补肾活血解毒方治疗骨髓增生异常综合征23例

[目的]观察中药补肾活血解毒方治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的疗效。[方法]用补肾活血解毒方为主治疗MDS23例，观察血象、骨髓象等变化。[结果]临床患基本缓解率21．74％，总有效率73．91％，其中RA的基本缓解率及总有效率分别为30％和90％。[结论]中药补肾活血解毒方对MDS-RA疗效较好。     

AG490及5-Aza对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及分子机制

【摘要】 目的 探讨JAK2/STAT3通路抑制剂AG490及DNA甲基化抑制剂5-Aza对血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖的影响及意义。方法 采用CCK8检测不同浓度AG490及5-Aza对PDGF-BB诱导PASMCs增殖的影响;将细胞分为对照组（正常的PASMCs）、0μM 组（予30 μg/L PDGF-BB 孵育48h)和25μM/1μM组、50μM/3μM组、100μM/5μM组（25μM/1μM组、50μM/3μM组、100μM/5μM组分别给予25/1、50/3、100/5μmol/L AG490/5-Aza共同孵育细胞）。采用RT-qPCR检测IL-6、GATA6、JAK2及STAT3 mRNA表达水平;Western blot检测GATA6、p-JAK2及p-STAT3蛋白的表达。结果 与对照组比较,0 μM AG490组IL-6、JAK2、STAT3mRNA表达均增加,GATA6mRNA及蛋白水平降低,p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3表达升高（P＜0.05）。与0μM AG490组比较,25、50、100μM AG490组细胞增殖减少,IL-6、JAK2和STAT3mRNA的表达均降低,GATA6mRNA及蛋白表达升高,p-JAK2/JAK2水平降低（均P＜0.05）,50和100μM组中p-STAT3/STAT3水平降低（均P＜0.05）;与0μM 5-Aza组相比,1μM、3μM、5μM 5-Aza组细胞增殖减少,IL-6mRNA表达降低,GATA6蛋白、p STAT3/STAT3表达增高,p-JAK2/JAK2水平降低（均P＜0.05）,JAK2、STAT3mRNA水平无显著差异（P＞0.05）;3μM和5μM 5-Aza组中GATA6mRNA表达增高(P＜0.05)。结论 AG490及5-Aza对 PDGF-BB诱导的PASMCs增殖具有抑制作用,该作用可能与阻断JAK2/STAT3信号通路,抑制IL-6调节GATA6启动子甲基化有关。     

IL-27通过JAK2/STAT1信号通路影响血管内皮细胞功能参与子痫前期发病机制的相关研究

目的：探讨IL-27参与原代人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）功能受损的信号通路,及其在子痫前期发病机制中的作用。方法：①使用Western blot检测子痫前期和正常足月胎盘组织中白介素（interleukin,IL）-27及其受体WSX-1的表达;②分离并培养原代人脐静脉内皮细胞,用免疫荧光的方法鉴定HUVECs细胞;③对原代HUVECs予以50 ng/mL人重组IL-27蛋白刺激15 min、30 min、1 h和2 h后,提取蛋白,Western blot方法检测JAK2、STAT1的活化情况;④使用JAK的特异性抑制剂AG490处理原代HUVECs后,分为6个处理组,分别是空白对照组（Con）、DMSO组、抑制剂组（AG490）,IL-27处理组（IL-27）、IL-27和DMSO共同处理组（DMSO+IL-27）、IL-27和抑制剂共同处理组（AG490+IL-27）,然后用Transwell和细胞管腔成型实验检测IL-27对原代HUVECs血管成形能力的影响。结果：①IL-27及其受体WSX-1的蛋白水平在子痫前期胎盘组织中高于正常足月胎盘（t=2.980,P=0.020;t=2.520,P=0.040）;②成功在体外建立培养原代人脐静脉内皮细胞的模型;③人重组IL-27（50 ng/mL）刺激HUVECs细胞后可以激活JAK2/STAT1信号通路;④与相应对照组相比,IL-27组、DMSO+IL-27组的迁移和血管成形能力降低（t=16.050,P=0.000;t=16.610,P=0.000;t=11.360,P=0.000;t=11.740,P=0.000）。但是AG490+IL-27组与AG490组相比,并无明显变化（t=0.420,P=0.770;t=0.290,P=0.790）。结论：IL-27可能通过JAK2/STAT1信号通路影响血管内皮细胞功能参与子痫前期的发病。     

