TSG101-siRNA对肝癌耐药细胞株QGY/CDDP的逆转作用

目的 构建TSG101(tumor susceptibility gene101)小干扰RNA(TSG101-siRNA)的真核表达载体,观察RNA干扰沉默TSG101基因后化疗药物顺铂(CDDP)对肝癌耐药细胞株QGY/CDDP增殖的影响.方法 根据小干扰RNA的设计原则由计算机软件辅助设计TSG101的靶序列,应用DNA重组技术将目的序列克隆入小干扰RNA的表达载体;RT-PCR检测TSG101-siRNA对QGY/CDDP细胞tsg101mRNA表达的影响;Western blot检测TSG101-siRNA对TSG101基因表达蛋白的抑制效率;采用MTT法测定TSG101-siRNA联合化疗药物CDDP对QGY/CDDP的增殖抑制作用.结果 测序显示干扰载体构建成功,TSG101-siRNA能抑制tsg101 mRNA表达,使QGY/CDDP细胞TSG101蛋白的表达下降,抑制QGY/CDDP细胞的增殖,明显增强CDDP对QGY/CDDP的增殖抑制.结论 TSG101-siRNA的真核表达载体能有效地抑制QGY/CDDP细胞的增殖,提高化疗药物CDDP对QGY/CDDP的抑制率,能逆转肝癌耐药细胞株QGY/CDDP对CDDP的耐药性.     

逆转胶囊对人乳腺癌MCF-7/ADR细胞中P-gp和MRP表达的影响

目的:检测逆转胶囊对乳腺癌耐药相关蛋白表达的影响,探讨其逆转乳腺癌多药耐药的作用机制。方法:流式细胞术、免疫印迹技术(Western-blot)检测逆转胶囊作用前后MCF-7/ADR细胞表面P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)的表达。结果:逆转胶囊能显著抑制MCF-7/ADR细胞表面P-gp的表达,并可诱导MRP表达下降,其作用随血药浓度增加和作用时间的延长而增强。结论:逆转胶囊逆转乳腺癌多药耐药的机制与下调P-gp和MRP的表达有关。     

苦参碱逆转人结肠癌细胞株（HT-29）奥沙利铂耐药性的作用及机制研究

目的：研究苦参碱对结肠癌耐药细胞HT-29/奥沙利铂(Oxaliplatin, OXA)耐药性的逆转作用并探讨其可能的作用机制。方法采用逐步增加药物浓度的方法建立奥沙利铂耐药结肠癌细胞株HT-29/OXA;CCK-8法测定苦参碱对HT-29/OXA细胞的耐药性逆转作用,流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化;实时定量PCR 检测各组细胞肺耐药蛋白（lung resis-tance protein LRP)和 P-glycoprotein (P-gp) mRNA表达水平; Western blot 检测各组细胞LRP和P-gp蛋白的表达水平。结果苦参碱使HT-29/OXA细胞对奥沙利铂的敏感性增加,耐药性得到部分逆转。奥沙利铂(0.5μg/mL)和苦参碱(3.0μg/mL)单独用药对结肠癌耐药细胞株HT-29/OXA细胞周期以及细胞凋亡没有影响;联合用药对HT-29/OXA生长增殖具有明显抑制作用并且能够通过改变细胞周期引起凋亡（P<0.05）。奥沙利铂(0.5μg/mL)和苦参碱(3.0μg/mL)单独用药对HT-29/OX-ALRP和P-gp mRNA以及蛋白的表达没有影响;联合用药作用后LRP mRNA和P-gp mRNA表达水平降低（P<0.01）,同时下调了LRP和P-gp蛋白表达（P<0.01）。结论苦参碱部分逆转HT-29/OXA细胞对奥沙利铂的耐药性,其机制可能与细胞内LRP和P-gp表达降低有关。     

