IN VITRO STUDY ON CRYOPRESERVATION OF PERIPHERAL BLOOD STEM CELLS WITH UNCONTROLLED FREEZER

In recent years, auto-peripheral blood stem cell transplantation (APBSCT) has been used extensively in the treatment of hematological malignancies and various solid tumors. However, in the APBSCT processing, blood stem cell (APBSC) the quality of auto-peripheral has become one of the most important factors which directly influence the success of APBSCT. Therefore, how to decrease the degree of cryoinjury in the cryoprocess is still a question to be solved. More attention was paid on t…     

High-dose chemotherapy with autologous peripheral blood stem cell support in children with malignant diseases

The advanced malignant diseases are rarely responsive to regular chemotherapy. High-dose chemotherapy supported by infusion of autologous peripheral blood stem cell (PBSC) has already shown to have significant activity in these diseases[1]. Nineteen children with advanced malignant diseases being hospitalized in our hospital received high-dose chemotherapy supported by autologous PBSC between June 1992 and February 2005. MATERIALS AND METHODS Patient Characteristics Nineteen childr…     

利妥昔单抗净化动员B细胞非霍奇金淋巴瘤外周血干细胞的初步研究

 目的 观察利妥昔单克隆抗体（Rituximab,利妥昔单抗）对B细胞非霍奇金淋巴瘤（NHL）患者外周血干细胞（PBSCs）净化动员的作用。方法 8例CD+20 B细胞NHL患者,在应用CHOP类化疗±利妥昔单抗4～6疗程诱导／巩固治疗后进行大剂量环磷酰胺（HD-CTX）+粒细胞集落刺激因子（G-CSF）联合利妥昔单抗（375 mg·m-2·d-1,第-1,7天）体内净化动员PBSCs。观察利妥昔单抗副反应、骨髓抑制期及相关并发症、PBSCs采集时间、数量以及采集物肿瘤标志物基因等。结果 在外周血干细胞动员过程中仅1例患者发生轻度利妥昔单抗相关的皮疹。PBSCs平均采集时间为CTX应用后（11.6±1.0）d,中位采集次数2（1～3）次。采集物平均单个核细胞（MNC）（3.4±1.0）×108／kg,平均CD+34细胞数（3.6±1.7）×106／kg。5例完成移植患者中3例移植后IgH／TCR转为阴性,1例治疗前后均为阴性,1例早期复发。4例无病生存。结论 利妥昔单抗不影响B细胞NHL患者PBSCs的动员效果,安全性好,并能加强体内净化作用。     

健康供者外周血造血干细胞动员采集最佳时机的探讨

目的探讨自身对照外周血造血干细胞的动员和采集的最佳采集时间。方法10例健康供者应用自身对照设计方法,分别在用rhG-CSF第4天或第5天后2h及4h分2组采集,比较2次采集的细胞浓度(MNC及CD3+4)。结果用rhG-CSF后4h组采集的细胞浓度比2h组的高。结论5~10μg·kg-·1d-1rhG-CSF动员外周血干细胞时,第4天或第5天采集以用药后4h采集干细胞有较好的动员效率和较合理的采集时间-价值-效益关系。     

自体外周血造血干细胞(APBSC)动员采集及冻存的研究

目的评价自体外周血造血干细胞(APBSC)的动员、采集及冻存方法。方法18例病例中，恶性淋巴瘤16例(NHL14例，HD2例)，睾丸肿瘤2例。病人行诱导化疗完全缓解后，采用大剂量联合化疗加小剂量粒细胞集落刺激因子(G—CSF)进行外周造血干细胞动员。用CS-3000，Plus血细胞分离机采集外周血造血干细胞，将分离的单个核细胞(MNC)经程序降温仪降至-80℃后，冻存-196℃液氮。冷冻前及解冻后分别行MNC计数和粒单系祖细胞集落(CFU—GM)培养。结果动员后外周血WBC及MNC总数明显增加，与动员前比较，差异有显著性。冷冻前后，MNC计数，CFU—GM集落数无明显差异。结论大剂量联合化疗加小剂量G—CSF动员方案是安全有效的。冷冻保存APBSC及复苏过程对细胞损伤较小，值得推广使用。     

