不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌黏附和侵入口腔上皮细胞能力的比较

目的 通过比较临床分离的不同fimA型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)菌株黏附和侵入KB细胞的能力,探讨不同fimA基因型Pg菌株之间致病力差异的原因.方法 应用培养法和抗生素保护法测定不同fimA型Pg菌株黏附和侵入KB细胞的能力,扫描电镜观察不同fimA型Pg对KB细胞的黏附情况.结果 所有菌株均可黏附和侵入KB细胞,黏附率为0.523%～37.125%,侵入率为0.017%～3.750%;各fimA型Pg菌株之间黏附和侵入KB细胞的能力差异无统计学意义(P>0.05);各株Pg之间、4株Ⅱ型菌株之间、5株Ⅳ型菌株之间,黏附和侵入KB细胞的能力差异有统计学意义(P<0.01).结论 Pg的fimA型与其对KB细胞的黏附和侵入能力无相关性,提示可能存在其他影响不同fimA型Pg致病力差异的因子.     

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌黏附和侵入口腔上皮细胞能力的比较

目的 通过比较临床分离的不同fimA型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)菌株黏附和侵入KB细胞的能力,探讨不同fimA基因型Pg菌株之间致病力差异的原因.方法 应用培养法和抗生素保护法测定不同fimA型Pg菌株黏附和侵入KB细胞的能力,扫描电镜观察不同fimA型Pg对KB细胞的黏附情况.结果 所有菌株均可黏附和侵入KB细胞,黏附率为0.523%～37.125%,侵入率为0.017%～3.750%;各fimA型Pg菌株之间黏附和侵入KB细胞的能力差异无统计学意义(P>0.05);各株Pg之间、4株Ⅱ型菌株之间、5株Ⅳ型菌株之间,黏附和侵入KB细胞的能力差异有统计学意义(P<0.01).结论 Pg的fimA型与其对KB细胞的黏附和侵入能力无相关性,提示可能存在其他影响不同fimA型Pg致病力差异的因子.     

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌黏附和侵入口腔上皮细胞能力的比较

目的 通过比较临床分离的不同fimA型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)菌株黏附和侵入KB细胞的能力,探讨不同fimA基因型Pg菌株之间致病力差异的原因.方法 应用培养法和抗生素保护法测定不同fimA型Pg菌株黏附和侵入KB细胞的能力,扫描电镜观察不同fimA型Pg对KB细胞的黏附情况.结果 所有菌株均可黏附和侵入KB细胞,黏附率为0.523%～37.125%,侵入率为0.017%～3.750%;各fimA型Pg菌株之间黏附和侵入KB细胞的能力差异无统计学意义(P>0.05);各株Pg之间、4株Ⅱ型菌株之间、5株Ⅳ型菌株之间,黏附和侵入KB细胞的能力差异有统计学意义(P<0.01).结论 Pg的fimA型与其对KB细胞的黏附和侵入能力无相关性,提示可能存在其他影响不同fimA型Pg致病力差异的因子.     

牙龈卟啉单胞菌对脐静脉血管内皮细胞产生sICAM-1的影响

目的：观察牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)对人类脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)产生可溶性细胞间粘附分子－1（soluble intercellular adhesion molecule-1,sICAM-1)的影响。方法：应用厌氧袋法培养P.gingivalis，并用其感染HUVECs，采和酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定培养上清中sICAM-1的含量，结果：HUVECs基础表达少量的sICAM-1;P.gingivalis剂量依赖性增强HUVECs产生sICAM-1蛋白的水平；紫外线、超声波和65℃的热处理都不能抑制P.gingivalis的作用；sICAM-1蛋白水平在P.gingivalis刺激后的4h未见改变，增高的作用从刺激后的8h开始，在12h,16h和20h继续增加。结论：活的和灭活的P.gingivalis都剂量依赖性和时间依赖性地增强HUVECs产生sICAM-1,P.gingivalis可能同样诱导牙龈血管内皮细胞表达sICAM-1，升高的sICAM-1可能参与调节牙周病炎症反应和免疫反应过程。     

牙龈卟啉单胞菌感染对大鼠血管平滑肌细胞细胞间黏附分子-1表达的影响

目的 观察牙龈卟啉单胞菌ATCC 33277感染对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达的影响。方法 建立体外牙龈卟啉单胞菌感染大鼠VSMC模型,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测ICAM-1基因的表达。结果 牙龈卟啉单胞菌感染VSMC 8、16、24 h后,ICAM-1表达明显增多,与空白对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。感染16 h达高峰,感染8 h与感染16、24 h比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 牙龈卟啉单胞菌感染可引起VSMC ICAM-1高表达,这提示牙周致病菌可能参与血管壁的炎症反应,在动脉粥样硬化的发生、发展中有重要的意义。     