苦参碱逆转人胃癌细胞株SGC7901/VCR耐药性实验研究

目的 研究苦参碱(Matrine)对人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR的多药耐药的逆转效应及其机制.方法 以长春新碱(VCR)诱导的人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR为研究对象,MTT法研究苦参碱对体外培养的人胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR细胞增殖的影响及逆转效应、用间接免疫荧光法经流式细胞仪检测MRP的表达并分析其机制.结果 MTT法显示苦参碱在0.5、1.0、2.0 mg·mL-1浓度下处理SGC7901/VCR细胞72 h后,其生长抑制率依次为10%、15%、32%,且可以逆转SGC7901/VCR对VCR的耐药,呈剂量依赖性,逆转倍数分别为9.4、13.4、24.5倍.0.5 mg·mL-1苦参碱与SGC7901/VCR细胞共同培养24 h后,SGC7901/VCR细胞的MRP表达从(36.00±4.32)%降低至(25.00±3.85)%(P<0.01).结论 苦参碱可以体外逆转人胃癌细胞多药耐药细胞SGC7901/VCR的耐药性,其逆转机制与降低MRP的表达有关.     

奥沙利铂处理人肝癌细胞株HepG2、QGY后凋亡相关基因蛋白的表达

目的观察抗肿瘤药物奥沙利铂对人肝癌细胞株HepG2、QGY凋亡相关基因蛋白表达的影响,探讨奥沙利铂诱导HepG2、QGY细胞发生凋亡的机制.方法采用人肝癌细胞株HepG2、QGY作为研究对象,免疫细胞化学法检测细胞凋亡相关基因蛋白的表达.结果奥沙利铂作用72h后,免疫细胞化学表明Bax表达增强,突变型P53蛋白(MTP53)、Bcl-2、Myc表达减弱,Fas表达无差异.结论奥沙利铂诱导肝癌细胞凋亡的作用与上调Bax蛋白表达及下调MTP53、Bcl-2、Myc蛋白表达有关,该药可能不是通过Fas途径诱导细胞凋亡.     

姜黄素逆转卵巢癌对紫杉醇耐药的实验研究

目的:通过观察姜黄素作用人卵巢癌A2780/Taxol细胞株后,逆转该细胞株对紫杉醇的耐药作用,研究卵巢癌细胞对紫杉醇耐药的原因及姜黄素逆转耐药机制。方法:人卵巢癌A2780/Taxol细胞株在体外培养,将细胞分为对照组（A组）和实验组（不同浓度姜黄素组作用细胞）。用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测2组细胞与相同浓度紫杉醇联用后细胞的生长抑制情况;Westernblot方法检测2组细胞内P-糖蛋白（P-gp）和蛋白激酶C-α（PKC-α）的表达情况。结果:四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法得出联合用姜黄素各组细胞生长抑制率均高于A组（P<0.05～P<0.01）;Western blot检测联合用姜黄素各组多药耐药蛋白-1/P-gp和PKC-α表达均较A组显著降低（P<0.01）。结论:姜黄素通过阻碍卵巢细胞中多药耐药蛋白-1/P-gp和PKC-α的表达,增加紫杉醇对细胞的毒性,降低细胞的耐药性。     

P15逆转肝癌多药耐药的机制研究

目的：探讨P15逆转肝癌多药耐药（MDR）的可能机制．方法：①采用顺铂（CCDP）诱导法,建立肝癌HepG2细胞动态MDRHepG2／CDDP细胞模型;②在动态MDRHepG2／CDDP细胞模型中,RT—PCR检测P15mRNA的表达,WesternBlot检测P15蛋白的表达;③建立稳定转染P15正义表达载体的HepG2／CDDP—P15细胞系及转染pcDNA3．1（＋）空载体的HepG：／CDDP—PC对照细胞系;④流式细胞仪检测转染细胞HepG2／CDDP—P15,HepG2／CDDP—PC和亲本HepG2／CDDP的细胞周期及阿霉素（ADR）的蓄积和潴留;⑤WesternBlot检测耐药经典分子MRP-1和P-糖蛋白（P—gP）的表达．结果：HepG2／CDDP动态耐药细胞模型建立成功;P15的mRNA表达水平随着HepG2／CDDP耐药细胞株耐药表型的增强逐渐下降;上调p15基因的表达可显著提高HepG2／CDDP耐药细胞株细胞内ADR的蓄积和潴留,促进G1期细胞阻滞,抑制肿瘤细胞增殖,下调MRP-1,P-gP蛋白的表达．结论：P15与肝癌细胞MDR关系密切,其表达水平随着肝癌耐药细胞株耐药表型的增强而逐渐下降;上调P15的表达,可有效逆转肝癌HepG2／CDDP耐药细胞株的耐药表型．     

