万古霉素和替考拉宁

万古霉素(图1)是一个极为重要的糖肽类抗生素,其抗菌谱很窄,基本上局限于很小一部分革兰氏阳性菌的种及一些螺旋体.近年多重耐药肠球菌(粪肠球菌)的出现,恢复了人们对万古霉素及其结构类似物替考拉宁(图2)的强烈兴趣,替考拉宁的体外活性更强.万古霉素是推荐用来治疗耐甲氧西林(β_内酰胺)金黄色葡萄球菌感染,包括败血症、心内膜炎、组织和骨感染的药物.对青霉素类过敏的患者可以使用.万古霉素对链球菌也有作用,特别是当与一个氨基糖苷类药物合用时效果更佳(协同作用).口服万古霉素对产毒的艰难梭菌有效,故可用来治疗由抗生素引起的伪膜结肠炎.因此,万古霉素是一个非常有价值的抗生素,不过常常被用作经β_内酰胺类抗生素或其它药物治疗失败后才使用的最后手段.     

替考拉宁的临床应用

替考拉宁是继万古霉素后研制的治疗G＋球菌的糖肽类抗生素，由于化学结构上增加了脂肪侧链，相对分子量增高，在药物代谢动力学上显示出良好的特性，组织穿透力强，能在细胞内浓集，蛋白结合率超过90%，半衰期明显延长，除静脉给药外也可肌内注射。临床主要用于重症G＋球菌感染。对替考拉宁的应用要谨慎合理，避免耐药菌过早产生。     

替考拉宁高产菌选育及发酵条件优化

摘要：目的 获得一株稳定遗传的高产新菌株,并提高替考拉宁产量。方法 以替考拉宁产生菌游动放线菌T19为出发 菌株,通过常压室温等离子(ARTP)诱变技术,获得一株具有稳定遗传性的高产新菌株,并对转速、接种量、温度和pH等发酵 条件进行了优化,确定了最佳的发酵工艺条件,从而提高了替考拉宁的产量。结果 诱变后菌株的发酵效价水平较出发菌株提 高了42%;在转速为220 r/min,接种量为7.5%,温度为28℃,pH为6.5时,该菌株发酵效价水平比出发菌株提高了80%。结论 ARTP诱变技术可有效用于游动放线菌的诱变选育,可大幅度提高替考拉宁的产量,为其工业化生产奠定了基础。     

替考拉宁临床应用中的不良反应

替考拉宁是一种新型糖肽类抗生素,分子结构与万古霉素相似,在治疗对青霉素或头孢菌素耐药的革兰阳性菌如MRSA和肠球菌感染方面优于万古霉素。临床主要用于各种严重的革兰阳性菌感染。在临床实际使用中出现了好多不良反应,需临床医师、药师和护师多关注,以保证该药在临床使用中合理、安全,真正达到治疗作用。     

HPLC法测定替考拉宁血药浓度

目的利用单因素实验法建立和优化临床替考拉宁（TEC）HPLC分析方法,为临床合理用药和药动学研究提供检测方法。方法用甲醇沉淀处理血液标本,Waters ODS2（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱为分析柱,利用单因素实验法优化色谱条件。实验设计通过改变柱温、p H、流动相的组成比例,验证每种条件对各成分分离度（R）、理论板数（N）和拖尾因子（T）的影响,并用所建立的方法研究TEC在大鼠肝脏和血清中的分布动力学。结果优化后流动相为0.05 mol·L-1KH2PO4缓冲溶液-乙腈（22∶78）,用磷酸调p H至2.65,波长为200 nm,流速为1.2 m L·min-1,柱温30℃,进样量为100μL。TEC的最低检测质量浓度为0.1 mg·L-1,在0.2²04.8 mg·L-1内线性较好（r=0.995 8）,相对回收率为（98.66±8.38）%^100.75±8.32%,平均日内、日间精密度（RSD）分别为9.83%和9.87%,分离度（R）为1.5。以15 mg·kg-1单剂量静脉给药的大鼠,3 h后测得血清和肝脏中TEC质量浓度分别为（152.5±7.01）mg·L-1和（14.99±3.54）mg·L-1,21 h后得血清和肝脏质量浓度分别为（3.19±1.53）mg·L-1和（13.39±2.39）mg·L-1。结论该方法灵敏、快速、简便和特异性强且稳定可靠,适用于临床TEC血药浓度的监测及药动学的研究。     

