脑干热休克蛋白70的表达与实验性脑损伤猝死的相关性

目的了解脑损伤后热休克蛋白 ７０（Ｈｅａｔ－ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ７０, ＨＳＰ７０）蛋白质及 ｍＲＮＡ在脑干局部的改变,及其对维持 脑干生命中枢功能的作用。方法用头颅打击器制成大鼠脑损伤猝死模型,免疫组化法分别测定损伤组损伤前和损伤 后 １、３、６、１２ ｈ及损伤摔死组脑于 ＨＳＰ７０的数量和分布变化;逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测各组相应部位 ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ水平。结果在脑损伤 １５ ｍｉｎ后脑干 ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ水平显著升高, ＨＳＰ７０蛋白质需 ３～６ ｈ才大量表达;损伤后 猝死的鼠脑中仅见 ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ升高,ＨＳＰ７０蛋白质与对照组无差异。结论脑损伤后 ＨＳＰ７０合成迅速增加,清除损伤 因素,维持自稳状态;当损伤严重时,应激蛋白质的合成障碍,抗损伤的保护机制不能发挥,脑干生命中枢的功能紊 乱,生命丧失。因此, ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ－蛋白质分离可作为神经细胞致死性损伤的标志。     

犬颅脑枪弹伤后脑组织中热休克蛋白70和c-Myc的表达

目的: 研究犬枪弹伤后脑组织中热休克蛋白70(Heat shock protein70, HSP70)和快反应蛋白c-myc的变化规律. 方法: 24只杂种犬,随机分为对照组,损伤组. 采用德国小口径步枪子弹致犬颅脑额叶切线伤(tangent brain injury, TBI). 用免疫组织化学方法检测伤后30 min, 2, 6, 12和24 h各不同时期弹道挫伤区、震荡区、海马及脑干神经元中HSP70和c-myc蛋白的表达. 结果: 对照组脑神经元中HSP70和c-myc蛋白表达弱,枪弹伤组挫伤区、震荡区、海马及脑干神经元中HSP70蛋白2 h开始增加(P<0.05),6 h时明显增加,12 h达高峰(P<0.01),24 h开始下降. c-myc伤后30 min开始增加(P<0.05),2 h达高峰(P<0.01),6 h开始下降,24 h同对照组. 且2种蛋白距伤道越近,表达越明显. 结论: HSP70和c-Myc蛋白在弹道挫伤区、震荡区、海马及脑干神经元均有表达,两者在脑组织中表达分布范围基本一致,但c-Myc先于HSP70表达.     

热休克蛋白HSP70在MCAo大鼠脑中的表达

目的：揭示局部脑缺血状态下热休克蛋白（heat shock protein,HSP)HSP70的表达与脑供血的关系,提供探讨针刺治疗脑梗塞研究的实验基础。方法：采用热凝法阻断大鼠一侧大脑中动脉（MCAo)造成局灶性脑缺血实验模型,采用DNA－RNA分子杂交技术研究了MCAo大鼠不同脑区HSP70的表达随缺血时间的改变,同时采用免疫组化的方法研究了HSP70蛋白表达的动态变化。结果：免疫阳性细胞出现较早并出现最多的区域是脑皮层区,纹状体次之,并多出现在缺血核心的周边区,分子杂交结果同样显示该模型中HSP70gRNA在大脑皮层中比在纹状体和海马中较早的出现且转录水平出高于纹状体和海马。结论：热休克蛋白HSP70因缺血被诱导,但其转录与表达又明显与供血状况有关。严重缺血区HSP70的表达受阻,提示改善脑局部微循环可促进HSP70的表达,增强脑组织的修复能力。     

癫痫大鼠脑组织内HSP7O表达的免疫组化研究

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)在癫痫大鼠脑组织内的表达情况及其意义。方法采用戊四氮致痫模型,应用免疫组织化学及常规病理检查的方法进行研究。结果在正常大鼠脑内未见HsP70免疫反应(IR)阳性细胞,戊四氮致痫后12h脑内开始出现HSP70IR阳性细胞,24hIR达高峰,3d后开始下降,7d后消失。HSP70主要在边缘系统(尤其是海马的CA1、CA3、CA4区)、大脑皮质(尤其是颞叶皮质、梨状皮质)等区域表达。常规病理检查发现,上述区域散在出现受损的异常神经元。结论癫痫发作可诱导HsP70在大鼠脑内广泛表达。HsP70表达可作为神经元受损的一个早期指标。     

