幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因及其表达产物

幽门螺杆菌（Ｈｐ）的ｖａｃＡ基因和ｃａｇＡ基因分别表达ＶａｃＡ和ＣａｇＡ蛋白两种毒力因子。两种毒力因子之间有着相互的关联，在Ｈｐ引起的胃肠疾病中具有重要作用，Ｈｐ感染的临床发病与Ｈｐ的ｖａｃＡ基因型，具有ｃａｇＡ基因Ｈｐ以及ＶａｃＡ和ＣａｇＡ蛋白的表达有着密切的关系。     

幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因及其表达产物

幽门螺杆菌(Hp)的vacA基因和cagA基因分别表达VacA和CagA蛋白两种毒力因子。两种毒力因子之间有着相互的关联,在Hp引起的胃肠疾病中具有重要作用。Hp感染者的临床发病与Hp的vacA基因型、具有cagA基因Hp以及VacA和CagA蛋白的表达有着密切的关系。     

幽门螺杆菌vacA毒性片段与cagA融合基因的构建与表达

目的　构建幽门螺杆菌空泡毒素 (VacA)毒性片段和细胞毒素相关蛋白 (CagA)的融合基因 (vlc) ,在原核细胞中表达 ,为Hp双价融合蛋白候选疫苗的研究提供材料。 方法　用GeneSOEing技术将vacA毒性亚单位片段 (v)与cagA保守片段 (c)用疏水性多肽接头 (Gly4Ser) 3 进行拼接 ,构建融合基因vlc,将vlc定向插入原核表达质粒pQE30 ,经DNA测序分析确认后 ,转化E .coliDH5a ,IPTG诱导表达 ,Westernblot分析其抗原性。结果　DNA序列分析表明融合基因的连接顺序、方向正确 ,有一个碱基发生了无义突变。工程菌诱导后可表达相对分子量为 5 8× 10 3 的融合蛋白 ,与预期分子量一致 ,约占菌体总蛋白的 8%。Westernblot显示融合蛋白具有良好的抗原性。结论　融合基因vlc构建成功 ,表达的融合蛋白具有良好的抗原性 ,有望进一步进行免疫保护性机制的研究和Hp疫苗的制备。     

幽门螺杆菌cagA及vacA亚型与胃肠疾病的关系

目的调查石家庄地区慢性胃病患者感染幽门螺杆菌(H·pylori)的细胞毒素相关基因(cagA)及空泡毒素基因(vacA)亚型的流行情况;探讨H·pylori cagA、vacA亚型与胃肠疾病的关系。方法自石家庄地区慢性胃病患者胃黏膜中分离得到55株H·pylori,抽提各菌株的总DNA,采用特定引物对各菌株cagA3′端、vacA信号序列(s)及中间序列(m)进行PCR检测。结果H·pylori cagA的阳性者占89·1%(49/55),其在慢性胃炎和消化性溃疡中的阳性率差异无显著性(χ2=0·376,P=0·540)。H·pylori vacA基因亚型有s1a/m2、s1a/m1b-m2、s1a/m1b三种组合,各亚型所占比例分别为90·4%(47/52)、5·8%(3/52)、3·8%(2/52),其中最常见的vacA亚型s1a/m2在慢性胃炎与消化性溃疡中的阳性率差异无显著性(χ2=0,P=1·000)结论石家庄地区慢性胃病患者感染的幽门螺杆菌以cagA 、vacA s1a/m2亚型占优势,未发现H·pylori cagA及vacA亚型与特定胃肠疾病间存在显著相关性。     