替考拉宁的高效液相色谱分析方法

替考拉宁(teicoplanin)是一个新的糖肽类抗生素,主要由5个结构近似的化合物(TA2-1、TA2-2、TA-3、TA2-4、TA2-5)组成的混合物.第 6个活性组份(TA3-1)在发酵液中未发现,但在粗品及精制品中有少量存在,该化合物是TA2的降解(水解)产物,另外替考拉宁还存在有两个亲脂性较大的类似物(RS-1,RS-2)及两个亲脂性较小的类似物(RS-3,RS-4).由于替考拉宁复杂的化学组成,建立准确、简便、快速的HPLC分析方法难度较大,有关的HPLC分析方法报道较多,以下将对HPLC分析方法有关的实验条件及应用进行归纳总结.     

糖肽类抗生素替考拉宁的研究进展

替考拉宁是糖肽类抗生素,与万古霉素比较具有更强的脂溶性,半衰期更长,对金葡萄的抗菌活性与万古霉素相似,对肠球菌的抗菌活性强于万古霉素。具有良好的组织、体液分布性,药物不良反应轻。可静脉或肌肉给药,治疗金葡菌和肠球菌引起的各种感染有良好的效果。     

替考拉宁相关精神症状

1例79岁男性患者,因支气管扩张合并肺部感染,病情控制不佳,给予替考拉宁400mg/d溶于0.9%氯化钠注射液250ml静脉滴注。第2天患者出现兴奋、欣快、秽语、谵妄、易激怒,并伴有皮肤瘙痒。第3天精神症状逐渐加重。停用替考拉宁,2d后上述症状消失。     

替考拉宁临床应用合理性分析

目的:调查和分析临床应用替考拉宁的用药合理性,为替考拉宁的临床合理应用提供参考依据。方法:通过电子病历系统筛选2015年1月至12月期间使用替考拉宁的住院患者,提取患者临床资料并进行统计分析。结果:108例患者应用替考拉宁治疗,以肺部感染为主,占68.52%。病原学标本送检率达98.1%,送检样本阳性率为45.4%,根据细菌培养和药敏试验结果选用替考拉宁的37例(34.3%)。47例(43.5%)患者替考拉宁用药存在不合理之处,主要表现为未予起始负荷量(89.4%)、负荷剂量给药方案不合理(17.0%)以及未根据肾功能水平调整剂量(19.1%)等。结论:应继续规范替考拉宁的临床使用及给药方案,特别是负荷剂量及肾功能不全患者的剂量调整,提升替考拉宁合理使用水平。     

纳他霉素产生菌基因组重排育种

Streptomyces gilvosporeus SG-1原生质体经紫外线诱变并筛选链霉素抗性菌株，获得纳他霉素高产菌株。在上述高产突变株中选择4株作为亲本进行基因组重排育种，筛选得到了高产重排菌株，其中一株重排菌株S．gilvosporeus GS-74的纳他霉素产量为3574mg／L。为产量最高的亲本菌株的153％，比原始出发菌株SG-1提高1.17倍。     