长期冷冻保存的外周血干细胞采集物形成CIK的能力及其生物学活性的研究

目的:观察是否能从长期深低温冷冻保存的外周血干细胞采集物(PBSC)大量诱导出具有细胞毒活性的CIK细胞。方法:10例液氮中保存3~6年的PBSC标本作为实验组,7例新鲜的PBSC标本作为对照组。PBSC标本去除红细胞后用IFN-γ、CD3单抗、IL-2联合诱导CIK细胞。14天后收获细胞,检测活力、扩增倍数。流式细胞学检测CIK细胞免疫表型,MTT法检测其细胞毒活性。结果:实验组和对照组培养后CIK细胞分别扩增了41·8倍和22·8倍,活化后CD8 T细胞比例升高(P<0·05),但两组的NKT细胞(CD3 CD16/56 T细胞)纯度活化后并没有升高。两组CIK细胞对K562细胞株的杀伤作用无显著性差异。结论:从长期冷冻保存的外周血干细胞采集物中可以诱导出具有细胞毒活性的CIK细胞。     

血细胞分离机不同采集程序采集儿童自体外周血造血干细胞效果观察

目的:探讨COBE Spectra血细胞分离机不同采集程序采集儿童自体外周血造血干细胞的效果。方法:回顾性分析苏州大学附属儿童医院2018年7月至2020年1月采用COBE Spectra血细胞分离机单个核细胞（MNC）或全自动外周血干细胞（AutoPBSC）程序采集自体外周血造血干细胞的10例患儿临床资料,年龄3~10岁,体质量15~31 kg。MNC组5例,AutoPBSC组5例。结果:共采集自体外周血造血干细胞25次,平均采集2.5次（1~4次）,MNC组采集10次,AutoPBSC组采集15次。采集前干细胞数[中位数（范围）]MNC组为19.3/μl（3.5~129.0/μl）,AutoPBSC组为9.4/μl（2.2~38.7/μl）;单次采集获得CD34 +细胞数MCN组为1.22×10 6/kg（0.18×10 6/kg~6.30×10 6/kg）,AutoPBSC组为0.85×10 6/kg（0.13×10 6/kg~2.64×10 6/kg）。相关性分析显示,采集获得CD34 +细胞数和采集前干细胞数呈正相关（AutoPBSC组： r=0.921, P<0.01;MNC组： r=0.833, P=0.003）。采集效率MNC组为5.4%（3.4%~11.2%）,AutoPBSC组为10.4%（4.7%~13.9%）,差异有统计学意义（ Z=2.163, P=0.031）。 结论:COBE Spectra血细胞分离机AutoPBSC程序采集儿童自体外周血造血干细胞的效果优于MNC程序。     

肺癌患者外周血淋巴细胞与癌细胞体外化疗药敏实验研究

目的　研究肺癌患者外周血淋巴细胞和癌细胞体外化疗药敏的相关性。方法　采用MTT法测定了 74例肺癌患者外周血淋巴细胞及其癌细胞对 15种临床常用化疗药物的敏感性。结果　肺癌患者外周血淋巴细胞与癌细胞对其中 12种化疗药的敏感性有很好的相关性 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　外周血淋巴细胞的体外化疗敏感性检测对肺癌的临床化疗药物的选择具有重要的参考价值。     

高龄血液恶性肿瘤患者自体外周血造血干细胞动员采集的临床研究

目的探讨高龄血液恶性肿瘤患者外周血干细胞动员采集的疗效及影响因素。方法对32例高龄患者和57例中青年患者经化疗＋生长因子动员后,使用CS3000Plus血细胞分离机（Baxter公司）进行外周血干细胞采集,并进行临床观察和分析。结果所有病例均采集成功。高龄患者动员获得单个核细胞（MNC）数为（6．47±7．04）×10^9／L,中青年患者获得MNC数为（10．89±9．50）×10^9／L,差异有显著性。高龄患者采集获得的MNC及CD34^＋细胞分别为（5．24±1．05）×10^8／kg和（2．74±1．04）×10^6／kg,中青年患者采集获得MNC及CD34^＋细胞分别为（6．71±2．62）×10^8／kg和（4．82±2．62）×10^6／kg,差异具有显著性。高龄患者在采集过程中不良反应发生率明显高于中青年患者。高龄患者与中青年患者移植后造血重建时间相当。结论做好采集前的充分准备,注意并发症的预防和处理,一般会成功地动员采集高龄患者自体外周血造血干细胞。     

Clinical outcome of peripheral blood stem cell support

Two clinical results of peripheral blood stem cell support are commonly considered: (1) the effect on hematopoietic recovery and (2) the effect on the underlying malignancy. The dynamics of hematopoietic recovery after autoiogous bone marrow transplantation and after autologous peripheral blood stem cell transplantation in a clinical setting are similar if no exogenous cytokines are administered and the peripheral stem ceils are collected while their numbers are not deliberately increased (mobilised). If mobilized peripheral stem cells are transplanted, hematopoietic recovery is accelerated. In some circumstances, patients who receive peripheral stem cell transplantation may experience an improved progression-free survival after high-dose therapy when compared with similar patients who receive autologous bone marrow transplantation. Explanations for such a survival advantage might include (1) a lower likelihood of occult tumor cells capable of restoring disease in peripheral stem cell autograft products than in bone marrow harvests, (2) a greater number of cytotoxic effector cells capable of destroying occult tumor ceils in the peripheral stem cell collections than in bone marrow harvests, and (3) a different and advantageous pattern of immunologic recovery following autologous peripheral stem cell transplant compared to autologous bone marrow transplant.     

