丙泊酚预处理对谷氨酸损伤大鼠脑组织的保护作用研究

目的 探讨丙泊酚预处理对谷氨酸(Glu)损伤大鼠脑组织的保护作用.方法 取出生10～ 15 dSD大鼠脑皮质切片进行培养,观察脑片形态学变化.将脑皮质切片分为空白对照组、Glu损伤组(1 mmol/L Glu 作用0.5 h)及丙泊酚预处理组(损伤前给予20 mg/L丙泊酚作用24 h),每组12个样本.镜下观察各组脑皮质切片的细胞病理改变及超微结构变化,计算乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,免疫组化法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性表达并计数.结果 培养的脑皮质切片细胞形态完整、存活良好.苏木素-伊红(HE)染色、电镜及LDH检测结果显示:Glu损伤组脑皮质切片中神经元细胞损伤严重,形态不规则,胶质细胞增生、水肿,LDH漏出率较空白对照组明显增高[(68.5±2.0)％比(16.0±2.5)％,P＜0.01];丙泊酚预处理组脑皮质切片神经元细胞损伤减轻,细胞形态恢复,LDH漏出率较Glu损伤组明显减少[(38.5±2.4)％比(68.5±2.0)％,P＜0.05].免疫组化检测结果显示:Glu损伤组胶质细胞胞体肿胀,突起数量增多,GFAP阳性反应强,阳性细胞数量(个/HP)较空白对照组显著增多(50±5比10±3,P＜0.01);丙泊酚预处理组胶质细胞形态有所恢复,细胞突起细长,GFAP阳性反应减弱,阳性细胞数量较Glu损伤组明显减少(30±4比50±5,P＜0.05).结论 丙泊酚预处理对Glu损伤的SD大鼠脑皮质神经元具有保护作用.     

LY367385对谷氨酸钠及缺糖缺氧引起的培养小鼠大脑皮层神经元损伤的保护作用

目的观察LY367385对谷氨酸钠(Glu)及缺糖缺氧(OGD)引起的小鼠大脑皮层神经元损伤的保护作用. 方法以细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出、光镜下细胞形态变化为指标,观察培养液中加入Glu或因OGD引起的神经元损伤,以及LY367385的保护作用;用免疫细胞化学和免疫荧光染色法检测神经元代谢型谷氨酸受体1α(mGluR1α)的表达.结果 OGD 1 h或0.1 mmol/L的Glu可明显造成神经元损伤,使LDH漏出明显增加( P<0.01);LY367385(50 μmol/L)可明显拮抗OGD或Glu引起的神经元损伤,使LDH漏出明显减少( P<0.01);免疫组化检测显示体外培养神经元mGluR1α阳性表达.结论 OGD或Glu可能通过激活皮层神经元mGluR1α引起神经元损伤,LY367385通过拮抗mGluR1α保护神经元.     

纳洛酮对缺氧大鼠皮质神经元的保护作用

背景纳洛酮对脑缺血再灌注损伤细胞的保护作用机制尚不明确.选择体外培养皮质神经元研究纳洛酮疗效可排除多重因素干扰.目的观察缺氧对体外培养大鼠皮质神经元的影响及纳洛酮的保护机制.设计重复测量设计.地点和对象实验地点军事医学科学院神经生物学研究室.研究对象体外培养12 d的Wistar大鼠皮质神经元.干预取体外培养12 d的Wistar大鼠皮质神经元,随机分为正常对照组、缺氧组、纳洛酮组(缺氧前24 h加纳洛酮预处理);缺氧6 h后在常氧下继续培养24 h.主要观察指标观察各种条件下神经元的存活率和形态学的改变,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量.结果缺氧后可见神经元胞体肿胀、细胞死亡,LDH渗出量增多[6 h正常对照组为(78.68±7.34)%,缺氧组为(194.38 ±22.32)%;12 h正常对照组为(77.98±8.85)%,缺氧组为(331.66±36.12)%],细胞存活率减少[6 h正常对照组为(91.82±2.89)%,缺氧组为(66.96±4.98)%;12 h正常对照组为(90.84±2.61)%,缺氧组为(32.02±6.34)%],差异有显著性意义(P＜0.01).经纳洛酮预处理的神经元,缺氧后神经元胞体肿胀、细胞死亡程度轻于缺氧组,LDH渗出[6 h(159.86±34.03)%;12 h(256.28±28.29)%]显著低于缺氧组(P＜0.01),而存活率[6 h(78.08±4.15)%;12 h(53.68±4.32)%]明显高于缺氧组,差异有显著性意义(P＜0.01).结论对缺氧诱导的皮质神经元的损伤,纳洛酮具有明显的保护作用.     

