过氧化氢体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞Caspase-3表达及超微结构改变的影响

目的探讨过氧化氢(H2O2)体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡、Caspase-3表达和细胞超微结构的影响。方法RPMI1640添加谷氨酰胺组即体外培养细粒棘球蚴原头节,用5mmol/L H2O2诱导8h,使其发生细胞凋亡。用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记技术(TUNEL法)检测原头节细胞凋亡情况,用过氧化物酶标记链霉卵白素(SP)染色半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)。在透射电镜下观察原头节细胞超微结构的变化。结果过氧化氢诱导原头节细胞凋亡细胞增加,caspase-3表达增加,电镜观察原头节细胞异染色质增加,部分细胞染色质异常浓缩呈现凋亡细胞征象。结论H2O2可诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡,且caspase-3参与原头节细胞的凋亡。     

银杏外种皮提取物杀灭钉螺效果的研究

目的 　观察银杏外种皮石油醚提取物（主要成分为银杏酸，含量为64%）、槟榔碱及两药伍用杀灭钉螺效果及对斑马鱼急性毒性。 方法 取7～8螺层、活力强的钉螺，用银杏外种皮干粉、水提取物和石油醚提取物3种制剂以及银杏外种皮石油醚提取物与槟榔碱伍用，采用WHO“杀螺剂实验室终筛方法”中的浸泡法，进行浸杀钉螺试验、钉螺上爬试验以及斑马鱼急性毒性试验。 3项试验均以氯硝柳胺为对照。 结果 　银杏外种皮3种制剂随浸泡时间延长浸杀效果明显提高。 其中，石油醚提取物浸杀效果较好， 浸泡24 h LC₅₀和LC₉₀分别为0.65 mg/L和5.50 mg/L，48 h 分别为0.07 mg/L和0.85 mg/L； 72 h钉螺死亡率近100%。与槟榔碱伍用, 浸杀效果明显提高, 浸泡24 h 银杏外种皮石油醚提取物LC₅₀和LC₉₀分别为0.26 mg/L 和0.56 mg/L，较银杏外种皮石油醚提取物单药LC₅₀降低60%，LC₉₀降低90%(P值均<0.05)。2.50 mg/L银杏外种皮石油醚提取物24 h总上爬率为10%；两药伍用，其银杏外种皮石油醚提取物0.16 mg/L上爬率仅为8%，提高了其抑制钉螺上爬效果。1倍LC₉₀和2倍LC₉₀浓度的银杏外种皮石油醚提取物，斑马鱼存活时间分别为24 h和10 h；伍用后，24 h斑马鱼在2倍LC₉₀浓度中未见死亡，48 h内死亡率为50%，伍用对斑马鱼急性毒性较低。 结论 银杏外种皮石油醚提取物有较好的灭螺效果，是具有研究价值的灭螺植物。     

