银杏内酯对大鼠基底前脑神经元生长发育的影响

目的：观察银杏内酯对培养的胚胎大鼠基底前脑胆碱能神经元和NADPH-d阳性神经元生长发育的作用。方法：取E17Wistar大鼠胚胎基底前脑进行体外细胞培养，并给予银杏内酯。进行乙酰胆碱酯酶(acetyl cholinesterase，AChE)和NADPH-d酶组织化学染色，并在光镜下进行阳性细胞计数和显微测量胞体及突起发育状况。结果：给予银杏内酯处理后，培养物中乙酰胆碱酯酶阳性神经元和NADPH-d阳性神经元数量均较对照组显著增加，且神经元发育状况好于对照组，胞体大，突起多且长。结论：银杏内酯可以促进体外培养的基底前脑神经元中乙酰胆碱酯酶和NADPH-d的表达，并能促进表达这两种酶的神经元生长发育。     

Genistein对大鼠基底前脑胆碱能神经元发育影响的体外研究

本文旨在研究染料木素(genistein)对体外培养的基底前脑胆碱能神经元发育的影响。取孕18d胎鼠基底前脑神经元,体外有血清培养7d后,随机分为3组:无血清培养液组(control组),genistein+无血清培养液组(G组)、E2+无血清培养液组(E2组)。48h后用MTT法测定细胞活力和代谢状态;用AChE组化染色以及ChAT和MAP2免疫荧光双重染色,镜下计数AChE阳性和ChAT阳性神经元数,并对两种神经元的细胞面积、第一级突起数及最长突起长度进行检测。结果显示:MTT法所测的OD值、AChE阳性和ChAT阳性神经元数、细胞面积、第一级突起数及最长突起长度在G组与control组之间无明显差异,然而E2组中的上述数值均明显增加。本研究的结果提示:genistein对体外培养的基底前脑胆碱能神经元无类似雌激素样的神经保护和营养作用。     

DBNF,NGF对AD模型鼠脑移植区胚胆碱能神经元发育生长的调控

探讨脑源性神经营养因子,神经生长因子对ＡＤ模型鼠脑植入胚基底前脑后行为改善和移植区胚碱能神经元发育生长的影响。方法用使君子酸损毁ＳＤ大鼠基底大细胞核制成ＡＤ模型,分成ＢＤＮＦ、ＮＧＦ＋ＮＧＦ及单纯移植对照４组。     

BDNF、NGF对AD模型鼠脑移植区胚胆碱能神经元发育生长的调控

目的探讨脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、神经生长因子（ＮＧＦ）对ＡＤ模型鼠脑植入胚基底前脑后行为改善和移植区胚胆碱能神经元发育生长的影响。方法用使君子酸损毁ＳＤ大鼠基底大细胞核制成ＡＤ模型,分成ＢＤＮＦ、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ＋ＮＧＦ及单纯移植对照４组。在额、顶叶皮质植入同种胚基底前脑细胞悬液,前３组含相应神经营养因子,移植后每２ｄ向侧脑室灌注相应神经营养因子共７次。移植后１、２．５和４个月时行避暗回避试验和跳台试验,最后脑切片经ＡＣｈＥ组织化学、ＣｈＡＴ和ＬＮＧＦＲ免疫组织化学等染色,对移植区中的神经元及纤维作定量分析和图像处理。结果移植后应用神经营养因子的动物较对照组行为改善明显迅速,ＢＤＮＦ＋ＮＧＦ组行为改善又较ＢＤＮＦ组或ＮＧＦ组明显。形态学证实,应用神经营养因子动物移植区中ＡＣｈＥ阳性神经元数、１６９００μｍ２网格中ＡＣｈＥ阳性纤维交点数及ＡＣｈＥ阳性神经元面积均优于对照组,ＢＤＮＦ＋ＮＧＦ组的结果又好于ＢＤＮＦ组或ＮＧＦ组。结论ＢＤＮＦ与ＮＧＦ一样能促进植入胚基底前脑的ＡＤ模型鼠行为改善和移植区胚胆碱能神经元的发育生长,ＢＤＮＦ和ＮＧＦ联合使用比单独使用一种因子更为有效。     

BDNF、NGF对体外培养的胚胆碱能神经元生长发育的影响

本文用AChE组化方法，研究了BDNF、NGF对培养的胚鼠基底前脑胆碱能神经元的作用及BDNF和NGF的协同作用。结果表明BDNF和NGF都具有增加AChE阳性神经元数量的作用，二者的不同在于BDNF作用出现的时间较早、强度较小；而NGF作用出现的时间较迟但强度较大。并发现BDNF对体外培养的胚胆碱能神经元胞体早期的生长发育作用比较明显，而NGF的作用则不甚显著。BDNF对胚胆碱能神经元发出突起和突起的延伸作用较NGF强。BDNF和NGF的联合作用较单独使用BDNF或NGF为好。本文的结果提示在体外培养中两种营养因子联合应用较只用一种因子有益。     

