周围神经损伤对脊髓运动神经元睫状神经营养因子表达的影响

目的 探讨周围神经损伤后脊髓运动神经元素达睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）水平的变化规律及其与神经元病理变化的相关性。方法 选用出生后３ｄ和成年大鼠各３０只,均分为对照组、伤后３,７,１４,２１,２８ｄ６组。切断不同鼠龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠坐骨神经复制周围神经损伤模型,行免疫组织化学染色ＣＮＴＦ阳性脊髓运动神经元,利用图像分析系统计算脊髓ＣＮＴＦ阳性运动神经元的吸光度值,从而间接反映脊髓运动神经元ＣＮＴＦ     

细胞凋亡与周围神经损伤后运动神经元死亡

凋亡是一种完全不同于坏死的细胞死亡方式,是由于内、外因素激发细胞本身自杀程序引起的,又称程序性细胞死亡。细胞凋亡是多细胞生物生命过程中不可缺少的一部分,与细胞增殖、分化等一样,是个体发育成熟所必需的。这种在生理状态下发生的凋亡可以使一个组织的细胞数保持动态平衡,维持生物个体的内稳态。凋亡在脊椎动物中枢及周围神经系统发育过程中也起重要作用,多种类型的神经元在与它们的靶细胞形成突触联系后不久,约半数或更多的神经元发生凋亡。这种生理性凋亡可持续至出生后的一段时间。在发育过程中存活的运动神经元也可在幼年…     

电刺激对大鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元凋亡调控基因表达的影响

目的 观察直流电场对鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元bcl-2,bax基因表达的作用,探讨电刺激防治细胞凋亡的机制。方法 30只SD大鼠坐骨神经切断后,平均分为两组。实验组在相应的脊髓节段立即置入直流电刺激器,对照组置入无输出电流的刺激器,分别于术后1,4,7,14,28d取材,应用免疫组化技术,光镜下观察脊髓动物神经元bcl-2,bax的表达,并对脊髓阳性运动神经元进行计数。结果 坐骨神经切断后4,7,14d,实验组脊髓运动神经元bcl-2阳性数高于对照组;坐骨神经切断后4,7,14,28d实验组脊髓运动神经元bax阳性数低于对照组。结论 直流电场对鼠坐骨神经切断后脊髓运动神经元bcl-2,bax的表达具有调节作用。     

TrkA在周围神经损伤后的表达

目的:确定Trk(Tyrosine kinase)A在损伤周围神经的表达分布。方法:切断大鼠坐骨神经再吻合后,不同时段上,取脊髓、脊神经节和吻合的神经段作LSAB免疫组化染色,光镜进行观察。结果:TrkA只在损伤的脊神经节感觉神经元胞体和坐骨神经呈免疫组化阳性反应。结论:TrkA只在损伤的脊神经节感觉神经元胞体和坐骨神经表达。     

坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元死亡性质的探讨

目的:研究大鼠坐骨神经损伤后,脊髓前角运动神经元的死亡性质,以便加以保护,促进神经损伤后运动功能的恢复。方法:切断大鼠右侧坐骨神经,再原位吻合,于术后不同时间取L_4～L_6节段脊髓,作石蜡切片,通过H·E染色和Hoechst33258染色,光镜下分别观察前角运动神经元胞体的形态学变化特征;作超薄切片,电镜下观察前角运动神经元胞体超微结构的变化规律。结果:光镜下,右侧脊髓前角运动神经元胞体尼氏体和细胞核染色质浓缩;电镜下,细胞膜内陷,将细胞分割成凋亡小体,然后裂解,细胞体消失;而左侧前角运动神经元胞体均一、无变化。结论:坐骨神经损伤后,脊髓前角运动神经元有死亡,死亡性质是细胞凋亡。     

针刺对痉挛性偏瘫患者脊髓运动神经元兴奋性的影响

目的 :探讨针刺对脑卒中后痉挛性偏瘫患者的脊髓运动神经元兴奋性的影响。方法 :以1 1例脑中风后遗症并伴有单侧上肢痉挛性偏瘫患者为实验对象 ,分别采用针刺偏瘫肢体痉挛侧和非痉挛侧的方法 ,以诱发肌电图作为判定脊髓运动神经元兴奋性变化的客观指标。结果 :分别针刺痉挛侧和非痉挛侧后 ,患侧上肢H/Mmax均明显降低 ,与对照组比较呈非常显著性差异 ,且针刺非痉挛侧后患侧H/Mmax降低幅度大于针刺痉挛侧。结论 :针刺非痉挛侧肢体的穴位 ,对脑中风后遗症患者脊髓运动神经元异常活动的抑制效果明显好于针刺痉挛侧肢体的穴位 ,其机制可能是通过交互抑制的反射活动 ,对脊髓α运动神经元兴奋性产生了调整作用。     