基因组重排选育麦迪霉素高产菌株

目的以生米卡链霉菌(Streptomyces mycarofaciens)突变株为研究对象,选育麦迪霉素高产菌株。探索并验证基因组重排技术在菌种选育中的重要作用。方法通过2轮多亲株灭活原生质体融合技术实现基因组重排。将来自不同育种方法的5株麦迪霉素高产菌株B64-5、01-GM-1、H-101、H-106和H-108作为第一轮亲本,在质量浓度为3 g.L-1溶菌酶3、2℃水浴60 min条件下制备原生质体,分别采用紫外线照射148 s和52℃加热60 min灭活原生质体,然后采用质量分数35%PEG 4000、37℃保温2 min诱导原生质体融合。融合子经过初筛和复筛,获得产量进一步提高的重组子作为亲本进行第二轮的多亲株灭活原生质体融合实验。用生物学方法测定麦迪霉素效价,用HPLC方法测定麦迪霉素A1含量。结果与结论经过2轮基因组重排实验成功选育出3株高产且遗传稳定的麦迪霉素生产菌株。其中1株菌株GSZ2-32发酵前补加前体X-1后摇瓶产量比原始出发菌株Streptomyces mycarofaciens var.464提高1.1倍,麦迪霉素A1(MDMA1)质量分数含量保持在80%以上。     

替考拉宁与盐酸万古霉素致严重水疱型药疹

1例74岁男性患者,因直肠癌根治术后出现咳嗽、咯痰、发热约1个月,先后给予拉氧头孢钠、比阿培南、莫西沙星、替考拉宁、盐酸万古霉素、利柰唑胺和达托霉素治疗。在应用替考拉宁12d后换用莫西沙星,应用莫西沙星的第4天,患者四肢及躯干部位出现充血性皮疹伴瘙痒感。停用莫西沙星、改用盐酸万古霉素并给予抗过敏对症治疗后患者皮疹好转。应用盐酸万古霉素第8天,患者四肢再次出现红疹,停用盐酸万古霉素并换用替考拉宁。应用替考拉宁第5天患者皮疹加重,部分皮疹表面出现水泡并连接成片,换用利奈唑胺并继续抗过敏治疗,陈旧水泡逐渐吸收,未再出现新发水疱。考虑可能为替考拉宁引起的迟发型过敏反应,不排除还存在与盐酸万古霉素交叉过敏的可能。     

HPLC法测定替考拉宁组分和有关物质

目的建立替考拉宁组分和有关物质测定的HPLC法。方法使用YWGC18柱(200m m×4.6mm,10μm),流动相为0.02molL/磷酸二氢钠(pH 6.0)∶乙腈(73∶27),流速1.0mlm/in,检测波长230nm。结果替考拉宁在浓度70～430μg/m l内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率98.93%,RSD为0.86%(n=9)。结论该方法快速、简便、准确,可用于替考拉宁组分及有关物质测定。     

胶束电动毛细管色谱法分析替考拉宁

目的建立毛细管电泳分离替考拉宁各主要组分的新方法。方法通过表面活性剂的浓度、缓冲液的浓度及pH、温度及电压的优化,选择最佳的分离条件。结果最佳分离条件硼酸盐∶磷酸二氢钠缓冲液(40mmol/L硼砂,10mmol/L磷酸二氢钠,用硼酸调节pH9.35,内含0.35%十二烷基硫酸钠);检测波长214nm,电压30kV,30℃,基线分离了替考拉宁的主要组分,并对所建立的新方法进行了方法学验证。结论建立的毛细管电泳法实用性强,费用低,为该品种的质量控制提供了一种可选择的新方法。     

Retrospective study of teicoplanin as home continuation of hospital-initiated therapy

Data were collected retrospectively on 69 cases of infection in 57 patients who had received teicoplanin on a non-inpatient basis for at least part of a course of therapy. A total of 52 records related to patients who were undergoing treatment for a hematological malignancy, most of whom had central venous catheter infection or catheter-related septicemia. Eleven cases were related to the treatment of bone and/or joint infection, two were concerned with the treatment of endocarditis and two were linked to soft tissue infections. In most cases in which bacteriological identification was made, coagulase-negative staphylococci were the causative organisms. Other pathogens included Staphylococcus aureus, streptococci, enterococci and diphtheroids. In most cases, the dose of teicoplanin used corresponded to the recommended dose for serious infections. All patients received teicoplanin intravenously and some patients administered the drug themselves. Clinical success (cure plus improvement) was achieved in 94% of evaluable cases and bacteriological success in 83%. Two adverse events were reported, but neither related to problems of antibiotic administration in a non-inpatient setting.     

