氯化甲基汞在体外抑制脑毒蕈碱受体结合的恢复效应

为研究甲基汞对脑毒蕈碱（Ｍ）受体的影响及常用拮抗剂对在汞引起该受体特异结合抑制的恢复效应，应用放射性配体进行了体外试验，结果显示，甲基汞能明显抑制＾３Ｈ－二苯基羟要酯（＾３Ｈ－ＱＮＢ）与脑Ｍ受体的特异结合。ＩＣ５０为４．８ｍｍｏｌ／Ｌ。巯基化合物二巯基丙磺酸钠，二巯基苏糖醇，谷胱甘肽及半胱氨酸能使甲基汞抑制的＾３Ｈ－ＱＮＢ的结合不同程度地恢复，而乙二胺四乙酸、亚硒酸钠则无这种恢复效应，表明甲基汞对     

氯化甲基汞对大鼠脑毒蕈碱受体的影响

通过大鼠体内、外试验研究氯化甲基汞对其脑组织Ｍ胆碱受体的影响。体外试验结果表明：氯化甲基汞能抑制氚标记配体二苯羟乙酸奎宁酯（￣３Ｈ－ＱＮ用与大鼠大脑Ｍ胆碱受体的结合，其ＩＣ＿（５０）为０．０１３７±０．００３７ｍｏｌ／Ｌ；饱和试验结果进一步证实了其抑制作用是因为氯化甲基汞可减少大鼠大脑组织受体的最大结合位点以及降低￣３Ｈ－ＱＮＢ与受体的亲合力。体内试验是在大鼠受孕的第７～１２天，每天经腹腔分别注射氯化甲基汞溶液１．５，２．５，３．５ｍｇ／ｋｇ。各组仔鼠出生后于第７、１４、２１天处死，分离出大、小脑，分别制成匀桨进行Ｍ胆碱受体与￣３Ｈ－ＱＮＢ的结合试验。观察结果显示氯化甲基汞对仔鼠发育的大脑和小脑的Ｍ胆碱受体与￣３Ｈ－ＱＮＢ的结合均具有抑制效应。     

大白鼠脊髓后角内乙酰胆碱M受体与体感一级传入的关系

为了进一步研究乙酰胆碱（ＡＣｈ）与体感一级传入的关系，用大白鼠脊髓后角内乙酰胆碱毒蕈碱受体（Ｍ．ＡＣｈＲ）放射自显影银粒的分布与数量变化为观察指标进行了分析研究，结果发现：①脊髓后角浅层有Ｍ．ＡＣｈＲ（＾３Ｈ－二苯羟乙酸奎宁酯；＾３Ｈ－ＱＮＢ结合位点），其分布与抗氟化钠酸性磷酸酶（ＦＲＡＰ）和乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）一致；②切断一侧后根５ｄ，术侧后角浅层ＦＲＡＰ明显减少，同时＾３Ｈ－ＱＮＢ结合位点     

中枢5－HT_（1A）受体在大鼠脑中的不同亲和力状态

用特异性配体［~３Ｈ］８－ＯＨ－ＤＰＡＴ与大鼠脑中不同部位脑组织膜制剂的５－ＨＴ_（１Ａ）受体结合，显示出在海马、延髓、下丘脑的最大结合容量和亲和力有明显不同。各种孵育缓冲液使鼠脑海马、延髓膜制剂与［~３Ｈ］８－ＯＨ－ＤＰＡＴ的结合呈现不同的亲和力状态。孵育缓冲液中加入Ｍｎ~（２＋）和Ｇｐｐ（ＮＨ）_ｐ或均不加时，结合呈高、低两种亲和力状态；而仅加入Ｍｎ~（２＋）或同时加入ＥＤＴＡ和Ｇｐｐ（ＮＨ）_ｐ时，结合分别呈单一的高、低两种亲和力状态。５－ＨＴ_（１Ａ）受体激动剂和拮抗剂的竞争实验结果也表明：５－ＨＴ_（１Ａ）受体至少存在两种不同亲和力的状态。     