牙龈卟啉单胞菌对人脐静脉内皮细胞一氧化氮生成的影响

目的 观察牙龈卟啉单胞茵(Porphyromonas gingivalis,Pg)对人脐静脉内皮细胞皮细胞功能损伤的途径,以期为牙周病在动脉粥样硬化发病机制中的作用提供依据.方法 应用厌氧罐培养Pg ATCC33277,用感染复数(multiplicity of infection,MOI)1:10、1:100、1:1000的Pg干预HUVEC,未受Pg干预的HUVEC作为阴性对照组,分别于4、8、12、24 h时收集细胞上清液,利用硝酸还原酶法测定细胞上清液中NO的浓度.结果 在24 h内,Pg MOI 1:10、1:100均能促进HUVEC NO的生成,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);Pg MOI 1:1000干预HUVEC后,12 h内可促进HUVEC NO的生成,但与阴性对照组相比差异无统计学意义,24 h时HUVEC NO的生成降低[(57.83±9.09)mmol/L],与其他各组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Pg对内皮细胞NO的生成有影响.Pg MOI 1:10、1:100能够促进内皮细胞NO的生成,Pg MOI 1:1000则抑制内皮细胞NO的生成.     

两种fimA基因型牙龈卟啉单胞菌刺激下口腔上皮细胞ICAM-1的表达

目的比较2种fimA基因型牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P．gingivalis）刺激下口腔上皮细胞ICAM-1的表达水平。方法实验组用P．gingivalis ATCC 33277（Ⅰ型菌毛组）,W83（Ⅳ型菌毛组）,47A-1（Ⅳ型菌毛组）分别与KB细胞（ATCC CCL17）共同孵育24h;对照组为未受P.gingivalis刺激的KB细胞。分别在1h、3h、6h和24h收集细胞,运用流式细胞仪检测KB细胞膜上ICAM-1的动态表达。结果P．gingivalis刺激细胞后3h、6h和24h,实验组ICAM-1的表达水平均高于对照组;2种fimA基因型P．gingivalis调节KB细胞表达ICAM-1的方式相似,Ⅳ型菌毛组的调节作用强于Ⅰ型菌毛组。结论P.gingivalis上调口腔上皮细胞表达ICAM-1的水平与其fimA基因型相关,提示P.gingivalis致病性与其fimA基因型相关。     

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌刺激牙龈成纤维细胞后单核细胞趋化蛋白1的表达

目的 比较不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)刺激下人牙龈成纤维细胞单核细胞趋化蛋白1 mRNA和蛋白的表达水平,比较不同fimA基因型Pg毒力和致病性的差异.方法 Pg ATCC 33277(Ⅰ型,T1组),WCSP115(Ⅱ型,T2组),WCSP1.5(Ⅲ型,T3组),W83(Ⅳ型,T4组)分别与牙龈成纤维细胞在标准条件下共同孵育,对照组加入2 ml达尔伯克氏改良伊格尔培养基,每组3孔.分别于孵育后1、3、6和12 h收集细胞和上清液,应用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和ELISA法分别检测牙龈成纤维细胞单核细胞趋化蛋白1 mRNA和蛋白的动态表达.结果 与对照组比较,各fimA型Pg刺激下牙龈成纤维细胞单核细胞趋化蛋白1 mRNA和蛋白水平的表达量均明显上调(P<0.05);其中T2组Pg的刺激作用强于其他各型,不同时间点单核细胞趋化蛋白1 mRNA相对表达量分别为(25.75±3.12)～(326.69±35.35),蛋白分泌水平为(178.20±46.20)～(443.46±82.19)ng/L;而T3组Pg弱于其他各型,单核细胞趋化蛋白1 mRNA相对表达量为(4.16±0.82)±(94.17±18.56),蛋白分泌水平为(86.95±23.90)～(264.01±28.59)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Pg可诱导牙龈成纤维细胞mRNA和蛋白水平过表达单核细胞趋化蛋白1,提示fimA基因型的不同可能与Pg的毒力和致病性存在相关性.     

