胰岛素对人外周血单个核细胞肿瘤坏死因子α蛋白表达及分泌的影响以及普伐他汀的干预作用

探讨胰岛素对培养的人外周血单个核细胞肿瘤坏死因子α蛋白表达及分泌的影响，以及普伐他汀对其的作用。健康人静脉血加入淋巴细胞分离液后离心提取人外周血单个核细胞培养，加入不同浓度的胰岛素、普伐他汀及甲羟戊酸孵育48h，采用Western blot及酶联免疫吸附法等方法，观察人外周血单个核细胞中肿瘤坏死因子α蛋白表达水平及细胞培养上清中肿瘤坏死因子α蛋白水平。结果发现，胰岛素可诱导人外周血单个核细胞及其培养上清中肿瘤坏死因子α蛋白水平显著升高，且呈剂量依赖性，加入普伐他汀后可使胰岛素刺激的人外周血单个核细胞及其培养液上清中肿瘤坏死因子α蛋白水平显著下降，普伐他汀的这种作用可被甲羟戊酸所抑制。结果提示，普伐他汀对糖尿病患者心血管系统的保护作用可能部分与其抑制胰岛素介导的炎症反应有关。     

支气管哮喘患者外周血单个核细胞凋亡的检测

支气管哮喘是由多种炎性细胞和炎性介质参与的慢性气道炎症 ,其中单核 巨噬细胞在哮喘发病中起重要作用。本研究意在观察哮喘患者外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ)的凋亡及糖皮质激素对其的影响。一、对象与方法1.对象 :(1)哮喘组 :2 0 0 0年 1月～ 2 0 0 0年 12月在我院呼吸科就诊的中、重度哮喘急性发作期患者 30例 ,男 17例 ,女 13例 ,年龄 (38± 11)岁 ,诊断符合 1997年中华医学会呼吸病学分会制定的支气管哮喘防治指南 (支气管哮喘的定义、诊断、治疗、疗效判断标准及教育和管理方案 )。所有患者对包括屋尘螨在内一项以上过敏原测定结果阳…     

哮喘患者外周血肿瘤坏死因子—α水平及影响因素

测定了２０例哮喘患者及１５例正常人的外周血肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）水平，并分离哮喘患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）于体外加药培养，结果显示，哮喘患者外周血ＴＮＦ－α水平明显高于正常人，其在哮喘发病中具有重要意义，植物血凝素（ＰＨＡ），抗原可激发ＰＢＭＮＣ产生ＴＮＦ－α，治疗浓度氨茶碱可抑制ＰＢＭＮＣ分泌ＴＮＦ－α。     

反义内皮素转换酶核酸对尘螨过敏哮喘患者外周血单个核细胞释放白细胞介素5的抑制作用

目的　探讨转导反义内皮素转换酶 (ECE)核酸的气道上皮细胞对尘螨过敏性患者外周血单个核细胞释放Th1/Th2相关细胞因子的影响。方法　尘螨过敏患者 2 1例 ,分离其外周血单个核细胞 (PBMC) ,根据实验要求分为 :未刺激组 (A组 )、反义ECE上皮细胞 +PBMCs组 (A1组 )、对照组上皮细胞 +PBMCs组 (A2 组 )及螨刺激组 (B组 )、反义ECE上皮细胞 +PBMCs+尘螨提取液组 (B1组 )、对照组上皮细胞 +PBMCs+尘螨提取液组 (B2 组 ) ,共培养 72h ,螨刺激组同时加入尘螨提取液 2 0 μg/ml。培养上清用酶联免疫吸附 (ELISA)法检测白细胞介素 5 (IL 5 )、γ干扰素 (IFN γ)。结果2 1例患者中有 12例患者经尘螨刺激后IL 5释放明显增加。将 12例患者进行统计学分析发现 ,未经尘螨刺激时 ,A1组IL 5和IFN γ水平分别为 [(6 0± 1 3)× 10 -9g/L]和 [(6 3± 2 6 )× 10 -9g/L],A2 组为 [(7 5± 1 1)× 10 -9g/L]、[(70± 5 2 )× 10 -9g/L],两组比较差异均无显著性 (P >0 0 5 ) ;尘螨刺激后 ,B1组的IL 5水平和IFN γ分别为 [(8 2± 1 6 )× 10 -9g/L]、[(10 0± 4 1)× 10 -9g/L],B2 组分别为[(12 0± 1 8)× 10 -9g/L]、[(15 3± 71)× 10 -9g/L],两组IL 5比较差异有显著性 (P =0 0 4 7) ,而IFN γ水平比较差异无显著性 (P >     