河西走廊地域幽门螺杆菌vacA和cagA基因型分布研究

[目的]探讨河西走廊胃癌高发区胃癌患者幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)vacA和cagA基因型的分布情况,为当地Hp流行病学研究和疫苗研制提供参考。[方法]复苏和纯培养从河西走廊地域医院收集并分离到的89株Hp,抽提DNA,设计vacA信号序列s1a、s1b、s1c和cagA引物,PCR扩增vacA信号序列以及cagA基因并鉴定,分析Hp菌株中vacA和cagA基因型分布以及不同基因型与患者临床病理类型的关系。[结果]89 Hp菌株vacA基因均阳性,其中信号序列为s1a型者占66.29%,s1c型占33.71%,未见s1b型。vacA s1a基因型在慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌各组中的构成比均高于s1c基因型。不同病理类型的疾病间,vacA s1a和s1c基因型构成均差异无统计学意义(P0.05)。cagA阳性率为97.75%,cagA+菌株在慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌各组中的构成比均高于cagA-菌株。不同病理类型的疾病间,cagA+和cagA-菌株构成均差异无统计学意义(P0.05)。[结论]河西走廊地域Hp菌株大多数为致病性高的Ⅰ型菌株;vacA信号序列以s1a为主,其次为s1c;cagA+的高毒力菌株分布广泛,这可能是当地上消化道疾病高发的重要原因。     

幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因及其表达产物与胃十二指肠疾病的关系

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是慢性胃炎(chronic gastritis,CG)和消化性溃疡(peptic ulcer,PU)的病因之一。也是胃癌(gastric cancer,GC)的危险因素。Hp的空泡形成毒素基因(vacuolating toxin gene,vacA)型和细胞毒素相关基因(cytotoxin-associated gene,cagA)及其表达产物——空泡形成细     

靶向siRNA抑制幽门螺杆菌vacA表达

目的:观察靶向siRNA能否抑制幽门螺杆菌(H pylori)vacA基因表达．方法:合成靶向H pyiori vacA基因5对特异 siRNA(实验组:vacA-S1,vacA-S2,vacA-S3, vacA-S4,vacA-S5)和1对非特异siRNA(对照组)．通过电穿孔法使siRNA转化至H pylori内,观察转化效率和转化1,6,12,24,48 h mRNA和蛋白表达的抑制率,并将PCR产物克隆和测序. 结果:电穿孔转化效率平均为89％．vacA-S2、 vacA-S4组在转化1 h vacA mRNA表达抑制率达最大值,1,6,12 h抑制率分别为65％和77％,43％和50％,17％和9％,24和48 h时 vacA mRNA表达无抑制效应,与vacA-S1、 vacA-S3、vacA-S5、vacA-S6组相比有显著差异 (P<0．05),因为vacA-S1、vacA-S3、vacA-S5、 vacA-S6组转化后各时间点mRNA表达无变化．vacA-S2和vacA-S4组在转化1,6,12,24 h时 vacA蛋白表达抑制率分别为26％和17％,47％和40％,70％和75％,33％和30％,与vacA-S1、 vacA-S3、vacA-S5、vacA-S6组相比有显著差异 (P<0．05);转化48 h则无抑制效应．PCR产物克隆和测序与相应报道序列比较,同源性为99％．结论:靶向siRNA可以通过电穿孔法转化并特异地抑制H pylori vacA基因表达.     

幽门螺杆菌vac A基因型与胃癌及癌前病变的相关性

目的　分析胃癌高发的西安地区幽门螺杆菌 (Hp)分离株空泡形成毒素基因 (vacA)的基因型与胃癌及癌前病变的相关性。方法　建立Hp菌株库并采用聚合酶链反应 (PCR)技术进行vacA基因s、m分型。结果　 192株菌株中 ,s1型 174株 ,占 90 6 % ;s2型 18株 ,占 9 4%。m1型 99株(5 1 6 % ) ;m2型 93株 (4 8 4% )。所有菌株的PCR产物均为s1或s2 ,m1或m2。s1在胃癌分离株中表达占 94 5 % ,其中s1a型明显多于s1b(P <0 0 5 ) ;但m1和m2表达差异不显著。在胃炎组 ,仍是s1型表达占多数 (89 8% ) ,但s1a和s1b、m1和m2表达的差异无显著性。结论　无论胃癌还是胃炎均以s1型为主 ,且在胃癌组s1a型表达显著高于s1b型 ,它是否是促进胃黏膜恶性变的指标 ,尚需进一步研究。但可肯定西安地区vacA基因型以致病性较强的产毒型为主。     

