白英甾体总生物碱对人肺癌细胞A549裸鼠异种移植瘤的药效研究

目的 探讨白英抗肿瘤有效部位对人肺癌细胞A549裸鼠异种移植肿瘤生长抑制作用及作用强度。方法 在裸鼠腹腔内接种人肺癌细胞A549细胞株复制肿瘤模型,给予阳性对照药紫杉醇和白英甾体总生物碱干预后,测量肿瘤体积和肿瘤质量,计算肿瘤生长抑制率,比较组间抗肿瘤药效强度。结果 白英低、中、高剂量组(12,24,48 mg·kg-1)的相对肿瘤增殖率(T/C)分别为85.52 %、60.64 %、45.24 %,抑瘤率分别为2.35 %、49.79 %、48.93 %,而相同条件下,紫杉醇组(8 mg·kg-1)的T/C和抑瘤率分别为14.68 %、82.59 %。紫杉醇有明显的抗肿瘤作用,白英甾体总生物碱均有一定的抗肿瘤作用,其中中、高剂量组抗肿瘤作用更明显。结论 白英甾体总生物碱对人肺癌细胞A549裸鼠异种移植肿瘤的生长具有抑制作用。     

白英提取液对人肺癌A549细胞凋亡及Fas／FasL基因表达的影响

目的探讨白英提取液（STE）对人肺癌A549细胞凋亡及fas／fasL基因表达的影响。方法体外培养肺癌A549细胞，以0（正常对照组），10，20和40mg／ml STE处理A549细胞48h，并以25mg／L顺铂（DDP）作为阳性对照、采用MTT法检测细胞增殖抑制率，TUNEL法检测凋亡率，半定量RT—PCR检测fas和fasLmRNA表达。结果与正常对照组比较，STE各浓度组细胞增殖抑制率显著上升（P〈0．01），细胞凋亡率明显升高（P〈0．01），基因fasmRNA表达显著上升（P〈0．05或P〈0．01），而fasLmRNA表达明显下降（P〈0．05或P〈0．01）。结论STE通过上调fas基因和下调fasL基因表达，诱导细胞凋亡，从而抑制A549细胞增殖。     

白毛藤诱导人肺癌A549细胞凋亡及其作用机制的研究

目的：研究白毛藤诱导肺癌细胞凋亡的作用及其机制。方法：荧光显微镜观察不同浓度白毛藤诱导A549细胞凋亡的作用,RT—PCR检测Bcl—xl、p53基因表达量的变化。结果：白毛藤具有诱导A549细胞凋亡的作用,并且上调p53基因、降低Bcl—xl基因的表达。结论：白毛藤促进A549细胞凋亡,其机制可能与激活p53基因、抑制Bel—xl基因表达有关。     

麦门冬汤诱导人肺腺癌A549细胞凋亡作用及其机制

目的:研究麦门冬汤对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测麦门冬汤(0.25、2.5、25g/L)作用24、48、72h后人肺腺癌A549细胞(2×104个/m L)活性;吖啶橙(AO)/EB双荧光染色观察麦门冬汤各剂量作用48h后A549细胞凋亡形态学改变;流式细胞术分析麦门冬汤作用48h后A549细胞凋亡率;Western Blot检测麦门冬汤对凋亡相关蛋白表皮生长因子受体(EGFR)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)表达的影响。结果:各剂量麦门冬汤能够抑制A549细胞活性,诱导其发生凋亡形态学改变,且A549细胞凋亡率与麦门冬汤剂量呈正相关(P<0.01);Western Blot检测表明低、中剂量麦门冬汤可使EGFR、STAT3表达下降。结论:麦门冬汤可诱导A549细胞凋亡,其作用机制可能与下调EGFR、STAT3蛋白表达相关。     

白英甾体皂苷组分诱导人卵巢癌细胞SKOV3凋亡的研究

目的：探讨白英甾体皂苷组分体外抑制人卵巢癌细胞（SKOV3）及诱导凋亡的作用。方法：MTT法测定SKOV3细胞体外增殖情况、姬姆萨-瑞氏染色观测形态学改变、通过流式细胞仪及Caspase-3和Caspase-9活化程度检测研究细胞凋亡及其途径。结果：白英甾体皂苷组分能显著抑制SKOV3细胞的体外增殖,诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞,上调Caspase-3和Caspase-9的活性。     

