定点突变对BPI23-Fcγ1重组抗菌蛋白表达和复性率的影响

为提高BPI2 3 Fcγ1重组抗菌蛋白在原核表达系统中的表达和复性率 ,采用定点突变法改造 pBV BPI60 0 Fcγ1 70 0 重组表达载体 ,转化E .coliDH5α后 ,通过温控诱导表达。结果表明 :①突变后BPI2 3 Fcγ1重组抗菌蛋白表达量比突变前提高约 1 0 % ;②表达时间提前约 1h ;③抗菌活性未受影响 ;④复性率未见显著提高     

BPI_(23)-Fcγ1重组蛋白原核表达载体的构建、表达和生物学活性的测定

目的构建 pBV- BPI600- Fcγ 1700重组表达载体，转化大肠杆菌 DH5α，诱导表达 BPI23- Fcγ 1抗菌重组蛋白。方法采用 RT- PCR技术，从 HL- 60细胞和正常人白细胞 mRNA中扩增编码 BPI23和 IgG1Fc（ Fcγ 1）的基因；通过连接反应构建重组克隆载体和重组表达载体；转化感受态大肠杆菌 DH5α，通过温控诱导表达 BPI23- Fcγ 1重组蛋白；测定 BPI23- Fcγ 1重组蛋白的抗菌及免疫学活性。结果 (1)RT- PCR获得预期的扩增产物— BPI600bp和 Fcγ 1 700bp基因片段； (2)成功构建 pUC18- BPI180、 pUC18- BPI420和 pUC18- Fcγ 1700重组克隆载体， DNA测序结果与文献报道一致； (3)成功构建 pBV- BPI600- Fcγ 1700重组表达载体，酶切图谱分析与预期结果相符； (4)BPI23- Fcγ 1重组蛋白的表达量约占菌体蛋白总量的 20％； (5)复性后重组蛋白具有抗菌活性和激活补体、介导调理吞噬等作用。结论 pBV- BPI600- Fcγ 1700重组表达载体构建成功，并在大肠杆菌中得到表达，获得具有 BPI和 IgGFc双重生物学活性的重组抗菌蛋白。     

定点突变对BPI23-Fcγ1重组抗菌蛋白表达和复性率的影响

为提高BPI₂₃-Fcγ1重组抗菌蛋白在原核表达系统中的表达和复性率,采用定点突变法改造pBV-BPI₆₀₀-Fcγ1₇₀₀重组表达载体,转化E.coliDH5α后,通过温控诱导表达.结果表明:①突变后BPI₂₃-Fcγ1重组抗菌蛋白表达量比突变前提高约10%;②表达时间提前约1h;③抗菌活性未受影响;④复性率未见显着提高.     

人B7-H1-Fc融合分子的构建及其在CHO细胞中的表达与鉴定

目的利用基因工程手段构建hB7-H1-Fc重组cDNA,用真核表达系统制备有活性的hB7-H1-Fc融合蛋白.方法 PCR方法从活化的人T细胞cDNA文库中扩增编码人B7-H1膜外区的cDNA序列, 将其与人IgG1Fc和pCI-neo片段连接,构建成hB7-H1-Fc重组表达载体.用脂质体法转染CHO细胞, 夹心ELISA法检测上清中融合蛋白hB7-H1-Fc的表达,经Protein A 亲合层析纯化,SDS-PAGE、免疫印迹鉴定表达产物. 结果 PCR扩增得到编码人B7-H1膜外区的727 bp基因片段,与hIgG1Fc的cDNA片段一起连接并插入pCI-neo表达质粒.重组质粒转染CHO细胞后, 夹心ELISA法检测显示培养上清中有hB7-H1-Fc蛋白表达.纯化后的hB7-H1-Fc蛋白经SDS-PAGE和免疫印迹鉴定其分子质量约51.76×103,与理论预测值相符. 结论成功构建了hB7-H1-Fc重组表达载体,利用哺乳动物细胞CHO表达出有活性的hB7-H1-Fc融合蛋白,为进一步研究B7-H1分子在免疫耐受、自身免疫性疾病中的作用奠定了基础.     