高血压病患者外周血单个核细胞分泌白细胞介素1β水平的变化

目的观察高血压病患者体外培养的外周血单个核细胞炎症因子白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的分泌,了解高血压病患者外周血单个核细胞炎症因子的分泌状态。方法序贯选取33例高血压病患者及12例血压正常者作对照。用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞进行体外培养。用酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清的白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的浓度。结果高血压组和正常对照组外周血单个核细胞培养上清液白细胞介素1β(182±66ngL比154±63ngL)和肿瘤坏死因子α(142±74ngL比168±61ngL)的自发性分泌差异均无显著性。脂多糖刺激后高血压组和正常对照组白细胞介素1β(2179±660ngL比182±66ngL;2854±631ngL比154±63ngL,P<0.05)和肿瘤坏死因子α(442±134ngL比142±74ngL;500±176ngL比168±61ngL,P<0.05)分泌均较自发性分泌显著增加。与正常对照组比较,高血压病患者脂多糖刺激的外周血单个核细胞白细胞介素1β分泌增加(2854±631ngL比2179±660ngL,P<0.05)。结论高血压病患者的外周血单个核细胞处于一定程度的炎症激活状态,炎症反应可能与高血压病的形成和发展及并发症的发生有关。     

肿瘤坏死因子α及淋巴毒素α基因多态性和支气管哮喘患者的关系

肿瘤坏死因子α(ＴＮＦ α)在哮喘的炎症反应中起重要作用[1] 。淋巴毒素α(ＬＴ α)基因与ＴＮＦ α基因紧密连锁 ,二者位于人类染色体 6ｐ2 1.3。我们采用聚合酶链反应 限制性长度多态性 (ＰＣＲ ＲＦＬＰ)方法研究了ＴＮＦ α/ＬＴ α基因多态性与我国北方哮喘患者及家系遗传易感性间的关系。对象与方法　 12 5例哮喘患者中男 4 8例 ,女 77例 ,平均年龄 (39± 14 )岁 ,平均病程 (17± 12 )年。其中 70 % (88/ 12 5 )哮喘患者存在明确的过敏原。 14 % (18/ 12 5 )患者有哮喘家族史 ,4 2 % (5 1/ 12 5 )哮喘患者有明确的夜间症状。 12 5例…     

哮喘患者外周血单个核细胞中热休克蛋白90和糖皮质激素受体mRNA的表达

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)和糖皮质激素受体(GR)mRNA在糖皮质激素敏感型(SS)、依赖型(SD)和抵抗型(SR)哮喘中的表达及其在SR哮喘发病中的作用.方法采用逆转录-聚合酶链(RT-PCR)的方法分别测定正常组(10名)、SS哮喘组(10例)、SD哮喘组(5例)和SR哮喘组(6例)患者的外周血单个核细胞(PBMC)中GR和HSP90mRNA的表达,并在体外用白细胞介素2(IL-2)、IL-4分别和联合刺激上述细胞观察其受刺激后GR和HSP90mRNA表达的改变情况.结果SR哮喘组患者的GR和HSP90mRNA表达水平最高,分别为0.730±0.171、1.122±0.165,SS哮喘组次之,分别为0.359±0.350、0.885±0.250,SD哮喘组最低,分别为0.017±0.008、0.078±0.039.正常组有一定表达,分别为0.052±0.013、0.362±0.101.GR和HSP90mRNA的表达在各组间作相互比较,差异有显著性(P均<0.05).正常组、SS、SD和SR哮喘组HSP90/GR的比值分别为7.15±1.84、8.39±7.95、5.51±3.30、1.57±0.18,SR哮喘组HSP90/GR比值与前三组比较,差异有显著性(P<0.05).IL-2和IL-4联合刺激可使SS、SD和SR哮喘组GRmRNA表达增强和SS、SD哮喘组HSP90mRNA表达增强,却不能使SR哮喘组HSP90mRNA表达增强.结论SR哮喘组中HSP90mRNA表达相对不足造成HSP90/GR比值降低可能是SR哮喘组形成的原因之一,IL-2和IL-4联合应用对GR和HSP90mRNA表达的不同调节作用可能是形成SR哮喘组HSP90/GR比值降低的原因之一.     

肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2和叉头样转录因子3 mRNA在原发性肝癌患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的探讨原发性肝癌患者外周血单个核细胞(PBMC)中肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)和CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg)叉头样转录因子3(Foxp3)的表达及相关关系。方法选择2014年1月-2016年12月在河北医科大学第三医院门诊及住院的原发性肝癌患者55例,同期选择健康自愿者35例为对照组。检测2组PBMC中TIPE2 mRNA和Foxp3mRNA的表达水平,并与肝脏血清生化指标、AFP、血白细胞及肿瘤大小、数量等进行相关性分析。符合正态分布的计量资料2组间比较采用t检验;不符合正态分布的计量资料2组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料2组间比较采用χ2检验;相关分析采用Pearson相关性检验。结果 2组患者ALT、AST、AST/ALT、TBil、WBC、AFP水平比较,差异均有统计学意义(P值均0. 05)。原发性肝癌组患者TIPE2 mRNA表达较对照组明显降低(0. 396±0. 174 vs 1. 045±0. 330,t=12. 187,P 0. 01);而Foxp3 mRNA表达较对照组明显升高(4. 498±1. 672 vs 1. 922±1. 297,t=7. 746,P 0. 01)。TIPE2 mRNA表达与血清ALT、AST、AST/ALT及AFP均呈负相关(r值分别为-0. 752、-0. 833、-0. 992、-0. 848,P值均0. 05),而Foxp3 mRNA表达与ALT、AST、AST/ALT及AFP均呈正相关(r值分别为0. 449、0. 536、0. 843、0. 640,P值均0. 05)。TIPE2 mRNA表达与Foxp3 mRNA呈负相关(r=-0. 821,P 0. 01)。结论肝癌患者的TIPE2 mRNA表达下调,而Foxp3 mRNA表达上调,并与肝细胞损伤程度和AFP水平有一定的相关性,TIPE2基因可能通过负性调控Treg介导的免疫反应参与肝癌的发病过程。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞c-kit受体表达的研究

目的：探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）中c-kit受体的表达及其临床意义。方法：采用免疫荧光标记，流式细胞仪检测SLE患者PBMC的c-kit受体蛋白（CD117）表达，反转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）检测其c-kit mRNA的表达水平，并分别与正常人比较。结果：SLE患者PBMC中c-kit受体及其mRNA表达水平与正常组相比显著增高（P＜0．05）；活动期与非活动期相比显著增高（P＜0．05），非活动期SLE患者PBMC的c-kit受体蛋白表达与正常人差异无显著性（P＞0．05），PBMC的c-kit受体蛋白表达与其SLEDAI显著相关（P＜0．01），结论：SLE患者PBMC c-kit受体蛋白水平及其mRNA表达水平均显著高于正常人，且与疾病活动呈正相关，c-kit受体可能在SLE的病程变化中起着重要作用。     

染料木黄酮对支气管哮喘患者核因子κB和肿瘤坏死因子α的影响

支气管哮喘 (简称哮喘 )急性发作时患者体内产生活性氧过多导致氧化应激 ,核因子κB(NF κB)表达增强致前炎因子释放。异黄酮类抗氧化剂染料木黄酮 (5 ,7,4 三羟基异黄酮 )可抑制多种细胞产生活性氧自由基。我们的研究旨在探讨染料木黄酮对哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMCs)NF κB表达及肿瘤坏死因子α(TNF α)分泌的影响。对象与方法　哮喘组 32例 ,男 2 0例 ,女 12例 ,平均年龄(4 9± 19)岁 ,均为兰州医学院第一附属医院呼吸科确诊的门诊及住院患者 ,诊断符合中华医学会呼吸病学分会哮喘学组制定的“支气管哮喘防治指南”诊断标准[…     

