Effect of rhBMP-2 and Osteogenic Revulsants on Proliferation and Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells in Rats

The effects of recombinant human bone morphogenetic protein-2 （rhBMP-2） and osteogenic revulsants alone or in combination at different time points and in different dosages on proliferation and osteogenesis of bone marrow stromal cells （BMSCs） in SD rats were investigated. Rat BMSCs were cultured in vitro and induced by rhBMP-2 in different dosages （10, 50, 100 and 200μg/L） alone or in combination with osteogenic revulsants. MTT colorimetric assay was used to evaluate The proliferation, activity of alkaline phosphoric （ALP） and osteocalcin were measured at 3rd, 6th, 9th, 12th day respectively. The results showed that rhBMP-2 and osteogenic revulsants could promote the differentiation of BMSCs towards osteoblast phenotype. The proliferation of BMSCs could be enhanced by rhBMP-2 in a dose-dependent manner. The expression of osteoblast phenotype was significantly higher by using both of them than by using them alone, which was verified by the activity of ALP and osteocalcin. It was suggested that the combined use of rhBMP-2 and osteogenic revulsants could promote the proliferation and simultaneously induce and maintain the expression of osteoblast phenotype of BMSCs in rats.     

三羟异黄酮对小鼠辐射损伤后造血功能的影响

目的 探讨三羟异黄酮(genistein, GEN)对辐射损伤造血功能的影响.方法 6.0 Gy γ射线一次全身照射BALB/c雄性小鼠复制出造血损伤模型.照射前24 h给予GEN灌胃(160 mg/kg体质量),分别观察照射后1、3、7、14、21、30 d不同时相点小鼠血清对粒单系集落形成单位(colony-forming unit-granulocyte/macrophage, CFU-GM)和红系集落形成单位(colony forming unit-erythroid, CFU-E)的支持或抑制活性.结果 辐射前24 h给予GEN,辐射后该组小鼠血清造血刺激活性显著增加,使正常小鼠骨髓有核细胞CFU-GM、CFU-E形成数量明显增多,而且对CFU-GM的刺激活性较CFU-E强.同时,该组小鼠照后血清对CFU-GM、CFU-E的抑制活性明显降低,但对CFU-E和CFU-GM的抑制活性差异不明显.结论 提高辐射损伤后小鼠血清刺激活性可能是GEN防护放射性造血损伤、促进受损造血系统重建的分子机制之一.     

Study on the Protective Effects of Compound Blood-activating Soup on Bone Marrow Hematopoietic Cells in Acute Radiation Injured Mice

ThisprojectwassupportedbyNationalScienceFoundationofChina(No.39670911)andTraditionalChineseMedicineSectionofthePublicHealthDepartmentofHubeiProvince.Ithasbeenknownthattheprominentmanifestationofbonemarrowintheearlyperiodofacuteradiationwasthathematopoieticcellsdecreasedrapidly,venoussinusexpanded,becominghyperemic,andbloodflowwasinstasisll].Onthebasisofthetheoryofblood-activatingandstasiseliminatingofChinesetraditionalmedicine,weusedablood--activatingandstasis--eliminatingChinesedrug,aco…     

Effects of Ligustrazine on Bone Marrow Microvessel Systemin the Early Period of Acute Radiation Injury in Mice

Ithasbeenprovedbymanystudlesthatthedifferent1ationanddevelopmentofthehematopoieticcellsdependonthesup-portandregulationofbonemarr0wmi-croenvironment,inwhichthevascularsys-temisanimp0rtantpart.Kn0speetalre-portedthatafterhigh-doseirradiationde-stroyedthehematopoieticcellsandthemi-crovesselsysteminbonemarrow,there-coveryofvascularsystemwasessentialforthehematopoiesisrehabilitatioin[l.2].There-fore,itisofgreatsignificancetostudytheeffects0fLigustrazine,akind0fs0called"blood-activatingandstasis-el…     

