PCDGF反义RNA真核表达载体的构建、转染及其对卵巢癌细胞增殖能力的抑制效应

目的:检测特异性封闭高度恶性人卵巢癌细胞株Sw626、A2780中畸胎瘤源性生长因子(PC -cell -devivedGrowthFactor,PCDGF)的表达,并观察其对增殖能力的抑制效应。方法:用RT -PCR技术扩增PCDGF基因cDNA保守序列,经pGEM -TEasy载体克隆后双酶切,反向插入哺乳动物真核表达载体pcDNA3 1 ( +)构建反义PCDGF核酸载体。并通过脂质体转染法转染人卵巢癌细胞株Sw626、A2780,用RT- PCR和Westernblot技术检测转染前后PCDGFmRNA和蛋白的表达,MTT实验检测其增殖能力的变化。结果:PCDGF反义核酸载体转染株的mRNA和蛋白水平明显低于对照组,Sw626的抑制率分别为50%、72%;A2780分别为53%、70%。同时增殖能力亦明显降低,其抑制率Sw626及A2780分别为71%、73%。结论:PCDGF反义核酸在高度恶性人卵巢癌细胞株Sw626及A2780中起了特异性封闭作用。为进一步研究PCDGF的分子生物学特性、致瘤机理及今后利用反义PCDGF核酸载体治疗卵巢癌提供了实验和理论模型。     

血管内皮生长因子与卵巢癌

血管内皮生长因子(VEGF)能强烈促进血管内皮细胞有丝分裂、血管生成,增加血管通透性.VEGF及其受体在许多肿瘤包括卵巢肿瘤中表达,并在卵巢癌高表达,与卵巢癌的发生、发展、转移和预后等密切相关.通过检测、抑制VEGF,可能为卵巢癌的早期诊断、治疗开辟新的途径.     

RNA干扰EFEMP1对卵巢癌细胞增殖、侵袭与转移的影响

目的:探讨fibulin糖蛋白家族中fibulin-3(EFEMP1)对卵巢癌细胞增殖、侵袭与转移的影响,为卵巢癌针对性治疗提供理论基础。方法:利用慢病毒转染RNA干扰的方式,转染具有高侵袭转移能力的S1克隆细胞株,抑制EFEMP1表达。Western blot、Real-time RT-PCR和免疫组化对转染效果进行验证。采用体外细胞功能分析技术检测干扰前后EFEMP1对细胞增殖、侵袭与转移能力的影响。建立裸鼠皮下移植瘤模型,体内观察EFEMP1对肿瘤生长的影响。结果:RNA干扰有效抑制EFEMP1表达,EFEMP1降表达显著抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和转移能力,裸鼠体内成瘤率降低并且肿瘤体积显著下降,同时肿瘤组织Fibulin基因表达显著降低。结论:EFEMP1与卵巢癌发生发展及侵袭转移密切相关,为卵巢癌的治疗提供新的思路。     

肿瘤间质在卵巢癌中的研究进展

肿瘤间质包括间质肌纤维母细胞、上皮细胞、粒细胞等。大量研究表明,肿瘤间质可产生诸如蛋白酶、生长因子、免疫调节因子等大量分子,通过影响肿瘤微环境中细胞内外双向的信号交换网络,参与肿瘤细胞的增殖分化、细胞凋亡、黏附及迁移等过程,与多种肿瘤的发生发展密切相关。近年研究表明,肿瘤间质在卵巢癌的发生发展、侵袭转移等过程中扮演重要角色,其与卵巢癌临床病理特征及预后有关,已成为当前卵巢癌生物学干预治疗的热门靶点。     