AG490对人胃癌裸鼠移植瘤中瘦素、JAK2/STAT3信号通路的影响

目的探讨在AG490干预下,瘦素(leptin)和JAK2/STAT3信号通路对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响,以及与其基因表达水平之间的关系。方法建立人胃癌SGC-7901细胞BALB/c-nu雄性裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机平均分为4组,A组为空白对照组,B组腹腔注射AG490,C组腹腔注射AG490和碧生源牌减肥茶灌胃,D组腹腔注射5-FU。记录各组裸鼠肿瘤重量,计算肿瘤生长抑制率,RT-PCR检测肿瘤中leptin、JAK2、STAT3 mRNA表达水平。结果AG490、5-FU可抑制人胃癌移植瘤的生长,同时均可降低leptin表达水平;AG490可同时降低JAK2、STAT3mRNA的表达水平,而5-FU不能降低JAK2、STAT3mRNA的表达;碧生源牌减肥茶对瘤重和leptin、JAK2、STAT3mRNA表达水平无影响。结论 AG490可能通过阻断JAK2/STAT3信号通路降低leptin的表达,进一步抑制胃癌细胞增殖。leptin的调控除了JAK2/STAT3信号通路外可能还存在其他途径。     

AG490对缺血性脑损伤后炎症反应的影响

目的：研究AG490对大鼠缺血性脑损伤（ ischemic brain injury ）后TNF-α,IL-6表达的影响。方法健康雄性SD大鼠120只,随机分为假手术组、IBI-isotonic saline 组和IBI-AG490干预组,各组依次分为6h,12h,24h,72h 4个亚组;采用线栓法制作MCAO动物模型,AG490干预组于伤后1h腹腔注射AG490（5mg/kg）,假手术组、IBI-isotonic saline组腹腔注射等渗盐水（5ml/kg）;Real time PCR法测定TNF-αmRNA,IL-6mRNA,ELISA法测定TNF-α,IL-6含量。结果 TNF-αmRNA,IL-6 mRNA在缺血发生后表达程度均增高,给予AG490干预可降低其表达水平,与假手术组相比差异具有统计学意义（P＜0．05）,TNF-α,IL-6检测显示相似结果。结论缺血性脑损伤后给予AG490能降低受伤脑组织的炎症反应,其机制可能与JAK/STAT途径有关。     

MDS、AML患者T淋巴细胞及相关细胞因子表达水平的研究

目的 通过检测骨髓增生异常综合征( MDS)和急性髓系白血病( AML)患者外周血T 淋巴细胞及其分泌的相关细胞因子表达水平的变化,研究此两种疾病免疫状态的区别并指导治疗.方法 采用流式细胞微球芯片捕获术( CBA)及流式细胞术检测20 例 MDS 患者[ MDS 组,难治性贫血(RA) 与难治性贫血伴原始细胞增多(RAEB) 各10 例]、15例AML患者( AML组) 和10名健康体检者(正常对照组)外周血中调节性T细胞(Treg)、白细胞介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17 (IL-17)的表达水平,间接评价各组T 淋巴细胞免疫状态,并作比较.结果 与正常对照组相比,RA组TNF、IL-17、IL-2、IFN-γ表达水平均较高(P＜0. 05),RAEB组和AML组Treg、IL-10、IL-6、IL-4 表达水平均较高(P ＜0. 05).与 MDS-RA组比较,MDS-RAEB 组和AML 组TNF、IL-17、IL-2、IFN-γ表达水平均较低(P＜0. 05),而Treg、IL-10、IL-6、IL-4 表达水平均较高(P＜0. 05).结论 不同时期的MDS和AML患者其免疫状态并不相同.     

马钱子碱对多发性骨髓瘤U266细胞JAK-STAT信号通路的影响

目的观察马钱子碱对多发性骨髓瘤U266细胞JAK—STAT通路的影响。方法马钱子碱和／或JAK—STAT途径特异性抑制剂AG490培养多发性骨髓瘤U266细胞,MTT法检测马钱子碱对多发性骨髓瘤U266细胞株增殖的影响,计算IC50值,用于实验。RT—PCR法检测马钱子碱对多发性骨髓瘤U266细胞stat3、star5mRNA表达的影响。结果（1）马钱子碱对多发性骨髓瘤细胞增殖的抑制率呈剂量和时间依赖性。（2）马钱子碱AG490均可下调stat3、stat5mRNA表达水平（P〈0．05）,而马钱子碱作用强于AG490组,并呈时间依赖性。马钱子碱＋AG490组作用强于马钱子碱、AG490单独作用组,呈时间依赖性。结论马钱子碱能下调stat3、stat5mRNA表达水平,抑制细胞JAK—STAT信号转导通路,从而抑制多发性骨髓瘤U266细胞增殖。     

