单核细胞增生性李斯特菌PCR快速检测方法的建立及在朝阳区大中型宾馆食品卫生监测中的应用

目的:通过扩增iap基因PCR法建立快速检测单核细胞增生性李斯特菌(Lm)方法.方法:用PCR法扩增iap基因来检测Lm标准菌株,并应用于朝阳区大中型宾馆的食品监测中.结果:将Lm、英诺克李斯特及其他13株非李斯特标准菌株同时进行PCR,仅Lm出现特异性条带,而其他菌株均未出现特异性片段,表明所扩增的iap基因约700 bp的DNA片段对Lm具有较高的特异性.PCR法对Lm纯培养物的检测限达106cfu/ml.采用该法对朝阳区大中型宾馆160件食品样品检测,5份样品呈阳性且均来源于B级餐厅,该结果与传统的生化鉴定方法完全一致.结论:扩增iap基因的PCR法对Lm的鉴定具有特异性强、灵敏度高、速度快和易操作等优点,可用于食品Lm分离.朝阳区部分大中型宾馆的食品卫生监督仍有待加强.     

PCR法鉴定单核细胞增生李斯特菌

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes，Lm)是一种人畜共患病的病原菌。Lm是最重要的食源性病原体之一，主要污染肉类、乳制品和蔬菜等。Lm鉴定方法包括传统的分离鉴定法、免疫学鉴定方法等。分离培养鉴定法比较简单，但是操作烦琐、耗时长，不适合日常对于食品的检测。Lm免疫学检测操作简便，可在同一时间内检测大量样品，但由于菌体及鞭毛抗原交叉反应的存在，难以进行李斯特菌种间特异性鉴别。PCR法具有特异性强、灵敏度高和速度快等优点。     

单核细胞增生李斯特菌研究进展

单核细胞增生李斯特菌(Lm)是一种重要的食源性致病菌,全国各地都对Lm在食品中的污染情况进行调查,建立简单快速、具有良好的稳定性和重复性、灵敏度高、特异性强的检测方法显得非常重要。本文就Lm的病原学、流行病学及检测方法等的研究进展进行介绍。     

能力验证试验单核细胞增生李斯特氏菌分离与鉴定

目的能力验证是对实验室检测能力和管理状况进行客观检验的有效方法[1],能力验证活动对完善和强化实验室质量管理体系,增强和提高实验室的竞争力具有重要的意义[2]。方法 GB4789.30-2010食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验。结果 mini VIDAS检测、荧光PCR检测结果阳性,API、溶血试验等鉴定为单核细胞增生李斯特氏菌。结论CNAS对该实验室检测样品能力验证试验结果结论为满意。     

两种方法鉴定单核细胞增生李斯特氏菌比较研究

<正>单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病病原菌,被列为目前4大食源性致病菌之一,存在于肉类、蛋类、禽类、海产品及即食食品等,对该菌的检测多年来沿用传统的分离培养生化鉴定。本实验室通过经传统方法结合API-Listeria与miniVIDAS检测技术对一定量菌株作比较,结果miniVIDAS检测技术更加快速、简便、特异、灵敏,可用于食源性突发公共卫生事件及大批量样品中致病菌的快速鉴定,是对传统方法的有效补充。     

单核细胞增生李斯特菌生物学研究进展

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)隶属于李斯特菌属,根据《伯杰氏鉴定细菌学手册》第9版,将李斯特菌属分为7种:单核细胞增生李斯特菌、伊氏李斯特菌、无害李斯特菌、威氏李斯特菌、利斯氏李斯特菌、格氏李斯特菌、默氏李斯特菌。原隶属于李斯特菌属的反硝化李斯特菌已成为一个新属,称为琼斯菌属。对人和动物具有致病力的有LM和伊氏李斯特菌,其余均为非致病型。此外,郭仰霖等[1]研究发现一种产H2S型李斯特菌,对动物具有高度致死性,牲畜病死率高达98·48%,对人存在潜在性威胁。1生物学特性1.1形态与染色李斯特菌(以下简称…     

