三氧化二砷诱导多药耐药白血病细胞K562-n/VCR凋亡

目的 研究三氧化二砷(AS2O3)对裸鼠高成瘤性慢性粒细胞白血病(CML)急变细胞系K562-n及其表达mdr-1的多药耐药细胞系K562-n／VCR诱导凋亡作用的差异。方法 采用WST法、细胞形态学、流式细胞术等多参数分析。结果 AS2O3对K562-n及K562-n／VCR的抑制作用无显著性差异。AS2O3对K562-n及K562-n／VCR细胞的凋亡诱导作用呈作用时间和浓度依赖关系。结论 AS2O3对表达mdr—1的CML急变期细胞系K562-n／VCR具有抑制生长及较明显的诱导凋亡作用。     

MnSOD模拟化合物诱导人白血病多药耐药K562/ADM细胞凋亡

目的:研究锰超氧化物岐化酶模拟化合物(mimics of manganese superoxide dismutase,MnSODm)对人白血病K562/ADM耐药细胞增殖抑制及诱导凋亡作用.方法:以人白血病高表达耐药基因(mdr1)的K562/ADM多药耐药细胞为靶细胞,应用四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖活性;光学显微镜、荧光显微镜和透射电镜观察细胞形态学变化;Annexin v/PI双标记法检测K562/ADM细胞凋亡.结果:(1-50),mg/L MnSODm可抑制K562/ADM细胞增殖(P＜0.01),并呈时间和浓度依赖性.MnSODm诱导48h后,K562/ADM细胞出现典型的凋亡形态学改变;Annexin V/PI双染显示凋亡细胞显著增高.结论:MnSODm体外明显抑制人白血病K562/ADM耐药细胞的增殖,并诱导K562/ADM细胞凋亡.     

PLK1基因沉默增强K562/A02细胞对阿霉素敏感性的实验研究

背景与目的:Polo样激酶1(polo-likekinase1,PLK1)是一种重要的细胞周期调节分子,在多种肿瘤细胞中高表达且与肿瘤发病、治疗和预后密切相关。本研究探讨PLK1基因沉默增强K562/A02细胞对阿霉素敏感性的作用。方法:构建针对PLK1mRNA的siRNA真核质粒,将其导入经阿霉素诱导的K562/A02细胞中,通过RT-PCR和Westernblot分析PLK1基因在转染前后的表达差异;MTT法检测阿霉素对K562/A02细胞的半数抑制浓度;流式细胞术检测细胞内阿霉素积累量和阿霉素诱导后的细胞凋亡。结果:与对照组相比,转染pEGFP-PLK1质粒的K562/A02细胞PLK1mRNA和蛋白水平分别下降(61.9±2.5)%和(65.3±2.4)%,对阿霉素敏感性的相对逆转率为67.8%。经阿霉素诱导96h后,空白对照组的细胞凋亡率为11.33%,转染pEGFP-PLK1质粒组凋亡率达到54.39%。结论:PLK1基因沉默能明显增加K562/A02细胞内阿霉素的累积量,增强细胞对阿霉素的敏感性并诱导凋亡,从而逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药性。     

NF-H基因参与K562/A02细胞多药耐药机制形成的研究

目的 分析K562／A02细胞多药耐药性(MDR)分子机制,寻找可能参与K562／A02细胞耐药机制的新基因。方法 通过长期逐步增加K562细胞培养液中阿霉素(ADM)的浓度,诱导出多药耐药细胞株K562／A02,利用cDNA microarray比较K562和K562／A02基因表达的筹别,从中选择NF-H基因进行RT-PCR和免疫细胞化学验证,并利用反义核酸技术和细胞内ADM浓度的测定,进一步验证该基因与K562／A02细胞多药耐药的关系。结果 通过比较发现,有12个基因可能参与了K562／A02细胞的耐药机制,其中7个基因在K562／A02中被下调,5个基因被上调。本研究结果显示,NF-H基因在K562／A02细胞中高表达,并且,将NF-H和mdrl反义核酸同时转入K562／A02细胞后,可明显提高细胞内ADM浓度,而单独转入NF-H反义核酸效果不明显。结论 K562／A02细胞耐药表型的形成是多因素的．除了P-糖蛋白(P-gp)等常见因素外,可能还有NF-H基因的参与。     