急性心肌梗死猝死者心肌细胞hsf1和HSP70改变的意义

目的探讨急性心肌梗死猝死者梗死区心肌细胞内热休克转录因子1(hsf1)和热休克蛋白70(HSP70)改变的临床意义。方法分别用RT-PCR和免疫组化法检测(IHC)18例急性心肌梗死猝死者(研究组)和15例心脏正常因车祸快速死亡者(对照组)心肌细胞中hsf1和HSP70基因的mRNA和蛋白表达量。结果急性心肌梗死猝死者心肌细胞hsf1和HSP70的mRNA表达量都显著高于正常对照组(P<0.01),且hsf1和HSP70 mRNA的表达量之间呈显著的正相关关系(P<0.001)。急性心肌梗死猝死者心肌细胞hsf1和HSP70蛋白在细胞浆和细胞核表达较对照组显著增强(P<0.01),其中hsf1蛋白主要在心肌细胞核内表达,HSP70蛋白主要在心肌细胞浆内表达。结论急性心肌梗死猝死者心肌细胞内hsf1和HSP70可能共同参与了急性心肌梗死的病理生理过程,这一过程可能是热休克反应的另一调节途径。     

热休克蛋白在实验性大鼠脑死亡肾中的表达

目的研究热休克蛋白(HO-1、HSP27和HSP70)在脑死亡大鼠肾中的表达。方法将气囊导管插入F344雄鼠大脑硬膜外慢慢充气,诱导脑死亡,未处理组做对照组,4 h后处死大鼠,采用RT-PCR、蛋白印迹和免疫组化检测肾脏HO-1、HSP27和HSP70的表达。结果RT-PCR显示HO-1(P<0.01)和HSP70(P<0.01)基因编码表达增强。蛋白印迹也显示HO-1蛋白水平增加(P<0.01),但HSP70蛋白表达无明显变化。免疫组化显示HO-1蛋白在肾皮质表达增强。HSP27在脑死亡供体肾的表达无变化。结论脑死亡引起的肾应激可诱导细胞保护基因HO-1和HSP70的表达。     

热休克蛋白在冠心病猝死病例心肌和血管中的表达及意义

目的:探讨冠心病猝死心肌组织和血管组织HSP70染色改变。为法医学鉴定冠心病猝死提供客观依据。方法:选择8例患冠心病但非冠心病猝死案例(A组)、10例冠心病猝死案例(B组)以及7例非冠心病死亡案例(C组).用免疫组化方法对比检测热休克蛋白70(heat shock protein70 HSP70)的表达。结果:HSP70在患冠心病但非冠心病猝死案例和冠心病猝死案例中呈阳性表达,在心肌组织中冠心病猝死组表达水平明显高于患冠心病但非冠心病猝死组(P0.05),非冠心病猝死组均呈阴性表达。结论:HSP70的阳性表达是心肌和血管缺血缺氧的重要指标,对推断冠心病猝死具有一定的实际应用价值。     

异丙酚和异氟醚麻醉对颅脑损伤患者围术期血清热休克蛋白70水平的影响

目的 观察异丙酚和异氟醚麻醉对颅脑损伤患者围术期血清热休克蛋白70(HSP70)水平的影响.方法 选择行开颅血肿清除术治疗的中、重型急性颅脑损伤患者30例,按随机数字表法分为异丙酚组和异氟醚组,每组15例.麻醉诱导后前组患者静脉靶控输注异丙酚(效应室靶浓度为3～4μg/ml),后组患者吸入1.2%异氟醚,并且均间断静注维库溴铵、芬太尼维持麻醉深度.应用ELISA法测定患者麻醉诱导前、打开硬脑膜后1 h、术后24 h血液HSP70的含量,记录患者的术后苏醒时间和气管导管拔除时间.结果 2组患者麻醉诱导前、打开硬脑膜后1 h、术后24 h血液HSP70含量随时间的推移均增加,差异有统计学意义(P＜0.05),与异氟醚组比较,异丙酚组患者在打开硬脑膜后1 h和术后24 h时血液HSP70含量较高[(2.00±0.24)ng/ml,(2.19±0.26)ng/ml,t=2.080,P=0.047;(3.57±0.32)ng/ml,(3.81±0.31)ng/ml,t=2.086,P=0.046],术后苏醒进间和气管导管拔除时间较短[(7.7±2.8)min,(5.6±2.7)min,t=2.091,P=0.046;(8.9±3.9)min,(6.0±3.6)min,t=2.116,P=0.043)],差异有统计学意义,＜0.05).结论 静脉靶控输注异丙酚麻醉可维持颅脑损伤患者围术期适度的应激状态.