卵巢上皮性癌中survivin和VEGF-C蛋白表达的相关性及意义

目的:探讨生存素(survivin)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)在卵巢上皮性癌发生、发展及腹腔转移中的作用,以及两蛋白表达的相关性。方法:采用免疫组化法检测132例原发性卵巢上皮性癌、50例交界性上皮性肿瘤及50例良性上皮性肿瘤组织中survivin和VEGF-C蛋白的表达,分析其表达与临床病理特征的关系。结果:卵巢癌组织中survivin和VEGF-C阳性表达率分别为90.1%(119/132)和87.9%(116/132),明显高于良性肿瘤组[22.0%(11/50),35.0%(15/50)]和交界性肿瘤组[48.0%(24/50),56.0%(28/50)](P0.05)。卵巢癌组织中survivin和VEGF-C表达呈正相关(r=0.592,P0.05)。肿瘤分化越低、临床分期越高、脉管内有癌栓及有淋巴结转移的卵巢癌组织中,survivin和VEGF-C蛋白的阳性率越高。结论:VEGF-C与survivin可能在卵巢癌的发生发展过程中发挥着协调作用,两者联合检测可作为判断卵巢癌恶性程度、侵袭、预后的重要指标。     

Twist2表达与卵巢癌脉管浸润及预后的相关研究

目的:分析Twist2与卵巢癌患者的预后及脉管浸润之间的关系,探索Twist2在卵巢癌脉管浸润中的作用及机制。方法:利用KM plotter分析卵巢癌患者中Twist2 mRNA的表达与卵巢癌总生存率(OS)、无进展生存率(PFS)、肿瘤进展后生存率(PPS)的相关性。利用癌症基因组学数据库c Bioportal分析卵巢癌患者中Twist2与脉管浸润的相关性。体外实验:采用Transwell检测Twist2对卵巢癌CAOV3细胞[空白组、阴性对照组(si NC组)、si Twist2组]侵袭、迁移能力的影响,并利用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(realtime-PCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)检测分别从RNA水平及蛋白水平检测下调Twist2表达后CAOV3细胞中Twist2、血管内皮生长因子C(VEGFC)表达的变化。结果:(1)KM plotter在线数据分析结果示,Twist2高表达的卵巢癌患者与不良预后有关,OS(HR 1.24,95%CI 1.01～1.52)、PFS(HR 1.39,95%CI 1.14～1.70)及PPS(HR 1.37,95%CI 1.08～1.74)差异均有统计学意义(P<0.05); c Bioportal分析示,Twist2 mRNA表达与卵巢癌血管浸润(r=0.93,P=0.001)及淋巴管浸润(r=0.89,P=0.009)均呈正相关。(2)体外实验Transwell检测示,与空白组和si NC组比较,si Twist2组卵巢癌细胞的侵袭及迁移能力显著下降(P<0.05)。Realtime-PCR及Western blot检测示,与空白组和si NC组比较,si Twist2组中Twist2 mRNA及蛋白、VEGFC mRNA及蛋白的表达均明显下降(P <0.05)。结论:卵巢癌中Twist2的表达与肿瘤预后及脉管浸润密切相关,下调Twist2后,细胞迁移及侵袭穿透的细胞数明显减少、VEGFC表达降低,Twist2可能通过VEGFC来诱导肿瘤细胞侵袭转移参与肿瘤脉管浸润,Twist2可能是未来卵巢癌评估预后及靶向治疗的指标之一。     

EpCAM在上皮性卵巢癌中的应用与研究进展

上皮性卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤,由于症状隐匿并缺乏有效的筛选工具,临床早期很难诊断。最近有研究表明上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule,Ep CAM)可作为早期检测和卵巢癌预后治疗的生物标志物之一。EpCAM是第1个通过单克隆抗体识别的人类肿瘤特异性抗原,在上皮性卵巢癌中高表达。其能够调节上皮细胞完整性,介导卵巢癌细胞间黏附、迁移作用,同时在卵巢癌细胞侵袭中发挥重要作用,其表达与卵巢癌患者预后密切相关。目前作为一种重要的肿瘤标志物,EpCAM成为卵巢肿瘤免疫治疗的新靶点及评价患者预后的重要指标。EpCAM在上皮性卵巢癌中的高表达对于肿瘤的治疗、预后有重要意义。现对Ep CAM在上皮性卵巢癌中的应用与研究进展进行综述。     