nm23-H1蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的研究nm23-H1蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组化法对87例乳腺癌患者标本中nm23-H1蛋白的表达进行检测。结果nm23-H1蛋白阳性表达率为51.72%,nm23-H1表达与淋巴结状态、组织学分级、临床分期及术后生存期有关(P<0.05),nm23-H1蛋白的表达与年龄、肿瘤大小、ER的表达无明显关系(P>0.05)。结论nm23-H1的表达可能与乳腺癌的发展及预后有关;nm23-H1蛋白的表达对判断乳腺癌进展及预后有一定的参考价值。     

人多药耐药基因1在CHO细胞中的表达及功能研究

目的:构建人多药耐药基因(MDR1)的真核表达载体,转染CHO细胞,研究MDR1基因在真核细胞中的表达及功能。方法:将MDR1全长基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),利用阳离子脂质体转染CHO细胞,RT-PCR检测MDR1转染阳性细胞,并用G418筛选稳定表达MDR1基因的细胞,通过测定细胞对Rh123的外排作用以及对阿霉素的耐受性确定MDR1基因在正常细胞中的功能。结果:酶切鉴定和测序结果证明构建的重组表达载体pcDNA-MDR1序列正确。RT-PCR分析以及荧光显微镜观察结果表明:该重组表达载体已在CHO细胞中有效转录并稳定表达。Rh123外排和MTT药敏实验结果显示:转染pcDNA-MDR1的CHO细胞对Rh123外排作用显著高于未转染的CHO细胞,并且转染后的CHO细胞对阿霉素的耐药性也有显著提高。结论:成功构建了稳定表达MDR1并具有多药耐药功能的细胞株,有望成为多药耐药性药物研究的细胞模型。     

抗菌药物对耐药菌感染的合理应用

抗菌药物是我国临床应用最多的一类药物,占所有药物的30%左右,其中存在诸多应用不合理情况,由此导致的细菌耐药也十分明显与突出,卫生部全国细菌耐药监测网2006～2007年度监测结果发现,我国大多数住院患者耐药突出,这与抗菌药物长期过度或滥用加速细菌耐药的产生、促进耐药流行密切相关.     

反向MDR1及TNF-α重组表达载体的构建及其在乳腺癌耐药细胞中的表达

目的 克隆MDR1及TNF-α基因cDNA，构建反向pEGFP-MDR1重组表达载体和pDsRed2-TNF-α重组表达载体，并在乳腺癌耐药细胞株MCF-7／ADR中进行表达。方法 应用RT-PCR和DNA重组技术构建反向绿色荧光蛋白pEGFP-MDR1融合蛋白表达载体和红色荧光蛋白pDsRed2-TNF-α融合蛋白表达载体，经脂质体分别和同时导入乳腺癌耐药细胞株MCF-7／ADR中进行表达，应用荧光显微镜直接观察融合蛋白的表达情况，G418筛选阳性克隆。结果 转染了反向pEGFP-MDR1载体的MCF-7／ADR细胞在胞浆和胞核均可见到绿色荧光。而转染了pDsRed2-TNF-α载体的MCF-7／ADR细胞在胞浆和胞核均可见到红色荧光。而同时转染了反向pEGFP-MDR1载体和pDsRed2-TNF-α载体的细胞胞浆和胞核均可见到红色及绿色荧光。结论 反向pEGFP-MDR1融合蛋白和pDsRed2-TNF-α融合蛋白能在乳腺癌耐药细胞MCF-7／ADR中分别及同时获得表达，为进一步研究基因治疗联同免疫治疗逆转乳腺癌耐药建立了很好的基础。     

中药抗常见耐药菌的作用及其机制研究进展

自青霉素发现以来,抗菌类药物被广泛应用于感染性疾病的治疗,为人类健康与医学发展做出了重大贡献。然而随着抗生素被长期广泛使用,多种细菌对抗生素产生了严重的耐药现象。具有多种耐药机制病原体的出现加剧了感染性疾病治疗的困难。中药具有多组分、多靶点和多作用的特点,在长期临床应用中尚未发现明显的耐药性。从中草药中寻找新型抗菌药物已成为解决细菌耐药性的有效途径之一。该文就细菌耐药现状以及中药抗常见耐药菌的作用及其机制研究进展加以综述。      

