辛伐他汀对谷氨酸损伤的大鼠海马组织中AMPA受体GluR2表达的影响

目的 研究辛伐他汀对谷氨酸损伤的大鼠海马组织中AMPA受体GluR2表达的影响。  方法 40只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、谷氨酸损伤组、辛伐他汀10 mg/kg组和20mg/kg组。连续灌胃给药10d后,麻醉状态下对大鼠行侧脑室注射,假手术组大鼠给予注射4μL生理盐水,其余组大鼠给予注射等体积谷氨酸溶液,2h后,每组取5只大鼠,断头取脑,分离海马组织,采用RT-PCR方法观察大鼠海马组织中GluR2的mRNA表达情况;其余大鼠用多聚甲醛灌流后取出海马组织做病理切片,采用免疫组织化学方法观察其蛋白表达情况。  结果 与假手术组相比,谷氨酸损伤组大鼠海马组织中GluR2在mRNA和蛋白水平的表达均降低(P＜0.01);辛伐他汀(10、20mg/kg)组大鼠海马组织中GluR2的mRNA和蛋白水平的表达均明显升高。  结论 影响AMPA受体GluR2的表达可能是辛伐他汀抗谷氨酸损伤作用的机制之一。     

糖尿病大鼠海马生长抑素的研究

目的 观察糖尿病大鼠海马内神经元生长抑素基因表达产物mRNA改变,研究糖尿病对海马神经元内生长抑素表达的影响,探讨慢性糖尿病性脑病的发病机制。方法 SD大鼠通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,运用原位杂交组织化学技术和计算机图像分析技术检测和比较糖尿病大鼠与正常大鼠海马神经元内生长抑素mRNA的表达。结果 糖尿病大鼠海马生长抑素mRNA阳性神经元细胞数量、阳性细胞的光密度及阳性细胞平均细胞面积均比正常大鼠显著减少。结论 糖尿病大鼠海马神经元的生长抑素表达减少,可能在糖尿病患者发生慢性痴呆等糖尿病慢性脑病中起一定作用。     

δ-连环素在糖尿病大鼠海马神经元中的表达

目的观察δ-连环素在大鼠糖尿病模型海马神经元中的表达特征。方法根据实验需要将大鼠随机分成糖尿病组、正常对照组和缓冲剂组。按45 mg/kg一次性尾静脉注射链脲佐菌素（溶于0.1 mol/L柠檬酸盐缓冲液）诱发糖尿病,缓冲剂组只给予等量的缓冲液。应用免疫组织化学方法观察海马神经元的形态结构变化,并应用计算机图像分析技术检测δ-连环素在各组中的定量表达。结果糖尿病组大鼠海马神经元中δ-连环素表达明显低于正常对照组和缓冲剂组,在海马齿状回减少尤为明显。结论糖尿病可下调大鼠海马神经元中δ-连环素的表达。     

音乐对大鼠海马GABAA受体表达的作用

目的研究音乐刺激对海马神经元GABAA受体表达的影响.方法在大鼠生长发育的不同时期,给予音乐刺激,用免疫组织化学和PCR技术及图像分析系统定量研究音乐刺激后,大鼠海马神经元GABAA受体及其编码该受体的mRNA的表达.结果音乐刺激后,大鼠海马神经元GABAA受体免疫染色的光密度比对照组增加,在CA1区分别从对照组(32.21±4.23)增加到持续音乐组(44.72±6.21),生后音乐组(43.61±6.12),胎期音乐组(34.34±4.54);编码受体的mRNA表达相对量增加,从对照组(0.67±0.23)增加到持续音乐组(0.99±0.34),生后音乐组(0.92±0.32),胎期音乐组(0.73±0.25),这些变化以持续音乐刺激组最明显,生后音乐刺激组次之,胎期音乐刺激组和对照组最弱.结论音乐刺激能增强大鼠海马神经元GABAA受体及编码该受体的mRNA表达,其增强作用具有刺激时间依赖性关系.     

