circHERC4通过调节miR-105-5p/Skp2轴抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探究circHERC4对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响与机制。方法 收集2020年6月～2021年12月在邵阳学院附属第一医院进行手术治疗的68例CRC病人的CRC组织和对应的癌旁组织。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织中circHERC4、miR-105-5p、细胞S期激酶相关蛋白2(Skp2) mRNA表达水平;Western blot检测细胞中Skp2蛋白表达;CCK-8、平板细胞克隆实验、划痕愈合实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移、侵袭情况。结果 circHERC4、Skp2 mRNA在CRC组织中表达上调,而miR-105-5p表达下调(P<0.05),且CRC组织中circHERC4、miR-105-5p、Skp2 mRNA表达水平之间互呈相关性(P<0.05)。敲低circHERC4或过表达miR-105-5p可抑制HCT116细胞增殖、迁移和侵袭及细胞中Skp2表达(P<0.05),而过表达Skp2可部分逆转miR-105-5p过表达对HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05),且...     

miR-3126-5p靶向 LASP1抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移的机制探讨

目的探讨微小RNA(miRNA)-3126-5p抑制靶基因LIM和SH3蛋白1(LIM and SH3 protein 1.LASP1)对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法采用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测结直肠癌细胞株(HT-29、HCT116、LoVo、SW480)和正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)中miR-3126-5p的表达水平。选择表达水平最低的细胞株作为实验对象,实验分为2组:阴性对照组(转染miR-NC)和miR-3126-5p组(转染miR-3126-5p),转染48 h后收集各组细胞。qRT-PCR法检测各组细胞miR-3126-5p的表达水平。采用MTS法和划痕愈合实验分别检测各组细胞的增殖水平和迁移能力。采用生物信息学软件microRNA.org和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-3126-5p的靶基因。采用qRT-PCR和Western blot检测各组细胞靶基因的表达水平。计量资料以均数土标准差(Mean±SO)表示,两两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析结果与正常肠黏膜上皮细胞(HIEC)相比,结直肠癌细胞株miR-3126-5p的表达水平显著降低(P<0.05),表达水平最低的细胞株是HCT116细胞(P<0.01)。阴性对照组和miR-3126-5P组HCT116细胞中miR-3126-5p的表达分别为(1.05±0.16)和(7.91±1.26),差异具有统计学意义(t=5.40,P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组HCT116细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),迁移能力显著下降(t=4.52,F<0.01)。microRNA.org显示miR-3126-5p与LIM和SH3蛋白1(LASP1)基因mRNA存在互补结合位点。miR-3126-5p和L4SP/mRNA能够靶向结合(P<0.01)。与阴性对照组相比,miR-3126-5p组H CT116细胞中L4SP/基因表达显著降低(t=4.56,P<0.01)。结论结直肠癌细胞株中miR-3126-5p呈低表达,miR-3126-5p能够通过抑制靶基因LASP1降低结直肠癌HCT116细胞的增殖和迁移能力。     

肝X受体激动剂GW3965对人结肠癌细胞奥沙利铂耐药的逆转作用及机制

目的:探讨肝X受体(LXR)激动剂GW3965对人结肠癌细胞奥沙利铂(OXA)耐药的逆转作用及机制。方法:用OXA药物浓度持续递增法诱导人结肠癌HCT116细胞构建OXA耐药的人结肠癌HCT116/L-OHP细胞,比较HCT116/L-OHP细胞与其亲本HCT116细胞的生长情况,以及对不同浓度OXA作用的反应情况;检测HCT116/L-OHP细胞经GW3965处理48 h后OXA耐药性及自噬相关蛋白ATG-5、Beclin-1、p62、LC3的表达的变化。结果:成功构建人结肠癌耐OXA细胞HCT116/L-OHP,表现为HCT116/L-OHP细胞与亲本HCT116细胞比较,增殖能力有所减弱,但对OXA的耐药性明显增强(IC_(50):244.99μmol/L vs.10.05μmol/L,P0.05),其耐药指数(RI)为24.45。不同浓度(10、20、30μmol/L)GW3965作用后,HCT116/L-OHP细胞对OXA的IC_(50)、RI均明显降低(均P0.05),且呈浓度依赖性(IC_(50):199.49、114.71、87.32μmol/L;RI:19.89、11.40、8.69),3个浓度的逆转倍数分别为1.23、2.15、2.82;ATG-5、Beclin-1蛋白的表达明显降低,而p62、LC3-II蛋白的表达明显升高(均P0.05),且均呈浓度依赖性。结论:LXR激动剂GW3965可逆转人结肠癌细胞对OXA的耐药,其机制可能与调节自噬相关蛋白表达水平有关。     