单核细胞增生李斯特菌检测技术研究进展

单核细胞增生李斯特菌是一种人畜共患病的病原菌。本文对当前检测方法：传统分离技术、显色培养基鉴定技术、数值分类鉴定与新型计数技术、免疫检测技术以及分子检测技术作了简要概述；指出了单核细胞增生李斯特菌传统检测耗时，免疫学检测单克隆抗体制备困难，分子检测易产生假阴性和假阳性等若干问题；最后对检测技术未来的发展作了展望。     

进口三文鱼单核细胞增生李斯特菌污染检测

目的对2003~2006年由北京口岸挪威进口的三文鱼进行单核细胞增生李斯特菌污染情况监控,并对分离的单核细胞增生李斯特菌进行血清分型。方法采用美国食品药品管理局颁布的检测方法对单核细胞增生李斯特菌进行分离和血清分型。结果挪威三文鱼的单核细胞增生李斯特菌的检出率为1.2%~6.3%,在2003~2006年呈下降趋势;血清分型结果显示,分离自三文鱼的单核细胞增生李斯特菌的血清型主要是1/2a、1/2b和4b型,分别占分离菌株的85%,6%和6%。结论首次对分离自挪威三文鱼的单核细胞增生李斯特菌进行血清分型,所分离的菌株中97%是引起人类李斯特菌病的菌株。     

单核细胞增生李斯特菌感染的临床特征

目的 分析单核细胞增生李斯特菌感染患者的临床特征及治疗情况。方法 回顾性收集2016年1月-2018年12月某院单核细胞增生李斯特菌感染患者的临床资料,分析患者的临床特征、实验室检查、抗菌药物使用方案及预后等。结果 15例单核细胞增生李斯特菌感染患者,其中非妊娠成年人大多为65岁以上且有基础疾病的老年人;14例败血症患者（其中1例合并化脓性脑膜炎）,1例化脓性脑膜炎患者。败血症成年患者均有发热,新生儿仅1例有发热;2例化脓性脑膜炎患者除发热外均有头痛、呕吐等神经系统症状。15例患者中大部分患者白细胞、C反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）均升高,2例化脓性脑膜炎患者脑脊液检查明显异常。治疗上予以单用青霉素或美罗培南,或者两种药物联合使用,14例患者好转,1例患者病情加重。结论 单核细胞增生李斯特菌主要引起新生儿、孕妇、老年人、免疫力低下人群感染,感染类型常见血流感染或化脓性脑膜炎,青霉素、氨苄西林、美罗培南和复方磺胺甲口恶唑可用来经验性治疗单核细胞增生李斯特菌感染。     

深圳南山区食品中单核细胞增生李斯特菌检测

目的了解各类食品中单核细胞增生李斯特菌的污染情况。方法以GB/T4789.30-2003方法为基础,分离培养改用PALCAM培养基,生化鉴定改用API生化试剂条,结合VIDS免疫荧光或实时荧光PCR等试验进行确证。结果从生肉及水产品中共检出5株。结论PALCAM-Listeria分离培养基和API Listeria生化鉴定试剂条在细菌的分离及鉴定中起关键作用,实时荧光PCR和VIDS试验从基因学和免疫学上确证。     

单增李斯特菌鉴定方法比较研究

[目的]对单增李斯特菌鉴定方法进行研究。[方法]分别用API检测方法、16SrRNA序列分析法和焦磷酸测序法对17株单核细胞增生李斯特菌进行检测。[结果]3种方法均能准确鉴定单增李斯特菌。[结论]焦磷酸测序方法检测单增李斯特菌特异性强、经济、操作简便、检测快速,为单增李斯特菌的快速、高通量检测提供了一种新的手段。     

食源性单核细胞增生李斯特菌的自动化核糖体基因分型

[目的]为了解我国食品来源的单核细胞增生李斯特菌(Listeria Monocytogene,LM)的遗传物质多态性特征,探索LM鉴定及溯源新方法. [方法]运用自动化的核糖体基因分型系统(RiboPrinter),用EcoRI酶,对我国食品污染物监测网来源的67株LM进行了分子分型研究. [结果]67株菌均被鉴定为LM;并获得了13种RiboPrinter 核糖体基因条带型,除2种被系统判定为新条带型,另外11种分别与杜邦数据库中的DUP-1038、DUP-1039、DUP-1042、DUP-1044、DUP-1045、DUP-1052相似. [结论]RiboPrinter分型结果为建立我国LM分子分型数据库积累了一定的数据和经验,但由于菌株的来源地及数量都有限,因此尚不能看出核糖体基因型是否有明显的地域分布特征.     

