碱性成纤维细胞生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（ ｂＦＧＦ）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤( ＨＩＢＤ）的保护作用。方法 将 ３２只 ７日龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠分为４组：假手术组、ＨＩＢＤ组、 ｂＦＧＦ治疗组（分大剂量组１７．５ μｇ／ｋｇ和小剂量组１０ μｇ／ｋｇ）,每组 ８只。后３组动物制成 ＨＩＢＤ模型,给予治疗组大鼠连续 ７ ｄ腹腔注射 ｂＦＧＦ, ＨＩＢＤ组腹腔注射等体积生理盐水作为对照。全部大鼠于术后１４ ｄ处死,对脑纹状体、皮质的光镜下结构、乙酰胆碱酯酶（ＡｃｈＥ）、酸性磷酸酶（ＡＣＰ）活性变化进行观察和比较。结果 新生大鼠 ＨＩＢＤ后皮质、纹状体有选择性神经元坏死及胶质细胞增生, ｂＦＧＦ治疗组上述病变明显减轻; ＨＩＢＤ后纹状体、皮质神经元 ＡｃｈＥ活性明显下降(－～＋）, ｂＦＧＦ组 ＡｃｈＥ活性（＋～＋＋）较ＨＩＢＤ组恢复快; ＨＩＢＤ后纹状体神经元 ＡＣＰ活性明显增高（＋＋＋）, ｂＦＧＦ组 ＡＣＰ活性（＋＋）变化程度小于ＨＩＢＤ组。但大、小剂量ｂＦＧＦ治疗组未见明显差异。结论 ｂＦＧＦ能通过影响受损神经元的酶物质代谢而加快ＨＩＢＤ新生大鼠神经元的修复。     

1-氨基-3，5二甲基金刚烷盐酸对脑缺氧缺血新生大鼠热休克蛋白70基因表达的调控研究

围产期窒息所致缺氧缺血脑损伤 (ＨＩＢＤ)为新生儿期危害最大的常见病 ,常导致新生儿死亡和幸存者严重的后遗症。近来报道非竞争性Ｎ 甲基 Ｄ 天冬氨酸 (ＮＭＤＡ)受体拮抗剂 1 氨基 3 ,5二甲基金刚烷盐酸 (商品名美金胺 )(Ｍｅｍａｎｔｉｎｅ)对ＨＩＢＤ具有脑保护作用[1] 。本研究拟对缺氧缺血 (ＨＩ)新生大鼠对照应用美金胺 ,通过观察热休克蛋白(ＨＳＰ) 70基因表达的变化 ,进一步从分子水平评估美金胺对脑的保护效果。材料和方法1 实验对象 :7日龄ＳＤ鼠 ,无性别选择 ,体重 10～ 14ｇ,分成正常对照 (ＮＯＲＭ)组、ＨＩ组以及ＨＩ后给药组 ,每组 15只。2 ＨＩＢＤ模型的建立 :结扎 7日龄新生鼠的右颈总动脉 ,置于自行研制的缺氧房[2 ] 内 ,在 37℃、8%氧浓度下缺氧 2ｈ ,返回母鼠身边喂养。3 ＨＳＰ70基因的检测方法 :(1)制备标本 :新生鼠分别于ＨＩ后 2、2 4、48、72ｈ及 7ｄ断头处死。正常鼠亦在相应时段断头处死。无菌操作下分别取右脑皮质约 5 0ｍｇ和海马组织约 2 5ｍｇ ,冻存于 - 80℃冰箱内备用。 (2 )ＨＳＰ70基因的检测 :采用柱离心式组织 ...     