糖尿病大鼠海马CA1区超微结构观察

目的 观察链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）糖尿病大鼠海马CA1区超微结构变化。方法 SD雄性大鼠18只随机分为实验组、治疗组及对照组,用STZ复制糖尿病动物模型,饲养12周后测血糖,并进行灌注固定,应用透射电镜观察海马CA1区超微结构。结果 电镜下可见糖尿病大鼠海马CA1区神经元细胞核出现核沟,染色质浓缩并聚集;粗面内质网扩张、排列紊乱和脱颗粒;线粒体肿胀,部分空泡变性;髓鞘板层排列疏松,间隙加大．内部轴突砷经丝松解、弯曲;突触结构分界不清,突触小泡稀疏衙疗组超微结构与对照组比较无明显病变,结论 糖尿病时海马组织出现一系列超微病理改变,为进一步探讨海马结构与糖尿病引发学习和记忆功能障碍的关系提供了形态学依据。     

米诺环素对糖尿病大鼠海马iNOS表达的干预

目的 探讨诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)在2型糖尿病大鼠海马中的表达情况以及米诺环素对iNOS表达的影响.方法 高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病模型.将SD大鼠随机分为正常对照组(N组)、糖尿病模型组(D组)、米诺环素组(M组).造模成功1周后,M组每天腹腔注射米诺环素45mg/kg,D组和N组腹腔注射等量的生理盐水,连续给药2周,然后取大鼠海马组织,免疫组化方法测各组大鼠海马中iNOS表达情况.结果 N组、D组、M组海马iNOS阳性神经元的平均光密度值(MOD值)分别为(0.101±0.012)、(0.196±0.020)和(0:128±0.010),D组和M组iNOS表达较N组高,差异有显著性(P<0.01),M组iNOS表达较D组低,差异有显著性(P<0.01).结论 iNOS在2型糖尿病大鼠海马神经元中表达异常增高,米诺环素可减少大鼠海马神经元iNOS的表达,这可能是米诺环素保护糖尿痛认知功能障碍的机制之一.     

米诺环素对糖尿病大鼠海马iNOS表达的干预

目的 探讨诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)在2型糖尿病大鼠海马中的表达情况以及米诺环素对iNOS表达的影响.方法 高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病模型.将SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、米诺环素治疗组.造模成功1周后,米诺环素组每天腹腔注射米诺环素45rag/kg,糖尿病模型组和正常对照组腹腔注射等量的生理盐水,连续给药2周,然后取大鼠海马组织,免疫组化方法测各组大鼠海马中iNOS表达情况.结果 免疫组化结果分析示正常对照组、糖尿病组、米诺环素组海马iNOS阳性神经元的平均光密度值(MOD值)分别为(0.101±0.012)、(0.196±0.020)和(0.128±0.010),与正常对照组比较,糖尿病组和米诺环素组iNOS表达的差异均差异有显著性(均P＜0.01),糖尿病组和米诺环素组比较差异也有显著性(P＜0.01).结论 iNOS在2型糖尿病大鼠海马神经元中表达异常增高,米诺环素可减少大鼠海马神经元iNOS的表达,这可能是米诺环素保护糖尿病认知功能障碍的机制之一.     

链尿佐菌素致糖尿病大鼠海马生长抑素表达与认知能力的研究

目的：观察糖尿病大鼠认知能力及海马内神经元生长抑素基因表达产物mRNA改变,研究糖尿病对海马神经元内生长抑素表达的影响,探讨慢性糖尿病脑病的发病机制。方法：Wistar大鼠通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型。Y型电迷宫法测定认知能力,原位杂交组织化学技术和计算机图像分析技术检测和比较糖尿病大鼠与正常大鼠海马神经元内生长抑素mRNA的表达。结果：糖尿病大鼠认知能力下降,海马生长抑素mRNA阳性神经元细胞数量、阳性细胞的光密度及阳性细胞平均细胞面积均比正常大鼠显著减少。结论：糖尿病是老年性痴呆的高危因素,糖尿病大鼠海马神经元的生长抑素表达减少,可能在糖尿病患者发生慢性痴呆等糖尿病慢性脑病中起一定作用。     