坐骨神经切断对大鼠脊髓背根节NGF和BDNF表达的影响

目的:探讨切断坐骨神经对成年SD大鼠背根节NGF和BDNF表达的影响。方法:用10只成年SD大鼠,切断一侧坐骨神经,术后存活3d,取手术侧和非手术侧的背根节,用NGF和BDNF的cRNA探针进行常规原位杂交染色。观察该两因子mRNA阳性反应产物在背根节的分布和变化。用计算机图像分析系统,测量坐骨神经切断后手术侧和非手术侧的100个阳性反应神经元NGF和BDNF的mRNA阳性反应神经元的平均灰度,以反映NGF和BDNF相对含量。结果:在背根节中可见NGF和BDNF的mRNA的阳性神经元,阳性反应产物星兰色位于细胞质。相比之下,呈NGF的mRNA阳性反应神经元的数量较少。手术侧NGF和BDNF的平均灰度值(82.3±3.4和80.2±5.4)较非手术侧的平均灰度(101.3±6.5和109.5±2.4)降低,表明手术侧NGF和BDNF的mRNA较非手术侧者明显增加,p<0.01。结论:提示坐骨神经切断可促进背根节NGF和BDNF的mRNA的表达增加,NGF和BDNF可能在周围神经损伤后的修复反应中具有重要作用。     

胚胎肢芽提取物对周围神经损伤后脊髓前角运动神经元的保护作用

目的研究周围神经损伤后脊髓前角运动神经元内酶学的变化，并探索从大鼠胚胎肢芽中提取的活性物质（ＥＬＢＥ）对神经元的保护作用。方法切断大鼠坐骨神经，在近端套接单盲端硅胶管囊，单纯损伤组囊内注满等渗盐水，保护组内注满ＥＬＢＥ。分别于术后１、４天，１、２、３、４周定量测量每克脊髓组织内乙酰胆碱脂酶（ＡｃｈＥ）和酸性磷酸酶（ＡＣＰ）的含量。结果ＡｃｈＥ于损伤后１天开始下降，２周降至最低，以后逐渐回升；ＡＣＰ于损伤后１天开始升高，１周升至最高，以后逐渐下降；用ＥＬＢＥ处理的动物上述两种酶变化的幅度较小，整个过程也比较平稳。结论ＥＬＢＥ能通过缓冲神经损伤后神经元内酶学的变化，起到保护神经元的作用，从而减轻神经元损伤的程度，减少神经元死亡的数量，有利于神经再生。     

周转神经损伤后碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达的实验研究

目的 研究大鼠坐骨神经钳夹伤后碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ表达的变化规律。方法 １０２只Ｗｉｓｔａ大鼠随机分为正常组６只,对照及实验组各４８只,用地钳钳夹坐骨神经,于伤后４小时,１,３,７,１０,１４,２１,２８天采用逆转录－聚合酶链反应技术（ＲＴ－ＰＣＲ）结合聚丙烯酰胺凝胶电泳及ａｌｐｈａ－３２ｐ－ｄＣＴＰ放射自显影,检测大鼠坐骨神经钳夹伤局部,腰４－６背根节及相应脊髓节段ｂＦＧＦ     