表达mIFN-γ的重组链球菌的构建及其对重组Sj-F1链球菌疫苗免疫调节作用研究

目的 构建表达mIFN-γ的重组链球菌,并与重组日本血吸虫Sj-F1链球菌疫苗进行联合免疫,观察IFN-γ对重组日本血吸虫Sj-F1链球菌疫苗的免疫调节效应.方法 用PCR法扩增mIFN-γ基因,亚克隆至链球菌重组质粒pGMB1,经PCR、限制性酶切和测序鉴定筛选阳性重组子.将阳性重组质粒转化链球菌载体,经抗生素抗性转化及染色体PCR鉴定筛选阳性重组链球菌.用Streak blot和Westem blot分析鉴定重组链球菌的表达情况.鉴定后的重组mIFN-γ链球菌与重组Sj-F1链球菌疫苗联合应用,经滴鼻接种免疫昆明小鼠,观察诱导产生的减虫和减卵效果.结果 成功构建了分泌mIFN-γ重组链球菌.Streak blot和Westem blot分析表明重组链球菌能分泌mIFN-γ并可稳定遗传.免疫保护性实验表明,重组mIFN-γ链球菌与重组日本血吸虫Sj-F1链球菌疫苗联合免疫,减虫率和减卵率分别为31.56％和47.48％,与单用重组Sj-F1链球菌疫苗比较减虫率和减卵率均增加.结论 结果表明,重组mIFN-γ链球菌能增强重组Sj-F1链球菌疫苗抗日本血吸虫感染的保护力.     

反向MDR1及TNF-α重组表达载体的构建及其在乳腺癌耐药细胞中的表达

目的克隆MDR1及TNF-α基因cDNA,构建反向pEGFP-MDR1重组表达载体和pDsRed2-TNF-α重组表达载体,并在乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR中进行表达.方法应用RT-PCR和DNA重组技术构建反向绿色荧光蛋白pEGFP-MDR1融合蛋白表达载体和红色荧光蛋白pDsRed2-TNF-α融合蛋白表达载体,经脂质体分别和同时导入乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR中进行表达,应用荧光显微镜直接观察融合蛋白的表达情况,G418筛选阳性克隆.结果转染了反向pEGFP-MDR1载体的MCF-7/ADR细胞在胞浆和胞核均可见到绿色荧光.而转染了pDsRed2-TNF-α载体的MCF-7/ADR细胞在胞浆和胞核均可见到红色荧光.而同时转染了反向pEGFP-MDR1载体和pDsRed2-TNF-α载体的细胞胞浆和胞核均可见到红色及绿色荧光.结论反向pEGFP-MDR1融合蛋白和pDsRed2-TNF-α融合蛋白能在乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR中分别及同时获得表达,为进一步研究基因治疗联同免疫治疗逆转乳腺癌耐药建立了很好的基础.     

非小细胞肺癌患者肺耐药蛋白和多药耐药相关蛋白的表达及其临床意义

目的 检测肺耐药蛋白和多药耐药相关蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况.并探讨其临床意义.方法 采用免疫组化方法对术前未经化疗、术后病理诊断明确的92例肺癌组织标本并以20常肺组织作为对照进行了多药耐药相关蛋白（MRP）、肺耐药蛋白（LRP）表达的检测.并对病理类型、分化程度、临床分期、预后等进行统计学分析.结果 （1）92例肺癌组织中MRP、LRP及其两者共表达的阳性率分别为53%、52%和45%,均显著高于正常肺组织中的表达水平（P〈0.05）.（2）MRP、LRP蛋白表达在不同病理类型、不同分化程度之间具有统计学差异（P〈0.05）,而在不同年龄、性别、临床分期、淋巴结转移情况等均无明显差异.另外,MRP、LRP蛋白的表达与患者预后密切相关,且随着耐药蛋白表达种类的增加,生存曲线水平下降.结论 NSCLC中MRP、LRP的表达可能在肺癌的原发性多药耐药中起不同程度的作用,检测NSCLC中MRP、LRP在判断患者预后.指导肿瘤化疗方面具有重要的临床意义.     

nm23-H1蛋白在鼻咽癌组织中的表达及意义

目的：为探讨ｎｍ２３－Ｈ１蛋白与鼻咽癌发生发展的关系。方法：采用免疫组化法检测了８０例鼻咽癌组织。２０例无瘤鼻咽癌组织ｎｍ２３－Ｈ１基因产物的表达结果：ｎｍ２３－Ｈ１蛋白在鼻咽癌组织、鼻咽部无瘤组织中的表达无显著性差异;ｎｍ２３－Ｈ１蛋白在鼻咽癌中的表达与性别、临床分期、原发灶大小无关,但在有颈淋巴结转移组与无颈淋巴结转移组之间,差异有显著性。结论：ｎｍ２３－Ｈ１基因国咽癌有无淋巴结转移有关,但它     