神经生长因子和依达拉奉对缺血/再灌注损伤脑保护作用的比较研究

目的 比较神经生长因子(NGF)和自由基清除剂依达拉奉预处理对脑缺血/再灌注(I/R)损伤神经细胞的保护作用.方法 取出生24 h内的SD乳鼠脑皮质细胞,体外培养7 d后分为对照组,药物损伤组,NGF 10、50、100 μg/L预处理组及依达拉奉100 μmol/L预处理组.各预处理组分别预处理24 h后,给予200μmol/L谷氨酸(Glu)损伤0.5 h,换正常培养液继续培养24 h;培养9 d时检测神经细胞存活率[四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法]、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率(分光光度法)、细胞凋亡率(流式细胞术);用苏木素-伊红(HE)染色后在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,在透射电镜下观察细胞超微结构改变.结果 与药物损伤组比较,NGF 10、50、100μg/L预处理组和依达拉奉预处理组细胞存活率明显升高C(0.21±0.04)%、(0.23±0.04)%、(0.21±0.04)%、(0.24±0.04)%比(0.19±0.04)%],LDH漏出率[(0.50±0.06)%、(0.46±0.07)%、(0.50±0.02)%,(0.43±0.06)%比(0.56±0.03)%]和细胞凋亡率[(10.77±1.07)%、(10.38±0.70)%、(13.34±0.57)%、(9.99±0.77)%比(14.52±0.77)%]均不同程度降低(P<0.05或P<0.01);细胞形态受损程度和神经元超微结构病变均减轻.NGF 3个浓度组中以50μg/L组效果最佳,且与依达拉奉组各指标差异无统计学意义.结论 NGF和依达拉奉预处理脑皮质细胞24 h对脑I/R损伤均有保护作用;50 μg/L NGF和100 μmol/L依达拉奉预处理效果最佳,且二者最佳浓度时疗效相当.     

鼠骨髓间充质干细胞对缺氧-复氧神经元修复的体外实验

目的:观察在体外培养条件下骨髓间充质干细胞对缺氧-复氧新生大鼠大脑皮质神经元活性的影响。方法:实验于2005-01/2006-12在兰州大学第一医院中心实验室完成。健康Wistar大鼠成鼠5只,健康新生Wistar大鼠20只,无菌条件下分离、培养、传代Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,细胞融合达90%时更换培养基培养24h,收集细胞培养液即为骨髓间充质干细胞条件培养基;无菌条件下培养新生Wistar大鼠大脑皮质神经元,第8天随机分为正常对照组、缺氧组、间充质干细胞条件培养基处理组,即用骨髓间充质干细胞条件培养基进行缺氧神经元的修复。分别于缺氧0h、缺氧6h、复氧24h用噻唑蓝盐比色法测定吸光度值和BeckMan全自动生化仪测定培养液乳酸脱氢酶漏出量,分别检测各组神经元的活性和细胞损伤后修复的程度。结果:各实验组均全部进入结果分析。①各组神经元的活性:鼠大脑皮质神经元缺氧6h及复氧24h后缺氧组噻唑蓝明显低于正常对照组,骨髓间充质干细胞条件培养基处理组复氧24h后噻唑蓝高于缺氧组(缺氧6h:缺氧组0.42±0.14,正常对照组0.81±0.12;复氧24h:缺氧组0.35±0.15,正常对照组0.82±0.21,骨髓间充质干细胞条件培养基处理组0.74±0.25,P<0.01或0.001)。②各组细胞损伤后修复的程度:缺氧6h和复氧24h后,缺氧组乳酸脱氢酶漏出量比正常对照组明显增多,骨髓间充质干细胞条件培养基处理组比缺氧组明显减少[缺氧6h:缺氧组(790.16±34.51)nkat/L,对照组(340.07±25.17)nkat/L,骨髓间充质干细胞条件培养基处理组(570.11±53.18)nkat/L;复氧24h:缺氧组(1790.36±252.38)nkat/L,对照组(340.07±19.00)nkat/L,骨髓间充质干细胞条件培养基处理组(860.17±40.17)nkat/L,P<0.001]。结论:在体外培养条件下骨髓间充质干细胞能增加缺氧神经元的细胞活性,促进缺氧神经元的修复。     