大鼠坐骨神经缺损后组织工程人工神经对外周靶器官及脊髓神经元的保护作用

目的 研究嗅球成鞘细胞(olfactory ensheathing cell,OEC)-雪旺细胞(Schwann cell,SC)-细胞外基质成分(extracellular matrix,ECM)-聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物[poly(DLlactide-co-glycolide acid),PLGA]桥接体对大鼠坐骨神经缺损后外周靶器官及脊髓神经元的保护作用.方法 建立SD大鼠右侧坐骨神经15 mm缺损模型后,用OEC、SC、ECM以及自行制备的PLGA导管,构成OEC-SC-ECM-PLGA桥接体进行修复,同时设OEC-ECM-PLGA组、SC-ECM-PLGA组、ECM-PLGA组、PLGA组和自体神经移植对照组.在术后1,3,6,9周行腓肠肌湿重恢复率及运动终板检测,并于术后9周行CM-Dil和霍乱毒素B亚单位-辣根过氧化物酶(CB-HRP)逆行示踪检测.结果 术后各组动物术侧腓肠肌湿莺和运动终板数量下降,3周后除ECM-PLGA组和PLGA组外,腓肠肌湿重和运动终板数量逐渐增加.9周时OEC-SC-ECM-PLGA组腓肠肌湿重、运动终板数量及运动终板长轴长度与自体神经移植组差异无统计学意义(P＞0.05).9周时CM-DiI和CB-HRP逆行示踪结果显示,OEC-SC-ECM-PLGA组标记的脊髓前角运动神经元数量与自体神经移植组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 OEC-SC-ECM-PLGA桥接体对大鼠坐骨神经缺损后的外周靶器官及脊髓神经元具有一定的保护作用.     

大鼠坐骨神经损伤后嗅球成鞘细胞对脊髓神经元的保护作用

目的：探讨嗅球成鞘细胞（OECs)对大鼠坐骨神经损伤引起的脊髓前角运动神经元死亡的保护作用，方法：30只SD大鼠随机分成对照（SAL）组和实验（OFCs)组，采用硅胶管套接大鼠切断的坐骨神经，硅胶管内给予等渗盐水或培养成活的新生大鼠OECs，分别于伤后7，14，30d应用尼氏染色，酶组织化学染色方法，检测神经损伤侧的脊髓前角运动神经元死亡数目和胆碱酯酶（ChE)及酸性磷酸酶（ACP）的变化。结果：与SAL组比较，伤后7，14和30d,OECs组脊髓前角运动神经元死亡率分别降低了7．04％，6．44％，和9．72％（P＜0．01），脊髓前角运动神经元中ChE活性变化幅度分别降低了4．03％，4．25％和5．72％（P＜0．01），ACP的变化幅度分别下降了51％、64％和92％（P＜0．01），结论：OECs对周围神经损伤后引起的神经元死亡有较好的保护作用。     

大鼠坐骨神经损伤后脊髓组织中Caspase 3、Bcl-xl表达变化的实验研究

目的：探讨大鼠坐骨神经损伤后脊髓组织中Caspase3、Bcl-xl的表达变化以及与脊髓神经细胞凋亡的关系。为进一步研究坐标神经损伤后的神经再生提供依据。方法：成年Wistar大鼠96只,随机分为对照组（12只）和实验组（84只）,实验组大鼠切除右侧长约6mm的坐骨神经,分为伤后3d和1,2,3,4,5,6周组,采用Caspase3、Bcl-xl免疫组化检测大鼠脊髓组织Caspase3、Bcl-xl表达变化,测定Caspase3的活性;采用流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双标检测和原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法（TUNEL）检测脊髓细胞凋亡情况。结果Caspase3、Bcl-xl免疫组化阳性反应主要位于灰质神经元细胞,高表达区在前角。伤后1周实验组伤侧脊髓组织中Caspase3表达轻度升高,2－4周显著升高,5周后下降,伤后1－3周脊髓Bcl-xl表达减弱,4周后明显升高,高水平持续到伤后6周;伤后2－4周在鼠伤侧脊髓有较多TNEL阳性标记细胞;伤后3d伤侧Caspase3活性荧光值开始升高,1－3周明显升高,4周逐渐下降;流式细胞仪检测,伤后1周伤侧脊髓凋亡细胞开始增加,2,3周为高峰,4周伤侧凋亡细胞逐渐减少。实验组末伤侧与对照组比较,各项检查差异无显著性意义。结论：Caspase3的活化是细胞凋亡的早期生化。与细胞凋亡的形态学表现相互关系;Bcl-xl对减轻大鼠坐骨神经损伤后脊髓组织细胞凋亡有重要作用,及早识别细胞凋亡的早期特征,对促进神经再生具有重要意义。     

Characteristics of cytokines in the sciatic nerve stumps and DRG after rat sciatic nerve crush injury