rhBMP-2及rhbFGF对兔骨髓间充质干细胞分化作用长期效应的实验研究

目的：检测重组人骨形成蛋白2(rhBMP-2)和重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF)单独、联合及序贯作用对兔骨髓间充质干细胞(BMSC)分化作用的长期效应。方法：采用考马斯亮蓝测定法检测单独、联合及序贯施加rhBMP-2和rhbFGF后兔BMSC在第2、5、7和10天时的蛋白质含量水平，以反映对细胞分化作用的影响，并进行统计学分析。结果：rhBMP-2能在较长时间内明显促进细胞的蛋白质含量增加，而rhbFGF则起抑制作用，并且均呈浓度依赖性。rhBMP-2单独应用与两种生长因子联合应用的效应相近，而且均高于rhbFGF单独应用或两种因子序贯应用的效应。结论：rhBMP-2和rhbFGF的不同应用方式对BMSC分化作用的长期效应不同。     

rhBMP-2在诱导C3H10T1/2干细胞成骨中对MMP-13、Collagen-2 mRNA表达的影响

目的研究基质金属蛋白酶13(MMP13)、II型胶原(collagen2)在C3H10T1/2细胞中的相互关系,探讨rhBMP-2在诱导C3H10T1/2成骨的同时对MMP13以及Collagen2 mRNA表达水平的影响。方法取C3H10T1/2细胞加入rhBMP-2诱导成骨细胞的产生,Von Kossa染色观察细胞形态,同时在不同时间段抽取总RNA,利用Real-time PCR检测MMP13、Collagen2的表达情况。结果未加rhBMP-2的细胞中MMP13、Collagen2前10d表达呈负相关;而rhBMP-2处理后的细胞中MMP-13表达水平受抑制,且MMP13和collagen2前14d表达呈明显负相关。结论MMP-13和Collagen-2 mRNA表达水平具明显相关性,rhBMP-2在诱导成骨的同时,具有抑制MMP-13表达的作用。     

ADSCs培养观察及rhBMP-2转染对其生长增殖的影响

目的 观察脂肪源性干细胞(ADSCs)体外生长规律,并探讨重组人骨形态发生蛋白(rhBMP-2)转染后ADSCs增殖变化情况.方法 用酶消化法从1岁龄贵州小香猪腹壁脂肪组织中获取ADSCs,进行连续传代培养,倒置显微镜下现察其相关生长特性.用细胞消化计数法和四唑盐比色法(MTT)对rhBMP-2转染ADSCs前后生长增殖情况进行比较,计算倍增时间,绘制生长曲线.结果 传代后ADSCs增殖速度比原代有所增快,于第4～6代趋于稳定.细胞形态由多角形、圆形和不规则形逐渐向成纤维细胞样和梭形过渡.rhBMP-2转染后ADSCs群体倍增时间增加8～10h,但对ADSCs生长增殖无明显影响(P<0.05).结论 ADSCs在体外培养至4～6代可获得较稳定状态.并且ADSCs作为宿主细胞被转染rhBMP-2基因后未发生畸变及生长增殖明显改变,说明rhBMP-2基因修饰的ADSCs可以作为携带目的 基因的种子细胞应用于再生医学研究.     

重组骨形态发生蛋白-2结合软骨下钻孔治疗犬关节软骨全层缺损的实验研究

目的 研究重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)结合软骨下骨钻孔治疗犬关节软骨全层缺损的可行性，为临床应用提供实验依据。方法 依照软骨缺损处理方法的不同将64侧股骨髁随机均分为4组：①结合组：软骨下骨钻孔 胶原海绵吸附rhBMP-2充填软骨缺损；②BMP组：胶原海绵吸附rhBMP-2充填软骨缺损；③钻孔组：单纯软骨下骨钻孔；④对照组：不作处理或单纯用胶原海绵填塞。术后2、4、8、12周取材观察其大体、光镜、透射电镜、免疫组织化学情况。结果 除对照组仅有纤维组织修复外，其余3组均有不同程度的软骨修复，但结合组的修复在组织细胞形态、超微结构、Ⅱ型胶原含量等方面均明显优于其他两组。结论rhBMP-2结合软骨下骨钻孔能有效修复犬膝关节软骨的全层缺损，该技术可行，有望在临床应用。     

Study on Oxygen Supply and Protection of Bone Marrow in Acute Radiation injured Mice