BDNF,NGF对AD模型鼠脑移植区一氧化氮合酶阳性神经元发育生 …

用使君子酸（ＱＡ）损毁ＳＤ大鼠左侧Ｍｅｙｎｅｒｔ基底大细胞核,制成老年性痴呆症（ＡＤ）模型,将同种鼠胚基底前脑制成的细胞悬液不加神经营养因子和分别加入脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）神经生长因子（ＮＧＦ）及ＢＤＮＦ＋ＮＧＦ者植入ＡＤ模型鼠额,顶叶皮质,隔日通过脑室灌注入工脑脊液和相应神经营养因子共７次,移植后４个月,取脑切片作Ｎｉｓｓｌ染色,ＮＡＤＰＨ－ｄ和ＮＡＤＰＨ－ｄ＋ＡＣｈＥ组化染色,计数移植     

脑衍生神经营养因子基因编码中一个雌激素反应单位的鉴定

前脑神经元生存、分化和维持受控于几种局部和远隔神经营养因子,这些神经营养因子以特异配体方式对前脑特定靶神经元产生作用。体外实验表明NGF(神经生长因子)、脑衍生神经营养因子(BDNF)、NT_3(神经营养因子3)对胆碱能神经元的生存分化有促进作用。雌激素调节细胞许多基因转录,包括结构蛋白、类固醇、肽类神经信号传导及其受     

Neurturin和神经生长因子对体外培养的神经生长因子受体阳性神经元生长发育的影响

目的探讨Neurturin(NTN)、神经生长因子(NGF)对新生大鼠基底前脑胆碱能神经元生长发育的影响。方法用免疫组化结合图象分析技术观察Neurturin和NGF对培养的新生大鼠基底前脑NGF-R阳性神经元生长发育的作用。结果培养4d时,NTN组的NGF-R阳性神经元细胞数目、突起数、胞体面积和最长突起长度均与对照组有显著性差异(P<0.05),NGF+NTN组各项指标均优于NGF组或NTN组(P<0.05);培养8d时,NTN组除突起数目外其他各项指标均与对照组无显著性差异(P>0.05),NGF+NTN组各项指标仍然均优于NGF组或NTN组(P<0.05);NTN组NGF-R阳性神经元突起数多于NGF组(P<0.05)。结论Neurturin对体外培养的新生大鼠基底前脑NGF-R阳性神经元生长发育有营养作用,但作用时间较短,而且增加突起数的作用较NGF强;Neurturin和NGF的联合作用较单独使用Neurturin或NGF为好。     

神经生长因子对体外培养大脑基底神经节神经元的保护作用

目的:研究神经生长因子(NGF)对谷氨酸造成的体外培养大脑基底神经节神经元损伤后的再生及防止神经元坏死的保护作用。方法:原代培养的胎鼠前脑基底神经节神经元,分为对照组、谷氨酸损伤组和谷氨酸损伤后NGF保护组。用倒置相差显微镜进行活细胞观察、采用RT-PCR技术检测前脑基底神经节神经元GAP-43和NF-L基因表达。结果:谷氨酸损伤神经元胞体回缩,突起消失或断裂。加入NGF后神经元绝大多数细胞胞体饱满,突起明显,细胞问的网络联系清晰可见,接近于对照组;NGF保护组大脑基底神经节GAP-43 mRNA和NF-L mRNA表达与损伤组比较具有显著性差异。结论:NGF可保护谷氨酸造成体外培养的大脑基底神经节损伤后的再生,并防止神经元坏死。     

EGFP示踪NSCs海马移植对APP/PS1转基因鼠认知功能及基底前脑胆碱能神经元的影响

目的观察神经干细胞(NSCs)移植对APP/PS1双转基因小鼠认知功能及基底前脑胆碱能神经元的影响,并探讨其可能机制。方法体外分离培养EGFP转基因小鼠胎脑来源NSCs,24只12月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分入实验组(Tg-NSCs组)和AD对照组(Tg-AD组),每组12只,12只同月龄雄性野生型小鼠作为正常对照组(WT组),Tg-NSCs组进行EGFP示踪NSCs移植,其余两组进行等量磷酸盐缓冲液注射,移植部位为双侧海马区。移植4周后采用Morris水迷宫检测三组小鼠学习记忆功能,免疫荧光组化法和Western blot检测基底前脑胆碱能神经元的变化情况;Q-PCR检测海马神经营养因子NGF、BDNF、NT3的mRNA水平的变化。结果①体外悬浮培养的神经球表达EGFP阳性,免疫荧光检测显示神经干细胞特异性标志物Nestin阳性。移植4周后,可见EGFP阳性NSCs在海马注射移植部位存活并向胼胝体,海马深部和齿状回迁移,基底前脑未见EGFP阳性细胞。②与Tg-AD组相比,Tg-NSCs组基底前脑ChAT神经元及蛋白水平均增加(P<0.05),但ChAT蛋白表达低于WT组水平(P<0.05)。③Tg-NSCs组海马区神经营养因子NGF、BDNF、NT3的mRNA表达增加,高于Tg-AD组(P<0.05),且与WT组相比差异无统计学意义(P>0.05)。④水迷宫结果显示Tg-NSCs组学习记忆功能改善优于Tg-AD组(P<0.05),但仍低于WT组水平(P<0.05)。结论 NSCs海马移植并不能对该转基因鼠基底前脑胆碱能神经元丢失产生直接的替代与补充,可能通过分泌神经营养因子对基底前脑胆碱能神经元起到保护作用,从而促进其认知功能的恢复。     