肿瘤相关粘蛋白MUCl及其同种型MUCl／Y与卵巢上皮性肿瘤关系的研究

目的 探讨肿瘤相关粘蛋白MUCl及其同种型MUC1／Y粘蛋白在卵巢上皮性肿瘤的变化特征。方法 采用免疫组化ABC法，对72例卵巢上皮性、桨液性和粘液性肿瘤组织和8例正常卵巢组织MUCl和MUCl／Y粘蛋白进行检测。结果 MUCl在卵巢癌中的表达率(80％)高于良性上皮性肿瘤(45％)和正常卵巢组织(37.5％)，P＜0．005。MUCl／Y仅在卵巢癌中表达，二者高表达，与卵巢癌的恶性程度高、组织分化差、癌瘤播散及淋巴结转移有关。结论 MUCl、MUC1／Y作为一种新型的肿瘤标志物，与卵巢癌的发生、发展密切相关。     

血管内皮生长因子和增殖细胞核抗原在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及意义

目的 探讨卵巢上皮性肿瘤的临床病理特征及血管内皮生长因子(VEGF)和增殖细胞核抗原(PcNA)表达的临床意义.方法 2002年1月至2006年12月采用免疫组织化学S-P法,检测中国医科大学盛京医院妇产科47例卵巢上皮癌(卵巢癌),22例卵巢交界性肿瘤,27例卵巢良性肿瘤组织中VEGF及PCNA的表达.结果 VEGF、PCNA在卵巢癌组织中的阳性率分别为89.36%、78.72%,均明显高于卵巢良性及交界性肿瘤(P＜0.01).在卵巢癌中,VEGF、PCNA的阳性表达在Ⅲ～Ⅳ期均明显高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05),且两者表达随着卵巢癌分化程度的下降,表达逐渐升高.VEGF、PCNA的表达与卵巢肿瘤的组织学类型均无关(P＞0.05).相关分析显示,VEGF表达与PCNA表达密切相关.结论 VEGF的表达与卵巢癌细胞增殖存在一定的相关性.PCNA在卵巢癌发生、发展过程中起重要作用.VEGF可能通过自分泌和旁分泌刺激两种途径影响卵巢癌的生物学行为.     

表皮生长因子和雄激素受体在卵巢癌的表达

表皮生长因子受体(EGFR)是一种在某些细胞膜表面表达的170kDa糖蛋白。其过表达与卵巢癌不良预后及病变恶化一致。50％卵巢癌有EGFR水平升高。雄激素受体(AR)是一种110kDa的甾体激素受体。在80％肿瘤中有表达。雄激素通过AR发生的内部反应在卵巢癌发病中起重要作用。它可使正常卵巢表皮增生,也可增加EGFR水平。     

微小RNA在卵巢癌中侵袭转移机制的研究进展

微小RNA(micro RNA,miRNA)是一类长约20～22个核苷的非编码RNA分子。miRNA通过调控靶基因影响肿瘤细胞的分化、增殖、转移及细胞坏死。大量研究提示miRNA与人类恶性肿瘤有关,其在卵巢癌组织中表达往往存在异常。卵巢癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,90%以上的卵巢癌是上皮性癌,5年生存率仅30%,因卵巢癌早期多无明显症状,故在诊断时,肿瘤发生转移率高。卵巢癌的侵袭转移机制涉及多种物质及通路,有大量研究表明肿瘤干细胞相关miRNA、上皮-间充质转换相关miRNA、细胞外基质相关miRNA以及血管形成相关miRNA与卵巢癌侵袭、转移过程有关,其在卵巢癌组织中的异常表达能通过调控下游物质的表达,从而参与卵巢癌的发生发展及侵袭转移。综述miRNA在卵巢癌中侵袭转移相关机制方面的研究。     

ABC294640抑制卵巢癌侵袭及转移的实验研究

目的:观察ABC294640对人卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响,并探讨其作用机制。方法:用细胞侵袭小室法(Transwell)检测ABC294640对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响;用细胞蛋白免疫印迹(Western blotting)法分析ABC294640对卵巢癌细胞中c-Myc蛋白表达水平的调节作用。建立卵巢癌腹腔移植瘤模型,观察ABC294640对肿瘤体内转移作用的影响及其对体内c-Myc表达的影响。结果:50μmol的ABC294640作用卵巢癌细胞后其侵袭、迁移能力受到显著抑制,细胞中c-Myc蛋白表达水平明显下降(P<0.01)。在裸鼠腹腔移植瘤模型中,与对照组比较,ABC294640用药组中腹腔转移灶数量显著减少(P<0.01)。肿瘤组织中c-Myc表达水平显著低于对照组(P<0.01)。结论:ABC294640能抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力,其抗肿瘤侵袭转移的作用机制可能与c-Myc蛋白的表达下调有关。     