白英甾体皂苷组分诱导人卵巢癌细胞SKOV3凋亡的研究

目的：探讨白英甾体皂苷组分体外抑制人卵巢癌细胞（SKOV3）及诱导凋亡的作用。方法：MTT法测定SKOV3细胞体外增殖情况、姬姆萨-瑞氏染色观测形态学改变、通过流式细胞仪及Caspase-3和Caspase-9活化程度检测研究细胞凋亡及其途径。结果：白英甾体皂苷组分能显著抑制SKOV3细胞的体外增殖,诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞,上调Caspase-3和Caspase-9的活性。     

α-细辛醚通过Bcl-2途径诱导人肺癌A549细胞凋亡研究

目的:探讨α-细辛醚通过bcl-2途径对人肺癌细胞系A549增殖抑制作用及凋亡诱导作用。方法:人肺癌A549细胞孵育24 h后,分别加入不同剂量α-细辛醚(0.25、0.5、1 mg/ml)作用于A549细胞,继续培养12,24,36,48 h,采用MTT法检测不同浓度α-细辛醚对A549细胞的增殖抑制情况;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR法检测凋亡相关基因bcl-2和bax mRNA的表达,western blot检测bcl-2和bax蛋白表达水平。结果:随着α-细辛醚剂量(0.25、0.5、1 mg/ml)的增加,可明显抑制A549细胞的增殖,这种抑制作用具有时间和剂量依赖性;流式细胞仪检测细胞发生了凋亡;α-细辛醚不同剂量(0.25、0.5、1 mg/ml)作用48h后bcl-2 mRNA和蛋白表达明显减少,bax mRNA和蛋白表达明显增加。结论:α-细辛醚对人肺癌A549细胞有明显的增殖抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性;α-细辛醚可通过下调bcl-2表达和上调bax表达而诱导人肺癌A549细胞发生凋亡。     

白英乙醇提取物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其对凋亡相关基因表达的影响

目的:探讨白英乙醇提取物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关基因survivin和caspase-3表达的影响。方法:用MTT法检测细胞增殖抑制率,TUNEL法检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR检测survivin和caspase-3 mRNA表达。结果:与正常对照组相比,白英提取物各浓度组细胞抑制率显著上升(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.01),Caspase-3 mRNA表达显著上升(P<0.05或P<0.01),Survivin mRNA表达显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论:白英乙醇提取物通过上调caspase-3和下调survivin基因表达,诱导细胞凋亡,从而抑制SMMC-7721细胞增殖。     

新藤黄酸诱导细胞凋亡抑制A549细胞裸鼠移植瘤增长的研究

目的:通过体内移植瘤模型探讨新藤黄酸干预人非小细胞肺癌的发生发展的可能机制.方法:采用肺腺癌A549裸鼠移植瘤实验,评价新藤黄酸对人肺腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用;透射电镜观察细胞超微结构的变化;TUNEL法检测凋亡指数;免疫组织化学方法检测瘤体组织COX-2和VEGF蛋白的表达.结果:新藤黄酸8,16 mg·kg-1给药后裸鼠的移植瘤较模型组生长缓慢,瘤重及瘤体积明显低于模型组(P<0.01);透射电镜观察发现新藤黄酸各组肿瘤细胞出现典型的凋亡特征;模型组中癌细胞质无明显空泡化,核膜内侧异染色质区域表现正常,其他染色质正常分散分布;TUNEL结果表明,给药组瘤体组织的凋亡指数明显高于模型组;免疫组织化学分析结果显示新藤黄酸作用后能够降低肿瘤组织的COX-2和VEGF的表达(P<0.01).结论:新藤黄酸可能通过诱导肺腺癌A549细胞凋亡而干预人非小细胞肺癌的发生发展,并调控肿瘤组织VEGF和COX-2蛋白的表达.     