幽门螺杆菌cagA/CagA分子生物学研究进展

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染人数众多,但临床表现各异。大部分感染者终生无症状,但部分感染者会发展为慢性胃炎、十二指肠炎、消化性溃疡、胃癌、粘膜相关胃淋巴瘤。Hp感染之所以有不同结局,在于菌株间存在致病力差异。Hp的致病因子包括菌毛、鞭毛、尿素酶、粘附素、细胞空泡毒素(vacuolization cytotoxin,VacA)、细胞毒素相关基因(cytotoxinassociated gene A,cagA)产物等,一些国家的流行病学研究表明,含细胞毒素相关基因,表达细胞毒素相关抗原A(cytotoxinassociated antigen A,CagA)的Hp菌株感染与十二指肠溃疡和胃癌等严重胃肠疾病发生有关,使cagA/CagA备受各国学者关注。最近,CagA进入宿主细胞后被磷酸化并导致宿主细胞形态改变的报道,为阐明CagA的致病作用和机制提供了契机,使得CagA的功能成为目前Hp研究的热点之一。     

太原地区不同临床型胃疾患与幽门螺杆菌感染及其毒力相关基因cagA关系的探讨

目的探讨幽门螺杆菌（Hp）感染、cagA^＋-Hp与胃部疾病严重程度的关系。方法胃镜直视下取102例胃粘膜组织并采血,分离血清。应用Hp-ureA-PCR,ELISA,细菌培养3种方法确定Hp感染例数,用PCR检测cagA-Hp基因。结果102例胃疾患病人,确定Hp感染76例,其中57例检测到cagA-Hp基因,检出率为75.00%。各型胃疾患病人cagA检出率分别为：CSG 52.38%（11/21）,CAG 92.31%（12/13）,GU81.82%（18/22）,GC 80.00%（16/20）。结论1）各种胃部疾病均与Hp感染有关,但单纯的Hp感染不足以解释临床结局的多样性;2）cagA^＋-Hp与胃部疾患的严重程度相关,携带有cagA的Hp可能具有较强的致病性,但其具体的致病机理尚需进一步阐明。     

中国幽门螺杆菌vacA基因的等位变异

目的 明确中国幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ）全长ｖａｃＡ基因的等位变异及其与西方主要菌株基因序列的差异。方法 从５例胃病患者胃黏膜粘栓组织中分离培养２２个单个Ｈｐ克隆,以Ｗｅｓｔｅｒｍ ｂｌｏｔ确定ｖａｃＡ表型特点,以体外细胞毒性试验研究其活性。然后选择５株有代表性的克隆进行基因组ＤＮＡ抽提、ＰＣＲ扩增及ｖａｃＡ基因全序列测定、分析。结果 ５株中４株ｖａｃＡ表达阳性。只     