缺氧缺血脑组织前列腺素2/血栓素A2的变化及MK-801、硫酸镁的保护作用

新生儿缺氧缺血性脑病 (ＨＩＥ)严重危害新生儿的健康乃至生命 ,本研究检测脑组织中前列环素 (ＰＧＩ2 )及血栓素Ａ2(ＴＸＡ2 )的含量 ,探讨二者对缺氧缺血脑组织的影响 ,并用ＭＫ 80 1等药物治疗新生大鼠ＨＩＥ ,观察对ＰＧＩ2 /ＴＸＡ2 的影响。材料40只新生 7ｄ大鼠体重 10～ 2 0ｇ ,雌雄不分 (购自本校动物中心 )。ＭＫ 80 1;硫酸镁 (天津氨基酸制药厂 ,批号9810 13) ;地塞米松 (Ｄｅｘ) (南京第三制药厂生产 ,批号9810 11) ;ＰＧＩ2 与ＴＸＡ2 药盒由北京东亚免疫技术研究所生产。方法(1)ＨＩＥ模型制备 :动物乙醚麻醉后 ,颈部正中切口 ,结扎左颈总动脉及缝合皮肤后休息 2ｈ ,然后置于 8%氧气的密闭容器中 2ｈ即制成ＨＩＥ模型。 (2 )分组 :正常对照组 (Ｃ) :只暴露左颈总动脉。缺氧缺血 (ＨＩ)组、ＭＫ 80 1组 (ＭＫ)、硫酸镁组 (Ｍｇ)、Ｄｅｘ组 :均在ＨＩ后立即向腹腔注射生理盐水 0 1ｍｌ/只、ＭＫ 80 11ｍｇ/ｋｇ、硫酸镁 30 0ｍｇ/ｋｇ、Ｄｅｘ 0 1ｍｇ/ｋｇ[1] 。上述各组在模型后 2 4ｈ断头处死。 (3)检...     

新生猪缺氧缺血性脑损伤模型中循环内皮细胞形态学观察

Ｇａｙｎｏｒ等在兔血中发现了循环内皮细胞 (ＣＥＣ) ,此后Ｈｌａｄｏｖｅｃ等建立了分离ＣＥＣ的方法 ,并发现ＣＥＣ数量和形态的变化可以反映血管的损伤及严重程度。该研究建立新生猪缺氧缺血性脑损伤动物模型 (ＨＩＢＭ ) ,观察ＣＥＣ数量和形态学变化 ,为临床诊断提供依据。对象与方法一、对象与分组　选择日龄为 3～ 4ｄ健康新生猪 14头 ,体重 1～ 1.5ｋｇ ,雌雄不拘 ,随机分为正常对照组、ＨＩＢＭ组。二、动物模型制作　应用姚裕家法[1] :局麻后分离并结扎左颈总动脉 ,然后置于 8%氧气和 92 %氮气的混合气体的密闭塑料箱内 ,持续 1…     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时Bcl—2和Fas配体蛋白表达的研究

为研究Ｂｃｌ－２和Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）基因蛋白在新生儿缺氧缺血性脑损伤（ＨＩＢＤ）中的表达及与细胞凋亡的关系,将新生７日龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠制制ＨＩＢＤ模型,应用免疫组织化学－ＳＰ法及原位缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）研究Ｂｃｌ－２和ＦａｓＬ蛋白在新生大鼠及缺氧缺血（ＨＩ）后脑中表达及与凋亡的关系。结果示新生大鼠ＨＩＢＤ时凋亡与坏死并存,以凋亡为主。Ｂｃｌ－２免疫蛋白在正常新生大鼠脑内广泛表达（＋～＋     