环磷酰胺联合G-CSF动员慢性粒细胞白血病患者外周血造血干细胞

 目的 评价环磷酰胺（Cy）联合粒细胞集落刺激因子（G-CSF）动员慢性粒细胞白血病（CML）患者外周血造血干细胞的动员、采集效果及不良反应。方法 选择符合诊断的CML患者7例,无心、肺、肝、肾等重要脏器功能损害。动员方案为Cy+人基因重组粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）,于化疗后WBC降至1.0×109／L时开始用rhG-CSF,用CS3000 plus血细胞分离机采集干细胞,-80 ℃低温冰箱冻存,并作单个核细胞（MNC）计数及CD+34细胞测定。结果 Cy平均剂量为4.0（3.0 ~ 5.0）g,rhG-CSF的剂量均为300 μg／d,平均5.8（3 ~ 9）d;其中仅1例患者动员2次,余6例均动员1次;共采集2次,每次循环血量为10 ~ 13 L;采集的MNC达（2.94 ~ 5.45）×108／kg,CD+34细胞数达（2.15 ~ 6.59）×106／kg ;患者能耐受整个动员和采集过程,无一例因化疗的不良反应而中止动员;移植后全部患者均迅速恢复了造血功能。结论 Cy联合G-CSF的动员方案对CML患者是安全、有效的。     

外周血干细胞冻存的探讨

目的　对冻存外周血干细胞所用的冻存液配方 ,冻存温度 ,存放时间等作一探讨。方法　用血细胞分离机采集经化疗药物及G CSF联合动员的肿瘤患者外周血干细胞 ,用 10 %DMSO 自体血浆或 5 %DMSO 6%HES 4%人血清白蛋白作冷冻保护剂 ,分别于液氮中和 -80℃低温冰箱中冻存 ,不同时间复苏 ,检测细胞活性 ,CD3 4阳性比率 ,及CFU GM数 ,分析冻存效果。结果　冻存半年 ,液氮和 -80℃对于干细胞的冻存无明显影响 ,用 10 %DMSO 自体血浆作冻存剂 ,于 -80℃低温冰箱保存的细胞 ,活力达 ( 95 .7 /-5 .84) % ,单个核细胞回收率 ( 92 .2 5 /-9.3 2 ) % ,CD3 4阳性细胞回收率 ( 71.73 /-2 7.0 3 ) % ,CFU -GM回收率 ( 77.89 /-12 .3 1) %。 9例患者行自体外周血干细胞移植 ,平均CD3 4阳性细胞回输量为每公斤体重 1.46× 10 7,CFU GM为每公斤体重 3 .85× 10 5,回输后患者平均 17天恢复中性粒细胞 2 .0 g·l-1以上 ,恢复血小板 5 0 g·l-1以上。结论　应用经 -80℃低温冻存的 10 %DMSO 自体血浆冻存外周血干细胞进行自体移植是简单可行的。     

化疗联合单一剂量rhG-CSF用于自体外周血造血干细胞移植的临床研究

背景与目的:总结广东省干细胞多中心研究协作组自1999年6月至2001年12月间55例自体外周血造血干细胞移植治疗造血系统恶性疾病的资料,对化疗联合单一剂量rhG-CSF用于自体外周血造血干细胞移植前动员及移植后造血重建的效果进行研究和评价。方法:全部病例(急性髓细胞性白血病28例,急性淋巴细胞性白血病9例,非霍奇金淋巴瘤14例,其他4例)采用化疗+重组粒系集落刺激因子(rhG-CSF,格拉诺赛特)联合动员方案,其中白血病患者主要采用EA方案,恶性淋巴瘤患者主要采用以CTX为主的方案。rhG-CSF用量为250μg/d,WBC升至>4×109/L后,连续1～2天采集PBSC。移植后+3天开始使用rhG-CSF250μg/d,并观察造血重建情况。结果:动员所需的时间即自化疗开始至采集的平均时间为(18.08±3.63)天,rhG-CSF平均应用剂量为4.15μg·(kg·d)-1,应用时间平均7.12天。55例患者平均采集1.38次,采集到的MNC细胞数为(4.09±1.69)×109/kg,CD34+细胞平均值为8.5×106/kg,CFU-GM平均为(6.1±5.8)×105/kg。WBC恢复至>1.0×109/L及中性粒细胞绝对值>0.5×109/L的中位天数分别为10天和10.5天,全部移植患者均获满意的造血重建。结论:我们采用的EA和以CTX为主的化疗联合单一剂量rhG-CSF,是一种安全有效的动员自体外周血造血干细胞的方法,单一剂量rh     

