粪便基因甲基化检测在结直肠癌及其癌前病变筛查中的作用

目的 探讨粪便中T淋巴细胞成熟相关蛋白（MAL）、细胞周期依赖性激酶抑制因子2A（CDKN2A）和6-氧-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶（MGMT）基因甲基化状态及其在结直肠癌和癌前病变筛查中的价值.方法 收集69例结直肠癌、24例腺瘤、19例增生性息肉患者及26名健康人群的清晨粪便标本,提取其DNA并进行亚硫酸氢盐修饰处理,采用甲基化特异性PCR技术分析MAL、CDKN2A及MGMT甲基化状态,分析其与结直肠癌临床病理特征的关系,并比较3个基因甲基化联合检测与粪隐血试验（FOBT）的诊断敏感性.结果 结直肠癌患者粪便DNA中MAL、CDKN2A、MGMT基因启动子甲基化率分别为78.3%、52.5%、55.1%,腺瘤患者分别为58.3%、41.7%、37.5%,增生性息肉患者分别为26.3%、15.8%、10.5%,正常对照人群分别为3.8%、0、3.8% 结直肠癌和腺瘤患者3个基因甲基化水平均显著高于增生性息肉患者和正常对照人群（均P＜0.05）.3个基因甲基化联合检测诊断结直肠癌和腺瘤敏感度分别为92.8%和70.8%,明显高于FOBT的29.0%和25.0%（均P＜0.05）.3个基因甲基化状态与结直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤部位、淋巴结转移、远处转移及TNM分期均无关（均P＞0.05）.结论 粪便中MAL、CDKN2A、MGMT基因启动子甲基化水平在结直肠癌和腺瘤患者中明显升高,其联合检测可望成为结直肠癌及其癌前病变筛查的非侵入性检测方法.     

结直肠肿瘤中DNA甲基化研究进展

DNA甲基化异常参与了结直肠肿瘤的发生、发展及转移，对其研究有助于进一步认识结直肠肿瘤的发病机制，提出新的防治措施。     

粪便隐血与TFPI-2基因甲基化联合检测在结直肠癌中的应用价值

目的:研究粪便隐血与组织因子途径抑制物-2(tissuefactor pathway inhibitor-2,TFPI-2)基因甲基化联合检测在结直肠癌中的应用价值.方法:将我院收治的100例结直肠癌患者作为观察组,另选同期健康体检志愿者48名作为对照组,收集2组人员的粪便作为检测标本,检测2组人员粪便标本T FPI-...     

探讨SFRP2基因甲基化在大肠癌筛查中的作用

目的:探讨粪便中分泌型卷曲相关蛋白2(secreted frizzled-related protein 2,SFRP2)基因超甲基化作为筛查大肠癌的非侵袭性工具的可行性.方法:用甲基化特异性PCR(MSP)技术分析69例大肠癌、34例腺瘤和26例增生性息肉患者的瘤组织和粪便中SFRP2基因启动子甲基化状态,30例内镜下正常的健康者作为对照.其中大肠癌患者的粪便分别于术前及术后第9天采集.同时分析SFRP2基因甲基化与肿瘤临床病理因素之间的关系.结果:SFRP2基因在91.3%(63/69)的大肠癌组织、79.4%(27/34)的腺瘤组织和53.8%(14/26)的增生性息肉组织中发生超甲基化,并在同一患者所对应的粪便中有87.0%(60/69)、61.8%(21/34)和42.3%(11/26)检测到发生超甲基化.在正常对照的结肠黏膜中没有检测到SFRP2基因甲基化,但在粪便中有2例发生了SFRP2基因甲基化.在大肠癌患者术前和术后第9天的粪便中SFRP2基因超甲基化比较差异有统计学意义(P<0.001).此外,SFRP2超甲基化与肿瘤的临床特征包括性别、年龄、肿瘤分期、位置及病理分级等无显著相关性.结论:粪便中SFRP2基因超甲基化是大肠癌的一种新的分子标志,对于非侵袭性检测大肠癌具有高度的潜力.     