ABC294640抑制卵巢癌侵袭及转移的实验研究

目的:观察ABC294640对人卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响,并探讨其作用机制。方法:用细胞侵袭小室法(Transwell)检测ABC294640对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响;用细胞蛋白免疫印迹(Western blotting)法分析ABC294640对卵巢癌细胞中c-Myc蛋白表达水平的调节作用。建立卵巢癌腹腔移植瘤模型,观察ABC294640对肿瘤体内转移作用的影响及其对体内c-Myc表达的影响。结果:50μmol的ABC294640作用卵巢癌细胞后其侵袭、迁移能力受到显著抑制,细胞中c-Myc蛋白表达水平明显下降(P<0.01)。在裸鼠腹腔移植瘤模型中,与对照组比较,ABC294640用药组中腹腔转移灶数量显著减少(P<0.01)。肿瘤组织中c-Myc表达水平显著低于对照组(P<0.01)。结论:ABC294640能抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力,其抗肿瘤侵袭转移的作用机制可能与c-Myc蛋白的表达下调有关。     

溶血磷脂酸在卵巢癌进展中的机制研究

在卵巢癌的发生发展中,脂代谢发挥重要作用,溶血磷脂酸(LPA)作为一种生物活性磷脂分子,通过与多种G蛋白偶联受体结合,参与卵巢癌的增殖、转移和侵袭活动。一方面,LPA可通过促进肿瘤血管新生、调节细胞周期、抑制凋亡、促进糖代谢及维持肿瘤干细胞(CSC)的特性来促进卵巢癌细胞增殖;另一方面,LPA可增加基质金属蛋白酶(MMP)及尿激酶型纤溶酶原激活物(u PA)的表达、干预细胞间连接和骨架蛋白、促进上皮-间质转化(EMT),进而促进卵巢癌的转移和侵袭。此外,卵巢癌患者血浆中高水平的LPA单独或与卵巢癌的其他肿瘤标记物联合检测具有更高的敏感度和特异度。综述LPA在卵巢癌增殖、转移和侵袭中的作用机制以及潜在的诊断、治疗靶点方面的研究进展。     

卵巢癌成纤维细胞通过肝细胞生长因子促进癌细胞侵袭作用的研究

目的:探讨卵巢癌相关成纤维细胞(CAFs)分泌因子,特别是肝细胞生长因子(HGF)对卵巢癌细胞株CAOV3侵袭迁移作用的影响。方法:通过RT-PCR检测CAFs和卵巢正常成纤维细胞(NFs)中HGF mRNA的表达及与CAOV3体外共培养后两种成纤维细胞中HGF表达的变化。利用Transwell模型检测CAFs和NFs对CAOV3侵袭迁移的影响。用HGF中和性抗体拮抗CAFs和NFs分泌的HGF,检测CAFs和NFs对CAOV3侵袭迁移影响的变化。结果:CAFs比NFs表达更多的HGF(P<0.01),与CAOV3共培养后,HGF表达均增多(P<0.05)。与NFs相比,CAFs具有更强的促进CAOV3侵袭迁移的能力(P<0.01),但在HGF抗体作用后,两者的促侵袭能力减弱(P<0.01)。结论:卵巢癌细胞可促进其间质成纤维细胞HGF表达,而HGF过表达又反过来促进了自身的侵袭和迁移。     