马钱子碱对白血病K562/A02细胞多药耐药性的逆转作用

目的：研究马钱子碱（vauqueline）对人白血病K562/A02细胞多药耐药性的逆转作用。方法：采用噻唑蓝（MTT）法检测马钱子碱的细胞毒作用;采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹（Western blot）分别检测非细胞毒浓度（IC10）的马钱子碱对K562/A02细胞MDR1 （multidrug resistance gene 1）、多药耐药相关蛋白（multidrug resistance-associated protein,MRP）、拓扑异构酶Ⅱ（topoisomeraseⅡ,TopoⅡ）、谷胱苷肽-S-转移酶（glutathione s-transferase,GST-π）mRNA及其蛋白表达的影响。结果：非细胞毒浓度（IC10）的马钱子碱作用后,K562/A02细胞中MDR1mRNA及P-gp表达降低（P<0.01）。而MRP、TopoⅡ、GST-π mRNA及其蛋白的表达无明显变化（P>0.05）,同时马钱子碱能增加化疗药物在白血病细胞内的积累。结论：马钱子碱能部分逆转K562/A02细胞的耐药性,其作用机制可能与下调K562/A02细胞MDR1 mRNA的表达,导致细胞膜上P-gp的表达量减少,化疗药物从细胞内溢出减少有关。     

环腺苷酸对人白血病多药耐药 K562/ADM 细胞的诱导分化作用

目的：研究环腺苷酸（cyclic adenosine monophosphate,cAMP)对人白血病多药耐药K562／ADM细胞的诱导分化作用。方法：K562／ADM细胞经0.25-2.0mmol/L cAMP处理后,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术（flow cytometry,FCM)检测细胞周期和P－糖蛋白（P－glycoprotein,P-gp)的表达,免疫细胞化学法检测细胞周期蛋白cyclin D1和转录因子E2F的表达;同时观察细胞形态学变化和血红蛋白合成功能。结果：cAMP呈浓度和时间依赖性地抑制K562／ADM细胞的增殖（P＜0．01）,细胞形态学上出现红系细胞的形态特征;被诱导的细胞能够合成血红蛋白、cyclinD1和E2F的表达减低。cAMP(0.25mmol/L和1.0mmol/L)诱导24h,多数细胞被阻滞在G1期,S期和G2＋M期细胞显著降低,诱导72h后K562／ADM细胞P－gp表达的阳性率无明显变化（99．8％－99．9％）,但P－gp的表达量显著增加,平均荧光强度分别增高1．24倍和1．28倍。结论：K562／ADM细胞仍保留了分化成熟的潜能,可被cAMP诱导向正常血细胞分化,但在分化诱导过程中,化学诱导剂可导致耐药细胞发生P－gp的应激性表达增强而可能阻抑后续的化学治疗,或对诱导剂产生耐受性。     

超声体外诱导白血病细胞K562凋亡的研究

 目的 研究超声对诱导白血病细胞K562凋亡的作用,为超声治疗的临床应用提供实验依据。方法 以人慢性粒细胞白血病急变细胞株K562为研究对象,用频率为1.8 MHz的超声波辐照白血病细胞K562,用光学显微镜观察凋亡细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 超声辐照K562细胞后24 h,8 mV×5 min组及8 mV×10 min组细胞凋亡率分别为2.3 %和8.28 %;10 mV×5 min及10 mV×10 min组细胞凋亡率分别为9.36 %和21.46 %。电压为7mV时,超声辐照K562细胞后0.5 h,1 h,3 h,5 h细胞凋亡率分别为1.9 %,3.6 %,5.7 %,7.7 %。同时光学显微镜下可见凋亡小体形成等典型形态学改变。结论 超声可以诱导白血病K562细胞凋亡。     