腹腔镜外科技术在结直肠恶性肿瘤切除术中的应用

目的探讨腹腔镜在结直肠恶性肿瘤切除手术中的应用. 方法经腹腔镜施行结直肠恶性肿瘤切除术17例,其中行右半结肠根治性切除术3例,乙状结肠根治性切除3例,直肠癌行Dixon术7例、Mile术2例、Park术2例.采用完全腹腔镜手术6例,腹腔镜辅助手术8例,手助腹腔镜手术3例. 结果全部病例均治愈出院,无死亡病例,无并发症发生,无中转开腹病例,手术时间150～240 min,平均190 min,术中出血20～300 ml,平均55 ml,术后平均住院9.6 d,有6例使用镇痛剂,术后近期随访1～6个月无复发. 结论经腹腔镜结直肠恶性肿瘤切除术是安全可行的,近期效果满意.     

MMP-3在结直肠腺瘤及结直肠癌中的表达与临床意义的相关性研究

目的探讨基质金属蛋白酶MMP-3在结直肠腺瘤及结直肠癌中表达与临床病理参数间相关性。方法应用免疫组织化学方法检测MMP-3在20例结直肠腺瘤和60例结直肠癌中的表达。结果 MMP-3在20例结直肠腺瘤及60例结直肠癌中,阳性表达率分别为10%、41.7%(P=0.031)。MMP-3的阳性表达与淋巴结转移(P=0.017)呈正相关,与预后呈负相关。结论 MMP-3的上调表达可能参与了结直肠癌的发生、发展、浸润及转移,对临床上判断预后具有较大意义。     

BNIP3基因甲基化与早期结直肠癌患者临床病理特征的关系

目的分析早期结直肠癌组织中BNIP3基因启动子区CpG岛甲基化与患者临床病理特征的关系,评价其在结直肠癌发生发展中的作用。方法用甲基化特异性PCR技术分析107例早期结直肠癌患者肿瘤组织中BNIP3基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果本组结直肠癌组织标本中BNIP3基因启动子区CpG岛甲基化阳性率为58.9%(63/107)。右半结肠组肿瘤组织中BNIP3基因甲基化明显高于左半结肠组(P<0.001);低分化组明显高于高中分化组(P=0.002)。BNIP3基因甲基化在患者性别、年龄、肿瘤大小和分期等分组间无明显差异。结论早期结直肠癌组织中存在BNIP3基因启动子区CpG岛甲基化。BNIP3基因高甲基化与早期结直肠癌部位和分化程度密切相关。     

结直肠癌患者分泌型卷曲相关蛋白2基因超甲基化研究

目的 分析结直肠癌患者粪便和外周血中分泌型卷曲相关蛋白2(SFRF2)基因甲基化与结直肠癌Dukes分期及组织学分型的关系,评价用SFRP2基因筛查结直肠癌和判断病情的价值.方法 用甲基化特异性PCR技术分析169例结直肠癌,63例结肠腺瘤和46例非腺瘤性息肉患者的瘤组织、粪便和外周血中SFRY2基因甲基化状态,以30例健康志愿者肠镜下肠黏膜活性组织作为对照. 结果本组SFRP2基因在88.2%的结直肠癌组织,65.1%的腺瘤组织和45.7%的非腺瘤性息肉组织中发生超甲基化;在相应的粪便中分别有84.0%、46.0%和32.6%发生超甲基化;在相应的外周血中分别有66.9%、6.4%和2.2%发生超甲基化.在正常对照的结肠黏膜组织和外周血中未检测到SFRP2基因超甲基化,但在粪便中有2例SFRIY2基因甲基化.此外,肿瘤组织和粪便中SFRP2与肿瘤的临床特征包括性别、年龄、位置、大小、Dukes分期等无显著相关性,与分化和浸润程度呈正相关,而外周血中SFRP2基因超甲基化与Dukes分期呈正相关.结论 粪便中SFRF2基因超甲基化可以作为结直肠癌筛查的一种新型分子标记物;外周血中SFBP2基因超甲基化与肿瘤分期呈正相关,可能对判定结直肠癌恶性程度和预后有一定的意义.     