硫酸锌对5－HT与［~3H］granistron竞争NG108－15细胞中5－HT_3受体的影响

本文用放射配体结合测定法观察了硫酸锌对５－ＨＴ３受体激动剂５－ＨＴ与［３Ｈ］ｇｒａｎｉｓｅｔｒｏｎ竞争ＮＧ１０８－１５细胞中５－ＨＴ３受体能力的影响。结果证实，硫酸锌（１ｍＭ）能使５－ＨＴ竞争受体的浓度──反应曲线左移，半数抑制结合浓度降低（Ｐ＜０．０５），对斜率无明显影响。提示锌离子可能也影响５－ＨＴ３受体功能，有增强５－ＨＴ与５－ＨＴ３受体结合的作用。     

陈旧性心肌梗塞患者外周血淋巴细胞β－受体的变化

目的：观察陈旧性心肌梗塞（ＯＭＩ）患者外周血淋巴细胞β－肾上腺素能受体（β－受体）的变化。方法：采用放射配体结合分析法测定各组（不同病程组、不同梗塞部位组、有无心衰组等）患者外周血淋巴细胞β－受体的最大结合量（Ｂｍａｘ）与亲和力（Ｋｄ）。结果：ＯＭＩ患者β－受体Ｂｍａｘ与急性期磷酸激酶ＭＢ亚型（ＣＫ－ＭＢ）峰值呈负相关，与急性期左室射血分数（ＬＶＥＦ）呈正相关，ＯＭＩ心衰组β－受体Ｂｍａｘ低于非心衰组，也低于正常人组。ＯＭＩ病程６月～、１年～、３年～各组，ＯＭＩ心衰组与非冠心病心衰组，ＯＭＩ非心衰组与正常人组，前（侧）壁梗塞组与下（后）壁梗塞组，β－受体Ｂｍａｘ组间比较相差均不显著。各组间β－受体Ｋｄ值均无统计学差异，结论：ＯＭＩ患者β－受体在无心功能不全等并发症情况下趋于恢复，不同病因的心功能不全β－受体均下调。     

7－溴化乙氧苯四氢巴马汀对家兔主动脉条和豚鼠回肠标本的作用

本文在家兔主动脉条和豚鼠回肠标本上观察了７－溴化乙氧苯四氢巴马汀（７－－ｂｒｏｍｏｅｔｈｙｏｘｙｂｅｎｚｅｎｅ－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐａｌｍａｔｉｎｅ，ＥＢＰ）对α受体和Ｍ受体的影响。结果表明，ＥＢＰ能依剂量地降低［￣３Ｈ］哌唑嗪与α１受体特异性结合，对豚鼠离体回肠Ｍ受体无显著作用。     

抗胃癌单链抗体的构建,表达及活性测定

对能与肿瘤细胞特异结合，并已成功用于临床肿瘤显像的单克隆抗体３Ｈ１１（ＭｃＡｂ３Ｈ１１）构建为小分子的单链抗体（Ｓ３Ｈ１１），并证明其生物学活性，为扩大ＭｃＡｂ３Ｈ１１在临床的应用奠定基础。方法通过逆转录及多聚酶链式反应，扩增并克隆３Ｈ１１的可变区基因（ＶＨ，ＶＬ）片段，经测序后通过（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３的接头将两者连接，并与谷胱苷肽转移酶（ＧＳＴ）基因重组，在大肠杆菌表达ＧＳＴ与３Ｈ１１单链抗体的融合蛋白（ＧＳ３Ｈ１１）。ＧＳ３Ｈ１１经变性及复性处理后用竞争抑制实验检测其抗体活性。结果ＧＳ３Ｈ１１能特异抑制ＭｃＡｂ３Ｈ１１同胃癌细胞ＭＧＣ８０３的结合，当ＧＳ３Ｈ１１与ＭｃＡｂ３Ｈ１１的结合价位比为１５：１时，ＭｃＡｂ３Ｈ１１的活性受到完全抑制；ＧＳ３Ｈ１１对亦能同ＭＧＣ８０３特异结合的不同单抗３Ｇ９及ＰＤ４无任何抑制作用。结论ＧＳ３Ｈ１１具有特异结合抗原的活性，具有潜在的应用前景，同时亦为构建免疫毒素分子奠定了基础。     