microRNA-622在卵巢上皮性癌中的表达及意义

目的探讨microRNA-622(miR-622)在卵巢上皮性癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞株迁移和侵袭能力的影响。方法收集2003年1月至2016年12月在南方医科大学附属东莞人民医院手术切除的卵巢上皮性癌组织125例、卵巢良性上皮性肿瘤组织45例、正常卵巢组织25例。采用实时荧光定量PCR检测miR-622的表达水平;利用脂质体将miR-622模拟物瞬时转染至SKOV3卵巢癌细胞株,通过Transwell小室装置检测上调miR-622的表达对卵巢癌细胞株迁移和侵袭能力的影响。结果 miR-622在卵巢上皮性癌组织中的表达水平高于卵巢良性上皮性肿瘤组织和正常卵巢组织,差异具有统计学意义(P0.05)。miR-622表达水平与卵巢上皮性癌FIGO分期和是否发生淋巴结转移相关(P0.05)。体外细胞实验显示,上调miR-622表达可增强SKOV3卵巢癌细胞株的迁移和侵袭能力。结论 miR-622在卵巢上皮性癌组织中的表达增高,其可能通过促进癌细胞迁移和侵袭,参与卵巢癌的恶性演进。     

Matriptase与子宫内膜癌侵袭转移相关性的研究进展

侵袭和转移是恶性肿瘤的重要生物学特征之一,也是造成肿瘤患者死亡的主要原因。肿瘤的侵袭和转移是一个复杂的病理过程,涉及多种蛋白酶,包括基质金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶等。近来研究发现一种Ⅱ型跨膜丝氨酸蛋白酶Matriptase可通过激活尿激酶型纤溶酶原激活物、肝细胞生长因子/扩散因子、蛋白酶活化受体2和前列腺蛋白酶原促进肿瘤细胞的侵袭和转移,与多种恶性肿瘤,如乳腺癌、食管癌、前列腺癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌等的发生、发展密切相关。因而Matriptase有望成为恶性肿瘤一个新的诊断和治疗靶标。综述Matriptase与子宫内膜癌侵袭转移的相关性。     

垂体肿瘤转化基因与妇科肿瘤研究进展

垂体肿瘤转化基因(PTTG)是一个新近从垂体瘤组织中分离出的癌基因.其在许多肿瘤组织及高度增生性组织中过度表达.研究表明,妇科肿瘤,如子宫肌瘤、卵巢癌和子宫内膜癌中普遍存在PTTG表达的变化.并与卵巢癌和子宫内膜癌的临床分期、淋巴结转移和预后有重要关系,同时与子宫内膜癌肌层浸润深度密切相关.提示该基因在上述妇科肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的作用.     

上皮间质转化在卵巢癌中的研究进展

上皮间质转化(EMT)与卵巢癌的侵袭、转移等行为密切相关,阻断EMT的发生发展对卵巢癌侵袭转移前的早期诊断、早期治疗有着非常重要的意义。因此,深入研究EMT的机制有助于我们更深刻的认识卵巢癌的侵袭和转移,寻找卵巢癌治疗的新途径及新靶向。     

bFGF和Ets-1在原发性卵巢癌中的表达及意义

目的 :检测碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)和E2 6转录因子 (E2 6transformation specific 1,Ets 1)在原发性卵巢癌中的表达 ,为评估卵巢癌的生物学行为提供新的依据。方法 :应用免疫组织化学链霉素抗生物素—过氧化物酶复合法 (streptomycinavidin biotin peroxidasecomplex,SP)检测 32例卵巢癌组织中bFGF和Ets 1的表达 ,观察其与肿瘤组织学分级、临床分期、有无淋巴结转移及相互之间的关系。结果 :卵巢癌组织中bFGF和Ets 1的阳性表达率明显高于癌旁组织 (P <0 .0 0 1) ;bFGF和Ets 1的表达与原发性卵巢癌的FIGO分期和组织学分级密切相关 ;有淋巴结转移患者的bFGF和Ets 1阳性表达率高于无淋巴结转移患者 (P <0 .0 0 5和P <0 .0 1) ;癌组织中bFGF和Ets 1的表达密切相关 ,相关系数rs0 .396 (P <0 .0 5 )。结论 :bFGF和Ets 1的表达与原发性卵巢癌的转移有密切关系 ,检测bFGF和Ets 1的表达可作为了解卵巢癌生物学行为的参考指标