益气活血化瘀法对大鼠肝癌前病变癌基因c—myc、N—ras mRNA表达的影响

[目的]研究益气活血化瘀法对大鼠肝癌前病变基因c-myc、N-rasm RNA表达水平的影响,从分子生物学水平揭示益气活血化瘀法治疗肝癌前病变的机制及其效果。[方法]将160只Wistar雄性大鼠随机分为4组：正常对照（正常）组、模型组、益气活血化瘀方高剂量（YHHI）组及低剂量（YHHⅡ）组,每组40只。除正常组外,其他组以化学致癌物二乙基亚硝胺（DEN）诱导大鼠建立肝细胞癌（HCC）模型,应用不同剂量益气活血化瘀法中药复方对其诱癌过程实施全程干预。各组在实验的4、8、12、16周时相点取材,利用RT-PCR检测技术与光学显微镜分别对肝细胞增殖相关基因c-myc、N-rasmRNA表达、肝组织病理形态学变化进行动态观察。[结果]在诱癌的不同阶段,YHHI、YHHⅡ组大鼠肝脏病变均明显轻于模型组,且大鼠HCC变进展较模型组明显减缓。与正常组相比,模型组诱癌各期肝组织c-myc、N-ras基因mRNA表达水平明显增高（P〈0．05）。诱癌8、12、16周时YHHI、YHHⅡ组c-myc、N-ras基因mRNA表达水平均明显少于模型组（P〈0．05）;YHHI组与YHHⅡ组比较差异有统计学意义（P〈O．05）。[结论]益气活血化瘀法对肝癌前病变癌基因有一定的抑制作用,其机制可能与调控肝细胞增殖基因c-myc、N-rasmRNA表达水平有关     

低剂量化疗联合中药抗肿瘤疗效及其作用机理

目的 探讨低剂量化疗联合中药抗肿瘤疗效及Fas/FasL基因在其中的作用.方法 将0、0.01、0.1、1 μg/ml表阿霉素处理的肝癌细胞分别和有、无参芪处理的淋巴细胞共培养,观察低剂量化疗药联合中药或FasL单克隆抗体介入后抗肿瘤的效果;用PCR测定化疗药处理的肝癌细胞Fas/FasL基因的表达.结果 1 μg/ml表阿霉素处理的肝癌细胞OD值高于0、0.01、0.1 μg/ml表阿霉素处理的肝癌细胞,未处理肝癌细胞的OD值最高;7402肝癌细胞表达Fas和FasL基因,与0 μg/ml表阿霉素干预过的7402肝癌细胞FasL表达比较,0.01、0.1 μg/ml的降低,1 μg/ml的增高;FasL单克隆抗体介入后,0、0.01、0.1 μg/ml表阿霉素处理的肝癌细胞OD值高于空白对照.结论 低剂量化疗药联合中药抗肿瘤可减毒增效;Fas/FasL系统在抗肿瘤免疫机制中起重要作用.     