骨髓增生异常综合征患者的骨髓微血管密度检测意义

目的：观察骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓微血管密度（MVD），分析微血管密度与MDS分型及治疗的关系。方法：MDS低危组25例，高危组21例及正常对照组20例，采用免疫组化法标记骨髓组织中血管内皮细胞。在光学显微镜下计数骨髓微血管数，取平均值为MVD。结果：治疗前低危组MVD为（18．26±2．62）／HP，高危组MVD为（25．75±3．27）／HP，对照组MVD为（8．10±2．93）／HP；低危组和高危组与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．001）；低危组与高危组比较差异亦有统计学意义（P〈0．001）；低危组及高危组治疗后分别有36％和81％的患者MVD降低，两者对治疗的反应有明显差异。结论：骨髓增生异常综合征患者骨髓血管新生明显，MVD与MDS分型及疗效有密切相关。     

骨髓增生异常综合征骨髓巨核细胞的观察

目的通过对骨髓增生异常综合征（MDS）各型中骨髓病态巨核细胞的观察,探讨其在MDS诊断和分型中的作用。方法对67例MDS患者骨髓片中的巨核细胞进行分类,比较及分析。结果高危亚型组和中危亚型组各类病态巨核细胞检出率均明显高于低危亚型组（P〈0.05）。结论髓象中各种病态巨核细胞检出率大小与MDS病态造血程度呈正相关性,对MDS的诊断和分型有重要意义。     

JAK2/STAT3信号通路在白藜芦醇抗肝脏缺血再灌注损伤中的作用及机制研究

目的：：探讨JAK2/STAT3信号通路在白藜芦醇抗肝脏缺血再灌注损伤中的作用及机制。方法：健康雄性SD大鼠40只随机分为4组,假手术对照(SC)组、肝脏缺血再灌注(HIR)组、白藜芦醇处理(Res+HIR)组、JAK2/STAT3通路阻断剂AG490(Res+AG490+HIR)组。建立急性肝脏缺血再灌注损伤模型,于再灌注6h后收集动物血液和肝脏标本。检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(AKP)及炎症因子IL-6、TNF-α、IL-10、TGF-β的变化。肝脏组织HE染色,光镜下观察肝组织形态学变化。结果：与HIR组相比,Res+HIR组大鼠肝组织病理学变化明显改善,血清中反映肝脏功能学的指标ALT、AST及AKP的浓度明显降低,同时血清中抗炎因子IL-10和TGF-β含量升高,而促炎因子IL-6和TNF-α含量降低;使用JAK2/STAT3通路阻断剂AG490后,肝组织病理学改变明显,ALT、AST及AKP的浓度明显升高,IL-10和TGF-β含量降低,而IL-6和TNF-α含量明显升高。结论：白藜芦醇对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用可能是通过激活JAK2/STAT3信号通路,改变再灌注过程中炎性反应实现的。     

JAK2-STAT3信号通路在白介素-1β经动脉外膜给药致平滑肌细胞增殖迁移中的作用

目的研究白细胞介素-1β经血管外膜给药导致动脉平滑肌细胞发生的改变及其与JAK2-STAT3信号通路的关系,明确JAK2-STAT3信号通路在血管增殖性病变中的作用。方法 6～8周龄SD雄性大鼠24只,分离左侧颈总动脉,实验组(n=18)血管外膜包裹含白介素-1β2.5μg的琼脂缓释悬液,对照组(n=6)包裹不含白介素的琼脂悬液,术后2、8、24、48 h,1、2周分别处死实验组大鼠3只,对照组1只,血管标本经切片HE染色观察形态,Western blot法检测JAK2、STAT3、磷酸化JAK2以及磷酸化STAT3的表达,免疫组化标记定位磷酸化JAK2及磷酸化STAT3;另取SD雄性大鼠9只,分离两侧颈总动脉,左侧滴加JAK2抑制剂AG490缓释凝胶,右侧滴加等量空白凝胶后两侧均包裹等量白介素-1β,术后8、48 h,1周处死动物分别行HE染色及Western blot检测。结果白介素-1β包裹血管外膜后出现血管平滑肌细胞的增殖、迁移,通道蛋白JAK2、STAT3在不同时间点出现不同程度的磷酸化,经Western blot检测并行灰度分析,p-JAK2相对灰度值对照组(0.337±0.216),8 h组(1.764±0.513),1周组(0.451±0.229);p-STAT3相对灰度值对照组(0.125±0.870),24 h组(1.909±0.309),2周组(0.448±0.516),各组间有明显差异(P<0.05)。加用抑制剂后,8 h组p-JAK2相对灰度值实验侧(0.085±0.031),对照侧(1.416±0.468),48 h组p-STAT3相对灰度值实验侧(0.460±0.065),对照侧(2.425±0.638),提示JAK2、STAT3的磷酸化水平被明显抑制(P<0.05),平滑肌细胞变化程度下降。结论炎性因子白细胞介素-1β经动脉外膜给药可致动脉平滑肌细胞增殖、迁移,这种改变与JAK2-STAT3信号通路有直接关系。     