miR-34a通过调控TGF-β/Smad4信号通路激活自噬而降低结肠癌细胞对奥沙利铂的耐药性

目的探讨miR-34a调节结肠癌细胞对奥沙利铂(OXA)的耐药作用及其机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测结肠癌组织和细胞系中miR-34a的表达水平;采用基因软件预测、分析及检测结肠癌细胞中miR-34a的下游靶基因;采用细胞计数试剂盒(CCK-8试剂盒)检测细胞的生存率;采用流式细胞仪以及Western blot方法检测结肠癌细胞的凋亡和自噬情况。结果接受OXA化疗的结肠癌患者的血清中miR-34a的表达水平明显降低,转化生长因子-β(TGF-β)mRNA和Smad4 mRNA的表达水平均明显增高。OXA引起miR-34a的表达下调,亲代结肠癌细胞和对OXA耐药的结肠癌细胞中TGF-β和Smad4的表达均上调。自噬的激活增强了结肠癌细胞对OXA的耐药性。在结肠癌组织中,Smad4 mRNA和miR-34a的表达水平间具有负相关性,过表达miR-34a通过靶向抑制Smad4的表达来抑制自噬的激活并降低耐药性。结论 miR-34a抑制TGF-β/Smad4信号通路的激活,抑制自噬降低结肠癌细胞对OXA的耐药性。     

miR-26b对肝癌HepG2奥沙利铂耐药细胞的增敏作用研究

目的:构建肝癌HepG2奥沙利铂耐药细胞,观察miR-26b在其耐药机制中的作用。方法:使用浓度梯度法构建肝癌奥沙利铂耐药细胞株(HepG2/L-OHP)。miR-26b mimic转染HepG2/L-OHP细胞,CCK-8法检测细胞增殖,Real-time PCR定量检测miR-26b表达,Western blot检测蛋白表达。结果:HepG2细胞miR-26b的2-△△Ct值为0.206±0.024,显著高于HepG2/L-OHP细胞的0.152±0.017(P0.01)。奥沙利铂对HepG2、HepG2/L-OHP和转染miR-26b mimic的HepG2/L-OHP细胞的IC_(50)值分别为22.15±3.26、48.56±6.47和36.73±5.18μmol/L,各组间差异有统计学意义(P0.01)。HepG2、HepG2/L-OHP和转染miR-26b mimic的HepG2/L-OHP细胞的LC3-Ⅱ/Ⅰ比值为2.27±0.24、9.45±1.54和6.32±1.13,各组间差异有统计学意义(P0.01)。结论:miR-26b可以抑制肝癌奥沙利铂耐药细胞自噬激活,逆转肝癌细胞对奥沙利铂耐药。     

LncRNA SNHG1通过miR-377-3p/AKT2轴对宫颈癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因1(lnc RNA SNHG1)对宫颈癌(CC)细胞增殖、凋亡和迁移的调控机制。方法 体外培养人CC细胞系Si Ha、Hela、Ca Ski和人正常宫颈上皮细胞HUCEC,实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测细胞中SNHG1、微小RNA-377-3p(miR-37 7-3p)和丝氨酸/苏氨酸激酶2(AKT2)m RNA的表达水平。将SNHG1小分子干扰RNA(si-SNHG1)转染Hela细胞构建SNHG1敲低细胞,并在SNHG1敲低细胞系中下调miR-37 7-3p表达进行验证。实验分为对照组(NC组)、si-NC组、si-SNHG1组、si-SNHG1+miR-377-3p inhibitor阴性对照组(inhibitor-NC)、si-SNHG1+miR-377-3p inhibitor组。转染48 h后,RT-q PCR检测转染效果;Western Blot检测细胞AKT2蛋白表达水平;MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;划痕愈合实验检测细胞迁移能力。双荧光素酶报告基...     