Allogeneic transplants with peripheral blood progenitor cells: a report of six cases

Six patients with high-risk leukaemia received a myeloablative regimen followed by allogeneic peripheral blood progenitor cells transplantation (PBPCT) from an HLA-identical sibling donor. Donors received 10-12 pg/kg/day of G-CSF subcutaneously for 5 days. G-CSF was well tolerated except for moderate bone pain. Peripheral blood leukapheresis product contained 14 times, more CD34+ cells and approximately a log more of T lymphocytes than marrow grafts from normal donors. In the two first cases the leukapheresis product was partially depleted of T-lymphocytes using counterflow centrifugation. No growth-factors were administered post-transplant. GVHD prophylaxis consisted of cyclosporin A (CyA) in one case, and CyA and methotrexate in five cases. All patients engrafted with a neutrophil count reaching more than 0.5 × 10⁹/L by day 12 to 21 post-transplant and a platelet count above 20 × 10⁹L by day 6 to 41 post-transplant. Acute GVHD was clinical grade 0 (n = 2). I (n = 1), II (n = 1), grade III (n = 1) and grade IV (n = 1). One case presents an extensive chronic cutaneous GVHD and is currently being treated with methylprednisolone. In conclusion, allogeneic transplants using PBPC can be performed safely. This may result in a rapid neutrophil and platelet engraftment, without an apparent increased risk of GVHD.     

外周血CD34 +细胞计数对外周血干细胞采集时机选择及结果的影响

目的:探讨外周血造血干细胞动员过程中外周血CD34 +细胞计数的变化趋势及其对采集时机选择和采集结果的影响。 方法:收集2012年4月至2017年3月在山西省肿瘤医院行自体外周血造血干细胞动员的62例血液病患者临床资料,采用化疗联合粒细胞集落刺激因子（G-CSF）的动员方案,监测外周血及采集物中白...     

异基因外周血干细胞移植后外周血出现幼稚粒细胞与白血病复发的关系

目的了解异基因外周血干细胞移植（allo-PBSCT）后白血病复发与外周血幼稚粒细胞的关系。方法97例白血病患者经allo-PBSCT治疗,于14、30、60、90、120、180d及1年以后骨髓随访时同时观察外周血幼稚粒细胞出现情况,分析与白血病复发的关系。结果97例中,15例发生白血病复发。在30d及其以后外周出现幼稚粒细胞的57例中,复发14例,复发率24．6％,而30d及其以后外周血未出现幼稚粒细胞者的40例中仅有1例复发,复发率2．5％（P〈0．05）。复发与不复发者移植物抗宿主病（GVHD）差异无统计学薏：义（P〉0．05）。结论白血病复发与移植后外周血幼稚粒细胞有关．复发后治疗难度大,预后差。     

rhIL-2对人骨髓CFU-GM与CFU-E和BFU-E的影响

目的:为了探索rhIL-2对人骨髓造血干祖细胞体外增殖的影响。方法:本文采用甲基纤维素体外半固体培养法。结果:证明了50～1000U/ml rhIL-2单用时对人骨髓造血祖细胞的CFU-GM、CFU-E及BFU-E无直接刺激增生作用,当与GM-CSF联合应用时,100～400U/ml rhIL-2其CFU-GM集落形成率明显高于单用GM-CSF(100U/ml)的对照组(P<0.05),当与EPO(2U/mi)联合应用时其CFU-E,及BFU-E集落形成率也明显高于单用EPO对照组(P<0.05),而1000U/ml rhIL-2其三种集落形成数目呈下降趋势,可能有抑制作用。结论:以上结果说明100～400U/ml rhIL-2可应用于协同GM-CSF及EPO体外扩增骨髓干/祖细胞来进行骨髓移植。     

