槲皮素通过抑制己糖激酶抑制肝癌HepG2细胞的增殖及促进其凋亡

目的 观察槲皮素对HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制.方法 选用槲皮素12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 μmol/L为实验浓度梯度,采用噻唑蓝(MTT)比色法及流式细胞检测技术检测人肝癌HepG2细胞对槲皮素的敏感性;应用免疫细胞化学及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测细胞中已糖激酶蛋白及mRNA的表达.结果 槲皮素对肝癌HepG2细胞的增殖呈浓度依赖性的抑制作用,以上各浓度抑制率分别为10.1％、20.4％、35.6％、59.8％、70.2％;诱导细胞凋亡率分别为9.7％、15.2％、22.6％、31.7％、42.3％:100 μmol/L槲皮素作用HepG2细胞48 h前后已糖激酶蛋白表达的灰度值分别为128.33±13.27、193.18±12.36;与β-肌动蛋白(β-actin)mRNA表达的吸光度(A)值分别为0.3747±0.1356、0.2058±0.1172.结论 槲皮素对肝癌HepG2细胞具有生长抑制作用,并通过抑制己精激酶的表达来促进细胞凋亡.     

miR-9靶向己糖激酶2对乳腺癌细胞增殖的影响

目的研究miR-9靶向己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)对乳腺癌细胞增殖的调节作用。方法取乳腺癌组织及癌旁组织,检测miR-9及HK2的表达水平;培养乳腺癌MCF-7细胞,分为空白对照组、NC组、miR-9组、NC-siRNA组、HK2-siRNA组,检测细胞活力、HK2及cleaved caspase-3表达水平,验证miR-9对HK2的靶向结合。结果乳腺癌组织中miR-9的表达水平低于癌旁组织(0.52±0.08 vs 1.05±0.25,t=16.685、P<0.000),HK2的表达水平高于癌旁组织(0.73±0.14 vs 0.34±0.08,t=17.587、P<0.000),miR-9与HK2呈负相关;miR-9组细胞的OD490水平、HK2表达水平、包含HK2基因mRNA 3’UTR的双荧光素酶报告基因的荧光活力低于NC组(0.58±0.09 vs 1.04±0.21、0.51±0.08 vs 1.18±0.24、41.11±9.28 vs 148.28±29.59,t/P=4.027/0.007、5.297/0.002、6.912/0.001),cleaved caspase-3表达水平高于NC组(1.08±0.26 vs 0.42±0.09、t/P=4.797/0.003);HK-siRNA组细胞的OD490水平、HK2表达水平低于NC-siRNA组,cleaved caspase-3表达水平高于NC-siRNA组。结论miR-9能抑制乳腺癌细胞的增殖,其机制可能与靶向抑制HK2表达,增加下游cleaved caspase-3表达有关。     

长链非编码RNA GSTM3TV2通过调节微小RNA-597对肝癌细胞恶性细胞生物学的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) GSTM3TV2对肝癌细胞增殖、侵袭和转移的影响,并探讨其与微小RNA(miR)-597的相互作用。方法:选取郑州大学附属南阳市中心医院、南阳市宛城区第一人民医院和郑州大学第一附属医院2016年5月到2018年5月收集的126例肝癌和癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链...     

人类无翅相关集合位点家族2号基因通过信号传导与转录激活因子3通路调控结直肠癌细胞中己糖激酶2的表达

目的:在体外研究结直肠癌细胞中人类无翅相关集合位点家族2号基因(Wnt2)对己糖激酶2(HK2)表达的影响,探讨其调控机制。方法:使用慢病毒构建高表达Wnt2的人结直肠腺癌细胞(Caco2)稳转株细胞(Caco2-Wnt2、Caco2-NC)和低表达Wnt2的人回盲肠癌细胞(HCT8)稳转株细胞及其对照组(HCT8-s...     

微小RNA-597靶向Rab23对肝癌细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的:探讨微小RNA(miRNA,miR)-597靶向Rab23对肝癌细胞增殖、凋亡和周期的影响及其分子机制。方法:选取南阳市中心医院2017年5月到2019年5月收集的126例肝癌和癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析正常肝细胞LO2、肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721和Huh7中miR...     

