小鼠特异性抗体与效应细胞在体外协同杀伤日本血吸虫童虫作用的研究

在体外试验系统中,特异性抗血清或各种效应细胞单一因素与日本血吸虫童虫作用,对童虫一般不出现有意义的杀伤作用。但当两者共同作用于虫体时,则可使粘附各种效应细胞的童虫比率和童虫死亡率显著增高。这种作用在一定范围内随着特异性抗体的浓度、效应细胞与童虫的比率(效一靶比率)和孵育时间的增加而增强。在同样条件下,一般均以巨噬细胞(Mφ)和嗜酸性粒细胞(Eos)的作用较强,中性粒细胞(Neu)作用较差。显微镜下观察可见Mφ和Eos紧密粘附于虫体表面,致虫体表面出观明显损伤。而Neu在虫体粘附一定时间后自由体脱落,童虫结构相对比较完整。     

抗体和(或)补体依赖细胞介导的对周期型马来丝虫微丝蚴细胞毒作用的体外研究

用碘六醇(Iohexol)分离液从大鼠腹腔渗出液中分离出效应细胞用于体外试验。结果表明,在特异性抗周期型马来丝虫微丝蚴(mf)血清存在时,中性粒细胞(Neu)和巨噬细胞(Mφ)对mf都有强烈的粘附和杀伤作用;嗜酸粒细胞(Eos)只表现粘附效应。正常鼠血清存在时,Neu、Mφ对脱鞘mf的粘附作用要高于Eos。血清加入EDTA可明显地抑制效应细胞的粘附和细胞毒作用,而加入EGTA则无类似现象,提示补体通过激活替代途径参与了该反应。用葡萄球菌A蛋白(SPA)或兔抗大鼠IgG免疫球蛋白处理抗血清后,粘附细胞的虫体数显著下降,表明细胞的粘附效应主要依赖于IgG抗体。通过相差显微镜和电镜观察,显示效应细胞粘附于虫体表面,并对其产生损伤作用。     

抗体依赖细胞介导对马来丝虫L_3细胞毒作用的体外研究

在体外小鼠特异性抗周期型马来丝虫感染期幼虫(L_3)血清(AIMS)或正常小鼠血清(fNMS)存在时,中性粒细胞(Neu)、巨噬细胞(Mφ)和嗜酸性粒细胞(Eos)均可粘附于虫体表面,Neu和Mφ对L_3的杀伤作用明显高于Eos。Eos只是在AIMS存在时,才表现出弱的细胞毒作用。通过用羊抗鼠IgG血清或葡萄球菌A蛋白处理AIMS后发现细胞毒作用消失,提示参与该作用的抗体分子主要是IgG。IFAT表明L_3表面确实存在IgG分子。AIMS经56℃,30min可降低细胞毒作用,说明补体能增强该作用。该作用还可因加入EDTA而不是EGTA受到明显抑制,表明补体是通过激活替代途径参与了该反应。扫描电镜观察被细胞粘附的虫体表面出现损伤现象。     

嗜酸粒细胞在日本血吸虫(中国大陆株)感染小鼠体内的作用

以抗嗜酸粒细胞血清(AES)对嗜酸粒细胞(Eos)在日本血吸虫(中国大陆株)感染小鼠体内的作用进行了研究。小鼠经初次感染日本血吸虫尾蚴5wk后,用200条尾蚴攻击感染,并经AES处理,肺部回收童虫数明显高于用正常兔血清(NRS)处理的对照组;正常小鼠经被动转移免疫血清后感染日本血吸虫尾蚴,用AES处理,肺部回收童虫数比NRS对照组明显增多。用日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)皮下致敏小鼠,2wk后经尾静脉注射虫卵形成肺肉芽肿反应,经AES处理后,肺虫卵肉芽肿内Eos受到明显抑制,肉芽肿平均直径明显小于NRS对照组。试验结果提示,Eos是宿主体内对日本血吸虫童虫有效的杀伤细胞之一,其杀伤作用是抗体依赖的Eos介导的细胞毒作用;AES能特异性地仰制肉芽肿内的Eos,并对不同时期肉芽肿的直径有明显的抑制作用。     