白血病细胞多药耐药与细胞凋亡的关系

目的 :探讨白血病细胞多药耐药 (MDR)与细胞凋亡的关系。方法 :在体外用化疗药物阿霉素 (ADM)诱导白血病细胞株 K5 6 2 MDR的产生 ,用 As2 O3诱导细胞的凋亡 ,采用流式细胞仪检测细胞表面 P糖蛋白 (P- gp)的表达 ;荧光定量 PCR检测 MDR1 m RNA;通过流式细胞仪检测Anexin- V判断凋亡细胞数量的多少 ;观察 MDR与细胞凋亡的关系。结果 :5 μm ol/ L 的 ADM能诱导 K5 6 2细胞 MDR的产生 ,随着作用时间的延长 ,P- gp/ MDR1 m RNA的表达逐渐升高 ;P- gp/MDR1 m RNA的表达与细胞凋亡呈负相关 (r=0 .6 8,P<0 .0 1 ) ;在 As2 O3作用下 ,细胞凋亡增加的同时 ,P- gp的表达下调。结论 :抗癌药物能诱导白血病细胞 MDR的产生 ,细胞的耐药性与凋亡抑制相关 ,诱导细胞的凋亡能减低白血病细胞的 MDR。     

LY294002与化疗药物联用对白血病K562细胞多药耐药的逆转作用

背景与目的: 传统逆转白血病多药耐药的药物由于不良反应大而限制了其在临床中的应用,进一步研究白血病多药耐药产生机制和有效逆转靶点成为攻克白血病多药耐药的关键.为此,本研究探讨LY294002[磷脂酰肌醇-3-激酶(P13-K/Akt)通路抑制剂]对人类白血病K562细胞多药耐药的逆转作用.方法: 锥虫蓝拒染法测定细胞生长增殖.Western印迹榆测K562/S和K562/D细胞中P-gp及p-Akt的表达.流式细胞术检测细胞内药物积聚.结果: K562/D细胞对柔红霉素(DNR)、多柔比星(ADR)、长春新碱(VCR)、依托泊苷(VP16)交叉耐药,相对其亲本细胞的耐药倍数分别为65、52、134和50.DNR诱导了K562/D细胞的P-gp、p-Akt过度表达.LY294002使K562/D细胞内药物积聚增加,部分逆转了K562/D细胞对DNR、ADR、VCR、VP16的耐药性(相对耐药倍数降至23、21、63和29),而对敏感细胞K562/S的耐药性无影响. 结论:LY294002部分逆转K562/D细胞的多药耐药,可能于DNR诱导K562/D细胞的P-gp、p-Akt过度表达而LY294002抑SUP13-K/Akt信号转导通路有关.     

HSP27高表达与人白血病多药耐药细胞K562/VCR的关系

背景与目的:白血病细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)是白血病化疗失败的常见原因,虽然已有研究揭示了一些肿瘤MDR机制,但目前仍然不能完全解释MDR现象。本文旨在应用蛋白质组学方法筛选白血病耐药相关蛋白,并研究其与白血病MDR的关系,为进一步阐明白血病MDR发生的分子机制提供理论依据。方法:二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)技术分离白血病细胞K562和人白血病耐药细胞K562/VCR的总蛋白,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ionization-time offlight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对差异表达的蛋白质点进行鉴定。应用反义核酸技术将分离鉴定差异表达蛋白的反义核酸转染至耐药细胞,Western blot检测转染后差异蛋白的表达情况,MTT法检测转染后细胞存活率,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率。结果:在K562/VCR细胞与K562细胞中鉴定出一差异表达蛋白点,并用质谱分析证实其为热休克蛋白27(heat shock protein27,HSP27)。用HSP27反义核酸转染K562/VCR细胞,在不同浓度长春新碱作用下,HSP27反义核酸转染的K562/VCR细胞的存活率较对照错义核酸转染组明显降低(P<0.05),流式细胞仪显示细胞凋亡率为16.37%,明显高于对照组(P<0.05)。结论:HSP27在K562/VCR细胞中高表达,其表达抑制后,K562/VCR细胞对长春新碱的敏感性增强。     