牙龈卟啉单胞菌感染对血管内皮细胞与单核细胞黏附的影响

目的：研究Pg感染对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）与单核细胞黏附的影响。方法：建立Pg感染HUVEC细胞株EA．hy926的体外模型,虎红染色法观察Pg381和Pg33277菌株感染HUVEC 6 h和24 h后,HUVEC与人单核细胞株THP-1细胞黏附量的变化。结果：培养6 h时Pg381感染组的THP-1细胞黏附量相对值为0．210±0．025,高于Pg33277感染组（0．078±0．024,P＜0．05）和空白对照组（0．062±0．022,P＜0．05）,Pg33277感染组和空白对照组无差异。24 h时3组间无差异（P＞0．05）。结论：Pg381感染HUVEC后能显著促进其与单核细胞的黏附。     

牙龈卟啉单胞菌对人脐静脉血管内皮细胞cGMP生成的影响

目的:体外研究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)cGMP水平的影响。方法:用Pg ATCC 33277分别以感染复数(multiplicity of infection,MOI)1∶10、1∶50、1∶250干预HUVEC,并以未受Pg ATCC 33277干预的HUVEC作为阴性对照,分别培养4、12、36 h,在倒置显微镜下观察各组细胞形态;125I cGMP放射免疫试剂盒检测各组HUVECcGMP的水平。结果:与对照组相比,Pg ATCC 33277分别以MOI 1∶10、1∶50、1∶250干预HUVEC 4、12、36 h后,实验各组HUVEC的细胞形态未见明显改变,仍呈典型的铺路石状单层贴壁生长;Pg ATCC 33277 MOI1∶250时可呈时间依赖性地降低HUVEC cGMP水平,而同一时间点内,各浓度组的cGMP水平并无明显差异。结论:短时间内,Pg ATCC 33277对HUVEC的细胞形态无明显影响,但可降低HUVEC cGMP的生成,HUVECNO生物利用度下降。     

多粘菌素B和热处理对牙龈卟啉单胞菌诱导ECHUV产生sICAM-1的影响

目的：观察多粘菌素B和热处理对牙龈卟啉菌诱导人类脐静脉血管内皮细胞（endothelial cells of human umbilical vein,ECHUV）产生可溶性细胞间粘附分子－1（soluble intercellular adhesion molecule-1,sICAM-1）的影响，以探讨P．gingivalis诱导ECHUV产生sICAM-1的有效部位。方法：采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定培养上清中sICAM-1的含量。结果：P.gingivalis、大肠杆菌脂多糖（LPS）和肿瘤坏死因子－α（TNF－α）强烈诱导ECHUV产生sICAM-1，多粘菌素B明显抑制大肠杆菌LPS的诱导作用，热处理完全废除了TNF－α的作用，而这两种方法都不能降低P.gingivalis对ECHUV产生sICAM-1的影响。另外，P.gingivalis毒力株W83的诱导强度明显高于非毒力株ATCC33277。结论：P.gingivalis可能通过LPS以外的耐热的有效位点诱导ECHUV产生sICAM-1，这一位点可能与P.gingivalis的有效毒力因子有关。     

Differential expression of interleukin-8 and intercellular adhesion molecule-1 by human gingival epithelial cells in response to Actinobacillus actinomycetemcomitans or Porphyromonas gingivalis infection

Little is known regarding the molecules expressed by gingival epithelial cells that are involved in initiating and maintaining inflammation following the interaction with periodontal pathogens. Thus, we investigated the effect of Actinobacillus actinomycetemcomitans and Porphyromonas gingivalis infection on the expression of neutrophil chemoattractant interleukin 8 (IL-8) and the adhesion molecule intercellular adhesion molecule-1 by gingival epithelial cells. The data revealed that both IL-8 and intercellular adhesion molecule-1 expression increased after infection with A. actinomycetemcomitans (IL-8: 2- to 7-fold; intercellular adhesior molecule-1: 2.5- to 3.7-fold). IL-8 secretion reached a maximal level 6 h after the infection and the expression subsequently decreased to basal level. The increased cell surface intercellular adhesion molecule-1 expression started at 4 h after infection and reached a maximal level 14 h after the infection. In contrast, the expression of both molecules rapidly decreased 2 h after challenge with P. gingivalis. This opposite influence of A. actinomycetemcomitans and P. gingivalis infection on the expression of IL-8 and intercellular adhesion molecule-1 by gingival epithelial cells suggests that A. actinomycetemcomitans infection may initiate the recruitment of neutrophils, whereas the P. gingivalis infection may retard this process and therefore demonstrate a distinct perspective of virulence.     