支气管哮喘患者外周血巨噬细胞移动抑制因子的表达及意义

目的观察巨噬细胞移动抑制因子（macrophagemigrationinhibitoryfactor,MIF）在支气管哮喘（简称哮喘）患者外周血中的表达水平及其意义。方法应用酶联免疫吸附试验法和荧光定量PCR技术,测定56例哮喘患者（哮喘组）和34名健康对照者（对照组）外周血MIF的表达水平。根据临床症状和肺功能检查将哮喘患者分为发作期、缓解期两组,其中发作期32例,缓解期24例,并对结果进行统计学处理。结果血浆MIF的浓度和外周血单个核细胞MIFmRNA的表达水平：哮喘组高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）;哮喘发作期组高于缓解期组,差异有统计学意义（P〈0．05）;但缓解期组与正常之间差异无统计学意义。结论MIF可能参与哮喘的病理过程并发挥重要作用,哮喘患者发作期血MIFmRNA表达及血MIF水平显著增高,其变化可反映疾病的活动性。     

支气管哮喘患者外周血巨噬细胞移动抑制因子的表达及意义

目的 观察巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)在支气管哮喘(简称哮喘)患者外周血中的表达水平及其意义.方法 应用酶联免疫吸附试验法和荧光定量PCR技术,测定56例哮喘患者(哮喘组)和34名健康对照者(正常对照组)外周血MIF的表达水平.根据临床症状和肺功能检查将哮喘患者分为发作期组和缓解期组,其中发作期组32例,缓解期组24例,并对结果进行统计学处理.结果 血浆MIF的浓度和外周血单个核细胞MIF mRNA的表达水平:哮喘组高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);哮喘发作期组高于缓解期组,差异有统计学意义(P<0.05);但缓解期组与正常对照组之间差异无统计学意义.结论 MIF可能参与哮喘的病理过程并发挥重要作用,哮喘患者发作期组血MIF mRNA表达及血MIF水平显著增高,其变化可反映疾病的活动性.     

外周血单个核细胞巨噬细胞移动抑制因子表达及其与狼疮活动

目的 观察系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)巨噬细胞移动抑制因子(MIF)mRNA表达及血MIF水平的变化,并分析其与SLE疾病活动性、血清免疫学指标的相关关系。方法 采用逆转录-PCR技术及ELISA方法分别测定34例活动期和21例静止期SLE患者的PBMC中MIF mRNA表达及血清MIF浓度,并以18例正常人作对照,观察SLE患者血MIF的改变及其与疾病活动性、血清免疫学指标的相关关系。结果 SLE患者PBMC中MIF mRNA表达及血MIF水平较正常人显著升高(P<0.01),且活动期患者增高更为明显,显著高于静止期患者(P<0.01)。SLE患者血MIF水平及PBMC中MIF mRNA表达与疾病活动指数、抗ds-DNA抗体、血补体C3、C4及IgG水平明显相关,但与抗核抗体无关。结论 SLE患者血MIF mRNA表达及血MIF水平显著增高,其变化可反映SLE患者疾病的活动性。     

重症肝炎患者外周血单个核细胞对内毒素敏感性的体外研究

我们用TNF—a做为检测指标,对重症肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)进行体外分离培养,以观察内毒素对PBMC释放TNF—a能力的影响。 1 材料与方法 1.1 主要试剂 LPS:SIGMA公司产品,来自ECOLI O111/B4细菌,10μg/ml。RPMI 1640为     