酮替芬和赛庚啶增强体外培养的恶性疟原虫氯喹抗性株对氯喹反应性的研究

目的 研究酮替芬和赛庚啶增强体外培养的恶性疟原虫氯喹抗性株对氯喹反应性，及其增效机制。 方法 恶性疟原虫氯喹抗性株(Fcc SM1/yN株)取自云南省思茅地区恶性疟患者静脉血，经同步化处理，用新鲜血将红细胞感染率调至0.5%～1.0%，红细胞压积与培养基体积比(红细胞比容)为1 ∶ 9，混匀。制备氯喹药板及氯喹/酮替芬（或氯喹/赛庚啶）组合药板。氯喹药板自上而下每行氯喹终浓度依次为0.312 5～2 560 nmol/L，呈2倍递增。氯喹/酮替芬（或氯喹/赛庚啶）组合药板，是在氯喹药板基础上加入酮替芬（或赛庚啶），每行10孔自左至右终浓度依次为9.77～5 000 nmol/L，呈2倍递增, 每块药板均设A行空白对照。每孔加混匀血样 50 μl，37 ℃ 培养 34 h，镜检计数每200个疟原虫中含3个核以上裂殖体数，计算氯喹单药及各配伍组对恶性疟原虫的半数抑制浓度（IC₅₀），以及酮替芬（或赛庚啶）提高氯喹活性的指数（AEI）。选择AEI值较高的配伍组，进行增效时序性研究。当氯喹对虫体作用 0～10 h 分别加入酮替芬（或赛庚啶），34 h后检测和计算各时间段IC₅₀及AEI。选择氯喹/酮替芬（或氯喹/赛庚啶）最佳配伍剂量，培养恶性疟原虫 20 h，提取总RNA，用实时荧光定量PCR(real-time PCR)分析药物作用前后恶性疟原虫氯喹抗性转移基因（pfcrt）和多药抗性基因（pfmdr1）表达水平。 结果 0.312 5～2 560 nmol/L氯喹与625 nmol/L 酮替芬（或赛庚啶）配伍，增效作用显著，氯喹/酮替芬的IC50为74.53 nmol/L，AEI为0.42；氯喹/赛庚啶的IC50为89.70 nmol/L、AEI为0.30。5 nmol/L氯喹作用 6～7 h 加入625 nmol/L酮替芬（或赛庚啶），增效作用显著，氯喹/酮替芬的IC50为 67.70 nmol/L、AEI为0.47；氯喹/赛庚啶的IC₅₀为81.53 nmol/L、AEI为0.37。5 nmol/L氯喹与625 nmol/L酮替芬（或赛庚啶）配伍，作用20 h，氯喹/酮替芬可使pfcrt基因表达水平升高91%，而氯喹/赛庚啶可使pfmdr1 基因表达水平下降14%。 结论 体外氯喹与适量的酮替芬（或赛庚啶）配伍，能增强恶性疟原虫氯喹抗性株对氯喹的反应性。氯喹对虫体作用 6～7 h 加入酮替芬（或赛庚啶）增效作用显著。该增效作用与pfcrt基因和pfmdr1 基因的表达水平有关。     

橙皮素对H2O2诱导H9c2心肌细胞凋亡的抑制效应研究

目的 探讨橙皮素(HES)对H₂O₂诱导的H9c2心肌细胞凋亡有何影响。方法 采用H₂O₂建立H9c2心肌细胞氧化应激损伤模型,实验分为四组：正常对照组(Control组),H₂O₂损伤组(H₂O₂组),单纯橙皮素处理组(HES组),橙皮素预处理 H₂O₂组(HES H₂O₂组)。H₂O₂(400 μM)处理2 h建立心肌细胞氧化应激损伤模型,HES H₂O₂组于建模前1 h加入40 μM橙皮素。采用CCK-8法确定H9c2细胞活性；DCFH-DA 探针检测细胞活性氧簇(ROS)水平,流式细胞术检测心肌细胞凋亡,分光光度计检测Caspase-3活性。结果 橙皮素预处理可明显改善H₂O₂诱导的H9c2心肌细胞活性降低,并且呈浓度依赖性；给予40 μM橙皮素预处理后ROS的产生明显减少,Caspase-3活性显著下降,心肌细胞凋亡率下降到30%左右。结论 橙皮素对氧化应激诱导的心肌细胞凋亡具有抑制效应。     

紫花牡荆素抑制氧化应激诱导的HUVEC细胞凋亡

目的　研究紫花牡荆素（CAS）对H₂O₂　氧化应激诱导的HUVEC细胞凋亡的影响及其可能机制。方法　体外培养HUVEC细胞,在添加H₂O₂　氧化应激诱导之前先加入不同浓度的CAS　（5、10和20　μmoL/L）　预孵30　min,用MTT法观察各组细胞生长活性;用AO/EB染色和FCM法检测HUVEC细胞凋亡情况及其凋亡率;用Western　blot检测细胞凋亡相关蛋白表达活性。结果　MTT提示与H₂O₂组相比较,CAS呈浓度和时间依赖性增加H₂O₂氧化应激诱导的HUVEC细胞的生长活性（P<0.05）,降低HUVEC细胞的凋亡数量及凋亡率（P<0.05）;同时下调Cytochrome　C、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达降低（P<0.05）,激活Bcl-2蛋白表达（P<0.05）,而Bax蛋白表达不变（P>0.05）,Bcl-2/Bax上升（P<0.05）。结论　CAS拮抗H₂O₂氧化应激诱导的HUVEC细胞凋亡可能与其调节内源性线粒体凋亡途径有关。     