纳洛酮对缺氧大鼠皮层神经元细胞的保护作用

目的　观察缺氧对大鼠皮层神经元细胞的影响及纳洛酮的保护作用。方法　取体外培养 12d的Wistar大鼠皮层控经元细胞 ,随机分为正常对照组、缺氧组、纳洛酮组 (缺氧前 2 4h加纳洛酮预处理 ) ;缺氧 6h后在常氧下继续培养 2 4h。观察各种条件下神经元细胞的存活率和形态学的改变 ,测定培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)含量。结果　缺氧后可见神经元胞体肿胀、细胞死亡 ,LDH渗出量增多 ,细胞存活率减少 (P <0 0 1)。经纳洛酮预处理的神经元 ,缺氧后神经元胞体肿胀、细胞死亡程度轻于缺氧组 ,LDH渗出显著低于缺氧组 (P <0 0 1) ,而存活率明显高于缺氧组 (P <0 0 1)。结论　缺氧能诱导皮层神经元损伤 ,而纳洛酮对神经元的缺氧损伤具有明显的保护作用     

PC12细胞缺血预处理模型的建立及一氧化氮的保护作用

目的 以PC12细胞建立体外脑缺血预处理细胞模型,探讨NO在预处理脑保护中的作用.方法 建立缺血预适应的细胞模型,随机分为四组,每组五碟细胞.正常对照组:常氧、低糖(<1g/L)2%胎牛血清DMEM培养;缺血预适应组(IPC):预先氧糖剥夺(OGD)6 h,后经复灌和OGD处理;非缺血预适应组(NIPC):常氧、低糖低血清培养6 h,后经复灌和OCD处理;一氧化氮合酶抑制剂组(L-NAME):OGD预处理前30 min加L-NAME,OGD6 h,后经复灌和OGD处理.通过细胞MTT代谢率、乳酸脱氢酶(LDH)释放量、细胞凋亡率来评判IPC模型是否建立,生化法观察各组一氧化氮合酶(NOS)活性变化.统计分析利用单因素方差分析,两两组间均数的比较用LSD法,以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 与NIPC组比较,IPC组MTT代谢率明显增高(94.9%±15.1%,P<0.05),LDH释放量减少(279.1%±28.1%,P<0.01),细胞凋亡率降低;与对照组(100.0%±13.5%)比较,NIPC组及IPC组NOS活性均升高(190.0%±14.6%,P<0.01;126.10k±10.6%,P<0.01);流式检测结果显示,对照组、IPC组、NIPC组和L-NANE组引起的细胞凋亡率分别为5.90%,8.71%,18.62%及11.73%.结论 IPC减少PC12细胞缺糖缺氧损伤后细胞的死亡与凋亡,且NO参与了此保护机制,但并非唯一因素.     