粪便miR34b／c基因甲基化检测在结直肠癌早期诊断中的价值

目的：探讨粪便miR34b/c基因甲基化状态的检测在结直肠癌早期诊断中的意义.方法：从98例结直肠癌患者癌组织、癌旁组织、粪便、血中分别提取DNA,采用甲基化特异性PCR结合变性高效液相色谱法检测患者组织、粪便和血中miR34b/c基因甲基化状态.结果：结直肠癌癌组织miR34b/c基因的甲基化阳性率为91.8% （90/98例）,对应的癌旁正常组织为4.08%（4/98例）,两者比较差异有统计学意义（P=0.000 1）.用癌组织、粪便、血标本miR34b/c基因甲基化诊断结直肠癌的敏感度、特异度分别为：组织 91.8%（90/98例） 和95.9%（94/98例）;粪便88.8%（87/98例）和91.7%（66/72例）;血83.7%（82/98例） 和87.5%（63/72例）.结直肠癌患者粪便miR34b/c基因甲基化检测结果与癌组织检测结果大致相同.结论：miR34b/c甲基化是结直肠癌的重要分子生物学特征,粪便miR34b/c基因甲基化的敏感性和特异性较高,粪便miR34b/c甲基化异常可作为结直肠癌早期诊断的肿瘤标志物.     

MUC1联合MUC2在结直肠腺瘤及结直肠癌中联合表达与临床病理的相关性研究

目的探讨黏蛋白MUC1、MUC2在结直肠腺瘤及结直肠癌中联合表达与临床病理参数间相关性。方法应用免疫组织化学方法检测MUC1、MUC2在20例结直肠腺瘤和60例结直肠癌中的表达。结果 1MUC1、MUC2在20例结直肠腺瘤及60例结直肠癌中,阳性表达率分别为10%、46.7%(P=0.013);100%、58.3%(P=0.000)。2MUC1黏蛋白在结直肠癌中的表达与肿瘤的分化程度呈负相关(P=0.006),在低分化结直肠癌中表达强,并与浸润深度(P=0.004)、淋巴结转移(P=0.01)、Dukes分期(P=0.033)呈正相关,与预后呈负相关。3MUC2的表达与分化程度无关(P=0.143),而与浸润深度(P=0.016)、淋巴结转移(P=0.002)、Dukes分期(P=0.005)呈负相关,与生存期呈正相关。4MUC1、MUC2联合检测表明:MUC1与MUC2呈负相关,MUC2+MUC1-预后最好、MUC1+MUC2-预后最差。结论 MUC1的上调表达或MUC2的下调表达可能参与了结直肠癌的发生、发展、浸润及转移,对临床上判断预后具有较大意义。     

MAL基因及其甲基化与大肠癌发生的研究进展

MAL基因在T细胞分化中晚期时表达,与肿瘤发病密切相关.大肠癌的发病机制除遗传因素外,后生机制起着重要作用.最主要的后生机制之一是DNA的甲基化、MAL基凶甲基化及表达异常与大肠癌发生、发展、侵袭联系密切.MAL基凶可作为大肠癌粪便筛查的标志物之一,为大肠癌的早期预测、分类分级、预后评估及预防提供了新的依据.     

E-钙黏附素基因甲基化与结直肠癌临床病理特征的关系

目的探讨E-钙黏附素（E-cadherin）基因甲基化与结直肠癌临床病理特征的关系。方法采用甲基化特异性巢式PCR技术（nMSP法）研究100例结直肠癌组织及100例癌旁组织E-eadherin基因甲基化与临床病理特征的关系。结果100例结直肠癌组织中有33例呈E-cad基因甲基化阳性（阳性率33.0％），相应的癌旁组织无甲基化。Dukes分期中C、D期组织E-cad基因甲基化阳性率（72.7％）明显高于A、B期（27.3％）（P〈0.05）；伴肝转移的结直肠癌组织甲基化阳性率（81．8％）明显高于无肝转移者（18．2％）（P〈0．01）；在肿瘤细胞分化程度、大体类型、年龄、性别和肿瘤部位等其他病理特征，E-cad基因甲基化阳性组与阴性组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论结直肠癌组织E-cad基因甲基化与淋巴结转移、肝转移和Dukes分期明显相关，E-cad基因甲基化可能是结直肠癌侵袭性增强的原因之一。     