microRNA-34a增加奥沙利铂对结肠癌细胞敏感性的实验研究

目的:构建奥沙利铂耐药结肠癌细胞株(SW480/ADR),观察miRNA-34a对SW480/ADR细胞奥沙利铂敏感性的影响。方法:使用浓度梯度法构建奥沙利铂耐药细胞株(SW480/ADR)。miR-34a慢病毒转染SW480/ADR细胞,MTT法检测细胞增殖,Real-time PCR定量检测miR-34a表达,Western blot检测蛋白表达。结果:SW480、SW480/ADR和过表达miR-34a-SW480/ADR细胞miR-34a的2-△△Ct值为0.15±0.03、0.12±0.02和0.74±0.13,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。奥沙利铂对SW480、SW480/ADR和过表达miR-34a-SW480/ADR细胞的IC50值分别为8.64±1.54、24.16±3.72和11.52±1.22μmol/L,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。SW480、SW480/ADR和过表达miR-34a-SW480/ADR细胞OCT-4蛋白的相对灰度值为0.096±0.014、0.352±0.053和0.136±0.017,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:miR-34a可以显著降低结肠癌奥沙利铂耐药细胞OCT-4蛋白表达,逆转结肠癌细胞对奥沙利铂的耐药。     

Aurora A激酶抑制剂Alisertib诱导结直肠癌细胞自噬的作用及与p53表达间的关系

目的 探讨Alisertib（ALS）对人结直肠癌Caco-2和HT29细胞的诱导自噬的作用及与p53 表达状态间的关系。方法 本研究采用人结直肠癌Caco-2和HT29细胞进行实验。实验组用0.1、1、5 μmol/L ALS而对照组用同浓度的DMSO处理细胞。流式细胞术检测细胞的自噬率,Wester Blotting法检测细胞自噬过程中关键调节分子的蛋白表达。结果与对照组比较,0.1、1 μmol/L Alisertib组Caco-2细胞自噬率增加,分别为26.4%和26.8%（P<0.01）。1、5 μmol/L ALS组HT29细胞自噬率增加,分别为36.8%和42.6%（P<0.01）。Caco-2细胞不表达p53蛋白,而HT29细胞表达p53蛋白。与对照组比较,1、5μmol/L Alisertib引起Caco-2细胞的p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-p38/p38的比值分别降低为对照组的62.6%、45.2%,30.1%、38.2%和49.0%、30.4%（P<0.01）,LC3-Ⅱ/LC3-I的比值升高32.6%、46.8%（P<0.01）。与对照组比较,1、5 μmol/L Alisertib引起HT29细胞的p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt的比值分别降低为对照组的70.9%、66.3%和85.2%、27.2%（P<0.01）,p-p38/p38和LC3-II/LC3-I的比值升高2.1倍、2.0倍和78.5%、84.8%（P<0.05）。与5 μmol/L Alisertib组比较,10 μmol/L SB202190+5 μmol/L Alisertib引起HT29细胞凋亡率升高64.7%（P<0.001）,而Caco-2细胞凋亡率无明显变化。结论 Alisertib抑制了PI3K/Akt信号通路,诱导了Caco-2和HT29细胞发生细胞自噬。Alisertib对p38 MAPK信号通路的影响不同,激活了HT29而抑制了Caco-2细胞的p38 MAPK信号通路,可能与p53蛋白是否表达有关。     