饮食业单核细胞增生性李斯特菌污染状况分析

[目的]了解饮食业冷藏设备及食品中单核细胞增生性李斯特菌的污染情况,为制订预防措施提供依据.[方法]采集53家饮食经营单位冷藏食物及冰箱冷藏室内表面涂抹拭子共293份样本,按国标法分离鉴定.[结果]冷藏室内表面涂抹拭子200份样本,单增李斯特特菌检出阳性率为4.00%.3类冷藏食品共93份样本,阳性率为3.23%[结论]饮食业冰箱及食品存在交叉污染,控制冷藏温度可有效防止单增李斯特菌污染.     

李斯特菌侵染Vero细胞诱发磷脂酶D活性的变化

目的观察在李斯特菌侵染下Vero细胞内磷脂酶D(PLD)活性的变化,为研究PLD在李斯特菌内化侵入Vero细胞过程中的具体激活机制及功能提供一定的理论基础。方法将李斯特菌以不同侵染比(MOI,细菌数:细胞数)及不同侵染时间刺激Vero细胞,应用侵染实验和PLD活性测定方法观察李斯特菌侵染量及Vero细胞内PLD活性的变化。结果当MOI为100:1时李斯特菌侵染量为(99.0±2.6)个,当MOI增加到200:1、400:1时,李斯特菌侵染量分别增加到(150.0±2.6)个和(220.0±1.0)个,并且当MOI值为200:1和400:1时与Vero细胞内基础活性相比,PLD活性均升高近2倍(P0.05)。当侵染时间为30min时,李斯特菌的侵染量为(102.0±3.0)个,当侵染时间增加到60min和90min时,李斯特菌侵染量分别增加到(185.0±1.7)个和(346.0±4.6)个。李斯特菌侵染15min后,与Vero细胞内PLD基础活性相比升高了大约160%(P0.05);随着剌激时间的延长,PLD的活性随之升高。结论建立了李斯特菌内化侵入Vero细胞的模型,证实李斯特菌内化侵入Vero细胞对其吞噬的过程中确实伴有PLD的激活。     

3种梅毒检测方法在献血筛检中的应用效果评价

[目的]对RPR、ELISA和PCR 3种梅毒检测方法在献血筛检中的应用效果进行评价,选择适合血站大规模血液筛检的梅毒检测方法。[方法]用RPR法和ELISA法对32 327份自愿无偿献血者血液标本同时进行梅毒检测,对任意一种方法检测出的阳性标本,再使用荧光PCR法和TPPA法进行检测。[结果]在32 327份标本中,RPR阳性108份,ELISA阳性174份;201份RPR阳性和/或ELISA阳性的标本,PCR全部阴性;108份RPR阳性标本中TP-PA阳性81份,174份ELISA阳性标本中TPPA阳性144份。[结论]综合考虑方法学和实际操作等因素,3种梅毒检测方法中,ELISA目前最适合血站大规模的血液筛检。     

产单核李斯特菌的改良分子信标荧光PCR-磁捕获快速检测体系的建立

[目的]建立改良分子信标荧光PCR-磁捕获快速检测产单核李斯特菌(LMO)的体系,应用于食品中LMO的污染状况调查及食物中毒快速诊断. [方法]根据GenBank公布的LMO hlyA基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立改良分子信标荧光PCR检测体系.运用磁捕获材料对PCR检测阳性的增菌液进一步处理后划平皿做分离培养. [结果]改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为110 fg,菌液灵敏度为99 cfu/ml或4 cfu/PCR反应体系,无交叉反应.以此反应体系检测28株LMO,均出现特异的荧光信号.对228份食品进行LMO检测,8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性.用磁捕获材料处理此8份增菌液,全部细菌培养阳性,高于国标法的6份阳性.[结论]改良分子信标一实时PCR反应体系快速、灵敏度高,特异性强,运用磁捕获试剂能有效提高培养阳性率.应用该检测系统能提高LMO的检出率和准确性.该系统可应用于LMO食品污染状况调查及食物中毒的快速诊断.     