结直肠癌组织中p27基因甲基化与其临床病理的关系

目的 检测结直肠癌组织中p27基因启动子区CpG岛甲基化水平及其表达,并结合其临床病理参数进行分析,探讨其在结直肠癌发生发展中的作用.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应分析技术检测106例结直肠癌组织及其正常结直肠黏膜组织、22例结肠腺瘤组织中p27基因启动子甲基化,用免疫组织化学SP方法检测其蛋白表达.结果 本组结直肠癌组织中p27甲基化阳性率为59.4%(63/106),结肠腺瘤组织中为18.2%(4/22),而正常结直肠黏膜组织中为3.8%(4/106),前组与后两组之间相比差异有统计学意义(P＜0.05).低分化组结直肠癌组织中p27甲基化阳性率明显高于高中分化组(48.0%比24.7%,P＜0.05);Dukes-A+B期组与C+D期组之间相比差异有统计学意义(20.0%比41.2%,P＜0.05);有无淋巴结转移两组之间的阳性率相比差异有统计学意义(41.5%比23.1%,P＜0.05);浸润深达浆膜层的结直肠癌组织中的甲基化阳性率与未达浆膜层组相比差异无统计学意义(32.5%比24.1%,P＞0.05).结论 结直肠癌组织中存在p27基因启动子甲基化.p27基因的高甲基化与结直肠癌分化程度、浸润深度、Dukes分期及有无淋巴结转移有关.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between p27 gene methylation and pathology of colorectal carcinoma. Methods p27 gene methylation promotor region and p27 protein expression were detected respectively by methylation specificity polymerase chain reaction and immunohistochemical staining SP in 106 cases of colorectal carcinoma and each adjacent normal mucous membrane tissue and 22 cases of colorectal adenoma tissue. Results The positive expression rate of p27 gene methylation was statistically different in colorectal carcinoma tissue compared with normal mucous membrane and colorectal adenoma tissue (P＜0.05). Their positive expression rate were 59.4% (63/106), 18.2% (4/22) and 3.8%(4/106) respectively in colorectal carcinoma tissue,colorectal adenoma and normal mucous membrane tissue (P ＜ 0. 05). p27 gene methylation in poorly differentiated group was significantly higher than that in welldifferentiated group (48.0% vs. 24. 7%, P ＜0. 05), in Dukes-A + B stage group was significantly lower than that in Dukes C + D stage group(20. 0% vs. 41.2%, P ＜ 0. 05 ), and it was higher in lymph nodes metastases group than that in lymph nodes negative group(41.5% vs. 23. 1%, P ＜0. 05), that in positive serosa infiltration group was higher than negative serosa infiltration group(32. 5% vs. 24. 1%, P ＞ 0. 05 ).Conclusions Methylated p27 gene protein expression in colorectal carcinoma was significantly higher than normal mucous membrane and colorectal adenoma tissue. The methylation rate of p27 gene in colorectal carcinoma was significantly associated with tumor differentiation, invasive depth, Dukes stage, lymph node metastasis.     