Abstract：

Objective To investigate the effect of propofol and isoflurane anesthesia on serum heat shock protein 70 ( HSP70 ) of perioperative patients with brain injury and compare the anesthetic effect of the two narcotic drugs. Methods 30 patients with medium or severe traumatic brain injury,treated by hematoma evacuation operation,were randomly divided into propofol ( n = 15 ) and isoflurane group ( n = 15 ). After anesthesia induction,propofol (target effect concentration of 3 ～ 4 μg/ml ) was intravenously injected and 1.2% isoflurane was inhalated into the patients of the 2 groups,respectively. In addition,vecuronium and fentany were intermittent intravenously injected into patients to maintain the depth of anesthesia. HSP70 in blood of patients were detected before anesthesia induction, 1 h after the dura was opened and 24 h after the operation by ELISA method. Recovery and tracheal extubation time of patients were recorded. Results HSP70 levels in blood of patients in the 2 groups were significantly increased compared with the former time point(P＜0.05 ). HSP70 content in propofol group was significantlyhigher at 1 h after the dura was opened( ( 2.00 ± 0. 24 ) ng/ml, ( 2.19 ± 0.26 ) ng/ml, t = 2. 080, P = 0.047 ) and 24 h after the operation( t=2.086, P=0.046) ,and recovery and tracheal extubation time was shorter compared with the isoflurane group(P＜0. 05). Conclusion Perioperative moderate stress,and early postoperative recovery and extubation can be maintained in patients with traumatic brain injury with profol anesthesia.     

酗酒对重型脑外伤患者脑内脱辅基脂蛋白E水平的影响及意义

目的探讨酗酒对重型脑外伤患者脑内脱辅基脂蛋白E（apoE）合成的影响及意义。方法采用RT—PCR法检测17例酗酒患者（研究组）和22例非酗酒患者（对照组）挫伤脑组织apoEmRNA的表达。并采用ELISA法测定两组患者脑外伤后不同时期脑脊液apoE含量。结果研究组脑组织apoEmRNA的表达水平及脑脊液apoE的含量较对照组降低（P〈0．05）。结论长期酗酒可使脑外伤后脑内apoEmRNA的表达水平降低,从而抑止脑内apoE的合成和分泌。     

p53诱导死亡结构域蛋白在大鼠创伤性脑损伤中的表达变化

目的:探索创伤性脑损伤病理过程中p53诱导死亡结构域蛋白(PIDD)的表达变化。方法:建立大鼠脑损伤模型,采用免疫印迹法和免疫组织化学法检测损伤后的大鼠皮层组织中PIDD的表达和定位变化。结果:(1)在假手术脑组织中,PIDD表达很低,脑损伤后其表达逐渐增加,在3天左右达到最高峰,之后表达下降;(2)免疫组织化学法和免疫荧光实验表明,PIDD在损伤后的脑组织中表达明显上升,并且主要定位于神经元之中。     

井穴放血法对急性脑缺血大鼠缺血区脑组织凋亡相关蛋白的影响

[目的]观察井穴放血法对急性缺血性脑损伤的脑保护作用。[方法]将实验大鼠分为假手术组、脑缺血组和脑缺血+井穴放血治疗组,一侧大脑中动脉阻塞致急性缺血性脑损伤模型(MCAO),治疗组在脑缺血后即刻给予井穴放血治疗,出血量为每穴1滴。分别于缺血后的1、3、6、24h处死,进行免疫组织化学染色,检测缺血区皮层脑组织c-fos蛋白(FOS)及HSP70蛋白免疫阳性细胞,以观察井穴放血法对急性缺血性脑损伤后早期抑凋亡基因表达的影响。[结果]c-fos蛋白和HSP70蛋白在缺血区皮层脑组织表达增加,缺血后1hHSP70无表达,FOS表达增加,在随后观察的3、6、24h时程内HSP70和FOS均有随缺血时间延长表达增多的趋势。井穴放血治疗组在以上各时程c-fos及HSP70免疫阳性细胞数均高于同时段的缺血病模组,有统计学意义。[结论]急性脑缺血后应用井穴放血干预治疗可明显增强缺血区脑组织对抗神经细胞凋亡的即刻早期基因c-fos蛋白和抗应激HSP70蛋白的表达,从而提高了缺血后神经细胞对缺血、缺氧的耐受和适应能力,提高了缺血后神经元的可塑性,进而可影响晚期目的基因的表达,抵抗细胞凋亡的发展,增强脑修复能力。表明井穴放血法对中风初期有一定的脑保护作用。     