长链非编码RNA ST8SIA6-AS1通过调节微小RNA-142-3p促进肝细胞癌的增殖和侵袭

目的探讨ST8SIA6-AS1靶向结合微小RNA(microRNA,miR)-142-3p,影响肝细胞癌的增殖和侵袭能力。方法用基因表达谱数据动态分析(GEPIA)验证ST8SIA6-AS1在肝细胞肝癌(HCC)和邻近正常组织中的差异表达。采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测ST8SIA6-AS1和miR-142-3p在组织水平和细胞水平的表达量。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和集落形成实验检测人肝癌细胞Hep3B的增殖情况;采用迁移侵袭实验(Transwell法)检测肝癌Hep3B细胞迁移和侵袭情况。生物信息学、双荧光素酶报告实验验证ST8SIA6-AS1与miR-142-3P的靶向关系。组间采用t检验,多组间采用单因素方差分析进行比较,相关性分析采用Spearman秩检验。结果GEPIA结果显示ST8SIA6-AS1在肝癌组织中的表达明显高于正常组织。RT-qPCR结果显示ST8SIA6-AS1在HCC中的表达明显高于癌旁组织(0.778±0.363比1.951±0.575,t=11.370,P<0.05),差异有统计学意义。miR-142-3p在肝癌组织的表达量显著低于癌旁组织(0.881±0.374比0.371±0.164,t=9.395,P<0.05),差异有统计学意义。ST8SIA6-AS1在4种人HCC细胞株(HepG2、SMMC-7721、HCCLM3和Hep3B)的表达(3.84±0.27、5.81±0.60、4.47±0.55、5.94±0.69)明显高于正常肝细胞株L02(1.00±0.09,t=17.280,t=13.730,t=10.780,t=12.300,P<0.05),差异有统计学意义,ST8SIA6-AS1在敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞中的相对表达量低于对照组(0.26±0.04比1.00±0.01,t=9.423,P<0.05),差异有统计学意义。集落形成实验结果显示,敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞集落个数显著低于对照组[(32.60±6.70)个比(100.00±10.00)个,t=10.040,P<0.05],差异有统计学意义;CCK-8实验中敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞72 h吸光度(A)值低于对照组[(0.71±0.06)%比(1.14±0.09)%,t=6.886,P<0.05],差异有统计学意义。Transwell实验结果显示敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞垂直迁移率明显低于对照组[(53.38±6.49)%比(100.00±13.00)%,t=5.641,P<0.05],差异有统计学意义。敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞的侵袭率低于对照组[(44.98±8.42)%比(100.00±10.00)%,t=7.485,P<0.05],差异有统计学意义。双荧光素酶报告实验证实miR-142-3p过表达组明显低于对照组ST8SIA6-AS1-野生型(WT)细胞的荧光活性,ST8SIA6-AS1负向调控miR-142-3p的表达(0.42±0.05比1.00±0.09,t=9.757,P<0.05)。干扰ST8SIA6-AS1的表达可对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭产生抑制作用,这种作用可通过沉默miR-142-3p发生逆转。结论ST8SIA6-AS1可通过竞争性结合miR-142-3p在肝癌中发挥致癌作用。     

circDUSP16调节miR-126-5p/SHH轴对结直肠癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探究circDUSP16对结直肠癌(CRC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法:qRT-PCR检测circDUSP16、miR-126-5p、SHH表达水平,CCK-8法测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测SHH、PCNA、Bcl-2、Bax、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达,荧光素酶实验检测circDUSP16和miR-126-5p/SHH的靶向关系。结果:沉默circDUSP16组SW480细胞circDUSP16、SHH mRNA表达、OD450值(24 h、48 h、72 h)、Bcl-2和N-cadherin蛋白表达降低,miR-126-5p、凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白水平升高(P<0.05);下调miR-126-5p减弱了沉默circDUSP16对SW480细胞的增殖、EMT发生的抑制,降低了细胞的凋亡能力;circDUSP16靶向负调控miR-126-5p表达,miR-126-5p靶向负调控SHH表达。结论:沉默circDUSP16可能通过上调miR-126-5p并下调SHH抑制SW480细胞增殖和EMT发生,促进凋亡。     

微小RNA-142-3p靶向CD133对肝癌细胞增殖、侵袭和干细胞特性的影响

目的:观察微小RNA(miR)-142-3p靶向CD133对肝癌细胞增殖、侵袭和干细胞特性的影响。方法:选取郑州大学第二附属医院2017年6月至2019年12月手术切除的肝癌组织和对应的癌旁组织作为研究对象。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌旁组织和肿瘤组织miR-142-3p表达水平。采用慢病毒在MHCC97H...     

p53 inhibition attenuates cisplatin-induced acute kidney injury through microRNA-142-5p regulating SIRT7/NF-κB