密达利杀灭湖北钉螺效果的研究

目的 实验室和现场试验评价密达利（META-Li， 40%四聚乙醛水乳剂）杀灭湖北钉螺的效果。 方法 室内：采用泥缸喷洒法、烧杯浸杀法和三角沉淀杯上爬法，用敲击法观察不同时间、不同浓度密达利对湖北钉螺的杀灭和抑制上爬作用。现场：选择安徽省芜湖县草滩进行现场喷洒试验，密达利剂量为1、2和4 g/m²，设氯硝柳胺药物对照剂量为1 g/m²和清水空白对照组，观察施药后3、7和15 d检查钉螺存活情况。 结果 室内喷洒试验：24、48和72 h的半数致死剂量（LD₅₀）分别为0.78、0.44和0.46 g/m2；室内浸杀试验：24、48、72 h的半数致死浓度（LC₅₀）分别为44.4、27.4和24.8 mg/L；24 h抑制钉螺上爬半数有效浓度（EC₅₀）为5.86 mg/L。现场喷洒试验：密达利2 g/m2喷洒后7 d钉螺死亡率大于90%，灭螺效果和氯硝柳胺1 g/m²相当（P>0.05）。 结论 密达利室内及现场喷洒灭螺效果明显，有抑制钉螺上爬作用。     

母源性抗旋毛虫抗体对子鼠肠道虫荷的影响

目的 探讨母源性抗旋毛虫抗体的传递途径及其对子鼠感染旋毛虫后肠道排虫的作用。方法 98只昆明小鼠子鼠分为4组,感染母鼠所产子鼠感染母鼠哺乳组（A组）、正常母鼠所产子鼠感染母鼠哺乳组（B组）、感染母鼠所产子鼠正常母鼠哺乳组（C组）及正常母鼠所产子鼠正常母鼠哺乳组（D组）。4组子鼠分别在14、21、42日龄时尾静脉采血,用旋毛虫肌幼虫ES抗原ELISA检测血清抗体水平,然后分别经口感染200条肌幼虫,18 h后剖杀子鼠,计数肠道虫荷。 结果 A、B、C和D等4组14日龄子鼠的肠道平均虫荷分别为5、5、19及18条,21日龄子鼠分别为18、19、75及73条。14日与21日龄的A、B两组子鼠肠道虫荷均显著低于C、D两组子鼠（F₁₄=10.056,F₂₁=35.062,P<0.01）。14日和21日龄子鼠血清吸光度（A₄₉₂）,A组（0.177、0.235）与B组（0.183、0.250）均显著高于C组（0.108、0.105）与D组（0.067、 0.065） （F₁₄=75.326,F₂₁=60.867,P<0.01）;14日和21日龄4组子鼠肠道虫荷与其血清抗体水平均呈负相关（r₁₄=-0.621,r₂₁=-0.756,P<0.01）。42日龄4组子鼠肠道虫荷差异无统计学意义（F₄₂=0.916,P>0.05）,血清抗旋毛虫抗体均为阴性,肠道虫荷与其血清抗体水平无相关性（r₄₂=-0.291,P>0.05）。 结论 母源性抗旋毛虫抗体主要经乳汁传递,可明显促进14日和21日龄子鼠感染旋毛虫后的肠道排虫反应。     