Fas/FasL、Bcl-2/Bax、Caspase-8在大鼠非酒精性脂肪性肝病中的作用机制

目的:探讨肝细胞凋亡及其相关因素Fas/FasL、Bcl-2/Bax蛋白及Caspase-8 mRNA的表达在大鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)中的作用.方法:采用改良高脂饮食建立大鼠NAFLD模型,以正常饮食设立对照组.HE染色观察肝脏脂肪变、炎症活动和纤维化程度,采用流式细胞仪法测肝细胞凋亡百分数;免疫组织化学法检测Fas、FasL、Bcl-2及Bax在肝组织中表达情况;实时荧光定量PCR法检测肝脏Caspase-8 mRNA的表达.结果:NAFLD模型组脂肪变性明显,纤维化和炎症活动度记分均显著高于正常对照组.流式细胞仪检测显示,与对照组比较,实验组大鼠肝细胞凋亡百分数增加,随造模时间延长凋亡率增加更明显(均P<0.01);免疫组织化学染色显示随着肝脏脂肪变加重,Fas、FasL蛋白染色加深,阳性细胞数增加;Bcl-2、Bax在对照组的表达均为散在弱阳性,实验组4、8、12wk阳性细胞数渐增加,并在脂肪变明显的部位着色深且随着脂肪肝的进展,Bcl-2/Bax比率进行性下降.实时荧光定量PCR法显示Caspase-8 mRNA表达量在高脂组中显著高于对照组(均P<0.01),且随肝脏脂肪变及炎症加重呈进行性上升.结论:在NAFLD发生过程中,肝细胞凋亡促进NAFLD大鼠病情进展;Fas、FasL、Caspase-8 mRNA相关调控蛋白的活化是引起NAFLD脂肪变性、炎症及纤维化的重要因素.细胞凋亡调节蛋白Bax、Bcl-2表达上调,二者表达的相对比例发生异常,这可能是NAFLD中肝细胞发生凋亡的重要原因之一.     

何首乌饮对亚急性衰老大鼠卵巢细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的 探讨何首乌饮对亚急性衰老大鼠卵巢细胞凋亡和相关基因Fas和FasL及其蛋白表达的影响.方法 采用D-半乳糖连续腹腔注射致亚急性衰老大鼠模型,同时以何首乌饮灌胃作为延缓衰老组;造模后应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测各组大鼠卵巢细胞凋亡情况;测定各组Fas和FasL的信使核糖核酸(mRNA)水平;SP免疫组化法检测卵巢细胞Fas和FasL蛋白的表达情况.结果 与正常对照组比较,模型组大鼠卵巢细胞中有凋亡细胞数增多现象、Fas和FasL的mRNA和蛋白表达均显著增强(P＜0.01);延缓衰老组较模型组凋亡率明显下降(P＜0.01),并抑制Fas和FasL的表达,呈现量效关系,以何首乌饮高剂量组效果作用最佳.结论 何首乌饮方剂能延缓衰老大鼠卵巢细胞凋亡的发生,其作用机制可能是通过干预Fas/FasL的表达,阻止死亡信号的转导,抑制卵巢细胞凋亡.     

通里攻下法对急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡的影响(摘要)

目的:探讨通里攻下法对内毒素脂多糖(LPS)致急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡的影响。方法:以LPS D-GalN联合制备大鼠急性肝衰竭模型,观察大鼠肝组织病理学变化;以免疫组化法(SP法)检测Fas、FasL蛋白在大鼠肝组织中的表达情况,并观察通里攻下中药对肝细胞凋亡的作用。结果:LPS D-GalN可引起严重的急性肝坏死并有广泛的肝细胞凋亡,伴Fas、FasL蛋白在肝细胞中表达增强;肝细胞Fas/FasL阳性     

Fas/FasL信号通路与帕金森病大鼠多巴胺能神经元的相关性研究

背景免疫炎症可能是导致帕金森病(PD)的因素,而Fas/FasL信号通路诱导的淋巴细胞凋亡与心血管疾病、自身免疫系统疾病的发生及预后均密切相关。目的探讨Fas/FasL信号通路与PD大鼠多巴胺能神经元的相关性。方法2017年10月—2018年1月,从60只雄性SPF级SD大鼠随机选取10只作为对照组,其余大鼠采用脑立体定位技术建立PD大鼠模型,并将建模成功的20只大鼠随机分为模型组与干预组,每组10只。对照组、模型组大鼠给予0.9%氯化钠溶液2 ml灌胃,干预组大鼠则给予美多芭溶液2 ml灌胃,均为1次/d,连续灌胃14 d。比较模型组与干预组大鼠干预后阿扑吗啡(APO)诱导的旋转圈数,并比较三组大鼠脑组织Fas、FasL、酪氨酸氢化酶(TH)蛋白表达水平;TH蛋白表达水平与PD大鼠Fas、FasL蛋白表达水平的相关性采用Pearson相关分析。结果干预组大鼠干预后APO诱导的旋转圈数少于模型组(P<0.05)。对照组与干预组大鼠的Fas、FasL蛋白表达水平低于模型组,TH蛋白表达水平高于模型组(P<0.05);干预组大鼠的Fas、FasL蛋白表达水平高于对照组,TH蛋白表达水平低于对照组(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,TH蛋白表达水平与Fas、FasL蛋白表达水平无直线相关性(r值分别为0.053、0.026,P>0.05)。结论PD大鼠Fas、FasL蛋白表达水平较高,Fas/FasL信号通路激活,但多巴胺能神经元数量较少,且Fas/FasL信号通路与PD大鼠多巴胺能神经元无直线相关关系。     