细菌脂多糖诱导人外周血单核细胞肿瘤坏死因子α的合成及核因子-κB的活化

为研究细菌脂多糖对人外周血单核细胞肿瘤坏死因子α合成和核因子-kB活化的影响，采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞，经细菌脂多糖刺激后，应用酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子α水平随刺激剂量和时间的变化，应用免疫细胞化学方法观察核因子-Kb在单核细胞的激活随刺激时间的变化。发现核因子-kB在接受刺激15min-1h之间，随刺激时间的延长逐渐从胞质向胞核转移，1h达高峰。细菌脂多糖呈浓度依赖性（1-1000μg/L）诱导肿瘤坏死因子α合成，肿瘤坏死因子α在刺激后1h出现，6h达到高峰，其合成出现在核因子-kB的活化后。以上提示细菌脂多糖通过激活单核细胞内核因子-kB来诱导炎性细胞因子肿瘤坏死因子α的合成。     

IFN-γ对系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞B细胞刺激因子表达的调控

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)B淋巴细胞刺激因子(BLyS)基因和蛋白在体外的表达及干扰素(IFN)-γ对其表达的调控。方法梯度密度离心法分离25例SLE患者[(3l±14)岁]和20名健康志愿者[(28±10)岁]的PBMCs,分为2组,IFN-γ(5 ng/ml)组和培养基组(仅含1640培养基),分别于培养0、6、12、24和72 h离心收集PBMCs,用反转录聚合酶链反应(RT- PCR)法检测刺激后0-24 h时点细胞BLys mRNA的表达,流式细胞仪(FACs)和直接免疫荧光法(激光共聚焦荧光显微镜)检测72 h膜结合型BLys蛋白的表达。结果①SLE患者PBMCs BLyS mRNA和蛋白的表达在体外均强于健康对照(P＜0．05)；②IFN-γ显著增强健康对照和SLE患者PBMCs BLys mRNA表达,6 h最为明显(0．42±0．19vs 0．25±0．14,P＜0．01；0．59±43．28vs 0．44±0．21,P＜0．01)；③IFN-γ可显著增强健康对照和SLE患者PBMCs膜结合型BLvS蛋白表达(4．5±3．0 Fs 3．7±2．6,P＜0．01；5．7±3．8 vs 4．5±2．9,P＜0．01)；④直接免疫荧光法激光共聚焦荧光显微镜检测PBMCs膜结合型BLyS蛋白表达提示IFN-γ刺激后BLyS表达增强。结论SLE患者PBMCs BLyS表达增强,而IFN-γ可增强患者BLys基因和蛋白表达。     

溃疡性结肠炎患者外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA的表达水平

目的:探讨溃疡性结肠炎(UC)患者外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA表达及其与疾病活动性的关系．方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 检测142例UC患者(活动期22例、缓解期20例) 和30例正常对照组外周血单个核细胞Foxp3 mRNA的表达水平．结果:UC患者急性期Foxp3 mRNA水平低于正常人,差异有显著性(1．58±0．31 vs 3．27± 0．40,P<0．05);缓解期Foxp3 mRNA水平与正常人差异无显著性(P=0．104);PBMC中Foxp3 mRNA表达水平与Walmsley评分标准有相关性,且呈负相关．结论:UC患者外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA表达水平显著低于正常人,其参与了 UC的发病过程并与疾病的活动性有关．     

系统性红斑狼疮外周血单个核细胞生长激素受体和mRNA表达的研究

目的　探讨SLE患者外周血单个核细胞 (PBMC)的生长激素受体 (GHR)的表达与系统性红斑狼疮 (SLE)的关系。方法　采用放射性受体配基结合试验 (RLBA)及反转录 聚合酶链反应(RT PCR)研究外周血淋巴细胞GHR变化。结果　SLE活动期患者PBMC的GHR的特异性结合率 (SB) (3 4± 2 0 ) %、总结合率 (TB) (13 8± 5 7) %和静止期患者SB (1 3± 1 2 ) % ,TB (11 4±4 6 ) %均高于正常对照组SB (1 0± 1 0 ) % ,TB (8 3± 0 9) % (P <0 0 1) ;SLE活动期患者PBMC的mRNA的表达水平 (0 77± 0 6 6 )高于静止期患者 (0 4 5± 0 2 8) (P <0 0 5 )和正常对照组PBMC的mRNA的表达 (0 31± 0 2 2 ) (P <0 0 1)。结论　SLE患者PBMC的GHR高表达与SLE的病情活动性相关。