Itwasreportedthatacuteradiationcoulddestroythemurinebonemarrowmicrovesselsystemandledtostasisofbloodll].WeareleadtoasksuchquestionaswhatchangeswouldtakeplaceastotheOxygensupplyofbonemarrowmicroenviromentinthissituation.InviewoftheChinesetraditionaltheoryofblood--activatingandstasis--eliminating,weobservedtheeffectsofcommonlyusedblood--activatingandstasis-eliminatingdrug(acompoundpreparationcomposedofredsageroot,Chineseangelicaroot,Chuanxiongrhizomeandredpeomyroot)ontherehabilitationandoxygens…     

重组人骨形成蛋白-2在诱导C3H10T1/2干细胞成骨中对MMP-9 mRNA表达的影响

目的：测定MMP-9mRNA在C3H10T1／2 clone 8(10T1／2)中的表达,探讨rhBMP-2诱导10T1／2产生成骨细胞时对MMP-9mRNA表达的影响。方法：取10T1／2培养至细胞完全贴壁,加入rhBMP-2培养28天,同时利用Real—time PCR检测MMP-9在10T1／2中不同时间段的表达。结果：10T1／2经rhBMP-2的诱导14天出现钙化点,MMP-9mRNA也随着rhBMP-2的加入表达降低,而对照组几乎不变化。结论：rhBMP-2在诱导10T1／2产生成骨细胞的同时抑制着MMP-9mRNA的表达。     

养阴抗毒散对受照小鼠红细胞免疫粘附功能的影响

目的　研究小鼠急性中度骨髓型放射损伤期间红细胞免疫粘附功能的变化及中药养阴抗毒散的放射防护作用 .方法　以 6 Gy X射线照射后小鼠作为动物模型 ,给予中药养阴抗毒散灌胃 ,应用酵母菌红细胞花环试验测定红细胞免疫粘附功能 .结果　和正常组 (RBC- C3b R花环率 15 .4%±4.3% ,RBC- IC花环率 14.8%± 3.1% )相比 ,照射对照组小鼠RBC- C3b R花环率从第 12日 (8.0± 2 .6 ) %开始下降 (P<0 .0 1) ,实验结束时 (10 .1± 3.2 ) %仍未恢复正常 ,RBC- IC花环率在照后第 4日 (19.9± 2 .2 ) %和 8d(19.5± 3.1) %升高(P<0 .0 1) ,随后逐步下降至正常 .照射中药组小鼠 RBC- C3bR花环率仅在第 12日 (10 .5± 3.0 ) %下降 (P<0 .0 1) ,RBC-IC花环率仅在第 4日 (18.5± 3.0 ) %升高 (P<0 .0 5 ) ,照射中药组 RBC- C3b R花环率在第 4,12 ,2 0 ,2 8日均高于照射对照组(P<0 .0 5 ) .结论　 6 Gy X线照射可造成小鼠红细胞免疫功能低下 ,中药养阴抗毒散对此有一定的预防和治疗作用     

重组人骨形成蛋白用于狗直接盖髓的实验研究

目的：观察重组人骨形成蛋白-2（recombinant human bone morphogenetic protein-2，rhBMP-2）对修复性牙本质形成的诱导作用。方法：用rhBMP-2与痉基磷灰石（HA）复合，用于狗恒牙人为穿髓后直接盖髓，并与氢氧化钙直接盖髓对照，通过组织病理观察修复性牙本质的形成。结果：rhBMP-2-HA盖髓术后3周，穿髓孔下方可见形成的修复性牙本质团块，团块周围有类造牙本质细胞；术后6周，穿髓孔下方可见完整的修复性牙本质桥；术后12周，修复性牙本质桥增厚而且致密，牙本质桥近髓可见排列规则的成牙本质细胞。氢氧化钙盖髓对照组，术后3周，穿髓孔下方可见钙质团块形成，有炎症细胞浸润；术后6周，可见有修复性牙本质形成，但不连续；术后12周，修复性牙本质形成但较rhBMP-2-HA盖髓后形成的修复性牙本质桥薄而且疏松。结论：rhBMP-2-HA可以直接诱导牙髓细胞分化为成牙本质细胞，形成修复性牙本质。     