己糖激酶1在肾癌中的异常表达

目的探讨己糖激酶1(hexokinase 1,HK1)基因在人肾癌和癌旁组织中差异表达。方法提取47例肾癌及其癌旁组织的RNA和蛋白,荧光定量实时聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,QPCR)检测HK1的表达水平,应用免疫组化方法检测HK1蛋白在肾癌及相应癌旁组织的表达情况。结果癌组织△CT值为4.43±1.54,癌旁组织的△CT值为5.59±1.70,二者有统计学差异(t=-4.97,P=0.00)。37例(78.7%,37/47)肾癌组织样本中HK1表达量高于癌旁组织。免疫组化结果显示,HK1蛋白表达于胞浆内,在肾癌组织中的表达量明显高于相应的正常组织。结论 HK1高表达于肾癌组织,可能在肿瘤发生发展的过程中发挥重要作用,该基因有望成为指导肾癌诊断及治疗的新靶点。     

己糖激酶Ⅱ与肿瘤研究进展

肿瘤最显著的代谢特征是高效糖酵解,即Warburg效应。肿瘤糖酵解活跃程度与肿瘤生长速度和侵袭性密切相关。尽管肿瘤高效糖酵解机制涉及癌基因事件,但糖酵解关键酶异常在肿瘤Warburg效应中起主要作用,其中己糖激酶Ⅱ（HK-Ⅱ）在恶性肿瘤中表达、亚细胞分布和酶动力学改变更显著,并且与肿瘤特征性代谢表型、细胞增殖和凋亡调节密切相关。HK—Ⅱ可能是探索肿瘤诊断和治疗的潜在靶点。     

微小RNA-618通过靶向羧基末端结合蛋白2抑制胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨微小RNA(miR)-618及羧基末端结合蛋白2(CtBP2)对胰腺癌增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法:采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测胰腺癌细胞中miR-618的表达;分别转染miR-618 inhibitor和mimics后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆集落形成及Tr...     

微小RNA-142-3p靶向CD133对肝癌细胞增殖、侵袭和干细胞特性的影响

目的:观察微小RNA(miR)-142-3p靶向CD133对肝癌细胞增殖、侵袭和干细胞特性的影响。方法:选取郑州大学第二附属医院2017年6月至2019年12月手术切除的肝癌组织和对应的癌旁组织作为研究对象。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌旁组织和肿瘤组织miR-142-3p表达水平。采用慢病毒在MHCC97H...     

微小RNA-146a通过调控巨噬细胞移动抑制因子表达影响前列腺癌细胞的增殖与迁移

前列腺癌发病率逐渐升高,且存在明显的地区差异性[1]。本研究旨在探讨微小RNA(microRNA,miRNA,miR)-146a通过调控巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达影响前列腺癌细胞的增殖与迁移。     

microRNA-497 在肝细胞癌中的表达及意义

目的:探讨microRNA-497(miR-497)在肝细胞癌组织中的表达及其意义.方法:收集40例肝细胞癌及对应癌旁组织标本,用qRT-PCR方法检测标本中miR-497的表达;人肝癌SMMC-7721细胞经miR-497模拟物转染后,用MTT和流式细胞术检测其增殖能力与凋亡水平的变化,并用qRT-PCR和Western blot检测miR-497潜在靶点Bcl-w的mRNA与蛋白的表达.结果:miR-497在肝癌组织中的表达水平明显低于其癌旁组织[(1.181±0.779)vs.(14.599±5.266),P＜0.05];转染miR-497模拟物的SMMC-7721细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡增加,Bcl-w的mRNA与蛋白表达均明显降低(与未转染的SMMC-7721细胞比较,均P＜0.05).结论:肝癌组织中miR-497表达下调,该下调可能导致靶基因Bcl-w表达升高,从而促进肿瘤的发生与发展.     

人肝癌细胞株与正常肝细胞株MicroRNA差异表达谱研究

目的 建立SMMC-7721人肝癌细胞株与CCC-HEL-1人正常肝细胞株MicroRNA(miRNA)差异的表达谱,确定差异的miRNA,为进一步研究miRNA在肝细胞癌变机制中的作用和肝癌的治疗提供新的线索.方法 体外培养SMMC-7721人肝癌细胞株和CCC-HEL-1人正常肝细胞株.用TRIzol法提取细胞的总...     

微小RNA-17-5p下调同源盒蛋白HOXB13抑制血管平滑肌细胞增殖的研究

目的:探讨微小RNA(miR)-17-5p调控同源盒蛋白(HOXB13)的分子机制。方法:从SD大鼠胸主动脉分离和培养血管平滑肌细胞(VSMCs);利用细胞计数试剂盒检测细胞增殖;反转录定量聚合酶链反应检测miRNA和miR-17-5p的表达;细胞转染miR-17-5p mimics、anti-miR-17-5p和小干...     