音乐对大鼠海马 GABAA受体表达的作用

目的研究音乐刺激对海马神经元GABAA受体表达的影响.方法在大鼠生长发育的不同时期,给予音乐刺激,用免疫组织化学和PCR技术及图像分析系统定量研究音乐刺激后,大鼠海马神经元GABAA受体及其编码该受体的mRNA的表达.结果音乐刺激后,大鼠海马神经元GABAA受体免疫染色的光密度比对照组增加,在CA1区分别从对照组(32.21±4.23)增加到持续音乐组(44.72±6.21),生后音乐组(43.61±6.12),胎期音乐组(34.34±4.54);编码受体的mRNA表达相对量增加,从对照组(0.67±0.23)增加到持续音乐组(0.99±0.34),生后音乐组(0.92±0.32),胎期音乐组(0.73±0.25),这些变化以持续音乐刺激组最明显,生后音乐刺激组次之,胎期音乐刺激组和对照组最弱.结论音乐刺激能增强大鼠海马神经元GABAA受体及编码该受体的mRNA表达,其增强作用具有刺激时间依赖性关系.     

AMPA受体GluR2亚基研究进展

GluR2亚基由于其mRNA Q/R位点编辑,使得它在AMPA受体中的相对含量决定了AMPA受体的钙离子不通透性。在多种神经性损伤或退行性疾病中,神经元GluR2表达下调,Ca2＋内流增加。但是目前关于GluR2下调机制,GluR2在神经元死亡或耐受中的作用及机制尚未完全阐明。本文就AMPA受体GluR2亚基调控及其与神经元损伤关系的研究进展作一综述。     

全脑缺血再灌模型大鼠皮层神经元GluR2表达的变化

目的:采用免疫组化技术,研究全脑缺血后再灌不同时点大鼠皮层神经元AMPA受体亚单位GluR2表达的变化,探讨GluR2在缺血性神经元损伤中的作用。方法:将36只SD大鼠随机分为6组,即正常组、缺血再灌注后2h、12h、24h、48h、72h 5个时间点组。参照改良的Pulsinelli四血管闭塞法制备全脑缺血大鼠模型,缺血再灌后的大鼠分别在存活2h、12h、24h、48h及72h后采用免疫组化法测定皮层神经元GluR2的表达量。结果:模型再灌5个时点之间SD大鼠皮层神经元GluR2表达量没有统计学差异(P>0.05),但与正常组相比,各组的的表达量明显降低(P<0.05)。结论:脑缺血再灌后皮层神经元AMPA受体亚单位GluR2表达减少,介导胞外Ca2+内流,引起神经细胞死亡。     

丝胶对2 型糖尿病大鼠海马HO-1 表达的影响

 目的探讨丝胶对2 型糖尿病大鼠海马血红素加氧酶1（HO-1）表达的影响。方法30 只雄性SD 大鼠随机分为正常对
照组、糖尿病模型组和丝胶治疗组,每组10 只。糖尿病模型组和丝胶治疗组大鼠均采用链脲佐菌素连续腹腔注射建立2 型糖尿
病大鼠模型,以血糖逸16.7 mmol/L 作为成模标准。待模型成功建立后,模型组大鼠不再作任何处理,丝胶治疗组大鼠给予丝胶
（2.4 g·kg^-1·d^-1）灌胃35 d。HE 染色观察海马的形态变化;分别采用Western blot 和RT-PCR 法检测海马HO-1 蛋白及mRNA的
表达。结果糖尿病模型组大鼠海马CA1 区神经细胞出现明显的病理变化,HO-1 蛋白及mRNA的表达明显高于正常对照组
大鼠（ P<0.01）。丝胶治疗组大鼠海马CA1 区神经细胞的病理变化明显减轻,HO-1 蛋白及mRNA的表达明显低于模型组大鼠
（ P<0.01, P<0.05）。结论丝胶可通过下调海马HO-1 的表达,减轻糖尿病时HO-1 高表达对海马神经细胞的毒性损害,发挥
对糖尿病神经系统损伤的保护作用。     