X射线损伤修复交叉互补基因1的单核苷酸多态性与散发性结直肠癌易感性相关

目的 检测单核苷酸多态性（SNP）位点Arg399Gln在散发性结直肠癌患者和非癌对照组中的分布情况，分析其与散发性结直肠癌及其临床病理特征的相关性。方法 从178例肿瘤组织和非癌对照组的180例血样中提取DNA，采用Taqman探针技术检测Arg399Gln多态性表型，并用统计软件计算各基因型的比值比（OR）和95％可信区间（95％CI）。结果 肿瘤组与对照组就XRCC1Arg399Gln多态性的基因表型差异有统计学意义（P〈0．05）；年龄不超过60岁的患者和超过60岁的患者在该位点的基因型差异有统计学意义（P〈0．05）；以399Arg／Arg基因型为参照，在年龄超过50岁的人群中（OR=0．64，95％C10．50～0．83，P〈0．05）和男性人群中（OR=0．64，95％C10．51～0．79，P〈0．05）携带至少一个Gin等位基因可致罹患散发性结直肠癌的风险显著降低；XRCC1399SNP与患者性别及散发性结直肠癌的发生部位、Dukes分期、浸润深度、淋巴结转移以及病理分型均无显著相关性（P均〉0．05）。结论 XRCC1399SNP可能通过改变DNA的损伤修复功能，成为散发性结直肠癌的易感因素。     

肝癌细胞NFAT2基因启动子区甲基化与其mRNA表达的关系

目的:探讨肝癌细胞中NFAT2基因启动子CpG岛甲基化状态及与其mRNA表达的关系。方法:用重硫酸盐测序法检测肝癌组织与癌旁组织及不同肝细胞系与正常肝细胞中NFAT2启动子甲基化状态,用qRT-PCR检测肝癌组织与癌旁组织NFAT2 mRNA表达,并分析肝癌组织NFAT2启动子甲基化与mRNA水平的相关性。结果:肝癌组织中NFAT2基因CpG岛甲基化率明显高于癌旁组织(33.0%vs.21.6%,P=0.003);人肝癌细胞系HuH7、HepG2、Hep3B中NFAT2基因CpG岛甲基化率分别为34.8%、40.4%、37.0%,均明显高于人正常肝细胞系L02中NFAT2基因CpG岛甲基化率(16.2%)(均P0.05)。肝癌组织NFAT2 mRNA相对表达量明显低于与癌旁组织(0.000 602 4 vs.0.001 469,P0.05),肝癌组织中NFAT2 mRNA水平与其启动子甲基化程度呈明显负相关(r=-0.661,P=0.027)。结论:肝癌细胞中NFAT2基因表达下调可能与其启动子区CpG岛高甲基化状态有关     

生物钟基因hPer2在人结直肠癌中的表达及其临床意义

目的 检测hPer2蛋白在人结直肠癌中的表达,探讨其临床意义.方法 取人结直肠癌及癌旁组织各38例,以免疫组织化学方法检测其中hPer2蛋白的表达,并分析其表达与l临床及病理常用指标的关系.结果 在结直肠癌及癌旁正常黏膜细胞中hPer2均有表达,阳性表达率分别为81.6%(31/38)及97.4%(37/38),两者间差异有统计学意义(P<0.05).以癌旁组织为参照,hPer2在癌组织中表达下调者占63.1%(24/38),表达上调者占5.3%(2/38),无明显区别者占31.6%(12/38),其差异有统计学意义(P<0.01).hPer2表达失调与结直肠癌患者年龄≤50岁、肿瘤组织学分级高、浸润深度深、有淋巴结转移、TNM分期晚相关(P<0.05).结论 hPer2在人结直肠癌中表达下调.hPer2表达的失调甚至缺失可能与结直肠癌的生长、浸润、转移相关.     

结直肠癌组织中p27基因甲基化与其临床病理的关系

Objective To investigate the relationship between p27 gene methylation and pathology of colorectal carcinoma. Methods p27 gene methylation promotor region and p27 protein expression were detected respectively by methylation specificity polymerase chain reaction and immunohistochemical staining SP in 106 cases of colorectal carcinoma and each adjacent normal mucous membrane tissue and 22 cases of colorectal adenoma tissue. Results The positive expression rate of p27 gene methylation was statistically different in colorectal carcinoma tissue compared with normal mucous membrane and colorectal adenoma tissue (P＜0.05). Their positive expression rate were 59.4% (63/106), 18.2% (4/22) and 3.8%(4/106) respectively in colorectal carcinoma tissue,colorectal adenoma and normal mucous membrane tissue (P ＜ 0. 05). p27 gene methylation in poorly differentiated group was significantly higher than that in welldifferentiated group (48.0% vs. 24. 7%, P ＜0. 05), in Dukes-A + B stage group was significantly lower than that in Dukes C + D stage group(20. 0% vs. 41.2%, P ＜ 0. 05 ), and it was higher in lymph nodes metastases group than that in lymph nodes negative group(41.5% vs. 23. 1%, P ＜0. 05), that in positive serosa infiltration group was higher than negative serosa infiltration group(32. 5% vs. 24. 1%, P ＞ 0. 05 ).Conclusions Methylated p27 gene protein expression in colorectal carcinoma was significantly higher than normal mucous membrane and colorectal adenoma tissue. The methylation rate of p27 gene in colorectal carcinoma was significantly associated with tumor differentiation, invasive depth, Dukes stage, lymph node metastasis.     