转移抑制基因nm23-H1在胆管细胞癌中的表达

目的探讨转移抑制基因nm23-H1的表达与胆管细胞癌临床病理及预后的关系.方法25例胆管细胞癌标本,制成石蜡切片,采用免疫组织化学ABC法染色.结果11例(40%)为阳性表达,14例(56%)为阴性表达.nm23-H1的表达与肿瘤大小、肿瘤部位、侵及浆膜、肝外转移、肿瘤破裂、淋巴结转移、侵及门静脉、分化程度和生存率无关.术后2年内的复发率nm23-H1阴性表达例(71.4%)高于阳性表达例(45.5%),但这一区别没有显著性差异(P>0.05).结论nm23-H1在胆管细胞癌中所起的作用不同. nm23-H1的表达对胆管细胞癌不具有预后指示作用.     

重组人Versican G1蛋白在昆虫细胞中的表达

目的：利用杆状病毒．昆虫细胞表达系统制备人蛋白聚糖Versican G1区(VG1)的重组蛋白。方法：将编码人VG1蛋白343个氨基酸的基因插入pFastBacl载体，转化大肠杆菌DH10Bac，提取重组Bacmids转染Sf9昆虫细胞，获取含重组人VG1蛋白的杆状病毒进一步感染昆虫细胞进行蛋白表达。通过Ni—NTA层析柱对重组蛋白进行纯化。免疫印迹方法对昆虫细胞培养上清中的蛋白成分进行鉴定，采用透明质酸结合实验确定重组人VG1蛋白的生物活性。结果：人VG1基因在昆虫细胞中获得高水平表达，重组人VG1蛋白具免疫原性和与透明质酸结合的生物活性。结论：昆虫细胞表达的重组人VG1蛋白具有良好的免疫原性和生物活性。     

肺癌中nm23-H_1蛋白表达及其意义

应用免疫组化ABC法观察nm23－H1蛋白在非小细胞肺癌表达总阳性率为50％（其中鳞癌为48％，腺癌为647％，两者有显著性差异（P＜0．05）），大细胞癌阳性率为16．7％，小细胞肺癌（SCLC），肺炎性假瘤和正常肺组织未见表达。nm23－H1蛋白表达与淋巴结转移没有负相关。nm23－H1阳性病人的生存率显著低于阴性者（P＜0．05）．表明nm23－H基因在肺癌的发生、转移和预后中起着不同程度的作用。     

PINCH、nm23-H1蛋白在宫颈鳞癌中的表达及临床意义

目的 探讨 PINCH蛋白(particulary interesting new cysteine-his-tidine rich protein)和 nm23-H1 蛋白(nonmetastatic protein 23 homologue 1) 在宫颈鳞癌中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学SP法检测宫颈...     

草决明对临床耐药金葡菌的抗菌作用及生物膜形成的影响

目的探讨草决明对耐药金葡菌的抗菌作用及其对细菌生物膜的抑制作用。方法以临床耐药菌株为研究对象,微量肉汤稀释法测定其最低抑菌浓度(MIC),96孔板法测定草决明对金葡菌生物膜的抑制作用,以氯化钠和蒸馏水测定草决明处理菌细胞壁渗透能力。结果草决明醇提液抗菌作用较强,其对金葡菌标准菌株和临床菌株的最低抑菌浓度分别为25μg/mL、6.25μg/mL,1/2~1/4MIC的草决明醇提液均可明显抑制耐药菌株生物膜的形成;1/2~1/8MIC草决明醇提液处理耐药金葡菌后,其细胞壁渗透力并无明显改变。结论草决明醇提液对耐药金葡菌具有抗菌作用,对耐药菌生物膜形成具有明显的抑制作用。     

ILK、nm23-H_1在妊娠滋养细胞疾病中的表达及其临床意义

<正>妊娠滋养细胞疾病(Gestational trophoblastic disease,GTD)是特发于生育期妇女的一类肿瘤,几乎所有侵袭性葡萄胎和50%绒毛膜癌是由葡萄胎恶变而来,严重威胁女性的生殖健康。本研究以不同妊娠时期的正常胎盘为对照,对葡萄胎、侵袭性葡萄胎及绒毛膜癌组织中ILK和nm23-H1的表达情况进行检测,以探讨其在GTD发生、发展中的作用及临床价值。