2型糖尿病大血管病变患者血清诱导的人脐静脉内皮细胞中JAK2/STAT3信号通路的表达

目的 探讨Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路在2型糖尿病大血管病变发病机制中的作用.方法 取健康志愿者、单纯2型糖尿病患者和2型糖尿病大血管病变患者的血清孵育人脐静脉内皮细胞(HUVEC)24 h,通过给予JAK2特异性抑制剂AG490阻断JAK2/STAT3信号通路,并将细胞按不同处理方式分为对照组(NC组)、单纯糖尿病组(DM组)、糖尿病大血管病变组(DV组)、单纯糖尿病+AG490组(DM+AG490组)及糖尿病大血管病变+AG490组(DV+AG490组),各30例.采用实时定量PCR技术检测各组细胞JAK2、STA T3、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体(FLT1)mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测JAK2、STAT3和磷酸化STAT3 (p-STAT3)蛋白表达量.结果 与NC组比较,DM组和DV组HUVEC细胞内JAK2、STA T3mRNA和JAK2、p-STAT3的蛋白表达水平均上调(P＜0.05),且DV组JAK2、STA T3 mRNA和JAK2、p-STAT3蛋白表达水平均高于DM组(P＜0.05).DM+AG490组和DV+AG490组的JAK2、STA T3 rnRNA和JAK2、p-STAT3蛋白表达水平分别低于DM组、DV组(P＜0.05).与NC组和DM组比较,DV组VEF和FLT1 mRNA的表达水平上调(P＜0.05);而与DV组比较,DV+AG490组VEGF和FLT1 mRNA的表达水平均下调(P＜0.05).结论 JAK2/STAT3信号通路可能参与2型糖尿病大血管病变的发病过程.     

Janus激酶抑制剂AG490对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移的影响

目的 研究Janus激酶抑制剂AG490对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移能力的影响,探讨JAK2/STAT3信号通路在肝癌侵袭调控中的作用。方法实验分为对照组、实验组（5、10 μmol/L AG490处理的SMMC-7721细胞）。采用Transwell小室检测肝癌细胞的侵袭能力,RT-PCR检测MMP-2 m...     

AG490改善缺血性脑卒中后神经功能的机制研究

目的:探讨AG490改善缺血性脑卒中后神经功能的机制研究。方法:采用C57BL/6J成年雄性小鼠构建光化学法局灶性大脑皮层缺血性脑卒中模型,随机分为Control组、Stroke组、DMSO组和AG490组,每组18只。术后1、3、7、14 d进行神经功能评分。术后第3天进行荧光定量PCR检测小鼠脑组织中Janus 激酶2（JAK2）、信号转导与转录激活因子3（STAT3）、白细胞介素-1α（IL-1α）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、补体C1q、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、紧密连接蛋白（Occludin、Claudin5和ZO-1）的表达,免疫印迹检测自噬相关蛋白（LC3Ⅱ/Ⅰ、P62/SQSTM1、Beclin-1）以及Occludin、Claudin5、ZO-1表达水平变化。结果:与Stroke组和DMSO组相比,AG490组在第3天、 7 天和 14 天错步/总步比例降低（F=3.704、9.199、10.83,均P＜0.05）,JAK2、STAT3 mRNA表达下调（F=6.331、7.168,均P＜0.05）,血脑屏障相关蛋白（Occludin、Claudin5、ZO-1）mRNA表达（F=7.648、29.83、25.08,均P＜0.05）和蛋白表达水平上调（F=12.42、10.88、14.32,均P＜0.05）,MMP-9 mRNA表达水平下调（F=9.790,P＜0.01）,脑组织炎性因子IL-1α、MCP-1和C1q表达下调（F=5.486、5.455、4.862,均P＜0.05）,自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1表达上调（F=6.092、15.52,均P＜0.05）,P62 /SQSTM1表达下调（F=8.143,P＜0.05）。结论:AG490通过抑制JAK2-STAT3通路的促炎作用并调节自噬,减轻血脑屏障损伤,改善缺血性脑卒中后的神经功能障碍。     