δ阿片受体激动剂DADLE对全脑缺血-再灌注大鼠血清S-100B蛋白的影响

目的 通过比较血清S-100B蛋白水平来观察δ阿片受体激动剂DADLE对大鼠全脑缺血-再灌注损伤的影响,从而探讨DADLE在脑复苏中的神经保护作用.方法 用二血管阻断加低血压法制作大鼠全脑缺血-再灌注模型.50只SD大鼠随机分为五组,每组各10只;假手术组:不制模不干预;模型组:单纯制作全脑缺血-再灌注模型;DADLE预处理组:在缺血前给予DADLE;DADLE缺血后处理组:在缺血后给予DADLE;DADLE再灌注期处理组:在再灌注早期给予DADLE.实验结束后分别取血,用酶联免疫检测法(ELISA)测定大鼠血清S-100B蛋白水平.数据用均数4±标准差((x)±s)表示,统计分析采用单因素方差分析,两两组间均数之间的比较采用SNK法,以P<0.05为差异具有统汁学意义.结果 假手术组的血清S-100B蛋白水平为(475.56±41.93)pg/ml,模型组和DADLE处理各组的山清S-100B蛋白水平均比假手术组高(P<0.05),DADLE处理各组的血清S-100B蛋白水平均比模型组低(P<0.05),DADIE处理各组间的血清S-100B蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 δ阿片受体激动剂DADLE对大鼠全脑缺血-再灌注损伤有保护作作用.     

纳洛酮对体外培养的缺氧大鼠皮质神经元细胞凋亡的影响

目的 :观察缺氧对大鼠皮质神经元细胞凋亡的影响及纳洛酮的保护作用。方法 :取体外培养 12 d的Wistar大鼠皮质神经元细胞 ,随机分为正常对照组、缺氧组、缺氧加纳洛酮组。缺氧 6h后在常氧下继续培养2 4h,用原位末端标记 (TUNEL)法和流式细胞仪检测不同时间段神经元细胞凋亡率。结果 :缺氧能诱导神经元细胞凋亡显著增加 ,纳洛酮可以降低凋亡率 ,与缺氧组相比差异显著 (P<0 .0 1)。结论 :纳洛酮可抑制缺氧诱导的大鼠皮质神经元细胞凋亡 ,对神经元细胞具有保护作用     

麝香酮对SH-SY5Y神经细胞缺氧/缺糖和再给氧损伤的保护作用

目的:研究麝香酮对神经细胞缺氧/缺糖和再给氧损伤的保护作用。方法:培养SH-SY5Y神经细胞。采用含连二亚硫酸钠的无糖Earle液模拟造成缺氧/缺糖和再给氧损伤;用苔盼蓝染色计数法测定细胞死亡率,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率,用Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)原位双染法荧光显微镜检测细胞坏死率和细胞凋亡率,用比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;并评价药效。结果:与正常对照组比较,缺氧/缺糖和再给氧损伤模型组细胞存活率显著下降〔(100.0±4.4)%比(25.6±3.7)%〕,细胞死亡率〔(5.0±2.2)%比(71.2±9.2)%〕、坏死率〔(2.6±1.2)%比(46.8±10.4)%〕、凋亡率〔(3.1±0.8)%比(16.0±4.9)%〕、LDH漏出率〔(20.1±5.8)%比(66.4±7.6)%〕均显著升高(P均<0.01)。麝香酮各终浓度组的细胞存活率显著提高〔(42.7±1.2)%~(47.8±1.7)%,P均<0.01〕,细胞死亡率〔(22.7±5.2)%~(36.1±5.9)%〕、坏死率〔(24.3±8.3)%~(28.9±8.7)%〕、凋亡率〔(7.8±3.1)%~(10.4±4.9)%〕、LDH漏出率〔(37.6±4.1)%~(40.6±2.4)%〕均显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论:麝香酮对SH-SY5Y神经细胞缺氧/缺糖和再给氧损伤具有显著的保护作用,提示麝香酮可能应用于中风病急性期的治疗。     