尼莫地平对新生猪缺氧缺血性脑损伤的防治作用

为探讨莫尼地平对新生儿缺氧缺血性脑病的防治作用，将８６只新生猪分为正常对照组，缺氧缺血性脑损伤（ＨＩＥ）１小时（１ｈｒ）、２４ｈｒ、７２ｈｒ组，尼莫地平０．５μｇｋｇ－１ｍｉｎ－１治疗后１ｈｒ、２４ｈｒ、７２ｈｒ组，尼莫地平１μｇｋｇ－１ｍｉｎ－１治疗后１ｈｒ、２４ｈｒ、７２ｈｒ组。检测各组红细胞胞浆总钙（ＲＢＣＴＣａ）及游离钙（ＲＢＣＣａ２＋ｉ）的浓度变化。结果：ＨＩＥ１ｈｒ组ＲＢＣＴＣａ和Ｃａ２＋ｉ均明显高于正常组对照（Ｐ＜０．０１），随着缺氧缺血状态的改善，ＲＢＣＴＣａ和Ｃａ２＋ｉ含量逐渐下降，ＨＩＥ７２ｈｒ组接近正常对照组（Ｐ＞０．０５）。两种剂量尼莫地平各治疗组ＲＢＣＴＣａ和Ｃａ２＋ｉ均明显低于ＨＩＥ１ｈｒ和２４ｈｒ组（Ｐ＜０．０１），与正常对照组比较，差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。提示：窒息后细胞内钙的沉积与新生猪ＨＩＥ的发生有关，尼莫地平能阻止Ｃａ２＋内流，有效地保护神经细胞。     

氨基胍和L-硝基-精氨酸甲酯对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经元凋亡的影响

神经细胞凋亡在缺氧缺血性脑病（HIE)迟发性损伤中占重要地全^[1,2]，因此通过抗凋亡治疗以抑制或减轻神经元的迟发性扣内务 可能成为治疗缺氧血性脑损伤（ＨＩＢＤ）的重要途径之一，我们采用氨基胍（ＡＧ）和Ｌ－硝基－精氨酸甲酯（Ｌ－ＮＡＭＥ），对ＨＩＢＤ大鼠进行干预，探讨其对凋亡的影响。     

N-乙酰-L-半氨酸对缺氧缺血新生大鼠脑保护作用的研究

目前 ,由于缺氧缺血性脑损伤 (ＨＩＢＤ)尚无有效的治疗方法 ,因而寻找一套安全、合理、有效的治疗方案 ,已成为当今研究的热点。我们在建立ＨＩＢＤ动物模型的基础上 ,使用抗氧化剂Ｎ 乙酰 Ｌ 半氨酸 (ＮＡＣ)治疗新生大鼠ＨＩＢＤ ,观察脑组织中超氧化物歧化酶 (ＳＯＤ)、丙二醛 (ＭＤＡ)的水平 ,以及ＮＡＣ对神经元凋亡的影响。材料和方法1 材料 :新生 7日龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠 72只 ,性别不限 ,体重13～ 16ｇ,由山东大学医学院实验动物中心提供 ;ＮＡＣ试剂购自深圳晶美生物工程有限公司 ;ＳＯＤ、ＭＤＡ及细胞凋亡试剂盒由南京建成生物工…     

窒息新生猪脑皮层细胞凋亡与淋巴细胞凋亡的相关性研究

目的　探讨新生儿窒息时淋巴细胞调亡与脑细胞凋亡是否具相关性,以期寻求围生窒息时临床客观判定脑细胞凋亡的指标。方法　制作新生猪HIE模型,用琼脂电泳及流式细胞术对HIE新生猪及正常对照新生猪淋巴细胞及脑细胞凋亡进行定性、定量分析。结果　HIE新生猪(n= 15)淋巴细胞及脑细胞凋亡率均显著高于正常对照组(n= 12)。F= 8.67　P< 0.01,窒息新生猪淋巴细胞凋亡与脑细胞凋亡呈显著正相关,r= 0.4007　P= 0.038。结论　体外淋巴细胞凋亡率可作为评估围生窒息新生儿活体内脑细胞凋亡状况的一项客观的临床指标     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时腺苷水平的变化

内源性神经介质在缺氧缺血性脑损伤 (ＨＩＢＤ)的病理生理过程中起着重要的作用。腺苷则是其中一种作用较强的神经调节因子[1] 。本研究利用新生大鼠ＨＩＢＤ模型 ,观察腺苷水平的变化 ,探讨腺苷的作用机制。材料和方法1 材料 :新生 7日龄ＳＤ大鼠 86只 ,体重 11～ 17ｇ ,由河北医科大学实验动物中心提供。将大鼠随机分为 :(1)正常对照组 :不做任何处理 ,直接断头取脑。 (2 )假手术组 :局麻下分离右侧颈总动脉 ,但不结扎 ,也不行低氧处理 ,2ｈ后断头取脑。 (3)ＨＩＢＤ组 :制备ＨＩＢＤ模型 ,按ＨＩＢＤ后即刻、1、2、4、12、2 4ｈ以及 4ｄ…     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤时脑内一氧化氮和一氧化氮合酶的变化及药物干预的影响