MDR1基因下调逆转人白血病阿霉素耐药细胞株K562/ADM的耐药性

目的：探讨RNA干扰（RNAi）人MDR1基因对人白血病阿霉素耐药细胞株K562/ADM耐药性的影响。方法：应用针对人MDR1基因的RNAi质粒pENTRTM/U6-MDR1转染人白血病阿霉素耐药细胞株K562/ADM和亲本细胞株K562,48 h后实时荧光定量PCR检测MDR1 mRNA表达,流式细胞术检测P-gp蛋白表达和P-gp功能,MTT法检测细胞对ADM的耐药性。结果：与未转染细胞相比,K562/ADM耐药细胞pENTRTM/U6-MDR1组的MDR1 mRNA和P-gp蛋白表达和功能均显著下降（ P <0.05）,对阿霉素的耐药性显著降低（ P <0.05）。结论：MDR1基因下调可逆转人白血病阿霉素耐药细胞株对阿霉素的耐药性。     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/ADM多药耐药性机制研究

目的 研究汉防己甲素(TTD)对慢性粒细胞白血病急性变白血病细胞株K562／ADM多药耐药(MDR)逆转的机理。方法 采用流式细胞仪检测细胞内化疗药物的浓度及细胞表面P糖蛋白(P-gp)的表达；荧光定量PCR法检测MDR1 mRNA；通过流式细胞仪检测Anexin—V判断凋亡细胞的数量。结果 10μmol/L的TTD处理K562／ADM细胞后，细胞内阿霉素(ADM)的浓度明显提高；K562／ADM细胞MDR1 mRNA／P-gp的表达下降；TTD能增强ADM致细胞凋亡的作用。结论 汉防己甲素的耐药逆转机制除了下调MDR1 mRNA／P-gp的表达引起细胞内抗癌药物的积聚外，增加抗癌药物致细胞凋亡也是耐药逆转的重要原因。．     

人核糖体蛋白L6对白血病K562/A02细胞耐药性的影响

目的观察核糖体蛋白L6(RPL6)表达的改变对白血病耐药性的作用。方法通过RT-PCR方法获得RPL6cDNA序列,用真核表达载体pcDNA3.1( )分别构建正向插入和反向插入的RPL6cDNA重组质粒。以脂质体将正义RPL6cDNA真核表达质粒转染K562细胞,将反义RPL6cDNA真核表达质粒转染K562/A02细胞,以MTT观察其对化疗药物耐药性的作用。结果转染正义RPL6cDNA真核表达质粒后,K562细胞对阿霉素的耐药性比未转染的K562细胞增强3.25倍,转染反义RPL6cDNA真核表达质粒后,K562/A02细胞对阿霉素的耐药性比未转染的K562/A02细胞降低62%。结论RPL6基因过表达在K562/A02细胞耐药性的形成中起重要作用。     

多药耐药细胞系K562/A02裸小鼠皮下移植瘤模型的建立与鉴定

目的:建立一种耐药特性稳定的裸小鼠移植瘤动物模型,为进行体内肿瘤耐药机制研究和逆转药物的筛选提供实验模型和实验基础。方法:将具有典型MDR表型的K562/A02耐药细胞接种于裸小鼠右侧背侧皮下,而亲本K562细胞接种裸小鼠左侧背侧皮下,接种细胞数为1×10⁷细胞/只,观察肿瘤成瘤情况及生长特性,并比较裸小鼠移植瘤细胞和体外培养细胞对化疗药物的敏感性,同时利用RT-PCR和免疫组织化学染色对裸小鼠K562/A02移植瘤基因表型进行鉴定。结果:1)K562/A02裸小鼠移植瘤的成瘤率为100%,大约于第6～9天成瘤(体积>100mm³),敏感肿瘤生长速度与耐药肿瘤无明显差别;2)裸小鼠K562/A02移植瘤肿瘤细胞和体外培养原代细胞对阿霉素的IC₅₀分别为185.24μg/ml和235.25μg/ml,而K562/A02移植瘤肿瘤的IC₅₀分别为3.07μg/ml和3.26μg/ml;阿霉素治疗组能够明显减慢K562敏感移植瘤的生长,而对K562/A02耐药移植瘤的生长几乎无作用;3)K562/A02裸小鼠移植瘤肿瘤细胞具有mdr1/Pgp表达,而K562裸小鼠移植瘤肿瘤细胞则无mdr1/Pgp表达。结论:以K562/A02细胞建立的裸小鼠耐药移植瘤模型,仍保持近似体外的耐药活性和基因表型,为耐药机制和逆转研究提供了良好的体内模型。     