重组人骨形成蛋白用于狗直接盖髓的实验研究

目的观察重组人骨形成蛋白-2(recombinant human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2)对修复性牙本质形成的诱导作用.方法用rhBMP-2与羟基磷灰石(HA)复合,用于狗恒牙人为穿髓后直接盖髓,并与氢氧化钙直接盖髓对照,通过组织病理观察修复性牙本质的形成.结果 rhBMP-2-HA盖髓术后3周,穿髓孔下方可见形成的修复性牙本质团块,团块周围有类造牙本质细胞;术后6周,穿髓孔下方可见完整的修复性牙本质桥;术后1 2周,修复性牙本质桥增厚而且致密,牙本质桥近髓可见排列规则的成牙本质细胞.氢氧化钙盖髓对照组,术后3周,穿髓孔下方可见钙质团块形成,有炎症细胞浸润;术后6周,可见有修复性牙本质形成,但不连续;术后12周,修复性牙本质形成但较rhBMP-2-HA盖髓后形成的修复性牙本质桥薄而且疏松.结论 rhBMP-2-HA可以直接诱导牙髓细胞分化为成牙本质细胞,形成修复性牙本质.     

用转染m2胆碱受体基因的CHO细胞观察知母皂甙元的作用

目的 观察知母甾体皂甙元（ｓａｒｓａｓａｐｏｇｅｎｉｎ,ＳＡＲ）对Ｍ２受体亚型的调节作用。方法 采用转染了ｍ２胆碱受体基因的ＣＨＯ细胞为模型,以非选择性的＾３Ｈ－ＱＮＢ作点放射配基结合分析。结果 ＣＨＯｍ２细胞受体密度在培养４８ｈ达顶峰,以后呈进行性下降,ＳＡＲ对下降的ＣＨＯｍ２细胞Ｍ２受体有有显的上调作用,这一作用有一定浓度依赖性。结论 ＳＡＲ对下降的Ｍ２受体密度具有上调作用。     

用转染m2胆碱受体基因的CHO细胞观察知母皂甙元的作用

目的 观察知母甾体皂甙元(sarsasapogenin,SAR)对M2受体亚型的调节作用。 方法采用转染了m2胆碱受体基因的CHO细胞为模型,以非选择性的3H-QNB作单点放射配基结合分析。 结果CHO m2细胞受体密度在培养48h达顶峰,以后呈进行性下降。SAR对下降的CHO m2细胞M2受体密度有明显的上调作用,这一作用有一定浓度依赖性。结论SAR对下降的M2受体密度具有上调作用。     

rhBMP-2对再生障碍性贫血小鼠骨髓造血恢复的促进作用

探究了人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)对再障小鼠的治疗作用。采用5-FU联合白消安建立小鼠再障模型,通过干预rhBMP-2进行治疗。考察了各实验组小鼠白细胞数、骨髓单核细胞数、体重、存活率、脾系数、粒系-巨系细胞集落(CFU-GM)数以及骨髓单核细胞中CD34⁺细胞比例,进行股骨、脾脏HE切片分析。结果表明,相较于再障对照组,rhBMP-2治疗组小鼠的白细胞数、存活率、CFU-GM集落数及骨髓单核细胞数显著提高,并且骨髓单核细胞中的CD34⁺细胞含量也提高,显著改善脾脏功能和缓解骨髓抑制,证实rhBMP-2能够促进再障小鼠造血损伤的修复。     

川芎嗪对辐射致血虚证小鼠骨髓细胞蛋白质表达的影响

目的:观察川芎嗪对辐射致血虚证小鼠骨髓细胞蛋白质表达的影响,探讨川芎嗪补血作用的分子机制。方法:采用3.5 Gy60Coγ射线全身1次性照射,制备小鼠血虚证模型;骨髓集落细胞培养,观察并计数粒系-巨噬细胞集落生成单位(CFU-GM)、爆增型红细胞集落生成单位(BFU-E)、红细胞集落生成单位(CFU-E)、混合集落生成单位(CFU-mix)集落数;利用蛋白质组学寻找差异表达蛋白质。结果:辐射后小鼠骨髓CFU-GM、BFU-E、CFU-E、CFU-mix集落数明显减少,川芎嗪能使其显著回升并部分逆转辐射后蛋白质表达的变化,使小鼠骨髓细胞5种蛋白质表达回升,5种回落。结论:川芎嗪可促进辐射致血虚证小鼠骨髓造血祖细胞增殖,调节多种骨髓细胞蛋白质的表达,后者可能是川芎嗪促进造血细胞生长和增殖的重要机制之一。     