Sj26基因转染的树突状细胞对日本血吸虫感染的免疫保护机制研究

目的 探讨日本血吸虫Sj26基因转染的树突状细胞（DC）对日本血吸虫感染的保护性免疫作用机制。 方法 BALB/c小鼠48只随机均分4组, 于小鼠耳廓分别注射细胞悬液(浓度1×10⁶/ml)0.2 ml, A组注射Sj26基因转染的DC、B组注射质粒pcDNA3转染的DC、 C组注射未处理的DC, D组注射RPMI-1640。共免疫3次，间隔2周。末次免疫后2周，每鼠经皮肤感染40±2条尾蚴。分别于免疫前、末次免疫后第 2 周以及攻击感染后第 6 周采血, ELISA法检测血清IgG抗体、γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-4（IL-4）水平，免疫印迹法（Western blot）检测血清特异性抗Sj26 IgG抗体，双夹心ELISA法检测脾淋巴细胞经伴刀豆球蛋白A(ConA)和可溶性虫卵抗原(SEA)刺激后培养上清中IFN-γ和IL-4含量。噻唑蓝法（MTT）检测脾淋巴细胞增殖情况。 结果 A组血清IgG抗体水平(吸光度A₄₉₁值)，免疫后（A₄₉₁=0.117）显著高于免疫前（A₄₉₁=0.049）（t=2.73，P<0.05），也显著高于B组（A₄₉₁=0.061）和C组（A₄₉₁=0.058）（t值为2.48和2.56，P<0.05）。A组血清能特异识别血吸虫成虫抗原Mr 26 000蛋白。血清IL-4水平，各组免疫前、后均无明显变化。 IFN-γ水平，A组血清免疫后为（101.4±4.9)pg/ml, 明显高于免疫前的(15.0±1.9) pg/ml（t=5.80，P<0.01），亦高于免疫后的B组（40.1±3.1) pg/ml和C组（35.6±1.2) pg/ml (t值为3.98和4.13，P<0.01)。脾淋巴细胞经ConA刺激诱生的IFN-γ， A组（171.2 pg/ml）显著高于 D组（91.0 pg/ml）（t=4.25，P<0.01）。 经SEA刺激诱生的IFN-γ， A组（70.8 pg/ml）显著高于D组（49.7 pg/ml）（t=2.83，P<0.01）。经ConA刺激诱生的IL-4水平，A组（79.7 pg/ml）明显低于D组（125.2 pg/ml）（t=4.40, P<0.01）。经SEA刺激诱生的IL-4，A组（50.7 pg/ml）明显低于D组（70.5 pg/ml）（t=2.62，P<0.05）。A组脾淋巴细胞经ConA和SEA刺激后的刺激指数分别为4.1和2.82，均高于其他各组（与D组比较，t=3.20, P<0.01和t=2.15，P<0.05）。 结论 Sj26基因转染的树突状细胞免疫小鼠主要诱导Th1型免疫应答。     

华支睾吸虫F0-ATP合酶b亚基基因的克隆表达和重组蛋白的免疫原性分析

目的 对华支睾吸虫F₀-ATP合酶b亚基（CsF₀-ATP-synt_B）基因进行克隆、表达及重组蛋白的免疫原性分析。 方法 以华支睾吸虫成虫cDNA文库中含有F₀-ATP合酶b亚基基因的质粒为模板，扩增该基因（去除线粒体靶向序列的成熟肽基因），将其克隆到原核表达质粒pET-28a（+）中，转化大肠埃希菌BL21（DE3），异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达，经亲和层析获得的纯化表达产物免疫SD大鼠，制备抗血清。蛋白质印迹（Western blotting）分析重组蛋白的免疫原性。 结果 华支睾吸虫F₀-ATP合酶b亚基成熟肽基因的编码区含813个碱基，编码271个氨基酸，相对分子质量（Mr）为31 171.9。经亲和层析获得的重组蛋白可被其免疫的大鼠血清识别。 结论 华支睾吸虫F₀-ATP合酶b亚基基因可在原核表达系统中获得具有免疫原性的高效表达。     

银杏酸5种同系物单体的制备及其杀灭钉螺的作用

目的 探索分离纯化的银杏酸同系物单体对钉螺的影响。 方法 用石油醚从银杏外种皮提取银杏酸, 经半制备高效液相色谱（HPLC）分离, 通过液相?鄄质谱联机系统鉴定。 按WHO“杀螺剂实验室终筛方法”检测银杏酸分离纯化的5个同系物单体杀灭湖北钉螺的作用。 结果 纯化的银杏酸5个同系物单体为GA _13︰0 、 GA _15︰1 、 GA _15︰0 、 GA_17︰1 和GA _17︰2 , 其母核苯环上分别有1个13、 15及17烷基或烯基的侧链。 各单体占总银杏酸的比例分别为17.6%、 52.3%、 3.2%、 23.3% 和3.6%。 杀螺活性顺序为： GA _13︰0>GA _15︰1>GA _15︰0>GA _17︰1>GA _17︰2 。 24 h对钉螺的半数致死浓度（LC₅₀）依次为20.79、 22.28、 33.76、 51.89和59.10 mg/L。GA _13︰0 和 GA_15︰1对钉螺上爬的抑制作用明显。 结论 银杏酸单体杀灭钉螺的作用受其侧链碳原子数量以及所含双键数目的影响, 单体GA _13︰0及GA _15︰1杀钉螺作用明显, 并能显著抑制钉螺上爬。单体GA15︰0也有一定的杀螺活性。     