随着对一氧化氮(ＮＯ)生物作用研究的深入,ＮＯ与缺氧缺血性脑损伤的关系引起人们的广泛关注,但新生儿缺氧缺血性脑病(ＨＩＥ)与ＮＯ的关系报道较少。为了探讨ＮＯ在ＨＩＥ发生中的作用,采用新生大鼠ＨＩＥ模型观察了ＨＩＥ及药物干预对脑组织中ＮＯ及一氧化氮合酶(ＮＯＳ)的影响。对象7日龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠[1],雌雄不限,体重12～18ｇ,购自河南医科大学实验动物中心,随机分为:(1)正常对照组:未做任何处理;(2)ＨＩＥ组:分为缺氧1ｈ和2ｈ组;(3)药物干预组:分为丹参、脑活素和神经生长因子(ＮＧＦ)干预组。术前30ｍｉｎ腹腔注射药物,乙醚吸入…     

硫酸镁对新生鼠缺氧缺血性脑损伤保护作用的实验研究

缺氧缺血性脑损伤 (ｈｙｐｏｘｉｃ ｉｓｃｈｅｍｉｃｂｒａｉｎｄａｍａｇｅ,ＨＩＢＤ)是严重威胁新生儿健康甚至致残的常见原因。为探讨ＨＩＢＤ有效的治疗手段 ,本实验利用新生大鼠ＨＩＢＤ模型 ,观察硫酸镁对脑源性神经营养因子 (ｂｒａｉｎ ｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ ,ＢＤＮＦ)表达的影响和对受损神经元的保护作用。材料和方法1 材料 :7日龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠 45只 ,体重 (17 2± 2 3)ｇ,由哈尔滨医科大学实验动物部提供。自制常压缺氧舱。ＢＤＮＦ试剂盒由美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司生产。2 方法 :(1)参…     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤组织一氧化氮合酶基因表达及作用

新生儿缺氧缺血性脑病 (ＨＩＥ)是围产期新生儿脑损伤的主要原因。病理性刺激下一氧化氮 (ＮＯ)过度生成并具有神经毒性作用[1] 。本研究观察原生型一氧化氮合酶 (ｃＮＯＳ)和诱生型一氧化氮合酶 (ｉＮＯＳ)的ｍＲＮＡ在新生鼠ＨＩＥ模型的表达 ,以阐明ＨＩＥ脑损伤时ＮＯＳ变化规律和作用。材料和方法1 对象 :纯种新生ＳＤ鼠 42只 ,随机分成对照组、Ｈ1ｈ和Ｈ4ｈ组 ;按Ｒｉｃｅ法建立ＨＩＥ模型并鉴定。2 试剂 :变性液、Ｔａｑ酶、ＡＭＶ逆转录酶及各种引物 :ｃＮＯＳ 5’ＧＣＣＧＧＡＴＣＣＴＣＣＡＧＧＡＧＧＧＴＧＴＣＣＡＣＣＧＣＡＴＧ 3’ ;5’ＣＣＧＧＡＡＴＴＣＧＡＡＴＡＣＣＡＧＣＣＴＧＡＴＣＣＡＴＧＧＡＡ 3’。该引物扩增的ｃＤＮＡ产物长度为 6 14ｂｐ。该对引物扩增产物长为 5 76ｂｐ。β ａｃｔｉｎ 5’ＧＧＡＴＣＣＡＧＣＣＴＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＡＣ 3’ ;ｉＮＯＳ 5’ＧＴＧＴＴＣＣＡＣＣＡＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧ 3’ ;5’ＣＴＣＣＴＧＣＣＣＡＣＴＧＡＧＴＴＣ ＧＴＣ 3’ ;5’ＧＡＡＴＴＣＣＣＡＡＧＡＧＣＣＴＴＧＡＧＣＡＡＴＧＧＡ 3’。该引物扩增产物长为 2 80ｂｐ3 方法 :一步...     