胸腺内注射Fas抗体对心脏移植大鼠Fas/FasL表达的影响

目的:研究受体胸腺内注射Fas抗体对心脏移植大鼠Fas/FasL表达的影响。方法:应用大鼠同种异位腹腔心脏移植模型,将模型动物随机分为三组,每组8只动物。A组:移植前后不给予处置;B组:给环孢素A,按每日8mg/kg于术前1d口服;C组:胸腺注射Fas抗体,以0.1mg/kg剂量在术前注射。以免疫组化法和逆转聚合酶链式反应(RT-PCR)法观察术后移植心脏局部的Fas及FasL的表达情况。结果:与A组相比,受体胸腺内注射Fas抗体可减少移植心脏局部的Fas/FasL基因表达(RT-PCR法半定量结果P0.05)和蛋白表达(免疫组化法P0.05)。结论:受体胸腺内注射Fas抗体是一种有效的抑制心脏移植急性排斥反应的方法,可使移植心肌局部Fas/FasL表达下调。     

雌激素缺乏对大鼠股骨骨髓细胞Fas、FasL表达的影响

目的探讨去势后SD大鼠骨质疏松发生过程中股骨骨髓细胞Fas、FasL的表达情况。方法建立绝经后骨质疏松模型（去势组，切除双侧卵巢）。用免疫组织化学方法（SABC法）检测不同时期去势大鼠与正常大鼠股骨骨髓细胞Fas、FasL的表达情况。结果在SD大鼠去势后骨质疏松发生过程中股骨骨髓细胞Fas、FasL的表达呈现出下降的趋势，并且破骨样前体多核细胞都呈弱阳性表达；而非去势组大鼠股骨骨髓细胞Fas、FasL呈强阳性表达，并且这种强阳性的表达多局限于破骨样前体多核细胞的胞浆中。结论在雌激素缺乏的情况下，骨髓细胞Fas、FasL的表达减弱；雌激素能加强骨髓破骨样前体多核细胞Fas、FasL的表达，从而引起骨髓中破骨样前体多核细胞凋亡的发生。     

大黄对急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡的影响

目的 探讨大黄对急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡的影响及可能机制.方法 Wistar大鼠随机分为4组:正常对照组、模型组、大黄组和促肝细胞生长素(PHGF)组.大黄组和PHGF组于造模前3d分别每天灌服大黄水煎液和皮下注射PHGF 1 ml/100 mg,正常组和模型组每天灌服0.9％氯化钠注射液1 ml/100 mg.采用D-氨基半乳糖(D-GalN)/内毒素脂多糖(LPS)腹腔注射制备大鼠急性肝衰竭模型,造模8h后开腹取大鼠肝组织作病理检查,HE染色光镜下观察大鼠肝组织病理学变化,应用TUNEL法检测肝细胞凋亡情况,并应用免疫组化法分别检测肝组织中Fas、FasL和caspase-3的表达.结果 D-GαlN和LPS可引起严重的急性肝坏死并有广泛的肝细胞凋亡,伴Fas、FasL和caspaSe-3在肝细胞中强烈表达,大黄能减轻肝组织损伤,并可降低肝细胞凋亡及Fas、FasL和caspase-3表达(P均＜0.05).结论 大黄可抑制急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡,其机制可能与减轻肝细胞Fas、FasL和caspase-3表达有关.     