BDNF、NGF对AD模型鼠脑移植区一氧化氮合酶阳性神经元发育生长的影响

用使君子酸（ＱＡ）损毁ＳＤ 大鼠左侧Ｍ ｅｙｎｅｒｔ基底大细胞核,制成老年性痴呆症（ＡＤ）模型。将同种鼠胚基底前脑制成的细胞悬液不加神经营养因子和分别加入脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、神经生长因子（ＮＧＦ）及ＢＤＮＦ＋ ＮＧＦ者植入ＡＤ 模型鼠额、顶叶皮质,隔日通过脑室灌注人工脑脊液和相应神经营养因子共７ 次。移植后４ 个月,取脑切片作Ｎｉｓｓｌ染色、ＮＡＤＰＨ ｄ和ＮＡＤＰＨ ｄ＋ ＡＣｈＥ 组化染色,计数移植区中ＮＯＳ阳性神经元数及其纤维在１６９００ μｍ ２ 网格中的交点数,并用ＭＩＡＳ ３００ 计算机图像分析系统对移植区中ＮＯＳ阳性神经元的细胞面积进行处理。结果显示：给予神经营养因子的动物,移植区中的ＮＯＳ阳性神经元数、ＮＯＳ阳性纤维交点数和ＮＯＳ阳性神经元的细胞面积等形态学指标均较不给予神经营养因子的对照组为佳,而在应用神经营养因子的各组中又以ＢＤＮＦ＋ ＮＧＦ组为优,提示ＢＤＮＦ、ＮＧＦ能促进移植区中ＮＯＳ阳性神经元的发育生长,ＢＤＮＦ与ＮＧＦ联合使用可发挥协同作用。本文对ＢＤＮＦ和ＮＧＦ促进移植区中ＮＯＳ阳性神经元发育生长的机制进行了探讨。     

NGF treatment promotes development of basal forebrain tissue grafts in the anterior chamber of the eye

Summary The effects of nerve growth factor (NGF) on developing central cholinergic neurons were studied using intraocular grafts of rat fetal (E17) basal forebrain tissue. Prior to grafting, grafts were incubated in NGF or saline. Transplants were allowed to mature for six weeks, receiving weekly intraocular injections of NGF or saline. Measurements of NGF levels in oculo after one single injection showed that NGF slowly decreases in the anterior chamber fluid, and after one week, low but significant levels were still present in the eye. Following pretreatment with diisopropylfluorophosphate (DFP), the cholinergic neurons in the grafts were analyzed using three morphological markers: antibodies to cholineacetyltransferase (ChAT), antibodies to acetylcholinesterase (AChE Ab) and acetylcholinesterase histochemistry (AChE). The transplants grew well and became vascularized within the first week. The growth of the NGF-treated basal forebrain grafts was significantly enhanced as compared to the growth of the saline-treated grafts evaluated with repeated stereomicroscopical observations directly through the cornea of the etheranaesthetized hosts. The NGF-treated grafts contained almost twice as many cholinergic neurons seen with all the cholinergic markers used, as the salinetreated grafts. However, there was no difference in cholinergic cell density between the two groups. The morphology and size of an individual cholinergic neuron was similar in the two groups. The fiber density as evaluated with AChE-immunohistochemistry did not change after NGF-treatment. The DFP-treatment did not seem to affect the AChE-immunoreactivity since an extensive fiber network was found, whereas almost no fibers were seen using conventional AChE histochemistry. We have demonstrated that in oculo transplantation of basal forebrain is a useful model for examining in vivo effects of NGF on central cholinergic function. The marked volume increase of NGF-treated grafts and the unchanged density of cholinergic cells and terminals suggests, that NGF increases the survival of not only developing cholinergic neurons, but possibly other non-cholinergic neurons and non-neuronal cells as well. These results support the notion that NGF acts as a neurotrophic factor on cholinergic and possibly non-cholinergic cells in the central nervous system     

Neurotrophic effect of brain-derived neurotrophic factor on basal forebrain cholinergic neurons in culture from postnatal rats.