HepG2.2.15细胞诱导MT2淋巴细胞凋亡及其意义

观测表达Ｆａｓ抗原（Ｆａｓ）的Ｔ淋巴细胞一感染乙型肝炎病毒的ＭＴｓ细胞对表达Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）的实质细胞一ＨｅｐＧ２２．１５细胞的敏感性,了解乙型肝炎病毒感染对淋巴细胞和肝实质细胞交互作用的影响。方法体外培养ＭＴ２细胞,用乙型肝炎病毒诱导表达ＦａｓＬ。将表达ＦａｓＬ的ＨｅｐＧ２．２．１５细胞与其共孵育后,以Ｔｕｎｅｌ法观测ＭＴ２细胞凋亡情况。结果ＭＴ２细胞感染乙型肝炎病毒后可测到Ｆａｓ表达信号。与表达ＦａｓＬ的ＨｅＰＧ２．２．１５细胞共孵育４８～７２小时以后,出现凋亡信号。结论乙型肝炎病毒诱导表达Ｆａｓ的ＭＴｓ细胞与表达ＦａｓＬ的ＨｅｐＧ２．２．１５细胞交互作用后发生凋亡,表明通常在乙型肝炎发病中作为效应细胞的淋巴细胞,亦可成为凋亡靶细胞。     

H(2)O(2) regulates cardiac myocyte phenotype via concentration-dependent activation of distinct kinase pathways

Reactive oxygen species (ROS) can act as signaling molecules to stimulate either hypertrophy or apoptosis in cardiac myocytes. We tested the hypothesis that the phenotypic effects of ROS are due to differential, concentration-dependent activation of specific kinase signaling pathways. Adult rat ventricular myocytes were exposed to H(2)O(2) over a broad concentration range (10-1000 microM). Low concentrations of H(2)O(2) (10-30 microM) increased protein synthesis without affecting survival. Higher concentrations of H(2)O(2) (100-200 microM) increased apoptosis (assessed by TUNEL). Still higher concentrations of H(2)O(2) (300-1000 microM) caused both apoptosis and necrosis. A hypertrophic concentration of H(2)O(2) (10 microM) increased the activity of ERK1/2, but not that of JNK, p38 kinase or Akt. An apoptotic concentration of H(2)O(2) (100 microM) activated JNK, p38 kinase and Akt, and further activated ERK1/2. The MEK1/2 inhibitor U0126 prevented the hypertrophic effect of 10 microM H(2)O(2). The apoptotic effect of 100 microM H(2)O(2) was inhibited bya dominant-negative JNK adenovirus, and was potentiated by U0126 or an Akt inhibitor. Thus, the concentration-dependent effects of ROS on myocyte hypertrophy and growth are due, at least in part, to the differential activation of specific kinase signaling pathways that regulate hypertrophy and apoptosis.     

复方丹参注射液对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的　探讨复方丹参注射液 (ISM)对 H2 O2 诱导的 PC1 2细胞凋亡的保护作用机制。方法　在 H2 O2 诱导 PC1 2细胞凋亡模型的基础上 ,采用 MTT比色分析测定细胞存活率 ,Hoechst- PI荧光染色和流式细胞仪检测分析细胞凋亡情况 ,RT- PCR检测 par- 4和 caspase- 3基因 m RNA表达 ,Western blot检测 par- 4蛋白表达和 caspase- 3P2 0活性片段 ,比色法检测 caspase- 3相对活性。结果　不同剂量 ISM预处理 1 h可提高 PC1 2细胞存活率 ,降低 par- 4和 caspase- 3的 m RNA表达以及 Par- 4的蛋白表达 ,caspase- 3 P2 0活性片段和 caspase- 3相对活性减少 ,但变化不明显。结论　 ISM可剂量依赖性地对抗 H2 O2的神经毒性作用 ,其机制可能与凋亡基因 par- 4表达有关 ,与 caspase- 3的关系尚需进一步探讨。     