脑源性神经营养因子对缺氧神经元的保护作用及其细胞内信号传递

目的:观察体外培养大鼠胚脑皮质神经元对缺氧耐受的时间窗,探讨外源性脑源性神经营养因子对缺氧神经元保护作用的时效-量效关系,及该保护作用可能的细胞内信号传递途径。方法:实验于2004-02/2005-02在四川大学华西医院移植工程及移植免疫实验室完成。体外培养孕17～19dSD大鼠皮质神经元,随机数字法分为基线对照组、单纯缺氧组及缺氧 脑源性神经营养因子组,7d后作缺氧培养,采用四氮唑盐比色法检测0～10h段各时间点单纯缺氧组和缺氧 脑源性神经营养因子组(分别在缺氧前24h及缺氧前即刻加入25～100μg/L脑源性神经营养因子)存活率的差别,并用Westernblotting检测两组神经元在Akt/磷酸化Akt及CREB/磷酸化CREB表达的差别。结果:①脑源性神经营养因子对缺氧神经元的保护作用是相对的,该保护作用具有时效-量效关系,缺氧前24h加入大剂量脑源性神经营养因子组(100μg/L)优于缺氧即刻加入小剂量(25μg/L)组,缺氧损伤到一定程度后(>10h)脑源性神经营养因子的保护作用将明显减弱犤缺氧前24h加入100μg/L脑源性神经营养因子在1,2,4,8,10h细胞活性分别为基线对照组的(133.85±3.72)%,(109.83±5.43)%,(86.15±0.68)%,(53.78±1.71)%,(33.41±1.64)%,而缺氧前即刻加入25μg/L脑源性神经营养因子组在以上时点细胞活性分别为基线对照组的(81.55±1.07)%,(92.10±4.89)%,(78.75±1.87)%,(43.58±2.42)%,(33.13±0.94)%,单纯缺氧组的细胞活性分别为基线对照组的(82.12±3.15)%,(81.79±2.61)%,(64.5±4.56)%,(45.9±1.74)%,(35.45±1.25)%犦。②加入脑源性神经营养因子可使磷酸化Akt表达增加,磷酸化CREB表达提前并维持较长时间。结论:脑源性神经营养因子可减轻缺氧对神经元的损害,而Akt表达上调可能是脑源性神经营养因子发挥其对缺氧神经元保护作用的重要途径之一。     

纳洛酮对缺氧大鼠皮质神经元的保护作用

背景：纳洛酮对脑缺血再灌注损伤细胞的保护作用机制尚不明确。选择体外培养皮质神经元研究纳洛酮疗效可排除多重因素干扰。目的：观察缺氧对体外培养大鼠皮质神经元的影响及纳洛酮的保护机制。设计：重复测量设计。地点和对象：实验地点：军事医学科学院神经生物学研究室。研究对象：体外培养12d的Wistar大鼠皮质神经元。干预：取体外培养12d的Wistar大鼠皮质神经元，随机分为正常对照组、缺氧组、纳洛酮组(缺氧前24h加纳洛酮预处理)；缺氧6h后在常氧下继续培养24h。主要观察指标：观察各种条件下神经元的存活率和形态学的改变，测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果：缺氧后可见神经元胞体肿胀、细胞死亡，LDH渗出量增多[6h：正常对照组为(78．68&;#177;7．34)％，缺氧组为(194．38&;#177;22．32)％；12h：正常对照组为(77．98&;#177;8．85)％，缺氧组为(331．66&;#177;36．12)％]，细胞存活率减少[6h：正常对照组为(91．82&;#177;2．89)％，缺氧组为(66．96&;#177;4．98)％；12h：正常对照组为(90．84&;#177;2．61)％，缺氧组为(32．02&;#177;6．34)％]，差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。经纳洛酮预处理的神经元，缺氧后神经元胞体肿胀、细胞死亡程度轻于缺氧组，LDH渗出[6h：(159．86&;#177;34．03)％；12h：(256．28&;#177;28．29)％]显著低于缺氧组(P&;lt;0．01)，而存活率[6h：(78．08&;#177;4．15)％：12h：(53．68&;#177;4．32)％]明显高于缺氧组，差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。结论：对缺氧诱导的皮质神经元的损伤，纳洛酮具有明显的保护作用。     