白英诱导大肠癌HT29细胞凋亡作用及其机制研究

目的：探讨白荚水提取液对人大肠癌HT29细胞增殖的影响并探讨其诱导凋亡作用机制。方法：采用MTF法检测白英水提取液对人大肠癌HT29细胞的增殖抑制作用,普通光学显微镜及电镜观察细胞形态学变化,Annexin—V／PI双染法流式细胞术分析细胞早期凋亡卒的变化。结果：白英水提取液可显著抑制人大肠癌HT29细胞增殖,且呈一定的剂量和时间依赖性：光镜下见细胞体积缩小,细胞增殖减慢;电镜下见细胞染色质明显浓缩,核聚集等典型的凋亡特征;流式细胞术证实细胞凋亡率明显升高。结论：白英水提取液对人大肠癌HT29细胞的增殖具有明显的抑制作用,其机制与诱导细胞凋亡相关。     

白英水提物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的实验研究

目的:观察白英水提物(ESL)对胃癌SGC-7901细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法:常规法制备ESL;实验分正常对照组、白英处理组和顺铂处理组.白英处理组加入ESL终浓度分别为12.5、25、50 mg/mL.MTT法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜观察SGC-7901细胞凋亡及形态变化,半定量RT-PCR分析基因bcl-xl、bid、Caspase-9 mRNA表达,荧光分析法测定Caspase-3活性.结果:与正常对照组比较,三个剂量白英处理组SGC-7901细胞增殖抑制均有显著性增加,且呈明显的时效和量效关系,细胞凋亡显著增多(P＜0.05),表现细胞核固缩、染色质凝集、边聚等;bcl-xl mRNA表达显著下降(P＜0.05),bid、Caspase-9 mRNA表达显著性升高(P＜0.05),并随ESL浓度增加而加强,Caspaes-3活性亦显著性增高(P＜0.01).结论:ESL能剂量依赖性诱导SGC-7901细胞凋亡和抑制增殖,其作用与调控bcl-xl、bid、Caspase-9 mRNA表达和增强Caspase-3活性相关.     

白英水提物诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的实验研究

目的 观察白英水提物(SLT)对胃癌SGC-7901细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法 常规法制备白英水提物;实验分正常对照组、白英处理组和顺铂处理组.白英处理组加入白英水提物终浓度分别为12.5,25和50 mg/ml.MTT法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜观察SGC-7901细胞凋亡及形态变化,半定量RT-PCR分析基因bcl-xl,bid,caspase-9 和caspase-3 mRNA表达.结果 与正常对照组比较,3个剂量白英处理组SGC-7901细胞增殖抑制均有显著性增加,且呈明显的时效和量效关系,细胞凋亡呈显著性增多(P<0.05),表现细胞核固缩、染色质凝集、边聚等;基因bcl-xl mRNA表达显著性下降(P<0.05), bid、caspase-9 和caspase-3 mRNA表达有显著性升高(P<0.05),并随白英浓度增加而加强.结论 白英能剂量依赖性的抑制SGC-7901细胞增殖和诱导凋亡,其作用可能与调控bcl-xl、bid、caspase-9和caspase-3 mRNA表达相关.     

鹤蟾片诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究

目的研究鹤蟾片对A549人肺腺癌细胞凋亡的影响。方法制备大鼠含药血清,MTT法检测鹤蟾片含药血清对A549细胞的生长抑制率。利用PI染色观察和流式细胞术研究该含药血清对A549细胞凋亡的影响。RT-PCR检测含药血清对细胞表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)mRNA表达的调节作用。结果鹤蟾片含药血清明显抑制A549细胞生长,并使该细胞呈凋亡形态学改变。10%、20%含药血清组的细胞凋亡率为20.5%、33.2%,与对照组(6.1%)比较,差异均有统计学意义(P0.05)。含药血清组的细胞EGFR表达明显低于对照组(P0.05)。结论鹤蟾片具有诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用,分子机制可能与抑制EGFR基因的转录有关。     