Presence of Fas and Bcl-2 proteins in BEL-7404 human hepatoma cells

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＡｌｐｈａｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ（ＡＦＰ）ｉｓａｍａｊｏｒｓｅｒｕｍｐｒｏｔｅｉｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｔｈｅｅａｒｌｙｓｔａｇｅｓｏｆｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｉｎｍａｍｍａｌｓａｎｄｏｔｈｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｔｅｓ,ｗｈｉｃｈｖ...     

Selenium has a protective role in caspase-3-dependent apoptosis induced by H2O2 in primary cultured pig thyrocytes

OBJECTIVE: Hydrogen peroxide (H2O2), necessary for thyroid hormonogenesis, is produced at the apical surface of the thyroid follicular epithelium. Excess H2O2 is potentially cytotoxic and may contribute to the development of hypothyroidism, e.g. in severe selenium deficiency. Yet it is unclear how H2O2 contributes to thyroid cell death. DESIGN AND METHODS: H2O2-induced apoptosis and necrosis were studied in primary cultured pig thyroid cells. Glutathione peroxidase (GPx) activity was altered by culture in low serum with or without selenite substitution. Apoptosis was evaluated by spectrofluorometric measurement of caspase-3-specific substrate cleavage, and by analysis of DNA fragmentation by agarose gel electrophoresis. Necrosis was detected by 51Cr release from prelabeled cells. RESULTS: Exogenous H2O2 dose-dependently (100-400 micromol/l) activated caspase-3 within 3-12 h, and DNA degradation was observed after 24 h. The potency of H2O2 to induce apoptosis was low compared with that of staurosporine, a strong proapoptotic agent. H2O2-treated cells with reduced GPx activity showed increased caspase-3 activation. Incubation of serum-starved cells with selenite (10-100 nmol/l) normalized the GPx activity and reduced the activation of caspase-3 by H2O2. High H2O2 concentrations (400-800 micromol/l) were required to obtain necrosis. The H2O2-induced necrosis was exaggerated by both low GPx activity and catalase inhibition. CONCLUSIONS: Cytotoxic effects of H2O2 on thyroid cells include caspase-3-dependent apoptosis that occurs at H2O2 concentrations insufficient to induce necrosis. Selenium deficiency aggravates the apoptotic response, probably due to impaired capacity of GPx to degrade H2O2.     

Increased apoptosis dependent on caspase-3 activity in polymorphonuclear leukocytes from patients with cirrhosis and ascites

BACKGROUND/AIMS: Patients with decompensated cirrhosis are prone to develop neutropenia. Although hypersplenism and increased clearance of polymorphonuclear leukocytes (PMN) in the spleen are thought to contribute to neutropenia in these patients, other factors cannot be excluded. The aim of the current study was to investigate whether the presence of increased PMN apoptosis could also contribute to the appearance of neutropenia in these patients. METHODS: PMN were isolated by Ficoll-Hypaque gradient centrifugation from 17 patients with decompensated cirrhosis (CH group) and 13 patients with compensated chronic liver disease (CT group). PMN were incubated in RPMI 1640 medium at 37 degrees C in a 5% CO(2) atmosphere and viability and frequency of apoptosis were evaluated after 0, 10, 20 and 40 h of culture. Viability was determined by the MTT assay and apoptosis by microscopic examination of cell morphology (Diff-Quik staining), DNA fragmentation by agarose gel electrophoresis (DNA laddering) and caspase-3 activity by DVDE-p-nitroanilide cleavage. RESULTS: Compared to CT patients, PMN isolated from CH patients exhibited a decreased PMN viability and a marked accelerated apoptosis as revealed by an increased number of condensed nuclei, increased DNA laddering and significantly higher caspase-3 activity. CONCLUSIONS: These findings indicate that shortening of PMN survival via apoptosis may explain in part the neutropenia present in decompensated cirrhotic patients with ascites, thus favoring the development of bacterial infections in these patients.     