HGF下调Skp2表达抑制人肝癌细胞增殖的实验研究

目的：探讨肝细胞生长因子(HGF)对人肝癌细胞增殖的作用及其机制。方法：人肝癌细胞株HepG2用于实验。通过BrdU细胞增殖酶联免疫实验观察HGF对细胞增殖的作用,采用Western印迹和RT-PCR法检测HGF对S期激酶结合蛋白2(Skp2)表达的影响。将Skp2真核细胞重组表达质粒转染HepG2细胞并获得稳定转染的过表达Skp2的HepG2细胞,观察HGF对该转染细胞增殖的影响。结果： HGF对HepG2细胞的增殖具有浓度依赖性和时间依赖性的抑制作用;HGF明显抑制HepG2细胞表达Skp2蛋白和mRNA。但HGF对过表达Skp2的HepG2细胞无增殖抑制作用。结论：HGF对HepG2细胞具有明显的增殖抑制作用,其作用机制与下调Skp2表达密切相关。     

微小RNA-205-5p调控轴抑制蛋白2基因表达对结肠癌细胞增殖凋亡的影响及作用机制的临床研究

目的:探讨微小RNA(microRNA,miR)-205-5p靶向调节轴抑制蛋白2(AXIN2)基因表达对结肠癌细胞增殖凋亡的影响及作用机制。方法:收集2017年1月至2019年1月山西省人民医院手术切除结肠癌组织组织标本并购买结肠癌细胞系,分别以距肿瘤边缘5 cm的癌旁组织和人正常结肠黏膜上皮细胞系为对照。实时定量反...     

跨膜丝氨酸蛋白酶4对肝细胞癌增殖侵袭作用的影响

目的 探讨跨膜丝氨酸蛋白酶4 (transmembrane protease serine 4,TMPRSS4)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)增殖侵袭的作用.方法 构建并鉴定慢病毒转染TMPRSS4过表达的人肝细胞癌细胞系BEL-7402.Western blot及RT-PCR检测TMPRSS4的表达.MTT实验检测TMPRSS4对BEL-7402细胞增殖能力的影响.Transwell实验检测TMPRSS4对细胞侵袭性的影响.结果 RT-PCR及Western blot结果显示TMPRSS4过表达组细胞TMPRSS4蛋白及mRNA表达均显著高于对照组及空白载体转染组.MTT实验结果显示,慢病毒转染后,对照组、空白载体转染组和TMPRSS4过表达组细胞增殖能力无显著差异(P＞0.05).侵袭实验显示TMPRSS4过表达组细胞穿过Matrigel胶到达Transwell小室膜背面的细胞数为49.3±7.4,显著高于对照组(23.3±5.0)和空白载体转染组(19.3±3.2)(P＜0.05).结论 HCC细胞表达TMPRSS4.TMPRSS4过表达可促进HCC细胞的侵袭能力,但是不影响HCC细胞增殖.     

C-X-C基序趋化因子10表达与肝癌患者预后的关系及其下调对肝癌增殖和侵袭的影响

目的:检测C-X-C基序趋化因子10(CXCL10)在人肝癌组织中的表达水平及其与肝癌患者临床生物学特征和预后的关系,并探讨CXCL10对肝癌细胞增殖和侵袭的作用。方法:癌症基因组图谱(TCGA) RNA测序数据库分析CXCL10在配对( n＝56)、非配对肝癌组织( n＝370)、癌旁正常组织...     

Sonic Hedgehog 信号通路在肝癌细胞增殖中的作用

目的：探讨Sonic Hedgehog（SHH）信号通路在肝癌细胞增殖中的作用及抑制该通路的活性对肝癌细胞对化疗药物敏感性的影响。 方法：分别用不同浓度重组SHH N-末端肽（rSHH-N）、SHH中和抗体（anti-SHH）、SHH通路抑制剂cyclopamine作用人肝癌SMMC-7721细胞不同时间,用MTT法检测细胞增殖状态。比较 5-氟尿嘧啶（5-FU）、anti-SHH、cyclopamine、anti-SHH+5-FU、cyclopamine+5-FU对SMMC-7721细胞增殖抑制作用的差异。 结果：rSHH-N作用后,SMMC-7721细胞增殖明显增加,而anti-SHH和cyclopamine作用后,SMMC-7721细胞增殖明显降低,且均呈时间和浓度依赖性（均P<0.05）;anti-SHH或cyclopamine联合5-FU对SMMC-7721细胞增殖抑制作用明显强于各药单用（均P<0.05）。 结论：SHH信号通路在肝癌生长中起重要作用,阻断SHH信号通路能抑制肝癌细胞增殖且能增加肝癌细胞对化疗药物的敏感性。