鹿角脱盘对辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤Notch2基因表达和免疫功能的影响

目的：观察鹿角脱盘对辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤Notch2基因的表达和免疫功能的影响,探讨其在辐射致癌过程中的作用。方法：将90只近交系BALB/c小鼠随机分成对照组、照射组和照射给药组,每组30只。照射组和照射给药组小鼠采用X射线照射,建立胸腺淋巴瘤动物模型,照射后给予照射给药组小鼠喂饲含鹿角脱盘超微粉的鼠粮。6个月后,取全血和胸腺,采用RT-PCR和Western blotting法分别检测胸腺淋巴瘤组织中Notch2 mRNA和蛋白表达水平;采用ELISA法检测血清免疫球蛋白（IgG、IgA和IgM）水平,应用SOD试剂盒检测血清中SOD活性。结果：照射组和照射给药组小鼠胸腺瘤发生率分别为53.33%（16/30）和36.67%（11/30）;照射组小鼠胸腺瘤组织中Notch2 mRNA和蛋白表达水平较对照组小鼠正常胸腺组织均明显升高（P<0.05）,而照射给药组小鼠胸腺瘤组织中Notch2 mRNA和蛋白表达水平均低于照射组（P<0.05）;照射组小鼠血清中IgG、IgA和IgM水平均低于对照组（P<0.05）,而照射给药组小鼠血清中IgG、IgM和血红蛋白水平及SOD活性均高于照射组（P<0.05）。结论：电离辐射激活Notch2基因和蛋白的高表达及降低小鼠免疫功能可能是辐射诱发胸腺淋巴瘤的发生机制之一;鹿角脱盘可通过抑制Notch2基因和蛋白的表达及提高小鼠免疫功能而降低辐射致癌的发生率,起到抑制肿瘤的作用。     

骨髓基质细胞移植对大鼠脊髓损伤后COX-2基因表达的影响

目的观察骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）移植对大鼠脊髓损伤后COX-2 mRNA表达的影响。方法分离培养BMSCs并传代。取Wistar雌性大鼠72只随机分为3组：A组18只（假手术组）、B组27只（细胞培养基对照组）和C组27只（BMSCs组）。B组和C组脊髓损伤后进行DMEM或BMSCs损伤周围区注射。应用RT-PCR法和免疫荧光方法检测损伤脊髓组织内COX-2 mRNA的表达及COX-2蛋白分布情况。结果 COX-2 mRNA在A组大鼠脊髓组织中低水平表达。脊髓损伤移植术后,C组COX-2 mRNA表达水平均显著高于相应时间点的B组（P〈0.01）。免疫荧光结果显示,A组COX-2仅表达于脊髓内的血管。脊髓损伤后,B组和C组COX-2表达分布则发生变化,主要见于损伤周围区脊髓内的血管和少数脊髓腹侧灰质内的神经元。结论 BMSCs移植能够增加脊髓损伤后COX-2 mRNA的表达。     

儿童急性白血病骨髓细胞PCNA和Bcl-2基因表达及其意义

目的　探讨增殖细胞核抗原 (PCNA)及原癌基因Bcl- 2在儿童急性白血病 (AL)骨髓细胞的表达及临床意义。方法　应用S -P免疫组化法检测 41例儿童AL骨髓标本PC NA和Bcl- 2。结果　急性淋巴细胞白血病 (ALL)组及急性非淋巴细胞白血病 (ANLL)组PC NA表达率与对照组比较均有显著差异 (P <0 .0 1,P<0 .0 5 ) ,ALL标危组显著高于高危组 (P <0 .0 5 ) ;ALL及ANLL组的Bcl- 2表达率高于对照组 (P <0 .0 1) ,标危组显著低于高危组 (P <0 .0 5 )。PCNA高表达者缓解率显著高于低表达者 (P <0 .0 1) ;Bcl- 2阳性表达者 3年无病生存率显著低于阴性表达者 (P <0 .0 1)。结论　PCNA、Bcl- 2基因在儿童AL中存在表达异常 ,二者均参与发病过程 ,但其作用机制可能是独立的 ,联合检测有助于判断预后。