We examined the effect of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) on cholinergic neurons in culture from postnatal rat basal forebrain by assay of choline acetyltransferase (ChAT) activity and cytochemical staining for acetylcholinesterase (AChE). BDNF was found to increase the ChAT activities but failed to promote the survival of AChE-positive neurons in cultures from neonatal (P3) rats, suggesting that its main role is cholinergic differentiation. In contrast, an enhancement of the survival of AChE-positive neurons and of ChAT activity was observed in cultures from P15-16 rats, suggesting that BDNF's main action is the maintenance of cholinergic neurons. Our results indicate a similarity between BDNF and nerve growth factor effects on the responses of cholinergic neurons of postnatal rat basal forebrain in culture.     

BDNF和神经干细胞联用对老年痴呆鼠基底前脑 胆碱能神经元和学习记忆能力的影响

探讨脑源性神经营养因子(BDNF)和神经干细胞(NSCs)联合应用对老年痴呆大鼠基底前脑胆碱能神经元及大鼠学习记忆能力的影响。利用无血清培养技术获得新生SD鼠的海马NSCs,行BrdU标记。切断SD大鼠左侧穹隆海马伞,基底前脑注射NSCs,同时侧脑室注射BDNF,2周后行nestin和BrdU/NF、BrdU/GFAP免疫荧光双标染色,4周后行Y迷宫测试,免疫组化结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑神经营养因子受体(NGFR)阳性神经元数目变化。结果发现,移植后NSCs能够在宿主体内存活且分化成神经元和胶质细胞;免疫组化结果显示损伤组大鼠胆碱能神经元数在内侧隔阂(MS)和斜角带(VDB)分别减少64.3%和49.3%,较正常组明显下降(P<0.01);移植组神经元数下降34.1%和27.6%较损伤组有改善(P<0.05),但与正常组比较有显著性差异(P<0.05);联合组神经元数减少15.1%和18.6%,与正常组无显著性差异(P>0.05)。Y迷宫测试结果显示,大鼠的学习记忆能力与基底前脑NGFR阳性细胞数呈正相关。提示,BDNF和NSCs移植的联用较单独使用NSCs或BDNF更好地改善老年痴呆大鼠的学习记忆能力。     

NGF对新生大鼠隔神经元的神经营养作用

本实验观察了神经生长因子（ＮＧＦ，２．５ｓ）对无血清培养新生大鼠隔神经元生长发育的作用。结果证明，ＮＧＦ能促进新生大鼠隔神经元的存活，增加神经元胞体面积和直径，增加隔培养神经元中ＡＣｈＥ阳性神经元的数目。流式细胞分析显示，ＮＧＦ使神经元平均蛋白含量增加。以上结果表明：ＮＧＦ对新生大鼠隔神经元的生长发育具有促进作用。Ｐ＜０．０１３．ＮＧＦ增加隔培养神经元胞体面积、最长径和最短径图像分析结果可见：在前７ｄ，在神经元胞体面积、最长径和最短径等方面两组之间无明显差别，但在培养１４、２１和３０ｄ时，ＮＧＦ组培养神经元的平均胞体面积、最长径和最短径均大于对照组，经统计学处理有显著意义（表２）。表２对隔培养神经元胞体面积、最长径和最短径的影响（ｘ±ｓ）注：Ｎ＝３０与同时期对照组相比＊Ｐ＜０．０５Ｐ＜０．０１４．ＮＧＦ促进新生大鼠隔细胞的总量白合成用ＦＡＣＳ４４０流式细胞仪测定隔细胞的平均蛋白含量，结果表明：在培养３、７、１４和２１ｄ时，ＮＧＦ组培养细胞的平均蛋白含量均显著高于对照组（表３，Ｆｉｇ．１）。表３ＮＧＦ对隔神经元蛋白合成的影响（ｘ±ｓ）往：Ｎ＝５与同时期对照组相比　＊Ｐ＜０．０５５．ＮＧＦ提高隔神经元的ＡＣｈＥ?     

去脑皮层血管对大鼠前脑大细胞基底核AChE、ChAT、BDNF、trkB及其mRNA表达的影响

本研究采用去除大鼠皮层血管建立的血管性痴呆模型。去除皮层血管后 ,发现大鼠前脑大细胞基底核胆碱能神经元的ACh E、Ch AT、BDNF、trk B及其 m RNA的表达明显降低。结果说明 ,去皮层血管后造成的大细胞基底核的损害是继发皮质损害的逆行性变性 ,大鼠去皮层血管后 ,皮质、海马等处神经元靶源性的 BDNF、trk B及其 m RNA的表达降低 ,逆行性运输到大细胞基底核的胆碱能神经元的 BDNF减少 ,导致大细胞基底核神经元的变性、坏死