AMPA受体亚单位GluR2在大鼠局灶性脑缺血不同时期表达及其机制研究

目的通过研究大鼠局灶性脑缺血不同时期缺血中心区与半暗带α-氨基羟甲基异恶唑丙酸（AMPA）受体亚单位GluR2蛋白表达，并同时观察凋亡指数，以进一步阐述GluR2在缺血性脑卒中的作用机制。方法采用免疫组化和Tunnel染色分别检测大脑中动脉梗塞（MCAO）2h再灌后1h、1d、3d、7d、15d、30d大鼠GluR2蛋白和凋亡细胞的表达。结果再灌1h，缺血侧中心区（ischemia core IC）与缺血半暗带区（ischernia penumbra，IP）GluR2蛋白表达与对照组无差异。在缺血中心区，再灌后1dGluR2蛋白表达开始减少（F=1.104，P〈0．05），3d表达达到最低（F=3．252，P〈0．01），7、15d表达回升（F=1．878，P〈0.01；F=1．185，P〈0．05），30d基本上与对照组相同。在缺血半暗带，GluR2蛋白表达在再灌后1、3、7d与健侧无明显差异，但在15d可见表达明显增强（F=27.166，P〈0．01），在30d表达呈更强（F=28．515，P〈0.01），且阳性细胞数目也稍有所增多。在缺血中心区，再灌1h即检测到表达非常弱但数目较多的凋亡细胞，再灌1d后更为明显，3d和7d凋亡细胞在数量上和表达程度上达到高峰，15d凋亡细胞减少，1个月后只见中心区少许凋亡细胞。在半暗带区，MCAO再灌后3d，7d和15d仅见少许TUNNEL阳性细胞。结论再灌后细胞凋亡出现时间先于GluR2蛋白表达下调时间提示GluR2不是早期凋亡的启动因子。再灌后1-30d，GluR2蛋白表达变化与凋亡阳性细胞几乎平行，提示GluR2虽不启动早期凋亡，但可能导致神经元进一步凋亡，或参与迟发性神经元死亡。缺血侧半暗带区GluR2蛋白在再灌后15-30d表达明显增强，且数目也稍有增多，提示GluR2与突触的可塑性有关。     

海人藻酸受体亚基GluR6特异性shRNA真核表达载体的构建

目的 构建海人藻酸受体亚基GluR6的shRNA真核细胞表达载体,进一步研究GIuR6在脑缺血中的作用机制.方法 根据GenBank数据库中GluR6的cDNA序列设计靶序列,化学合成两条互补的DNA寡核苷酸链,连接质粒后转染大肠杆菌,使其在大肠杆菌内大量复制;提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定及测序分析.结果 限制性内切酶酶切鉴定及测序分析证实了序列的正确性,与合成的寡核苷酸序列完全相符,且以正确的方向插入.结论 成功构建了GluR6特异性shRNA真核表达载体.     

脂联素受体2在糖尿病大鼠肝脏中的表达

目的探讨脂联素受体2在1型和2型糖尿病大鼠肝脏中的表达差异以及与糖尿病发病的可能机制的关系。方法 30只SD大鼠分为3组：对照组（con）,腹腔注射等体积量枸橼酸缓冲液;1型糖尿病组（1-DM）：一次性腹腔内注射高剂量链脲佐菌素60 mg/kg;2型糖尿病组（2-DM）：大鼠高脂饲料喂养1个月,禁食12 h后腹腔注射低剂量链脲佐菌素35 mg/kg,继续高脂饮食喂养。采用ELISA试剂盒检测血清胰岛素和脂联素水平,免疫组化法分析肝脏脂联素受体2（Adipo R2）的表达,HE染色观察各组肝脏病理改变。结果糖尿病组大鼠血糖均高于对照组,与con组（8239±2259）ng/ml比较,1-DM组血清脂联素降低[（5266±1985）ng/ml,P〈0.05],肝Adipo R2表达无明显改变[（13.39±3.09）%,（11.92±5.62）%,P﹥0.05];与con组（8239±2259）ng/ml和1-DM组（5266±1985）ng/ml比较,2-DM组血清脂联素（3533±1048）ng/ml降低（P〈0.05）,肝Adipo R2表达升高（69.76±10.8）%,P〈0.01,且有脂肪变性等损伤。结论肝Adipo R2在1-DM大鼠肝脏的表达与正常组无异,在2-DM大鼠肝脏高表达,与2-DM肝脏的损伤和脂代谢异常相关。     