异丙酚预处理诱导PC12细胞缺氧耐受作用研究

目的 观察异丙酚预处理对PC12细胞缺氧损伤的影响.方法 对数生长期的PC12细胞分为四组:对照组(C组),普通培养箱内常规培养;脂肪乳剂组(F组),在细胞培养基中加入10%脂肪乳剂,置普通培养箱内常规培养;缺氧组(H组),细胞置三气培养箱内培养,设置培养条件为2% O2、5% CO2;异丙酚+缺氧组(PH组),在细胞培养基中加入终浓度为2 mmol/L的异丙酚,再置入三气培养箱培养,条件设置同H组.四组细胞均在培养4 h后行细胞活力和细胞凋亡检测.结果 C组与H组之间细胞活力和细胞凋亡率的差异有统计学意义(P<0.05);与H组相比,PH组细胞活力明显增高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05).结论 异丙酚预处理改善PC12细胞活力,通过抑制细胞凋亡诱导PC12细胞缺氧耐受.     

促红细胞生成素对大鼠脊髓运动神经元缺氧性损伤的保护作用

目的观察重组红细胞生成素(EPO)对大鼠脊髓运动神经元细胞缺氧性损伤的保护作用。方法对Wistar 乳鼠脊髓运动神经元细胞进行原代分离培养,通过去除培养液中氧气来模拟脊髓缺氧。倒置显微镜下观察细胞形态变化,Western blotting 检测EPO受体(EPOR)蛋白的表达,噻唑蓝(MTT)比色法及乳酸盐脱氢酶(LDH)活力测定观察加入不同浓度EPO对神经元细胞的保护作用。结果与正常对照组比较,缺氧组脊髓运动神经元缺氧后EPOR表达及LDH浓度明显增加(P<0.01),细胞存活率明显降低(P<0.01);与缺氧组比较,EPO 组EPOR 表达及LDH 浓度降低(P<0.05),细胞存活率明显增强(P<0.01),且与浓度相关。结论EPO可减轻缺氧对运动神经元的损害,而EPOR表达上调可能是EPO发挥其对缺氧神经元保护作用的重要途径之一。     

培养星形胶质细胞缺氧/复氧时水通道蛋白4表达的变化

目的:探讨缺氧/复氧对体外培养星形胶质细胞水通道蛋白4(AQP4)表达的影响.方法:培养的大鼠脑皮层星形胶质细胞分成两组:正常对照组和缺氧/复氧组.缺氧8 h后复氧.根据复氧时间不同,又分为复氧0、4、6、8、12、24 h 6个亚组.于各时间点以检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率,Western blot法检测AQP4的表达.结果:缺氧8 h后随着复氧时间的延长,细胞存活率逐渐降低,至复氧12 h时,达最低,仅有对照组的81.3%,至复氧24 h,又有轻度增加;LDH的漏出率逐渐增多,至复氧24 h达最高峰.AQP4表达随着复氧时间延长而逐步增多,至复氧12 h时达最高峰,为正常对照组的(2.52±0.35)倍,24 h时略有下降.结论:缺氧/复氧过程能对体外培养的星形胶质细胞产生损伤作用的同时,发生了AQP4的表达时程变化.     