抗血吸虫感染免疫效应机理的体外研究进展

迄今已积累的研究资料表明,宿主感染血吸虫后产生的伴随免疫涉及多种免疫效应机理,其中抗体依赖的细胞介导的对童虫的细胞毒作用(ADCC),可能是主要免疫效应之一。本文综述了有关嗜酸粒细胞、中性粒细胞、单核-巨噬细胞参与的 ADCC 体外免疫效应机理的研究进展。嗜酸粒细胞依赖抗体的杀童虫作用分为两个步骤:即依赖细胞上的 Fc 受体与结合在童虫表面的抗体 Fc 段搭桥,随之细胞中颗粒的内容物作为配体促进其与童虫不可逆的结合,从而杀伤童虫。嗜酸粒细胞颗粒中的主要碱性蛋白、阳离子蛋白为主要的杀童虫物质,此外过氧化物酶-过氧化氢-卤化物系统可能也有一定的杀童虫作用。补体、肥大细胞的产物、淋巴因子等对嗜酸粒细胞介导的 ADCC 有促进作用。尽管在体外实验中,中性粒细胞有与嗜酸粒细胞相似的过氧化物酶-过氧化氢-卤化物系统杀伤童虫的机制,但其在保护性免疫表达中的作用迄今仍不明确。近年来,许多实验证明单核-巨噬细胞不仅在体外能依赖抗体特异地杀伤皮肤期童虫,而且因感染、免疫接种或无关抗原(如 BCG)的刺激激活的巨噬细胞能非特异杀伤皮肤期童虫和肺期童虫。巨噬细胞杀伤童虫的细胞毒机理尚不明确,可能与精氨酸酶和髓过氧化物酶有关。运用巨噬细胞功能缺陷的小鼠品系进行的体内诱导免疫力的研究,进一步支持巨噬细胞在抗血吸虫感染的保护性免疫的产生中可能起中心作用。     

抗体和补体依赖嗜酸粒细胞介导的对日本血吸虫童虫作用电镜研究

本文报道了在嗜酸粒细胞(Eos)介导的细胞毒效应过程中童虫形态变化的电镜观察及受损童虫释放乳酸脱氢酶(LDH)的测定。不同配体依赖的 Eos 介导杀伤童虫作用的强度和速度不同,即补体 抗体组和补体组出现较早,且前者所致损伤较重,抗体组童虫损伤出现较晚而轻微。受损童虫的 LDH 释放多寡顺序为抗体 补体>补体>抗体。不同配体依赖的 Eos 介导细胞毒作用的速度和电镜观察相符。     

抗体和/或补体依赖嗜酸粒细胞介导的细胞毒作用对血吸虫童虫的体外杀伤试验

以日本血吸虫中国大陆株童虫为实验对象,研究比较了嗜酸粒细胞(Eos)的细胞毒效应对抗体和/或补体的依赖作用。正交设计的体外杀伤试验表明补体和抗体均可作为配体参与Eos杀伤日本血吸虫中国大陆株童虫的细胞毒效应作用;配体依赖作用的大小顺序为抗体 补体>补体>抗体;在新鲜免疫血清1∶20、培养48h、效/靶比5000∶1时童虫死亡率最高。     

细胞表面Integin Mac-1在抗-16kDamAb介导的巨噬细胞对曼氏血吸虫童虫杀伤中的作用

激活的巨噬细胞(Mφ)是小鼠抗血吸虫病免疫力的重要效应细胞。诱生的腹腔Mφ在体外单独不能杀伤童虫,然而在Ab存在时,大鼠、正常狒狒腹腔Mφ和人单核细胞具有杀伤作用。本研究拟确定一些血清,尤其是多次接种疫苗的高免疫小鼠血清,和几株抗曼氏血吸虫(S.m.)的mAb是否能在体外介导由淀粉诱生的小鼠Mφ的杀伤作用;以及用mAb阻断试验研究各种细胞表面分子在Ab依赖的Mφ介导的杀伤中的作用。     

在体外人的嗜酸粒细胞和日本血吸虫童虫的相互作用:IgG依赖细胞的粘附和杀虫效果

作者旨在通过体外实验证明,血清中嗜酸粒细胞能粘附于日本血吸虫童虫,有杀灭童虫的作用。嗜酸粒细胞、中性粒细胞的制备:从5例嗜酸粒细胞增多症的患者,于治疗前抽静脉血加入肝素,然后按Gartner方法(1980)纯化。血吸虫童虫的收集:以钉螺逸出的日本血吸虫山梨株的尾蚴经肤感染小鼠,用Clegg     

以照射过的曼氏血吸虫尾蚴、成虫和/或虫卵免疫小鼠来产生抗童虫表面的抗体

作者在体外研究了两种抗血吸虫童虫的抗体水平,即与童虫表面结合抗体和嗜酸粒细胞依赖的细胞毒性抗体,并与尾蚴攻击感染的体外试验结果作了比较。评价抗体结合力的指标为计算粘连到每条能动的机械性转换童虫表面上的细胞数(p388D_1细胞有IgG-Fc段受体)。实验分9个组:A.每鼠感染经照射剂量为20 krad的尾蚴500条,在实验开始时和6周后各感染1次;B.除在开始时只感染1次外,余同A;C.除照射剂量为40krad外,余同A;D.除照射剂量为40krad和在开始时只感染1次外,余同A;E.感染     