马红丸对肝癌大鼠血管形成的影响

目的通过研究马红丸对肝癌大鼠血管生长表达的影响,探讨纯中药复方制剂马红丸对肝癌治疗的机制。方法建立大鼠肝细胞癌模型,将已建模大鼠随机平均分为模型组、马红丸高、低剂量组、环磷酰胺组、呋喃氟脲嘧啶共5组,用药组分别给予药物灌胃给药,空白对照组和模型组给予蒸馏水灌胃给药。连续给药6周后结束。运用免疫组化法、RT-PCR技术检测肿瘤组织中VEGF、MMP-9表达。结果马红丸高、低剂量的中药治疗在一定程度上降低VEGF、MMP-9表达,抑制VEGF、MMP-9生成,减慢肿瘤细胞新生血管的生成,减慢肿瘤的侵袭和转移。结论马红丸对大鼠肝癌动物模型VEGF、MMP-9表达有一定的影响,对抑制肝癌的生长转移的有一定疗效。     

益气活血方治疗慢性病毒性肝炎肝纤维化的临床研究

目的明确益气活血方治疗慢性病毒性肝炎肝纤维化的临床疗效。方法采用开放、阳性药平行对照研究的方法,选取经肝穿活组织学及肝脏瞬时弹性成像技术检查确诊的慢性乙型及丙型肝炎肝纤维化患者207例,根据中医辨证施治的原则,分别采用自拟益气活血方(n=127)和扶正化瘀胶囊(n=80)治疗,疗程均为24~48周。对比分析两组患者中医症候积分、肝脏生化学、肝脏硬度值(LSM)、无创性肝纤维化指数[天冬氨酸转氨酶与血小板比值指数(APRI)、基于4因子的肝纤维化指标(FIB-4)]的变化,评估益气活血方抗肝纤维化疗效。结果益气活血方组和扶正化瘀胶囊组患者基线LSM、APRI、FIB-4比较,P值均>0.05,差异均无统计学意义。应用益气活血方和扶正化瘀胶囊患者症候积分均有一定程度改善,益气活血方在改善肝病面容、肝区不适及腰膝酸软方面优于扶正化瘀胶囊(P<0.05);肝脏生物化学指标(丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、γ-谷氨酰转移酶、碱性磷酸酶)随疗程延长逐渐复常,治疗24~48周复常率两组分别为100%对比100%、100%对比93.8%、96.8%对比92.3%及87.5%对比81.8%。治疗12周后两组APRI值均显著降低;治疗48周,两组LSM显著改善;而FIB-4显著改善仅见于益气活血方治疗48周,与扶正化瘀治疗组比较差异有统计学意义,P<0.05。两组治疗后LSM、APRI、FIB-4的总有效率分别为80.0%对比63.6%,P=0.046;68.4%对比52.0%,P=0.052;68.4%对比62.0%,P=0.437;益气活血方治疗患者LSM总有效率显著高于扶正化瘀胶囊治疗组。结论中药益气活血方可作为治疗慢性病毒性肝炎肝纤维化的优选方案。     

益气化瘀方预防炎症性肠病的实验研究

目的：观察益气化瘀方对三硝基苯磺酸诱导的大鼠实验性结肠炎的预防作用。方法：模型动物分别每日口服3ml益气化瘀汤或0．9％氯化钠溶液共10d,并与未造模动物对照,评价所有动物的存活率、肠梗阻发生率、末端结肠病变损伤指数和重量指数。结果：治疗组生存情况明显改善,存活率大幅提高,肠梗阻发生率明显降低,末端结肠重量指数和狭窄评分也明显改善。结论：益气化瘀方确有预防大鼠实验性结肠炎的作用,其机制可能与其具有抑制血小板聚集功能的作用而改善肠壁循环有关。     