中药川芎、当归有效成分对缺氧后复氧大鼠海马神经元钠、钾电流的作用

背景:中药红景天、人参、当归的有效成分具有抗缺氧损伤的作用。目的:从细胞电生理角度观察中药芎归滴丸对脑海马神经元的保护作用。设计:以细胞为观察对象,自身对照观察。单位:解放军第八十八医院和解放军军事医学科学院。材料:实验于2002-03/08在解放军军事医学科学院毒物药物研究所完成。选择新生清洁级Wistar大鼠1只,取其海马,将其分离培养成海马神经元细胞,然后选取9例海马神经元细胞,将其放入3个培养皿中培养,每个培养皿中3例神经元细胞,将其分为缺氧-复氧前后(对照组)、芎归滴丸(由解放军第八十八医院制剂室提供,主要成分为川芎和当归的挥发油)1×10-6mol/L组和芎归滴丸10×10-6mol/L组。方法:缺氧-复氧前后组分为两个亚组(即缺氧-复氧前、缺氧-复氧后),均不进行药物干预;芎归滴丸1×10-6mol/L组分为两个亚组(即芎归滴丸1.0×10-6mol/L 不缺氧组、芎归滴丸1×10-6mol/L 缺氧组);芎归滴丸10×10-6mol/L组分为两个亚组(即芎归滴丸10×10-6mol/L 不缺氧组、芎归滴丸10×10-6mol/L 缺氧组)。采用膜片箝全细胞记录方法检测缺氧-复氧前后体外培养的大鼠海马神经元的电压门控性Na 、K 电流。主要观察指标:体外培养的大鼠海马神经元的电压门控性Na 、K 电流幅度。结果:①海马神经元的电压门控性Na 电流幅度变化:缺氧-复氧后明显低于缺氧-复氧前犤(-3.8±1.0,-10.3±0.5)nA,t=3.49,P<0.01犦。②海马神经元的电压门控性K 电流幅度变化:缺氧-复氧后K 电流的激活阈值由-40mV变为-20mV,电流幅度变化差异无显著性意义。③芎归滴丸预处理后缺氧-复氧前后海马神经元的Na 、K 变化:缺氧-复氧前海马神经元ⅠNa、Ⅰk在阈值处的幅度很接近,差异无显著性意义。缺氧-复氧后芎归滴丸10×10-6mol/L组高于芎归滴丸1×10-6mol/L组和缺氧-复氧后犤(-58.5±1.9,-6.9±1.4,-3.8±1.0)nA,t=7.51,P<0.05犦。结论:芎归滴丸对海马神经元的缺氧损伤有抑制作用。     

热休克预处理对肠上皮细胞缺氧-再给氧损伤的保护作用及其机制

目的 :观察热休克预处理对肠上皮细胞 (IEC 6 )缺氧再给氧损伤的影响 ,并探讨热休克蛋白 70(HSP70 )的细胞保护作用。方法 :体外培养 IEC 6细胞 ,分为正常对照组、单纯缺氧再给氧组及热休克预处理组 ,观察缺氧再给氧后各组细胞 HSP70及 Bcl 2表达及细胞活力、乳酸脱氢酶 (L DH)漏出情况 ;用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 :热休克预处理可诱导 HSP70产生 (P <0 .0 1) ,显著增加缺氧再给氧处理后IEC 6细胞活力 (P<0 .0 5 ) ,使 L DH漏出减少 (P<0 .0 5 ) ,凋亡相关基因 Bcl 2表达明显增加 (P<0 .0 1) ,细胞凋亡率明显降低 (P<0 .0 1)。结论 :热休克预处理可能通过诱导 HSP70表达来减轻肠上皮细胞缺氧再给氧损伤 ;增加细胞 Bcl 2基因表达并抑制肠上皮细胞缺氧再给氧后细胞凋亡可能是其保护作用机制之一。     