在体外培养系统中中性粒细胞对日本血吸虫童虫的作用

3小时童虫在含病兔血清、补体和中性粒细胞的培养系统(ISCN)中培养48小时后,约60％的童虫体表有中性粒细胞附着,其中50.8％的童虫已死亡,含病兔血清不含补体(ISCN)、含正常小鼠血清及补体(NSCN)或含正常血清不含补体(NSN)的培养系统中,中性粒细胞粘附童虫体表较少,童虫的死亡率亦低。24小时童虫在ISCN中培养48小时后,中性粒细胞对童虫的附着及童虫死亡率均逊于3小时童虫。在ISCN中,中性粒细胞对72小时童虫几不附着。以中性粒细胞介导的杀死3小时童虫的作用依赖于抗体的存在,但不完全依赖于补体。     

曼氏血吸虫的免疫性:抗体依赖的嗜酸粒细胞对血吸虫童虫的杀伤作用

作者用 ~(51) Cr 标记曼氏血吸虫童虫,通过测定杀伤后童虫释出的 ~(51) Cr 量来分析抗体依赖的嗜酸粒细胞对血吸虫童虫的体外杀伤作用。本文报告了两个问题,第一是用高纯度的嗜酸粒细胞制剂进行体外试验,以便比较直接地观察嗜酸粒细胞的功能;第二用各种抗代谢药物分析嗜酸粒细胞对血吸虫童虫的杀伤作用机制。     

小鼠感染后不同时间血清对日本血吸虫童虫细胞介导的细胞毒作用

用抗体依赖、细胞介导的细胞毒试验(ADCC)观察了小鼠感染后不同时间血清在体外杀伤系统中对日本血吸虫童虫的作用规律。未加补体时,嗜酸粒细胞或巨噬细胞介导的童虫杀伤作用于感染后4wk出现明显作用,分别于5—7wk和6—8wk达高峰,然后下降,至11wk时降至4wk时的水平;而未加补体时无明显的中性粒细胞介导的杀伤作用。在补体参与下,这三种细胞均能介导对童虫的杀伤作用,且作用增强。证实ADCC是日本血吸虫获得性抵抗力的一个重要组分,嗜酸粒细胞、巨噬细胞介导的对童虫的细胞毒作用是不依赖补体的,而中性粒细胞介导的作用是依赖补体的。结果对选择免疫预防适宜时间和评价候选疫苗效果有参考意义。     

小鼠初次和攻击感染日本血吸虫尾蚴后皮肤内的细胞反应

对正常和慢性感染鼠,经耳廓皮肤分别初次和攻击感染日本血吸虫尾蚴。攻击感染15b后,慢性感染鼠皮肤内的嗜酸粒细胞(EOS)较初次感染鼠明显增加.两组鼠炎症细胞在童虫附近或包围完整及解体的童虫,形成粒细胞性微脓肿。超微结构显示,扁平的EOS紧贴童虫表面,并脱颗粒。粘附处局部皮层可见破坏现象。中性粒细胞(NEU)的粘附不如EOS紧密,未见脱颗粒现象,童虫皮层完整。结果提示,EOS是对日本血吸虫皮肤期童虫有效的杀伤细胞.     

小鼠白细胞和免疫血清对卫氏并殖吸虫童虫生物学特性的影响

目的　观察小鼠白细胞及免疫血清协同作用对卫氏并殖吸虫童虫的超微结构以及活力与侵袭力的影响。方法　将小鼠白细胞、免疫血清及卫氏并殖吸虫童虫在体外培养进行抗体依赖细胞介导的细胞毒性 (ADCC)试验 ;分别在倒置显微镜和扫描电镜下观察童虫的活性或超微结构 ,并通过再感染实验检测经ADCC试验后的童虫对新宿主的侵袭能力。结果　卫氏并殖吸虫童虫与小鼠白细胞及免疫血清共同培养后 ,虫体表面出现肿胀、水泡、破损 ,体棘消失、感觉乳突变形或消失等改变 ,但活力与侵袭新宿主的能力不变。结论　小鼠白细胞在免疫血清协同作用下对卫氏并殖吸虫童虫有一定程度的损伤 ,损伤的部位主要在皮层 ,但不影响其活力及侵袭力。     