大鼠液压脑损伤后bax/bcl-xL 的表达在mRNA和蛋白质水平的相关性

目的：探讨脑创伤后bax/bcl-xL在mRNA和蛋白水平的变化规律及其与神经细胞凋亡发生、发展的关系。方法：在液压脑损伤模型中,应用逆转录聚合酶链反应、免疫组化分别检测大鼠脑创伤后不同时程bax和bcl-xL表达;采用凋亡原位末端标记、电镜超微结构、DNA凝胶电泳观察脑创伤后细胞凋亡的形态和生化特征。结果：伤后6 h,bcl-xL mRNA表达下调［伤侧半球为对侧的(67.42±7.5 4)%］,bcl-xL蛋白水平下降［伤侧为对侧的(85.85±5.72)%］。伤后3 d,bcl-xL mRNA和 bcl-xL蛋白表达分别为对侧的(39.97±3.61)%和(57.50±6.21)%;bax mRNA和bax蛋白分别为对侧半球的(203.95±17.53)%和(189.02±7.23)%。伤后bax/bcl-xL比率升高比细胞凋亡提前出现,早期由于bcl-xL的表达下降,后期主要是由于bax的升高所致。结论：细胞凋亡及其调节基因的表达间具有一致性;脑创伤对bax和 bcl-xL 的调节发生在转录水平以前的某一环节。bax/bcl-xL平衡体系的维持或紊乱影响脑创伤后神经细胞生存或死亡。     

葛根素对急性缺血脑神经细胞损伤的保护及对HSP70蛋白表达的干预作用

目的探讨葛根素对大鼠急性脑缺血损伤的保护作用和对HSP70表达的影响及其作用机制。方法采用闭夹大脑中动脉造成局部脑缺血模型,对实验标本作HE染色及用免疫组化SP法作HSP70染色,观察其组织病理学改变及HSP70表达情况。结果葛根素干预组死亡神经元数明显少于单纯缺血组,脑水肿程度较轻,而HSP70表达强度显著强于单纯缺血组。葛根素干预暴露因素与神经细胞死亡呈显著负相关（P〈0．01）。结论葛根素对大鼠急性脑缺血损伤有保护作用,其作用机制与上调HSP70的表达有关。     

肝脏缺血-再灌注后热休克蛋白70mRNA的表达

目的 :探讨缺血—再灌注后大鼠肝脏热休克蛋白 (HSP) 70mRNA的表达规律。方法 :通过已建立的大鼠肝脏缺血—再灌注模型 ,应用人HSP 70cDNA ,采用dotblot杂交 ,观察缺血—再灌注后大鼠肝脏HSP 70mRNA的表达。结果 :肝脏缺血 15min ,3 0min再灌注后没有HSP 70mRNA的表达 ,缺血 60min再灌注 2h伴有HSP 70mRNA的表达 ,高水平HSP 70mRNA的表达持续到再灌注 12h ,以再灌注 4h表达水平为最高。缺血 12 0min再灌注 2h ,HSP 70mRNA升高 ,高水平表达维持 4h ,再灌注 12hHSP 70mRNA消失。结论 :肝脏缺血—再灌注后可以诱导HSP 70mRNA的表达 ,必要的缺血时间所造成的肝脏损伤是HSP基因激活的基础 ,再灌注期间氧自由基的释放可能是其表达增加的原因。     

大鼠侧位液压冲击脑损伤hsP70mRNA的表达

目的：研究大鼠侧位液压冲击脑损伤时hsp70mRNA的表达特点及时序性变化。方法：雄性SD大鼠，给以0．2MPa液压冲击脑损伤，应用RT－PCR技术检测不同时间损伤区脑组织hsp70mRNA的含量。结果：脑冲击后smin－30min，hsp70mRNA无明显改变；1～2h，冲击侧大脑皮层和脑干表达增强。结论：倒垃液压冲击脑损伤后，hsP70mRNA在冲击倒大脑皮层和脑干表达，但表达出现时间较晚。     

The regulatory effect of memantine on expression and synthesis of heat shock protein 70 gene in neonatal rat models with cerebral hypoxic ischemia