雷公藤红素逆转K562/A02细胞多药耐药的实验研究

目的探讨雷公藤红素逆转人慢性粒细胞白血病红白血病急变细胞株K562/A02多药耐药的效果。方法采用CCK-8法测定细胞的药敏性及耐药逆转性,应用流式细胞术检测细胞内ADM浓度、P-gp蛋白表达。结果雷公藤红素对K562/A02、K562的半数抑制率浓度（IC50）分别为（295.58±23.288）μmol/L、（411.59±26.551）μmol/L。K562/A02细胞对ADM的耐药性是K562细胞的79.78倍。细胞毒剂量的雷公藤红素作用后,ADM对K562/A02细胞的IC50显著下降（P〈0.05）,逆转倍数为117.860倍。细胞毒剂量（IC50）和非细胞毒剂量（IC10）的雷公藤红素处理后的K562/A02细胞内的ADM浓度显著增加（P〈0.05）,增加倍数分别为1.537倍和1.102倍。雷公藤红素能明显下调K562/A02细胞的P-gp表达。结论雷公藤红素对逆转K562/A02细胞的耐药性有一定的作用,其机制可能与下调P-gp表达有关。     

环孢霉素A、他莫昔酚对耐药细胞系K562／DOX多药耐药逆转作用的研究

目的 寻找有效的多药耐药联合逆转剂。方法 以他莫酚与环孢霉素A作为耐药逆转剂,采用MTT法进行体外药物敏感试验,观察他莫昔酚与环孢霉素A对多药耐药白血病细胞株K562／DOX的药物敏感性的影响。结果 他莫昔酚与环孢霉素A均可增强阿霉素（DOX）对K562／DOX的细胞毒作用,两者有联合协同作用,逆转倍数为单用药的9倍,超过单用2倍剂量的逆转效果。结论 他莫昔酚与环孢霉素A都是有效的多药耐药逆转剂,两者联合的协同作用更为显著。     

反义ras基因增强足叶乙甙对白血病K562细胞的诱导凋亡作用

目的 研究ras p21蛋白在bcr-abl p210蛋白抗凋亡信号传导通路中的作用。方法 应用逆转录病毒载体pLXSN将反义N－ras1 cDNA转导到K562细胞系中后，通过足叶乙甙对细胞进行诱导凋亡。结果 转导反义N－ras1 cDNA的K562细胞内N－ras p21表达下降。反义N－ras转民细胞较对照细胞K562易发生凋亡，对药物的敏感性显著增高。结论 ras p21蛋白是bcr-abl p210蛋白介导抗凋亡信号的重要的下游蛋白，阻断该蛋白的功能有可能成为治疗人类慢性髓性白血病的1个选择点。     

环孢霉素A逆转白血病耐药细胞系K562／VCR耐药性的研究

为寻找克服Ｐ－糖蛋白介导肿瘤多药耐药的途径。选择环孢霉素Ａ（ＣｓＡ）作为耐药逆转剂,分别采用台盼蓝拒染法、ＭＴＴ法和免疫组化法分析ＣｓＡ对人白血病细胞株的毒性及逆转效果,观察ＣｓＡ及长春新碱（ＶＣＲ）对Ｋ－５６２／ＶＣＲ生长的抑制作用及检测Ｋ５６２／ＶＣＲ细胞膜Ｐ－ｇｐ的表达情况,结果显示,ＣｓＡ在非毒性剂量浓度４μｇ／ｍｌ以下能逆转细胞耐药,与ＶＣＲ合用能抑制Ｋ５６２／ＶＣＲ生长;Ｋ５６２／ＶＣ