苦参碱对人膀胱癌EJ细胞株凋亡的影响及机制

目的为苦参碱用于膀胱癌治疗提供依据。方法将EJ细胞贴壁培养于10％胎牛血清、10万U／L青霉素、100mg／L链霉素的1640培养液中,37℃、5％CO2饱和湿度培养箱中培养,取对数生长期细胞随机分为两组,苦参碱组加入质量浓度为0．5、1．0,2．0mg／ml的苦参碱;对照组不加苦参碱,每天更换RPM11640培养液。采用MTT法检测各组细胞生长抑制率;荧光显微镜观察EJ细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;并对凋亡相关Bcl-2蛋白表达进行检测。结果0．5—2．0mg／ml苦参碱可有效抑制EJ细胞增殖,抑制作用呈时间-剂量依赖性,作用72h时2．0mg／ml的抑制率为50．65％±2．78％,凋亡率为36．35％±2．06％,与对照组比较,P均〈0．01;荧光显微镜下可观察到细胞内空泡与核碎裂现象;Bcl-2蛋白表达随药物浓度增高和作用时间延长而下降。结论苦参碱能诱导EJ细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达有关。     

Upregulated Cyclooxygenase-2 Inhibits Apoptosis of Human Gastric Epithelial Cells Infected with Helicobacter pylori

Helicobacter pylori induces apoptosis and alters the proliferation of gastric mucosal epithelial cells. Cyclooxygenase-2 (COX-2), the inducible form of prostaglandin (PG) synthesis, is known to cause alteration in epithelial cell growth. The goal of this study was to determine whether COX-2 gene expression by H. pylori infection could influence gastric epithelial cell apoptosis. Expression of COX-2 mRNA and proteins was up-regulated in Hs746T gastric epithelial cell lines infected with H. pylori, when assessed by quantitative RT-PCR and western blot. Inhibition of COX-2 expression using NS-398, a specific COX-2 inhibitor, showed a significant increase of gastric epithelial cell apoptosis and caspase-3 activation in Hs746T cells infected with H. pylori. Moreover, the effect of NS-398 on H. pylori-induced apoptosis was reversed by the addition of PGE₂. These results suggest that up-regulated COX-2 expression by H. pylori infection can inhibit apoptosis of gastric epithelial cells.     

几种药物对体外培养日本血吸虫成虫毒性作用的研究

目的观察金诺芬、顺铂、阿霉素及化合物4N、H、B、O对体外培养日本血吸虫的毒性作用,以及对硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶（TGR）活性的抑制作用。方法取日本血吸虫成虫置于RPMI 1640培养基中,培养30～60 min后,加入不同浓度药物,分别于6、24、48、72 h观察虫体活力、形态改变及死亡情况。随后换无药物的新鲜培养基,观察虫体活力的恢复情况,并计算药物半数致死剂量（LD50）。测定药物处理后的成虫匀浆上清液中日本血吸虫TGR的硫氧还蛋白原酶（TrxR）和谷胱苷肽还原酶（GR）的活性。结果 5μg/ml金诺芬作用24 h、20μg/ml 4N作用72 h、60μg/ml H作用72 h、80μg/ml顺铂作用72 h对日本血吸虫成虫致死率分别为100%、60%、66.7%、100%,LD50值分别为2.56、17.59、54.14μg/ml和52.87μg/ml,其他药物对日本血吸虫无作用。金诺芬、4N、顺铂、H对成虫的毒性作用具有不可逆性;金诺芬、顺铂对日本血吸虫的TGR酶活性有抑制作用,其他药物对TGR无作用。5～30μg/ml金诺芬、20～30μg/ml 4N、70～150μg/ml顺铂及60～150μg/ml H作用24 h均可使虫体形态发生改变。结论金诺芬、顺铂、化合物4N和H对体外培养的日本血吸虫成虫具有杀伤作用,其中金诺芬、顺铂杀伤日本血吸虫成虫的作用可能与其抑制TGR活性有关。