中国幽门螺杆菌胃上皮细胞白细胞介素-8的转录能力

目的探讨中国幽门螺杆菌(Hp)的空泡毒素基因(vacA)型及cag致病岛对胃上皮细胞白细胞介素-8(IL-8)转录的影响.方法以基因测序与Southern杂交法确定HpvacA基因型及cag致病岛状态;构建带有IL-8报告基因的人胃癌细胞系L5F11,用液体闪烁计数仪测定荧光素酶活性(IL-8转录),用HeLa细胞测定空泡毒素活性.结果所有cag致病岛完整菌株(15株)较野生型cag致病岛阴性菌株G50诱导荧光素酶活性[记数/分(cpm)]明显增强[(0.47±0.19)×106cpm比(0.13±0.02)×106cpm,P＜0.01];而cag致病岛部分丢失菌株(4株)荧光素酶活性与G50差异无显著性[(0.23±0.08)×106cpm比(0.13±0.02)×106cpm,P＞0.05];vacA基因s1/m1型菌株(5株)较s1/m2型菌株(14株)空泡毒素活性增强(P＜0.01),但二者诱导荧光素酶活性差异无显著性[(0.29±0.12)×106cpm比(0.53±0.41)×106cpm,P＞0.05].结论中国Hp诱导胃上皮细胞IL-8转录能力与cag致病岛状态密切相关,而与vacA基因型无明显关系.     

湖北地区幽门螺杆菌VacA基因分型及疾病相关性分析

目的了解湖北地区幽门螺杆菌（Hp）空泡毒素基因（vacA）不同噩型及其与慢性胃炎（CG）和慢性消化性溃疡（CPU）之间的相关性。方法采用共享引物PCR技术和特异的PCR分型引物，对74例CG或CPU患者胃黏膜活检组织Hp分离株进行分型，并分析不同亚型与这两种疾病的相关性。结果湖北地区的HpvacA基因主要以S1a—m2型为主，vacA的优势亚型分布与上海和广州相似．除了s2型以外，sla—ml、S1b—m1、s1b—m2、s1c—m1和S1c—m2均有分布；另有8株不能被完全分型。结论湖北地区Hp vacA基因的不同亚型与CG和CPU之间不存在相关性，CG和CPU的引发因素有待进一步研究。     

定量检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白基因A方法的建立

目的建立定量检测幽门螺杆菌（Ｈｐ）细胞毒素相关蛋白基因Ａ（ｃａｇＡ）的方法。方法以含ＨｐｃａｇＡ片段的质粒（ｐＭＣ３）作为外参照品，在微孔板中对聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ｃａｇＡ的产物进行辣根过氧化物酶标记探针的杂交及酶促显色以定量检测ｃａｇＡ阳性Ｈｐ。结果当ＰＣＲ反应体系中原始模板为１～１０５拷贝，循环次数小于或等于２５时，原始模板以相对固定的指数形式增加，在该范围内适宜定量分析。通过对２０份已知Ｈｐ菌株ｃａｇＡ的检测，符合率达１００％，观察结果的敏感度较电泳法提高了２００倍。定量检测不同胃黏膜组织中ｃａｇＡ阳性Ｈｐ，检出底线为６拷贝／毫克组织。结论本方法特异性强，敏感度高，对研究Ｈｐ与消化道疾病的关系及建立定量检测其他微生物的方法均有实用价值     

采用竞争性定量PCR检测幽门螺杆菌cagA基因

目的建立竞争性定量 PCR 检测幽门螺杆菌 cagA 基因的方法。方法以重组 PCR 将乳糖操纵子中 Lac 阻抑蛋白特异性结合序列(21bp)重组入 cagA 基因397bp 的片段中构建内参标模援(rfcagA)。体外克隆并表达具有双功能的 GST-LacI 融合蛋白,其一端只有 GST 酶活性,另一端可特异性地与重组内参标模板结合。在定量 PCR 中,以 rfcagA 为内参标模板,pMC3 或 Hp 基因组 cagA 作为竞争性模板,PCR 产物的5′-端标记了生物素,可与包被了亲和素的微孔板结合,只有 rfcagA 的 PCR 产物可与融合蛋白结合而显色。结果 GST 底物的显色程度与样本的 ca-gA 含量呈负相关,当反应体系中的起始模板量为10-10~5拷贝,循环次数小于等于20次。原始模板数以指数方式增长,并建立了原始模板的考贝数与 A_(340)值同的标准曲线。用该方法检测12份已知菌株中的 cagA 含量,8份 cagA 阳性,cagA 基因的拷贝数为6.3×10~(10)-2.14×10~(11)/L,特异性为100%,敏感度达可检出 cagA 基因2倍的差别。结论这是一个特异、敏感及很实用的定量检测 cagA 基因的方法。     