Objective To evaluate the neuroprotective effect of memantine, a non-competitive antagonist at the N-methyI-D-aspartate receptor, against hypoxic ischemia (HI) by exploring its regulation on the expression and synthesis of heat shock protein 70 (HSP70) gene in neonatal rat models with cerebralHI.Methods Memantine was intraperitoneally injected at a dose of 20 mg/kg in neonatal rat models either before (PRE group) or after (POST group) induction of HI. The expression and synthesis of the HSFr70 gene and its corresponding product were determined by rapid competitive PCR and immunohistochemistry, respectively.Results There was an increase in the expression of HSP70 mRNA two hours after induction of HI,which reached its peak at 48 hours, then decreased gradually. The same expression occurred at relatively low levels in the control group. Also, HSP70 synthesis was detected as early as 2h after HI,reached its peak between 48 and 72 hours, then declined over time. After memantine administration,the expression of the gene and its synthesis of the corresponding product decreased significantly during the time intervals 24 -72 h for the gene and 48 -72 h for the product compared to the HI group.Conclusion It was shown that HI is very sensitive to the expression of the HSP70 gene and synthesis of its corresponding product, which could be regulated by memantine. The latter may have the ability to reduce brain damage; thus decreased HSP70 mRNA expression could be a marker for HI. It is suggested that memantine can be a promising agent for neuroprotection against HI, although an overall and objective assessment of memantine is required to see if it can be used on neonates clinically later on.     

促红细胞生成素及其受体在脑外伤后的表达及意义

目的观察促红细胞生成素(EPO)及其受体(EPOR)在急性重型脑外伤后大脑皮质内的动态表达规律,并探讨其意义。方法将130只Wistar大鼠分为3组:正常组10只、对照组60只(仅行开颅术)和脑损伤组60只(Feeney法)。分别在伤后5、12、24h及3、5、7d断头取脑。采用RT-PCR、免疫荧光法检测EPO和EPOR的mRNA及蛋白的表达。结果正常组和对照组各时间点有微量EPO及EPOR的表达,脑损伤组在伤后5h见少量EPOmRNA和蛋白的表达,12h和24h表达升高,至3d(mRNA0.691±0.035,免疫阳性细胞78.4±6.32)达到高峰,5d时下降,7d时降至正常水平。而EPORmRNA和蛋白在伤后5h见少量表达,12h时表达升高,至24h(mRNA0.736±0.017,免疫阳性细胞70.2±6.31)达到高峰,3d(mRNA0.641±0.027,免疫阳性细胞74.8±5.49)、5d(mRNA0.656±0.011,免疫阳性细胞69.5±7.21)和7d(mRNA0.771±0.017,免疫阳性细胞70.2±6.59)时仍维持在高表达水平,未见减弱。结论大鼠急性重型颅脑损伤后大脑皮质内EPO短暂升高,而EPOR持续高水平表达且呈时间依赖性,提示颅脑损伤后外源性EPO能与持续高表达的EPOR结合产生神经保护作用。     

葛根素对大鼠急性脑缺血及缺血再灌注损伤后HSP70蛋白表达的影响

目的：探讨葛根素对大鼠急性脑缺血损伤及缺血再灌注损伤后HSP70表达的影响.方法：采用夹闭大脑中动脉造成局部脑缺血模型,夹闭大脑中动脉后再通造成局部脑缺血再灌注模型,对脑组织用免疫组化SP法作HSP70染色,观察其HSP70表达情况.结果：大鼠急性脑缺血损伤后葛根素干预实验组的HSP70表达强度明显强于单纯缺血实验组（P〈0.01）;大鼠脑缺血再灌注损伤后葛根素保护组实验侧HSP70表达强度明显强于非保护组实验侧（P〈0.01）.结论：葛根素有上调大鼠急性脑缺血及缺血再灌注损伤后HSP70表达的作用.     

全脑缺血再灌注后HSP70的表达及其与缺血耐受关系的实验研究

目的：研究不同时间大鼠全脑缺血预处理诱导热休克蛋白70(HSP70)的表达及其与缺血耐受间的关系。方法：用改良的四动脉阻断法制备全脑缺血模型，分别预缺血1、2、5、10min。2天后用免疫组化SP法检测海马CAl区HSP70的表达，相同的预缺血分组间隔2天再次给予20min的全脑缺血，5天后观察海马CAl区的病理学改变。结果：预缺血1min组未见HSP70表达，2min组少量表达，5min组大量表达，10min组表达减少。预缺血1min组和10min组再缺血后CAl区锥体细胞大量坏死，2min组和5min组坏死细胞较少。结论：HSP70是脑缺血敏感的应激标志，与脑缺血耐受的机制有关，在一定的缺血时间窗内存在量效关系。