Enhanced production of tanshinone IIA in endophytic fungi Emericella foeniculicola by genome shuffling

Context: Tanshinone IIA, commercially produced from Salvia miltiorrhiza Bunge (C.Y.Wu) (Labiatae), has various biological benefits. Currently, this compound is mainly extracted from plants. However, because of the long growth cycle and the unstable quality of plants, the market demands can barely be satisfied.

Objective: The genomic shuffling technology is applied to screen the high-yield tanshinone IIA strain, which could be used to replace the plant S. miltiorrhiza for the production of tanshinone IIA. The change in the production of tanshinone IIA is clarified by comparing it with the original strain.

Materials and methods: Tanshinone IIA was extracted from Strains cells, which was prepared through 0.5?mL protoplast samples by using hypertonic solution I from two different strains. Then, it was analyzed by high-performance liquid chromatography at 30?°C and UV 270?nm. Total DNA from the strains was extracted for RAPD amplification and electrophoresis to isolate the product.

Results: In this study, a high-yield tanshinone IIA strain F-3.4 was screened and the yield of tanshinone IIA was increased by 387.56?±?0.02?mg/g, 11.07 times higher than that of the original strain TR21.

Discussion: This study shows that the genetic basis of high-yield strains is achieved through genome shuffling, which proves that genome shuffling can shorten the breeding cycle and improve the mutagenesis efficiency in obtaining the strains with good traits and it is a useful method for the molecular breeding of industrial strains.     

替考拉宁的分离纯化

目的 优化替考拉宁纯化工艺,制备纯度高、满足欧洲药典标准的替考拉宁。方法 采用大孔树脂吸附、结晶等技术分离替考拉宁,结合二元液相色谱系统,以聚合物微球为载体,对填料的型号和洗脱条件进行优化,最终得到高质量替考拉宁样品。结果 PS30-300微球为最佳纯化介质,洗脱剂为65%甲醇-水,上样量为10mg/mL填料,洗脱流速为1.5~2.0BV/h柱体积时洗脱效果最佳。在此实验条件下产品纯度≥99%,纯化收率≥75%。结论     

替考拉宁的分离纯化

目的优化替考拉宁纯化工艺,制备纯度高、满足欧洲药典标准的替考拉宁。方法采用大孔树脂吸附、结晶等技术分离替考拉宁,结合二元液相色谱系统,以聚合物微球为载体,对填料的型号和洗脱条件进行优化,最终得到高质量替考拉宁样品。结果 PS30-300微球为最佳纯化介质,洗脱剂为65%甲醇-水,上样量为10mg/mL填料,洗脱流速为1.5～2.0BV/h柱体积时洗脱效果最佳。在此实验条件下产品纯度≥99%,纯化收率≥75%。结论该分离纯化方法简单,快速,易于操作,适于工业化生产。     

替考拉宁分离条件的响应面法优化

利用大孔吸附树脂分离纯化替考拉宁,并对其分离条件进行优化。以替考拉宁发酵液提取粗品为原料,研究上样浓度、解吸剂、解吸剂pH、解吸剂浓度等因素对替考拉宁含量的影响。在单因素试验基础上对上样浓度、解吸剂pH、解吸剂浓度三个因素进行Box-Behnken试验设计,以替考拉宁含量为响应值,利用响应面分析法对分离条件进行优化。在上样浓度为2500μg/mL、解吸剂pH2.0、解吸剂浓度40%的分离条件下,替考拉宁含量达90.8%。响应面法优化替考拉宁含量比优化前的单因素试验结果有较大提高。