Renal tubular epithelial cell apoptosis is the main mechanism of cisplatin-induced acute kidney injury. The role of microRNAs (miRNAs) in the apoptosis of renal tubular epithelial cells has been suggested, but the underlying mechanism has not been fully elucidated. We used microarray analysis to identify miR-142-5p involved in cisplatin-induced acute kidney injury. miR-142-5p was down-regulated in human renal tubular epithelial (HK-2) cells with cisplatin treatment. Notably, the overexpression of miR-142-5p attenuated the cisplatin-induced HK-2 cell apoptosis and inhibition of miR-142-5p aggravated cisplatin-induced HK-2 cell apoptosis. During cisplatin treatment, p53 was activated. The inhibition of p53 by pifithrin-α attenuated the cisplatin-induced kidney injury and up-regulated miR-142-5p expression. We also identified the Sirtuin7 (SIRT7) as a target of miR-142-5p. Furthermore, we demonstrated that the inhibition of SIRT7 prevented cisplatin-induced HK-2 cell apoptosis and decreased the expression of nuclear factor kappa B (NF-κB). Our data revealed that p53 inhibition could attenuate cisplatin-induced acute kidney injury by up-regulating miR-142-5p to repress SIRT7/NF-κB. These findings may provide a novel therapeutic target of cisplatin-induced acute kidney injury.     

Upregulation of miR-142-3p in peripheral blood mononuclear cells of operationally tolerant patients with a renal transplant

Achieving drug-free tolerance or successfully using only small doses of immunosuppression is a major goal in organ transplantation. To investigate the potential mechanisms by which some kidney transplant recipients can achieve operational tolerance, we compared the expression profiles of microRNA in peripheral blood mononuclear cells of operationally tolerant patients with those of stable patients treated with conventional immunosuppression. B cells from operationally tolerant patients overexpressed miR-142-3p. The expression of miR-142-3p was stable over time and was not modulated by immunosuppression. In Raji B cells, overexpression of miR-142-3p modulated nearly 1000 genes related to the immune response of B cells, including potential miR-142-3p targets and molecules previously identified in the blood of operationally tolerant patients. Furthermore, our results suggested that a negative feedback loop involving TGF-β signaling and miR-142-3p expression in B cells may contribute to the maintenance of tolerance. In summary, miR-142-3p expression in peripheral blood mononuclear cells correlates with operational tolerance. Whether upregulation of miR-142-3p modulates inflammatory responses to promote tolerance or is a result of this tolerance state requires further study.     

miR-1287-5p upregulation inhibits the EMT and pro-inflammatory cytokines in LPS-induced human nasal epithelial cells (HNECs)

BackgroundChronic rhinosinusitis is an intractable symptom that influences daily lives of patients. miR-1287-5p was discovered to play a suppressive role in cervical cancer and HBV-related infection.PurposeThis study investigated the potential role of miR-1287-5p in the in-vitro model of chronic rhinosinusitis.MethodsGSE169376 dataset was analyzed and differential miRNAs in nasal mucosa tissues in the chronic rhinosinusitis group were screened out. LPS was used to treat HNECs for 12h, 24h and 48h. Cells underwent LPS treatment after SNAI1 downregulation, miR-1287-5p upregulation or pretreatment of the HMGB1 inhibitor, Glycyrrhizin. RT-PCR was used to measure the RNA expression of miR-1287-5p, SNAI1 and HMGB1. ELISA was used for the detection of IL-6, IL-8, TNF-α changes. Targetscan and starBase were used to predict the targets (SNAI1 and HMGB1) of miR-1287-5p. Dual-luciferase reporter assays were applied to validate this. Western blot was used to analyze the protein changes of Snai1, Vimentin, E-cadherin and HMGB1.ResultsmiR-1287-5p was downregulated in the chronic rhinosinusitis group and decreased after LPS treatment in HNECs. The upregulation of miR-1287-5p inhibited IL-6, IL-8, TNF-α and EMT. miR-1287-5p targeted and inhibited SNAI1 and HMGB1. SNAI1 downregulation led to inhibition in EMT while loss of HMGB1 contributed to the decrease in pro-inflammatory cytokines. Knockdown of SNAI1 decreased HMGB1, resulting in the reduction of pro-inflammatory cytokines while HMGB1 inhibitor reduced SNAI1 and thus suppressed the EMT process.ConclusionmiR-1287-5p downregulation was associated with chronic rhinosinusitis and its upregulation inhibited the EMT and inflammation in LPS-induced HNECs through Snai1/HMGB1 pathway.     