静脉注射免疫球蛋白对急性川崎病患儿淋巴细胞凋亡的影响

通过观察静脉注射免疫球蛋白（ＩＶＩＧ）对川崎病（ＫＤ）患儿淋巴细胞凋亡（ＡＰＯ）的影响，进一步探讨ＩＶＩＧ对免疫性疾病的作用机理。对２６例川崎病患儿和２０名健康儿童外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）经抗－ＣＤ３单克隆抗体刺激培养不同时间（０，１２，２４，４８，７２小时）ＡＰＯ百分率和ＤＮＡ片断化分析，２６例患儿随机分为两组，阿司匹林＋ＩＶＩＧ治疗组（ｎ＝１６）和阿司匹林治疗组（ｎ＝１０），并对ＰＢＭＣ经植物血凝素（ＰＨＡ）刺激淋巴细胞增殖反应进行了观察。结果：ＫＤ患儿ＡＰＯ百分率和ＤＮＡ片断化较正常儿童明显降低（Ｐ＜０．００１）和延迟；ＩＶＩＧ治疗后，降低的ＡＰＯ百分率和延迟的ＤＮＡ片断化被逆转，同时与单用阿司匹林组比较，临床症状明显改善。淋巴细胞增殖反应下调（Ｐ＜０．００１）。外周血淋巴细胞ＡＰＯ下调可能参与了ＫＤ的发病。ＩＶＩＧ治疗ＫＤ的机理可能部分归于对被抑制的淋巴细胞ＡＰＯ的逆转。ＩＶＩＧ对其它淋巴细胞凋亡不足的自身免疫性疾病治疗可能存在同样机理。     

脐血淋巴细胞凋亡及其影响因素

目的探讨新生儿Ｔ淋巴细胞功能低下的机制。方法以健康成人为对照，采用凋亡细胞计数、片段ＤＮＡ分析、流式细胞分析等方法观察脐血单个核细胞（ＣＢＭＣ）凋亡及其影响因素。结果（１）ＣＢＭＣ自发或经抗ＣＤ３单克隆抗体刺激较成人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）易发生凋亡；（２）ＣＢＭＣ与成人ＰＢＭＣＢｃｌ２阳性细胞率差异无明显意义；（３）白细胞介素１、干扰素γ对ＣＢＭＣ的凋亡无明显作用，白细胞介素２可部分或全部纠正ＣＢＭＣ凋亡；（４）蛋白抑制剂放线菌酮可迅速诱导ＣＢＭＣ和成人ＰＢＭＣ发生凋亡。结论易于凋亡可能是新生儿Ｔ淋巴细胞发育不成熟的另一重要特征，其凋亡途径为Ｂｃｌ２非依赖途径，白细胞介素２对维持ＣＢＭＣ生存十分重要     

新生儿疾病诊断治疗进展

现将 1999年国内新生儿疾病诊断治疗进展简介如下。1　缺氧缺血性脑病 (ＨＩＥ)1 1　基础　在发病机制研究方面最重要的进展之一是阐明了ＨＩＥ神经细胞死亡形式。沈阳报道[1]用大鼠制成缺氧缺血性脑损伤 (ＨＩＢＤ)模型 ,用透射电镜、ＴＵＮＥＬ法综合研究ＨＩＢＤ脑细胞死亡形式 ,结果表明细胞凋亡与坏死共存 ,但以凋亡为主。缺氧缺血 (ＨＩ)后 4天坏死已减少或停止 ,但凋亡持续至少 2 1天。通常坏死位于病变部位的中心 ,凋亡细胞主要位于病变边缘的半暗区内。严重ＨＩＢＤ可见坏死与凋亡同时存在 ,中度ＨＩＢＤ不见细胞坏死 ,只有大量的…     