青蒿琥酯治疗小鼠日本血吸虫病的血清学研究

目的观察青蒿琥酯对日本血吸虫感染小鼠的治疗作用及血清IgG的动态变化，探讨血清抗体与体外杀童虫效果的相关性。方法用日本血吸虫感染C57／BL6小鼠，在感染后8、15、22和29d分别一次性灌服300mg／kg青蒿琥酯，对照组小鼠灌服1％羧甲基纤维素钠。最后一次给药后7d剖杀小鼠，计算成虫数和虫卵数，以ELISA法检测小鼠血清中日本血吸虫特异性IgG抗体的水平，观察接受青蒿琥酯治疗的小鼠血清与巨噬细胞体外协同杀伤日本血吸虫童虫的效应。结果青蒿琥酯治疗组小鼠未检获成虫和虫卵；血清中日本血吸虫尾蚴抗原特异的IgG抗体水平在感染后21d达高峰，此后下降；成虫抗原特异的IgG抗体水平呈上升态势，二者与对照组比较差异均无显著性；青蒿琥酯治疗小鼠血清中虫卵抗原特异的IgG抗体呈低水平状态，显著低于对照组。青蒿琥酯治疗组小鼠血清和对照组小鼠血清均具有较强的体外杀童虫效果。结论青蒿琥酯对日本血吸虫感染的小鼠具有显著的治疗效果，其血清与巨噬细胞在体外具有协同杀伤童虫的作用。     

日本血吸虫(中国大陆株)童虫杀伤机理的体外研究-抗体依赖的小鼠中性粒细胞介导的细胞毒作用

运用体外免疫效应机理分析系统,证明了抗体依赖的小鼠中性粒细胞介导对日本血吸虫（中国大陆株）童虫的细胞毒作用（ADCC）。结果表明,正常小鼠的中性粒细胞能产生对日本血吸虫童虫的依赖抗体介导的ADCC反应,这种ADCC作用不依赖补体,补体对中性粒细胞介导的这种ADCC无增强作用。     

血吸虫病人血清体外诱导杀童虫作用的观察

通过比较日本血吸虫感染病人与正常人血清体外诱导小鼠白细胞杀童虫的作用,了解抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)在血吸虫感染宿主的获得性免疫中的作用.体外诱导小鼠白细胞杀童虫作用,日本血吸虫感染病人血清,无论是成人组还是儿童组,初次感染组还是重复感染组,均明显地强于正常人血清,表明抗血吸虫特异性抗体可以诱导细胞介导的细胞毒作用.证明日本血吸虫感染宿主体内存在着ADCC机制,该机制对于抵抗再次感染具有一定的作用,是日本血吸虫获得性免疫的重要组分.     

旋毛虫幼虫对嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的体内趋化作用

寄生虫感染,常引起宿主外周血液和虫体寄生部位嗜酸性粒细胞(Eos)、中性粒细胞(Neu)增多[1],这因为宿主对寄生虫产生的Eos趋化因子(ECF)和Neu趋化因子(NCF)引起的Eos、Neu聚集。作者探讨了旋毛虫幼虫的分泌排泄物(ES)及浸出液(EX)对Eos和Neu的趋化作用,以了解宿主对旋毛虫抗原的免疫应答。材料和方法幼虫ES抗原制备感染45d的小鼠肌肉内以人工胃液消化分离的活幼虫,经充分洗涤后取400条幼虫放入10mlPBS培养液(含青、链霉素各150U/ml),在37℃细胞培养箱中预培养6h,以除去可能来源于宿主的杂质,再将幼虫用PBS洗涤3次,更换培养液,在…     

Calpain抗体介导的对日本血吸虫童虫的细胞毒作用

目的　探讨日本血吸虫疫苗候选分子———钙离子激活的中性蛋白激酶 (Calpain)的保护性免疫力和免疫保护性机制。方法　用重组纯化的Calpain抗原免疫小鼠 ,制备抗Calpain血清 ,将机械转化的日本血吸虫童虫和同种鼠激活的嗜酸性粒细胞共同培养 ,观察细胞对血吸虫童虫的黏附及对童虫的杀伤效果。结果　重组Calpain抗原免疫小鼠后 ,产生了极高的抗Calpain特异性抗体 ,并介导了同种鼠的嗜酸性粒细胞对日本血吸虫童虫的黏附。在 3 7°C ,5 %CO2 培养 48h后 ,3 3 .8%的日本血吸虫童虫被杀死 ,与对照组 14 .5 %的自然死亡率相比显著增高 (P <0 .0 1)。结论　Calpain特异性抗体介导了对日本血吸虫童虫的细胞毒作用 ,提示Calpain可能是日本血吸虫的一个疫苗候选分子 ,该分子的重组抗原有可能应用于血吸虫病诊断