地骨皮提取液对2型糖尿病大鼠肾脏COX一2表达的影响

目的：观察地骨皮醇提取液对2型糖尿病大鼠肾脏COX一2表达的影响,探讨其对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用的机制。方法：SD大鼠125只,随机抽取10只为正常对照组。以STZ加高脂饲料饲养3周复制2型糖尿病肥胖大鼠模型,随机分为模型组、罗格列酮组、地骨皮醇提低剂量组、地骨皮醇提高剂量组,每组10只。模型组和正常组给予生理盐水,各实验组分别给予相应药物灌胃,治疗7周后免疫组化法检测’净脏COX一2表达。结果：罗格列酮组和地骨皮醇提组COX一2表达与模型组比较明显改善,差异均有统计学意义（P〈0．01）,但与正常对照组之间仍有明显差异（P＜0．01）。地骨皮醇提高剂量组与罗格列酮组比较差异无统计学意义（侈0．05）。结论：地骨皮醇提取液可以降低2型糖尿痛肥胖大鼠肾脏COX一2的表达,其中高剂量组优于低剂量组,与罗格列酮组疗效相当．     

缺氧所致神经元AMPA受体的结构组成及功能变化

目的探讨缺氧损伤后神经元膜表面谷氨酸AMPA受体亚单位(GluRs)含量、受体结构组成、功能的变化及其在Ca2 超载和延迟性细胞死亡中的作用.方法建立神经元缺氧损伤模型,采用PI染色、双重免疫荧光标记和细胞比色分析技术定量观察神经元死亡和膜表面GluRs含量变化,采用Fura-2法测定胞内Ca2 含量,以膜片钳技术检测微兴奋性突触后电流(mEPSCs)的变化.结果伤后胞内Ca2 含量和神经元死亡数量明显高于对照组;膜表面GluR2含量及含GluR2的突触数目显著减少(P<0.05),而GluR3含量较对照组则显著升高(P<0.05);缺乏GluR2的AMPA受体通道对Ca2 有很高的通透性.结论缺氧可致神经元膜表面AMPA受体的结构组成发生变化,缺乏GluR2的受体通道数目增加,介导了Ca2 的快速内流,引起神经元的延迟性死亡.     

AMPA受体与癫痫的关系

癫痫是一种常见的神经系统疾病,严重危害人类健康。α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AM-PA)受体是一种游离型兴奋性谷氨酸受体,由GluR1~GluR4 4个亚单位组成,GluR2亚单位对Ca2+不通透。由于GluR2亚单位的表达天然AMPA受体通道对Ca2+不通透。在AMPA受体激活时,大量Ca2+内流导致神经损伤。AMPA受体对于癫痫发病机制的研究和治疗均有重要作用。     

糖脂清颗粒对 ２型糖尿病大鼠心肌组织 Bax、Bcl ２表达的影响

目的：观察糖脂清颗粒对２型糖尿病大鼠心肌组织 Bax、Bcl ２表达的影响,并探讨其干预心肌细胞凋亡的机制。方法：雄性ＳＤ大鼠,采用高糖高脂饲料喂养８周后,一次性小剂量（３０ｍｇ·ｋｇ^－１）２％ 链脲佐菌素（ＳＴＺ）溶液腹腔注射造模,３ｄ后尾尖采血,测随机血糖≥16.7ｍｍｏｌ·Ｌ^－１者确定为２型糖尿病大鼠模型,８周后,用免疫组织化学法检测各组心肌组织 Bcl-２、Bax的表达。结果：糖脂清颗粒各治疗组大鼠心肌组织 Bcl-２表达明显上升,与模型组比较,差异有统计学意义（Ｐ＜0.05）;各治疗组大鼠心肌组织 Bax／Bal-２明显下降,与模型组比较,差异有统计学意义（Ｐ＜0.05）。结论：糖脂清颗粒具有抗糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的作用,其可能机制为升高 Bcl-２的表达,从而降低 Bax／Bcl-２的比值,抑制心肌细胞凋亡,延缓糖尿病心肌病的进展。