铁与新生儿缺氧缺血性脑损伤的关系

铁介导的氧自由基在新生儿缺氧缺血性脑损伤 (ＨＩＢＤ)发生机制中作用的研究少见报道 ,本研究旨在探讨窒息新生儿血浆非蛋白结合铁 (ＮＰＢＩ)的改变和新生儿ＨＩＢＤ尸检脑组织铁分布的变化 ,为新生儿缺氧缺血性脑病 (ＨＩＥ)发病机制的研究提供理论依据。对象和方法出生后 48ｈ内的足月儿 ,共 45例 ,分为 3组 ,每组 15例。对照组 (Ａ组 ) :健康新生儿 ;单纯窒息组 (Ｂ组 ) :不伴神经系统表现窒息新生儿 ;ＨＩＥ组 (Ｃ组 ) :其中 8例由头颅ＣＴ证实 ,ＨＩＥ临床分度 :轻度 6例 ,中度 9例 ,重度ＨＩＥ不纳入本研究。尸检 6例 ,均为足月儿 ,…     

脐血CD3AK细胞和其培养上清液诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究

脐血含丰富的造血干细胞 ,本世纪 80年代末用脐血代替骨髓作造血干细胞移植取得成功。近年来脐血ＬＡＫ细胞(ｒＩＬ 2激化的杀伤细胞 )诱导肿瘤细胞凋亡已见报道[1] 。本实验研究脐血ＣＤ3ＡＫ细胞和ＣＤ3ＡＫ细胞培养上清液诱导肿瘤细胞凋亡的作用 ,探索用活化脐血治疗肿瘤的新方法。材料1.标本来源 :脐血来源于湖北医科大学附属第二医院妇产科正常分娩的胎盘血。2 .试剂 :重组白细胞介素 2 (ｒＩＬ 2 )购自军事医学科学研究院 ;ＣＤ3 单抗购自北京邦定生物医学公司 ;Ｋ562 、ＨＬ 6 0购自武汉大学典型物培养中心 ;原位细胞凋亡试剂盒ＰＯ…     

反复呼吸道感染患儿外周血淋巴细胞凋亡及其与免疫功能的相关性探讨

目的探讨反复呼吸道感染（ＲＲＩ）患儿外周血成熟淋巴细胞的免疫功能与细胞凋亡的相关性。方法测定３０例ＲＲＩ患儿的Ｔ细胞亚群、免疫球蛋白及细胞凋亡,并测定２８例正常儿童作为对照。结果ＲＲＩ患儿ＣＤ４＋、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋明显低于对照组（Ｐ＜００１）,ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＧ亦低于对照组（Ｐ＜００５）,外周血淋巴细胞凋亡极显著高于对照组（Ｐ＜００１）。结论ＲＲＩ患儿的整体免疫功能降低,其原因是由于淋巴细胞凋亡过度所致。     

p27KIP1基因表达对神经母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响及意义

细胞增殖失控或 /和凋亡受抑与肿瘤的发生发展关系密切。近年来发现 ,细胞周期素 细胞周期素依赖激酶 (ｃｙ ｃｌｉｎ ＣＤＫ)在细胞增殖周期中发挥正性调控作用 ,增殖细胞核抗原 (ＰＣＮＡ)具有参与和促进ＤＮＡ合成之功能 ,细胞周期素依赖激酶抑制因子 (ＣＫＩ) ｐ2 7ＫＩＰ1则能抑制它们的活性 ,进而减慢或阻止ＤＮＡ合成及细胞周期Ｇ1→Ｓ的演进。此外 ,ｐ2 7ＫＩＰ1 尚有诱导细胞凋亡之功能。本文通过检测神经母细胞瘤 (ＮＢ)中 ｐ2 7ＫＩＰ1 、ＰＣＮＡ、ｃｙｃｌｉｎＤ1基因表达和细胞凋亡发生情况 ,探讨 ｐ2 7ＫＩＰ1 对ＮＢ细胞增…