锌对砷中毒小鼠肝脏Fas和FasL表达影响的实验研究

目的 探讨砷对小鼠肝脏Fas、FasL表达的影响及锌的拈抗作用.方法 选用健康昆明种小鼠60只,按体质量分成5组:阴性对照组(不给砷也不给锌),单纯给砷组(55 mg/L NaAsO2溶液),砷+低锌组、砷+中锌组、砷+高锌组均给55 mg/L NaAsO2溶液,并分别给20、40、80 mg/L ZnSO4溶液.经口连续灌胃(按体质量灌胃量为0.02 ml/g.1次/d)6周,待实验结束后处死小鼠,采用免疫组化法测定小鼠肝脏巾凋亡因子Fas、FasL表达.结果 干预组随着给锌量的增加,肝脏Fas、FasL的表达率逐渐降低.低、中锌+砷组的Fas的表达率[83.33%(10/12)、50%(6/12)]、FasL表达率[66.67%(8/12)、41.67%(5/12)]与阴性对照组Fas[8.33%(1/12)]、FasL[0.00%(0/12)]表达率比较,差异有统计学意义(P均<0.05);中、高锌+砷组的Fas的表达率[50%(6/12)、25%(3/12)]与阳性对照组[8.33%(1/12)]比较,差异有统计学意义(P均<0.01),中、高锌+砷组的FasL的表达率[41.67%(5/12)、16.67%(2/12)]与阳性对照组[91.67%(11/12)]比较,差异有统计学意义(P均<0.05).结论 砷可使小鼠肝脏Fas、FasL的表达率增高,促进肝脏的凋亡,锌可拮抗砷对细胞凋亡的作用.

Abstract：

Objective To investigate the effects of arsenic on liver Fas/FasL expression in mice and to observe the antagonize effect of zinc. Methods Sixty health Kunming mice were divided into five groups according to their body mass: negative control group(no arsenic and no zinc), arsenic group(55 mg/L NaAsO2 solution), low dose zinc intervention group(55 mg/L NaAsO2 solution and 20 mg/L ZnSO4 solution), middle dose zinc intervention group (55 mg/L NaAsO2 solution and 40 mg/L ZnSO4 solution), and high dose zinc intervention group (55 mg/LNaAsO2 solution and 80 mg/L ZnSO4 solution). Everyday the solution was given by oral gavage at a dose of 0.02 ml/g body weight for six weeks. The expression of Fas/FasL in mice liver was examined by immunohistochemistry.Results With the amount of zinc increasing, the expression of both Fas and FasL in mice liver decreased gradually. The expression rates of Fas[83.33%(10/12), 50%(6/12)] and FasL[66.67%(8/12), 41.67%(5/12)]in low dose zinc intervention group and middle dose zinc intervention group, respectively, were different from the expression rate of Fas[8.33%(1/12)] and FasL[0.00%(0/12)] in the negative control group(all P < 0.05). The Fas expression rate of middle dose zinc intervention group[50%(6/12)] and the high dose zinc intervention group [25%(3/12)] was compared with the arsenic group[8.33%(1/12)], and the difference was statistically significant (all P < 0.01 ). The FasL expression rate of the middle dose zinc intervention group [41.67% (5/12 )] and the high dose zinc intervention group[16.67%(2/12)] was compared with positive control group[91.67%(11/12)], and the difference was statistically significant (all P < 0.05). Conclusions Arsenic can increase the expression of Fas and FasL in mice liver, and promote apoptosis in liver, zinc may antagonize the effect of arsenic.     

赤芍承气汤对急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡的影响

目的：观察赤芍承气汤对内毒素脂多糖（LPS）致急性肝衰竭大鼠肝细胞凋亡的影响。方法：以内毒素（LPS）＋D－氨基半乳糖（D－GalN)）联合制备大鼠急性肝衰竭模型,模型组用生理盐水、治疗组用复方中药赤芍 承气汤分别灌胃,4天后开腹取鼠肝组织作病理检查,以HE染色观察大鼠肝组织病理学变化;以免疫组化法（SP法）检测Fas,FasL蛋白在大鼠肝 的表达情况,并观察赤芍承气汤对肝细胞凋亡的影响。结果：LPS＋D－GalN可引起严重的急性肝坏死并有广阔物肝细胞凋亡,伴Fas,FasL蛋白在肝细胞中强烈表达;肝细胞Fas／FasL阳性率,模型组为83％：92％,中药组为53％：50％,经统计学分析,P＜0．01;其阳性表达率随肝细胞坏死程度加重而增加,结论：赤芍承气汤可减轻肝细胞Fas／FasL的表达,抵抗内毒素诱发的肝细胞凋亡。     