益气除痰方通过caspase-4途径诱导人肺腺癌A549细胞凋亡

目的:研究益气除痰方血清(YQCT)对人肺腺癌A549细胞促凋亡作用并探讨其通过caspase-4途径诱导凋亡的机制。方法:运用血清药理学方法,予YQCT与人肺腺癌A549细胞共同孵育后,MTT法检测细胞生长状况;Hoechst 33258荧光法、流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况;透射电镜观察细胞超微结构改变;免疫印迹法检测caspase-4、IRE1α、TRAF2、calpain-2、caspase-7蛋白表达情况;并采用化学抑制剂抑制caspase-4表达。结果:30%YQCT血清作用A549细胞24 h生长率为(92.09±4.39)%,48 h达(85.69±4.31)%,与同浓度空白组比较有统计学差异;24 h凋亡率为(14.12±1.41)%,48 h达(23.68±1.74)%,与同浓度空白组比较有统计学差异;荧光显微镜(×10)下细胞呈现凋亡形态学改变,透射电镜(×9700)下核周间隙加大,粗面内质网扩张,空泡形成;线粒体肿胀,嵴断裂;免疫印迹法检测30%YQCT血清作用A549细胞48 h后,calpain-2、caspase-7、caspase-4蛋白表达上升,IRE1α、TRAF2表达改变不明显;抑制caspasse-4表达后,Z-LEVD-FMK(+)组细胞凋亡率有所下降,与Z-LEVD-FMK(-)组比较仍有统计学差异。结论:益气除痰方可抑制肺癌细胞生长,诱导细胞凋亡,部分通过激活calpain-2、caspase-7,启动caspase-4起始的内质网特异性凋亡途径发挥其抗肺癌作用。     

Extract of Fermented Brown Rice Induces Apoptosis of Human Colorectal Tumor Cells by Activating Mitochondrial Pathway

Brown rice fermented with Aspergillus oryzae, designated as FBRA, is a dietary fiber‐rich food, and fully appreciated as one of the prebiotics, which are generally considered to be beneficial to the health of the body, because of stimulating the growth and/or the activity of bacteria in the digestive system. To assess the effectiveness of FBRA as a functional food, the direct effect of FBRA extract on human colorectal tumor cells was examined. The exposure of HCT116 cells to FBRA extract reduced their viabilities in a concentration‐dependent manner, and the reduction of the cell viability might be attributed to the induction of apoptosis probably through the oxidative damage to the cells. Further studies showed that FBRA extract caused a significant elevation of Bax protein and a slight reduction of Bcl2 protein levels, and furthermore caused the activation of caspase‐3 in the cells. Thus, it seems reasonable to conclude that FBRA extract can exert oxidative damage to the cells, resulting in apoptotic cell death by activating the mitochondrial pathway in human colorectal tumor cells. Therefore, daily intake of FBRA can be expected to be beneficial for preventing carcinogenesis and/or suppressing tumor growth in the digestive tract. Copyright © 2012 John Wiley & Sons, Ltd.     

益肺逐积方诱导人肺腺癌A549细胞凋亡机制

目的:通过体外实验观察益肺逐积方对人肺腺癌A549细胞活性、细胞凋亡以及表皮生长因子受体(EGFR),G蛋白偶联受体30(GPR30)蛋白表达的影响,探讨中药复方益肺逐积方抑制肺癌细胞活性,诱导肺癌细胞凋亡的作用机制。方法:将人肺腺癌A549细胞培养至对数生长期,益肺逐积方高、低质量浓度组分别加入2,1.5 g·L~(-1)益肺逐积方培养液,5-氟尿密啶(5-FU)组加入2.5 g·L~(-1)5-FU培养液,溶剂组加入含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液,分别作用24,48 h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测益肺逐积方对人肺腺癌A549细胞活性的影响;吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光染色观察益肺逐积方作用不同时间后人肺腺癌A549细胞的凋亡形态学变化;流式细胞术(FCM)测定益肺逐积方作用下人肺腺癌A549细胞的凋亡率;利用倒置显微镜观察益肺逐积方作用24,48 h后A549细胞的形态学改变,蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定人肺腺癌A549凋亡细胞EGFR,GPR30蛋白的表达。结果:与溶剂组比较,1.5,2 g·L~(-1)益肺逐积方均能抑制人肺腺癌A549细胞活性(P0.05),诱导A549细胞发生不同程度的凋亡形态学改变;流式细胞术检测显示,益肺逐积方作用24,48 h后,可使人肺腺癌A549细胞其发生晚期凋亡(P0.05);Western blot结果显示,益肺逐积方可以不同程度地下调人肺腺癌A549细胞GPR30,EGFR蛋白的表达(P0.05)。结论:益肺逐积方可抑制人肺腺癌A549细胞活性、诱导其发生晚期凋亡,并使其发生凋亡形态学改变,这可能与下调EGFR,GPR30蛋白表达有关。     

Curcumin Inhibits Proliferation and Induces Apoptosis of Human Colorectal Cancer Cells by Activating the Mitochondria Apoptotic Pathway