外周血造血干细胞移植治疗恶性浆细胞病19例临床分析

 目的 评价外周血干细胞移植（PBSCT）治疗恶性浆细胞病的安全性和有效性。方法 1999年3月至2005年8月，用PBSCT治疗恶性浆细胞病19例，其中自体PBSCT（APBSCT）治疗多发性骨髓瘤（MM）16例、华氏巨球蛋白血症（WM）1例，异基因PBSCT（allo-PBSCT）治疗MM 2例。结果 17例APBSCT患者均重建造血，中性粒细胞植入（≥0.5×109／L）和不需血小板输注（≥20×109／L）的时间分别为13（9~24）d和13（8~25）d；移植后完全缓解（CR）或接近完全缓解（nCR）7例（41.2 %），部分缓解（PR）9例（52.9 %），总有效率为94.1 %；平均随访30个月，复发或进展10例，其中死亡7例，中位无进展生存（PFS）期和总生存（OS）期分别为18（2 ~ 69）个月和49（14 ~ 75）个月，3年PFS率和OS率分别为39.4 %和75.5 %。移植相关毒副反应主要为发热9例（52.9 %）、口腔溃疡或糜烂5例（29.4 %）、腹泻4例（23.5 %）、肝功能异常3例（17.6 %）、带状疱疹和肺部巨细胞病毒感染各1例（5.9 %），随着造血重建和对症治疗后均完全恢复。2例allo-PBSCT患者中，1例获CR并已无病生存41个月，1例于移植后7个月死于重度移植物抗宿主病（GVHD）。结论 PBSCT是治疗恶性浆细胞病的有效方法；如何减少APBSCT的复发和提高allo-PBSCT的安全性尚需进一步研究。     

环磷酰胺或足叶乙甙联合粒细胞集落刺激因子动员自体外周血造血干细胞的对照研究

背景与目的:通过动员采集获得高质量的自体外周血造血干细胞(autologousperipheralbloodstemcell,APBSC)是造血干细胞移植成功的关键,环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)联合重组人粒细胞集落刺激因子(recombinedhumangranulocytecolony-stimulatingfactor,rhG-CSF)是APBSC经典的动员方案,足叶乙甙(etoposide,VP-16)联合rhG-CSF是近年来应用的另一个动员方案。本研究的目的是比较上述两种动员方案对恶性淋巴瘤和生殖细胞肿瘤患者APBSC的动员效果。方法:共有52例恶性实体瘤患者,其中CTX方案组26例,剂量为CTX3.5g/m2加rhG-CSF5μg·kg-1·d-1;VP-16方案组26例,VP-16的剂量随机采用1000mg/m2或1500mg/m2加rhG-CSF5μg·kg-1·d-1。两组均在白细胞(whitebloodcell,WBC)降至最低点时开始皮下注射rhG-CSF,直至采集结束前一天。当CTX组WBC恢复到2.5×109/L、VP-16组WBC恢复到5.0×109/L以上时开始连日采集APBSC,当累计采集的单个核细胞(mononuclearcell,MNC)≥5×108/kg或CD34+细胞≥2×106/kg时停止采集。患者经预处理后回输采集到的APBSC。比较两组动员采集过程中的血液学指标变化、采集细胞数量、造血重建时间、不良反应等。结果:CTX组患者化疗后外周血中WBC和血小板(platelet,PLT)降至最低值的时间明显早于VP-     

异基因外周血造血干细胞移植联合骨髓移植治疗白血病30例

 目的　观察异基因外周血干细胞移植联合骨髓移植对白血病的疗效。方法　白血病患者30例,平均年龄32.6岁,其中急性髓细胞白血病（AML） 11例,急性淋巴细胞白血病（ALL） 14例,慢性粒细胞白血病（CML）5例,供者均为HLA相合同胞,动员方案为每天G-CSF 5 μg／kg,共5 d,并于外周血干细胞回输当天采集供者骨髓300 ml回输;预处理方案采用Bu／Cy,移植物抗宿主病（GVHD）预防采用环孢素A（CsA）联合甲氨蝶呤（MTX）、吗替麦考酚酯（MMF）。结果　回输外周血单个核细胞（5.13±2.6）×108／kg,骨髓单个核细胞（1.3±0.6）×108／kg,30例患者均成功植活,其中中性粒细胞＞0.5×109／L的时间为（12.1±3.25）d,血小板＞0.5×109／L的时间为（14.0±5.33）d;Ⅰ～Ⅱ度aGVHD发生率为40.0 %（12／30）,Ⅲ～Ⅳ度发生率3.3 %（1／30）,cGVHD发生率为43.3 %（13／30）,严重cGVHD发生率为3.3 %（1／30）;2年无病生存率达72.0 %。结论　异基因外周血造血干细胞移植联合骨髓移植是治疗白血病的有效方法,并有可能减少重度急、慢性GVHD的发生。