JAK2/STAT3通路在肝癌细胞侵袭及血管生成拟态中的作用

目的 探讨JAK2/STAT3通路在肝癌细胞QGY-7701侵袭及血管生成拟态中的作用.方法 JAK2抑制剂AG490(5、10 μmol/L)处理肝癌细胞48 h,Transwell小室、体外成管实验分别检测各组细胞的体外侵袭能力和成管能力,RT-PCR检测Twist1及MMP-2 mRNA表达差异,Western blot检测STAT3、p-STAT3、Twistl和MMP-2蛋白表达差异.结果 与对照组相比,Transwell小室穿膜细胞数减少,形成管道结构数目减少,Twist1及MMP-2 mRNA表达减少,Twist1、MMP-2和p-STAT3蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P＜0.05),STAT3蛋白表达无差异(P＞0.05).结论 AG490能有效抑制肝癌细胞侵袭及成管的能力,JAK2/STAT3通路在肝癌细胞侵袭及血管生成拟态中起促进作用.     

JAK/STAT信号通路在大鼠重症急性胰腺炎早期作用机制的研究

  目的  探讨抑制JAK/STAT信号通路对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)早期相关疾病指标的影响，从而推测该信号通路在SAP大鼠中可能的作用机制。  方法  将54只成年SD大鼠按随机数字表分成对照组、SAP组、AG490组，每组18只，AG490组造模前给予AG490，其他组给予等量生理盐水，以5%牛磺胆酸钠逆行胆胰管内注射法制作SAP模型，造模后6、12、24 h每组分别处死6只大鼠，取心房血测血淀粉酶、血钙、TNF-α、IL-1、IL-6，留取胰腺组织行HE染色病理检查及Western blotting法检测胰腺组织中STAT3蛋白表达水平。  结果  AG490组在6、12、24 h淀粉酶值分别为(2 049.17±257.00)U/L、(2 915.00±188.42)U/L、(3 746.50±181.05)U/L，高于对照组、低于SAP组，SAP组高于对照组(均P＜0.05)；AG490组6、12、24 h血钙浓度高于SAP组, 2组均低于对照组(均P＜0.05)；AG490组6、12、24 h TNF-α、IL-6、IL-1均低于SAP组，2组均高于对照组；SAP组胰腺组织STAT3表达量随时间增加，24 h明显高于AG490组，其他时间点差异不明显。SAP组、AG490组胰腺病理切片可见胰腺细胞水肿、炎性细胞浸润，差异不明显。  结论  SAP早期阶段可能是通过JAK/STAT信号通路诱导多种炎性因子分泌，促进胰腺炎的进展。      

JAK2/STAT3通路在表皮生长因子诱导结肠癌细胞侵袭迁移中的作用

目的探讨JAK2/STAT3通路在表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导结肠癌细胞侵袭迁移中的作用。方法以人结肠癌细胞株LoVo为研究对象,分为对照组、表皮生长因子处理组(EGF组)、表皮生长因子与JAK2激酶抑制剂AG490共处理组(EGF+AG490组)。采用免疫荧光和Western blot检测各组LoVo细胞E钙粘素蛋白、磷酸化STAT3表达水平;Transwell法检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果细胞划痕实验对照组细胞划痕闭合约38%,EGF+AG490组细胞划痕闭合约40%,而EGF组闭合约80%。EGF组显著高于另2组(P<0.05);体外侵袭实验显示对照组透膜细胞数为(21.24±2.65)/视野,EGF+AG490组为(23.19±3.50)/视野,EGF组为(55.08±2.14)/视野。EGF组显著高于另2组(P<0.05);与EGF+AG490组结肠癌LoVo细胞相比,EGF组细胞P-STAT3表达增加72.4%,E-cadherin蛋白表达降低68.5%(P<0.05);免疫荧光显示EGF组细胞E-cadherin向细胞质内移位...