Curcumin, a natural plant extract from Curcuma longa, is known for its anti‐carcinogenic and chemopreventive effects on a variety of experimental cancer models. In this study, we evaluated the effects of curcumin and elucidated its mechanism in human colorectal carcinoma cells. Cell viability assay showed that curcumin significantly inhibited the growth of LoVo cells. Curcumin treatment induced the apoptosis accompanied by ultra‐structural changes and release of lactate dehydrogenase in a dose‐dependent manner. Moreover, treatment with 0–30 µg/mL curcumin decreased the mitochondrial membrane potential and activated the caspase‐3 and caspase‐9 in a dose‐ and time‐dependent manner. Nuclear and annexin V/PI staining showed that curcumin induced the apoptosis of LoVo cells. FACS analysis revealed that curcumin could induce the cell cycle arrest of LoVo cells at the S phase. Furthermore, western blotting analysis indicated that curcumin induced the release of cytochrome c, a significant increase of Bax and p53 and a marked reduction of Bcl‐2 and survivin in LoVo cells. Taken together, our results suggested that curcumin inhibited the growth of LoVo cells by inducing apoptosis through a mitochondria‐mediated pathway. Copyright © 2012 John Wiley & Sons, Ltd.     

白藜芦醇对A549肺腺癌细胞促凋亡机制的研究

目的:观察白藜芦醇对A549肺腺癌细胞生长的影响并对促凋亡机制进行初步研究。方法:使用MTT方法观察不同浓度与作用时间的白藜芦醇对A549细胞增殖的影响,采取流式细胞技术观察白藜芦醇对A549细胞促凋亡情况与细胞周期的影响,选用Western-blot技术观察不同浓度白藜芦醇作用下A549细胞凋亡相关蛋白p53、Bcl-2家族及Caspase的变化。结果:白藜芦醇对A549细胞增殖的抑制呈浓度/时间双重依赖,作用24 h IC50值是29.3μM,这种抑制作用有凋亡机制的参与。A549细胞发生了S期阻滞,凋亡相关蛋白中p53浓度增加,Bcl-2家族蛋白中促凋亡蛋白/抗凋亡蛋白比值上调,Caspase-3、-9发生剪切。结论:白藜芦醇能通过促凋亡作用抑制A549肺腺癌细胞的增殖,诱导出现S期细胞阻滞,与细胞凋亡线粒体途径相关的p53、Bcl-2家族蛋白、Caspase-3、-9等多种凋亡相关因子也参与促凋亡作用中,白藜芦醇对A549的促凋亡效应可能是一个多靶点多层次的作用机制。     

芍药苷干预Hippo信号通路诱导非小细胞肺癌凋亡的机制

目的 观察芍药苷诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的作用,并探讨其作用机制。方法 采用细胞增殖与活性检测法（CCK-8）检测不同浓度芍药苷（2.5、5、10、20、25 μmol·L^-1）对H1299、H292、A549细胞增殖的抑制率,筛选合适药物浓度及实验细胞。克隆形成实验检测芍药苷对肺癌细胞抑制作用。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（AnnexinV-FITC）/碘化丙锭（PI）染色,流式细胞仪检测芍药苷对细胞凋亡的影响。在合适药物浓度干预下,用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、剪切的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）水平变化,同时测定缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及Hippo信号通路分子表达情况。结果 与空白组比较,芍药苷对人肺癌H1299、H292和A549细胞的生长均具有显著抑制作用（P<0.01）;芍药苷可显著诱导A549细胞出现凋亡现象（P<0.01）,同时降低Bcl-2/Bax（P<0.01）,并显著升高cleaved Caspase-3蛋白的表达（P<0.01）。与空白组比较,芍药苷组A549细胞中的HIF-1α、具有PDZ基序的辅转录激活子（TAZ）、大肿瘤抑制激酶1（LATS1）、单极纺锤体结合蛋白1（MOB1）、Yes激酶相关蛋白（YAP）的表达水平均显著降低（P<0.01）,p-LATS1、p-MOB1、p-YAP表达显著升高（P<0.01）。同时对磷酸化哺乳动物不育系20样激酶1（p-MST1）及MST1的表达水平没有显著影响,差异无统计学意义。结论 芍药苷可通过改善细胞缺氧状态、抑制异常激活的Hippo信号通路诱导促进非小细胞肺癌凋亡,从而达到抗肿瘤的作用。