微小RNA-221对结直肠癌中CDKN1C/P57表达调控的研究

目的 观察结直肠癌组织和细胞中微小RNA-221（miR-221）和CDKN1C/P57表达情况,并探讨特异性miR-221抑制剂对癌细胞增殖、凋亡及CDKN1C/P57表达的影响.方法 应用实时荧光定量PCR检测34例结直肠癌组织和相应癌旁组织、以及4种人结直肠癌细胞系HT-29、Lovo、SW-480、Caco2中miR-221表达情况;采用半定量RT-PCR和Western-blot法分析CDKN1C/P57mRNA及蛋白表达情况;将miR-221和anti-miR-221寡核苷酸通过脂质体转染Caco2细胞系,通过MTT法及流式细胞仪观察细胞的增殖及凋亡情况.结果 miR-221在结直肠癌组织中的相对表达量为2.041±1.401,明显高于癌旁组织（0.806±0.341,P＜0.01）;同样,miR-221在4种人结直肠癌细胞系中的表达亦高于正常对照细胞.CDKN1C/P57 mRNA水平在结直肠癌与癌旁组织中差异并不显著;但其蛋白相对表达量结直肠癌组织显著高于癌旁组织（3.019±1.708比0.972±0.316,P＜0.01）.癌细胞转染anti-miR-221后,CDKN1C/P57蛋白表达上调,细胞增殖受抑,细胞凋亡率增高,G0/G1期细胞比例增加同时S期细胞比例下降,差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 miR-221可能通过转录后基因沉默机制使CDKN1C/P57蛋白表达水平下降,从而促进结直肠癌发生发展;anti-miR-221可通过抑制细胞增殖同时诱导细胞凋亡,以抑制结直肠癌细胞生长;miR-221有可能成为结直肠癌生物治疗的新靶点.     

微小RNA-195靶向调控Delta样配体4抗结直肠癌分子机制研究

目的观察微小RNA(microRNA,miR)-195调控结直肠癌中Notch通路配体Delta样配体4(Dll4)表达,探讨其作用靶点,明确miR-195通过Notch通路抗结直肠癌的分子机制。方法收集北京大学人民医院胃肠外科2010年11月至2011年2月56例行结直肠癌根治术切除的标本,3、应用芯片技术筛选6例结直肠肿瘤组织和正常肠黏膜组织中micro-RNA的表达差异,用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-195在组织中相对表达量,应用固定化蛋白质印迹法(Western blot)检测56例结直肠癌组织及其邻近正常肠黏膜中Notch通路中Dll4蛋白表达;采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-195与Dll43’端非编码区(3’UTR)区的相互作用及活性,采用基因过表达miR-195(40 pmol/L)处理结肠癌细胞系SW480,运用流式细胞仪观察其对细胞凋亡的影响,Western blot检测通路相关蛋白Dll4、锯齿状蛋白1(Jagged1)、Notch受体胞内段(NICD)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、转录因子发状分裂相关增强子1(HES1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、核因子-κB(NF-κB)的表达。组间比较采用方差分析(ANOVA),独立样本t检验比较蛋白表达量差异,统计学方法分别采用独立样本t检验、配对样本t检验及单因素方差分析。结果结直肠癌组织中miR-195表达水平明显低于正常肠黏膜,而Dll4蛋白表达水平高于正常肠黏膜,分别为正常肠黏膜的0.34倍(0.341±0.008)及1.92倍(1.922±0.003)(t=3.116、2.374,P<0.05),差异均有统计学意义,体外转入miR-195后,Dll4荧光素酶活性低于对照组(0.442±0.010、1.010±0.002,t=4.305,P<0.01),差异有统计学意义,miR-195和γ-分泌酶抑制剂(DAPT)都可阻断Notch1通路,抑制SW480细胞的增殖(3.1%比17.3%,t=4.232,P<0.01),差异有统计学意义,诱导其凋亡(13.7%比48.3%,t=8.355,P<0.01),两者具有协同作用(t=7.474,P<0.01),差异有统计学意义。同时Notch通路相关蛋白NICD、Hes-1随作用时间延长而表达下降。结论结直肠癌中miR-195及Dll4呈拮抗性表达,与其病理学特征密切相关,Dll4为miR-195调控的下游靶基因,miR-195通过负性调控Dll4/Notch信号通路抗结直肠癌。