High prevalence of potentially virulent strains of Helicobacter pylori in the general male British population

BACKGROUND: Strains of Helicobacter pylori that express the cytotoxin associated gene product A (CagA) may be more strongly associated with serious gastric diseases, such as gastric cancer and peptic ulceration, than other strains. Data, however, are sparse on the prevalence, risk factors, and other correlates of these strains in the general population. AIM: To characterise aspects of the seroepidemiology of CagA(+) strains of H pylori in the general British population. METHODS: We measured serum IgG antibodies to mixed H pylori antigens and separately to CagA in 1025 men aged 40-59 years who were randomly selected from a larger group of participants in a community based survey conducted in 18 different British towns. RESULTS: Overall, 44% (95% confidence interval 41-47%) of the men were seropositive to CagA antibodies, representing about 61% (57-65%) of the men seropositive to mixed antigen H pylori. The risk factors for seropositivity to CagA antibodies were similar to those for seropositivity to mixed antigen H pylori, apart from an increased prevalence of reported bedroom sharing in childhood (p<0.01). CONCLUSION: In a nationwide study of potentially virulent H pylori strains, there was a high prevalence of the infection, with some evidence that acquisition of such strains might occur earlier in life than other strains.     

幽门螺杆菌vacA基因型及其表达产物与胃十二指肠疾病关系的研究

目的 探讨幽门螺杆菌ｖａｃＡ基因型及其表达产物－ＶａｃＡ与胃十二指肠疾病之间的关系。方法 用聚合酶链反应技术测定６２株从慢性胃炎,消化性溃疡和胃癌患者中分离获得的幽门螺杆菌（Ｈｐ）菌株的ｖａｃＡ基因型,用Ｈｅｌａ细胞测定Ｈｐ菌株体外ＶａｃＡ活性。     

Helicobacter pylori cagA, iceA and vacA status in Taiwanese patients with peptic ulcer and gastritis

BACKGROUND: Helicobacter pylori causes chronic gastritis, peptic ulcer, gastric cancer and mucosa-associated lymphoid tissue (MALT) lymphoma. Different genotypes of H. pylori are confirmed from diverse geographical areas. Its association with clinical diseases remains controversial. The aim of the present study was to investigate the H. pylori vacuolating cytotoxin (vacA) alleles, cytotoxin-associated gene (cagA) and iceA, in patients with peptic ulcer and gastritis. METHODS: We enrolled patients with peptic ulcer and chronic gastritis. Biopsy specimens were obtained from the antrum and lower body of the stomach. DNA extraction and polymerase chain reaction (PCR) were used to detect the presence or absence of cagA and to assess the polymorphism of vacA and iceA. RESULTS: A total of 133 patients (57 gastric ulcer, 52 duodenal ulcer, 24 chronic gastritis) had positive PCR results from biopsy specimens. Concerning genotypes, we found cagA (79% in the antrum, 92% in the body) and iceA1 (73% in the antrum, 82.8% in the body) strains in the majority of patients. The dominant vacA subtype was s1a (74.4% in the antrum, 75% in the body), followed by s1c (51.1% in the antrum, 60.5% in the body). In the middle region, the m2 strain dominated (49.6% in the antrum, 41.4% in the body), followed by m1T (19.5% in the antrum, 9.5% in the body). Mixed infection occurred in 89 patients (67%). There was no statistical difference in genotypes among the three groups. CONCLUSION: In Taiwan, H. pylori with positive cagA and iceA1 was found in the majority of cases. H. pylori with vacA s1a strains was the most common vacA subtype, followed by s1c, while s1b was rare. In the middle region, the m2 subtype was predominant followed by m1T. There was no significant association between genotypes and clinical diseases.