益气活血中药防治原发性肝癌患者三维适形放疗对肝储备功能损害的临床研究

目的：探讨益气活血中药防治原发性肝癌患者三维适形放疗对肝储备功能损害的作用。方法：随机将83例巨块型原发性肝癌患者分为两组,甲组42例（治疗组）,乙组41例（对照组）,两组均先采用TACE（肝脏灌注栓塞化疗）治疗1—2次,4—6周后再行三维适形放疗,甲组患者在放疗期间及放疗后两月口服益气活血中药,乙组患者不服用中药,其余治疗与甲组基本相同,放疗前及放疗后两个月均查吲哚菁绿15分钟潴留率（简称ICGR15）。结果：放疗前ICGR15在两组间比较差异无统计学意义,放疗后ICGR15在两组均有不同程度升高,乙组升高更明显,组间比较差异有统计学意义。结论：益气活血中药能够防治原发性肝癌患者三维适形放疗对肝储备功能的损害。     

Effects of interleukin-10 on activation and apoptosis of hepatic stellate cells in fibrotic rat liver

AIM:To study the effects of interleukin-10(IL-10)on the expression of α-smooth muscle actin(α-SMA),nuclear factor-κB(NF-κB)and Fas/Fas ligand(FasL)inhepatic stellate cells of experimental rats with hepaticfibrosis.METHODS:Sixty clean SD rats were randomly dividedinto control group(group N),liver fibrotic group(groupC)and IL-10 treatment group(group I).Control groupreceived intraperitoneal injection of saline(2ml·kg~(-1)),twicea week.Fibrotic group was injected intraperitoneallywith 50% carbon tetrachloride(CCl_4)(2 ml·kg~(-1)),twicea week.IL-10 treatment group was given IL-10 at adose of 4 μg·kg~(-1)20 minutes before CCl_4 administrationfrom the third week.Hepatic stellate cells(HSCs)wereisolated from these rats at the seventh and eleventhweeks during the course of liver fibrosis,respectively.The expression of α-SMA and NF-κB in HSCs wasmeasured by S-P immunohistochemistry.The expressionof Fas and FasL mRNA was measured by RT-PCR.Furthermore,liver tissues were harvested from threegroups at the same time.RESULTS:The CCl_4- induced experimental rat hepaticfibrosis model was established successfully.The purityof extracted hepatic stellate cells was about 95% andthe yield of hepatic stellate cells was 1.2-2.3×10~6/g livertissue averagely.The positive expression of α-SMA andNF-κB was 36.5% and 28.5% respectively in group N.The positive levels of α-SMA and NF-κB were increasedsignificantly in group C compared to group N(P<0.01).The positive signals decreased significantly(P<0.05)ingroup I.In the 11~(th)week,the HSCs of group I becameround with visible pyknotic nuclei.The expression ofNF-μB in group C was significantly increased in a time-dependentmanner(P<0.01),but there was no difference in the α-SMA expression(P>0.05).The mRNA of Fasand FasL in group C was significantly increased in a time-dependent manner compared to that in control group.After treated with IL-10,the expression level of Fas andFasL was higher in group I than in group C.CONCLUSION:The positive expression of α-SMA andNF-κB in hepatic stellate cells is decreased by ectogenicIL-10 in liver fibrosis induced by CCl_4.The expression ofFas and FasL is increased in the course of liver fibrosis,and is further increased by IL-10.IL-10 could inhibitthe activation of HSCs and cause apoptosis of activatedHSCs.