三种方法组成的结核病快速诊断技术的评价

目的评价浓缩涂片法、实时荧光定量PCR法、BACTEC MGIT-960培养法3种方法组合模式对结核病快速诊断的应用价值。方法应用浓缩涂片法、实时荧光定量PCR法、BACTEC MGIT-960培养法3种方法组合测定1 628份临床标本,并与直接涂片法、改良罗氏培养法结果进行比较。结果组合法的阳性检出率36.30%,显著高于直接涂片法的20.15%,差异有显著性(2=52.4,p<0.01);组合法的阳性检出率高于改良罗氏培养法30.71%,差异有显著性(2=5.7,p<0.05),而且检测时间明显缩短;同时组合法的阳性检出率均高于其中单一方法的检测结果,检测结核分枝杆菌的敏感度为99.66%,特异性为99.81%,准确性为99.88%。结论浓缩涂片法、实时荧光定量PCR法、BACTEC MGIT-960培养法3种方法组合具有很高的敏感性和特异性,用于结核病早期快速诊断有重要的临床价值。     

自贡市食品中单核细胞增生李斯特菌污染状况的调查及药敏结果分析

[目的]调查自贡市食品中单核细胞增生李斯特菌(LM)污染状况及药敏情况。[方法]检测按国标GB/T4789.30-2003程序进行;药敏试验采用Kirby-Bauer法。[结果]2005~2007年于253份食品中共检出LM21株;总污染率为8.3%(21/253)。样品中生畜肉、生禽肉、熟肉及海水产品的污染率分别为18.3%(15/82)、3.4%(2/59)、4.4%(3/68)、2.3%(1/44)。对15株LM进行了18种抗生素的药敏试验,其中对庆大霉素、链霉素、左氟沙星、先锋V、四环素、万古霉素、青霉素G、红霉素、复方新诺明等全部敏感;对多粘菌素B、氯霉素等部分耐药。[结论]用CHROMAGAR显色培养基分离LM,是一种理想途径,可明显提高检测效率。进行食品中LM污染卫生学调查,掌握该菌在主要食品中的污染分布特点及敏感药物,为预防与治疗因LM引发食源性疾病或食物中毒的潜在危险及食品安全管理提供科学依据。     

秦皇岛市首次从豆制品等食品中检出单核细胞增生李斯特菌

[目的]对秦皇岛市食品中单核细胞增生李斯特菌的污染状况进行监测与分析。[方法]用LB增菌液增菌后,接种青岛海博显色培养基进行分离,动力试验、溶血实验及API生化鉴定。[结果]从120份食品中检出单核细胞增生李斯特菌9株,总检出率为7.5%,其中从豆制品中检出2株,检出率为20%,速冻米面食品中检出4株,检出率为20%,水产品中检出3株,检出率为15%,其他样品未检出。[结论]我市首次从豆制品水产品速冻米面食品中检出单核细胞增生李斯特菌,且超市食品中该菌污染严重,应对超市食品进行重点监测。     

1例冷藏猪脑中2种致病菌的分离及系统发育分析

[目的]为了解生肉类食品的安全性,针对火锅城食用生肉类食品中的单核细胞增生性李斯特菌及金黄色葡萄球菌进行检测。[方法]按照GB4789.30-2008、GB4789.10-2008对相关菌株进行检测。[结果]从1例火锅食用冷藏猪脑中同时分离出2种致病菌,单核细胞增生性李斯特菌(简称100105A)及金黄色葡萄球菌(简称100105B)。并对菌株100105A、100105B其形态特征、生理生化鉴定以及对菌株100105A进行了16S rDNA序列进行了分析,确定了其系统发育关系,并研究了100105A菌株在10℃,4℃,-10℃低温下的生长情况。该菌株在10℃,4℃,乃至-10℃下,显示出较强的繁殖能力。[结论]冰箱冷藏保存,对食品安全性也存在一定风险。