奥沙利铂体外干预结直肠癌细胞株HT-29的耐药基因及相关蛋白的表达

目的:检测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)耐药细胞株HT-29/L-OHP中多药耐药基因(multidrug resistance gene 1,MDR-1)、多药耐药相关蛋白的基因及他们编码的蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein,MRP)的表达,探讨其在L-OHP耐药中的作用。方法:利用MTT法检测L-OHP对原代细胞HT-29和耐药细胞HT-29/L-OHP的半数抑制率(IC50);利用RT-PCR及蛋白质印迹法检测HT-29/L-OHP中耐药基因及蛋白的表达情况。结果:L-OHP对HT-29和HT-29/L-OHP细胞的IC50分别为(4.15±0.17)μg.ml-1和(32.01±1.87)μg.ml-1,耐药指数为7.71;与原代细胞相比,HT29/L-OHP中耐药基因及蛋白表达均有所增加。结论:结直肠癌耐药细胞株中MDR-1、MRP基因及其编码的蛋白P-gp、MRP的表达高于原代细胞,这为预测CRC的多药耐药提供了新的依据。     

川芎嗪对人卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM逆转作用实验研究

目的 探讨川芎嗪(TMP)逆转卵巢癌A2780/ADM细胞对阿霉素(ADM)的耐药作用及机制.方法 应用MTT法测定细胞的药敏性;用荧光分光光度法测定细胞内阿霉素浓度的变化;采用流式细胞术检测耐药细胞凋亡率的变化.结果 非细胞毒性剂量川芎嗪能显著降低卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM的IC50,逆转倍数为2.07倍;非细胞毒性剂量川芎嗪能显著增加耐药细胞内ADM的浓度和耐药细胞的凋亡百分率,显著降低P-gp的表达.结论 川芎嗪具逆转卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM细胞对阿霉素的耐药性,其逆转机制可能与增加细胞内ADM浓度和抑制该细胞P-gp的表达有关.     

冬凌草甲素逆转人胃癌细胞SGC 7901/DDP顺铂耐药的作用及机制研究

目的:探讨天然化合物冬凌草甲素(oridonin,Ori)对顺铂(cisplatin,DDP)耐药的胃癌细胞SGC7901/DDP的耐药逆转作用及其相关机制。方法:MTT法检测Ori对SGC7901/DDP的毒性作用及与DDP的协同作用;台盼蓝计数实验及集落形成实验检测Ori对细胞生长的抑制作用;核染色免疫荧光及免疫印迹法检测Ori诱导细胞凋亡作用及逆转SGC7901/DDP细胞DDP耐药的作用机理。结果:Ori能显著抑制SGC7901/DDP细胞增殖、生长和集落形成,并诱导凋亡。机制研究发现,Ori显著抑制与肿瘤多药耐药相关的蛋白的表达,包括P-糖蛋白(P-glycoprotein)、多药耐药性相关蛋白(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)和细胞周期蛋白Cyclin D1;另外,Ori还可以诱导磷酸酶2A的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A,CIP2A)表达下调,Akt磷酸化下调。结论:Ori能够逆转SGC7901/DDP对DDP耐药并诱导凋亡,其机制可能是通过下调多药耐药蛋白P-gp、MRP1及抑制CIP2A/Akt信号级联。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。