腺病毒介导的热休克蛋白70在神经元和胶质细胞中的抗缺氧研究

目的 探讨重组腺病毒介导的热休克蛋白70(HSP70)表达对神经元和胶质细胞缺氧/再复氧损伤的保护作用.方法 制备携带全长HSP70基因的重组腺病毒vAd-HSP70.感染体外培养的神经元和胶质细胞,检测靶细胞中外源性HSP70的表达.感染vAd-HSP70 24、48、72 h组和感染vAd-GFP对照组的细胞经缺氧/再复氧处理后,分别测定细胞活性、细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性及线粒体和胞质内细胞色素C含量.结果 感染vAd-HSP70的神经细胞可检测到外源性HSP70基因表达.经缺氧/再复氧处理,感染vAd-HSP70组细胞活性较感染vAd-GFP对照组明显增强(P均＜0.05);感染vAd-HSP70 24、48、72 h组细胞培养上清液中LDH活性[(1 480±121)、(1 023士106)、(1 132±197)U/L]均明显低于感染vAd-GFP对照组[(1 976±190)U/L],线粒体中细胞色素C含量(0.986±0.012、1.028±0.007、1.014±0.008)均明显高于感染vAd-GFP对照组(0.970±0.003),而胞质中的细胞色素C含量(0.987±0.008、0.960±0.005、0.964±0.003)则低于感染vAd-GFP对照组(1.011±0.005,P＜0.05或P＜0.01),其中以感染48 h最为理想(P均＜0.01).结论 腺病毒介导的外源性HSP70表达可保护神经元和胶质细胞抵抗缺氧/再复氧损伤,具有明确的细胞保护作用.     

洛伐他汀对谷氨酸诱导的兴奋性毒性损害的神经保护作用

目的探讨洛伐他汀(LOV)对谷氨酸诱导的大鼠皮质神经元兴奋性毒性损害的神经保护作用。方法选用孕期17d的SD大鼠。取皮质神经元接种培养。实验分为对照组、谷氨酸组、LOV预处理+谷氨酸组、喜树碱组、LOV预处理+喜树碱组。通过台盼蓝排除实验评估细胞活力及免疫荧光细胞化学技术测定神经元形态。结果与未处理组相比.谷氨酸处理组大部分细胞失去活力(P<0.001),在谷氨酸处理神经元之前,洛伐他汀500 nmol/L预处理3 d、5 d.能显著改善细胞活力(P<0.001)。与未处理组相比,喜树碱处理组大部分细胞失去活力(P<0.001).而在喜树碱处理前应用洛伐他汀预处理1 d、3 d、5 d。未见细胞活力改善(P>0.05)。免疫荧光细胞化学技术测定显示,与未处理组相比,谷氨酸处理组MAP-2阳性神经元显著减少(P<0.001),突起的数目和长度均明显减少.洛伐他汀500nmol/L预处理能减轻谷氨酸诱导的MAP-2阳性神经元形态损害。结论洛伐他汀选择性地减轻谷氨酸诱导的大鼠皮质神经元兴奋性毒性损害及形态损害,提示洛伐他汀对兴奋性毒性损害相关神经病理有潜在的神经保护作用。     

Delta阿片受体激动剂DADLE对神经元转录的影响

目的:观察Delta阿片受体激动剂DADLE([D-Ala2,D-Leu5]enkephalin)对大鼠原代皮层神经元转录的影响.方法:体外培养皮层神经元,免疫荧光法鉴定其纯度,以不同浓度的DADLE与神经元共培养不同的时间,应用[3H]标记脲嘧啶掺入法测定神经元的转录水平,MTT法检测细胞活力.结果:DADLE在不同浓度均能抑制神经元的转录,但是其抑制率与浓度不呈线性关系,当浓度增加到1 nmol以上时其抑制率绝对值稳定在40%～60%左右.DADLE的转录抑制率与作用时间也不呈线性关系,当时间超过24 h后,其抑制率绝对值维持在40%一60%.将DADLE洗脱72 h后其抑制效果完全消失.MTT检测显示各个浓度的DADLE对神经元的活力影响无显著差异.结论:DADLE能可逆、无损伤抑制神经元的转录.