结直肠癌组织中p27基因甲基化与其临床病理的关系

Objective To investigate the relationship between p27 gene methylation and pathology of colorectal carcinoma. Methods p27 gene methylation promotor region and p27 protein expression were detected respectively by methylation specificity polymerase chain reaction and immunohistochemical staining SP in 106 cases of colorectal carcinoma and each adjacent normal mucous membrane tissue and 22 cases of colorectal adenoma tissue. Results The positive expression rate of p27 gene methylation was statistically different in colorectal carcinoma tissue compared with normal mucous membrane and colorectal adenoma tissue (P＜0.05). Their positive expression rate were 59.4% (63/106), 18.2% (4/22) and 3.8%(4/106) respectively in colorectal carcinoma tissue,colorectal adenoma and normal mucous membrane tissue (P ＜ 0. 05). p27 gene methylation in poorly differentiated group was significantly higher than that in welldifferentiated group (48.0% vs. 24. 7%, P ＜0. 05), in Dukes-A + B stage group was significantly lower than that in Dukes C + D stage group(20. 0% vs. 41.2%, P ＜ 0. 05 ), and it was higher in lymph nodes metastases group than that in lymph nodes negative group(41.5% vs. 23. 1%, P ＜0. 05), that in positive serosa infiltration group was higher than negative serosa infiltration group(32. 5% vs. 24. 1%, P ＞ 0. 05 ).Conclusions Methylated p27 gene protein expression in colorectal carcinoma was significantly higher than normal mucous membrane and colorectal adenoma tissue. The methylation rate of p27 gene in colorectal carcinoma was significantly associated with tumor differentiation, invasive depth, Dukes stage, lymph node metastasis.     

DNA甲基化转移酶1/3b与肝癌临床病理特征和预后相关性研究

目的探讨DNA甲基化转移酶1/3b(DNMT1/3b)表达异常与肝癌临床病理特征和患者术后生存之间的相关性。 方法采用免疫组织化学技术检测89例手术切除肝癌组织中DNMT1和DNMT3b的蛋白表达情况,结合临床病理及无瘤生存期和总生存期,分析DNMT1/3b与临床病理参数、预后的相关性,并通过高通量基因芯片技术筛选肝癌相关DNMT1和DNMT3b的靶基因。 结果89例肝癌组织中DNMT1和DNMT3b皆为阳性63例,皆为阴性5例,单一阳性的分别为9例和12例。DNMT1/3b在肝癌组织中高表达与患者血清AFP(χ²=12.903,P=0.005)、乙型肝炎(χ²=9.535,P=0.023)、卫星灶(χ²=9.574,P=0.023)和肿瘤复发、转移及生存期有关,而与性别、肿瘤大小、肝硬化和肿瘤分化无关;Kaplan-Meier分析显示DNMT1/3b阳性组患者生存时间较阴性组短,差异有统计学意义(P<0.05)。高通量基因组甲基化芯片技术筛选出肝癌细胞中受DNMT1和DNMT3b调控的基因2 000多个,其中参与肿瘤侵袭转移的靶基因有112个。 结论DNMT1/3b在肝癌组织中高表达与患者血清AFP、乙型肝炎、卫星灶和肿瘤复发、转移等临床病理特征和生存期密切相关,并可能通过调控多方面肿瘤相关基因促进肝癌复发、转移等恶性表型。