Adhesion and invasion to epithelial cells by fimA genotypes of Porphyromonas gingivalis

Adhesion to and invasion of epithelial cells by the periodontopathogen Porphyromonas gingivalis is promoted by the major fimbriae, encoded by fimA. The microorganism can be classified in six genotypes, based on fimA sequence, and genotype II strains are more prevalent than others in periodontitis patients. This study aimed to determine the adhesive and invasive abilities on KB cells of different fimA allelic variants of P. gingivalis isolates. Twenty-two isolates and six reference strains representing the six fimA genotypes and non-typeable strains were screened for their adhesion and invasion abilities on KB cells, using standard methods. All strains were able to adhere and, except for one, to invade KB cells. However, these properties were not homogeneous among strains belonging to the same genotype. There was no correlation between adhesion and invasion efficiencies. Isolate KdII 865 (fimA genotype II) was the most invasive and the second most adhesive strain, whereas reference strain ATCC 33277 (fimA I) showed a low adhesion ability but was highly invasive. These data indicated that fimA genotypes of P. gingivalis are not related to the adhesion and invasion abilities on KB cells, suggesting that the increased prevalence and proportion of certain genotypes may be attributed to other characteristics besides FimA variation.     

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌刺激口腔上皮细胞白细胞介素-8的表达

目的比较不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌（P.gingivalis）刺激下口腔上皮细胞白细胞介素-8（IL-8）的表达水平,初步探讨P.gingivalis致病性与其fimA基因型的关系。方法P.gingivalis ATCC 33277（Ⅰ型fimA）、W83、47A-1（Ⅳ型fimA）和KB细胞ATCC CCL-17共同孵育24 h,以未受刺激的KB细胞作为对照组,分别在1、3、6、24 h收集细胞和培养上清液。RT-PCR检测KB细胞IL-8 mRNA的动态表达,酶联免疫反应检测培养上清液中IL-8的动态变化。结果2种fimA基因型菌株刺激1 h,KB细胞IL-8 mRNA的表达上调至峰值,高于对照组,3~24 h IL-8 mRNA的表达水平接近对照组;P.gingivalis感染细胞后3~24 h,上清液中的IL-8水平低于对照组,Ⅳ型菌株低于Ⅰ型菌株;IL-8 mRNA及其蛋白表达不完全一致,提示IL-8的表达存在转录后水平的调节。结论fimA基因型与口腔上皮细胞IL-8的表达水平相关,提示P.gingivalis致病性与其fimA基因型相关。     

不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌对牙龈成纤维细胞基质金属蛋白酶表达的影响

目的 观察不同fimA基因型牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)对人牙龈成纤维细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)表达水平的影响,探讨fimA基因型与Pg致病力之间的关系.方法 Pg ATCC 33277(Ⅰ型)、WCSP115(Ⅱ型)、WCSP1.5(Ⅲ型)、W83(Ⅳ型)分别与牙龈成纤维细胞在标准条件下共同孵育(对照组为达尔伯克氏改良伊格尔培养基),于孵育后1、3、6和12 h收集细胞和培养上清液,应用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和ELISA法分别检测牙龈成纤维细胞MMP-1、MMP-2的mRNA及蛋白的动态表达.结果 与对照组相比,Pg刺激下牙龈成纤维细胞MMP-1、MMP-2的mRNA和蛋白水平表达量均明显上调(P<0.01);其中Ⅱ型fimA型Pg的刺激作用强于其他各型,不同时间点MMP-1 mRNA相对表达量及蛋白分泌水平分别为(28.88±3.12)～(231.01±24.99)、(1.35±0.17)～(3.08±1.20);MMP-2 mRNA相对表达量及蛋白分泌水平分别为(20.42±2.21)～(188.34±37.37)、(2.57±0.76)～(18.08±1.15),与其他各型相比差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ型Pg的刺激作用较弱,不同时间点MMP-1 mRNA相对表达量及蛋白分泌水平分别为[(5.11±0.55)～(72.84±8.84)]μg/L、[(0.68±0.13)～(1.46±0.94)]μg/L;MMP-2 mRNA相对表达量及蛋白分泌水平分别为[(4.55±0.55)～(25.75±3.12)]μg/L、[(2.28±0.93)～(11.22±2.46)]μg/L,与其他各型相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 Pg可以诱导牙龈成纤维细胞过表达MMP,fimA基因型与Pg的毒力作用相关,fimA型可能为Pg致病力差异的基因基础.