Background:Cytokines are essential cellular modulators of various physiological and pathological activities,including peripheral nerve repair and regeneration.However,the molecular changes of these cellular mediators after peripheral nerve injury are still unclear.This study aimed to identify cytokines critical for the regenerative process of injured peripheral nerves.Methods:The sequencing data of the injured nerve stumps and the dorsal root ganglia (DRG) of Sprague-Dawley (SD)rats subjected to sciatic nerve (SN) crush injury were analyzed to determine the expression patterns of genes coding for cytokines.PCR was used to validate the accuracy of the sequencing data.Results:A total of 46,52,and 54 upstream cytokines were differentially expressed in the SN at 1 day,4 days,and 7 days after nerve injury.A total of 25,28,and 34 upstream cytokines were differentially expressed in the DRG at these time points.The expression patterns of some essential upstream cytokines are displayed in a heatmap and were validated by PCR.Bioinformatic analysis of these differentially expressed upstream cytokines after nerve injury demonstrated that inflammatory and immune responses were significantly involved.Conclusions:In summary,these findings provide an overview of the dynamic changes in cytokines in the SN and DRG at different time points after nerve crush injury in rats,elucidate the biological processes of differentially expressed cytokines,especially the important roles in inflammatory and immune responses after peripheral nerve injury,and thus might contribute to the identification of potential treatments for peripheral nerve repair and regeneration.     

大鼠坐骨神经损伤后雪旺细胞、层粘连蛋白动态变化研究

目的 研究大鼠坐骨神经损伤后的变性以及其再生过程中雪旺细胞（Schwann cell,SC)、层粘连蛋白（laminin,LN)变化规律。方法 用硅胶管桥接大鼠（60只）左侧坐骨神经缺损（缺损长6mm),分别于伤后3、7、15、30、60、90天用免疫组化方法检测损伤神经近、远端和新生神经中段雪旺细胞,层粘连蛋白的表达。结果 损伤神经近、远SC和LN均于伤后30天达增殖高峰,新生神经中段LN的增殖于伤后60天达高峰,近端SC和LN的数量多于远端,LN在神经损伤区存在明显的浓度梯度。结论 LN的表达依赖于SC的增殖,LN的浓度梯度引导神经生长和雪旺细胞迁移的方向。     

坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元内神经生长因子的时程变化

以坐骨神经损伤的豚鼠为动物模型，采用免疫细胞化学方法，研究脊髓前角运动细胞神经生长因子（Ｎｅｒｖｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＮＧＦ）的变化。结果表明，ＮＧＦ－ｉｒ免疫阳性产物见于前角运动核背外侧群（ＤＬ）、腹外侧群（ＶＬ）、中间群（Ｃ）、后背外侧群（ＲＤＬ），损伤侧ＮＧＦ免疫反应染色明显深于对照侧，第４ｄ染色达到高峰。提示ＮＧＦ在坐骨神经损伤后，可能具有营养、保护及促进损伤神经再生作用     

大鼠周围神经损伤后感觉神经元死亡数量的研究

目的 :研究周围神经损伤后 ,脊神经节感觉神经元的死亡数量。方法 :先计算正常SD大鼠两侧的脊神经节感觉神经元胞体数是否对称 ,再切断并原位吻合右侧大鼠坐骨神经 ,左侧不作任何处理、作为对照 ,于术后不同时间取L4～L6脊神经节作HE染色计算脊神经节感觉神经元胞体数量的变化。结果 :正常SD大鼠两侧的脊神经节感觉神经元胞体数量呈对称分布 ;右侧坐骨神经损伤后 ,其脊神经节感觉神经元胞体数量较左侧减少。结论 :大鼠坐骨神经损伤后 ,脊神经节感觉神经元的胞体有死亡 ,其死亡具有一定的特征。     

去细胞神经同种异体移植的运动功能恢复

目的 研究去细胞同种异体神经移植修复大型哺乳类动物粗大和长段周围神经缺损的效果。方法 15只犬分为去细胞神经同种异体移植组（实验组）6只、自体神经移植组（对照组Ⅰ）6只、新鲜神经同种异体移植组（对照组Ⅱ组）3只。右侧坐骨神经主干造成5cm长缺损，分别以上述三种神经移植物桥接修复，术后6个月进行步态分析。结果 实验组和对照组Ⅰ功能恢复一般情况相似，对照组Ⅱ无任何恢复；实验组和对照组Ⅰ的右后肢运动及步态周期非常相似，踝关节跖屈及背伸肌群的肌力均有一定程度的恢复，但不及正常犬。结论 化学去细胞神经同种异体移植修复犬坐骨神经长段缺损，在术后6个月近期运动功能恢复与自体神经移植相似。