中枢5—HT1A受体在大鼠脑中的不同亲和力状态

用特异性配体［＾３Ｈ］８－ＯＨ－ＤＰＡＴ与大鼠脑中不同部位脑组织膜制剂的５－ＨＴ１Ａ受体结合，显示出在海马、延髓、下丘脑的最大结合容量和亲和力有明显不同。各种孵育缓冲液使鼠脑海马、延髓膜制剂与［＾３Ｈ］８－ＯＨ－ＤＰＡＴ的结合呈现乐同的亲和力状态。孵育缓冲液中加入Ｍｎ＾２＋和Ｇｐｐ（ＮＨ）ｐ或均不加时，结合呈高、低两种亲和力状态；而仅加入Ｍｎ＾２＋或同时加入ＥＤＴＡ和Ｇｐｐ（ＮＨ）ｐ时，结合分别呈     

知母皂甙元对老年小鼠脑M受体上调机理的研究

用Ｍ受体选择性烷化剂ＢＣＭ将脑内原有受体不可逆地阻断，用３Ｈ—ＱＮＢ测定新生受体的时相曲线，通过数学模型求解生成速率（Ｐｒ）和降解速率常数（Ｋ）。二批平行实验表明，用知母皂甙元（ＺＭＳ）的老年小鼠脑Ｍ受体更新明显快于不用药的对照组，两组半更新时间分别为１１．６２ｈ和１６．５ｈ；受体降解速率常数分别为（０．０５９７±０．０１）／ｈ和（０．０４２±０．００３）／ｈ（Ｐ＜０．０５）；生成速率分别为每小时（９０．２３±１０．６０）ｆｍｏｌ／ｍｇｐｒｏｔｅｉｎ和（５９．４６±４．０３）ｆｍｏｌ／ｍｇｐｒｏｔｅｉｎ（Ｐ＜０．０１）。故认为ＺＭＳ通过相对加快受体的合成来调节衰老动物降低的脑Ｍ受体数。     

Regeneration of functionally active rat brain muscarinic receptor in vitro after inhibition with methylmercury chloride]

The effect of methylmercury on muscarinic receptors and the regeneration of functionally active muscarinic receptor in vitro by antagonists were investigated. The result showed that methylmercury chloride (MMC) inhibited the binding of [3H] QNB to muscarinic receptor of rat brain-lysed synaptosomes, with IC50 values of 4.18 mmol/L. Regeneration of functionally active rat brain muscarinic receptors after inhibition with methylmercury was achieved by 2,3-dimercapto-1-propanesulfonc acid, Na salt (DMPS) dithiothreitol (DTT), glutathione (GSH) and Cysteine. Blocking the sulfhydryl groups is suggested to be the molecular mechanism of inhibition of brain muscarinic receptors by methylmercury. Our results provide evidence that thiols chelate out mercuric cations that tightly bound to sulfhydryl groups in muscarinic receptor binding sites and regenerate [3H] QNB binding activity.     

甲亢类阴虚及甲低类阳虚模型动物中枢胆碱能M一受体变化的实验研究

本文报告了利用放射性配基受体结合法分析测定了甲亢类阴虚和甲低类阳虚模型动物大脑中枢胆碱能M一受体的变化,以及养阴益气中药复方和温补肾阳中药复方对其影响,尝试从细胞生物学水平上对虚证的发病机理和中药复方治疗虚证的机制作些探讨。结果表明,甲亢类阴虚模型大鼠脑中枢胆碱能M一受体数量减少(P<0.05),素和力提高(P<0.05),养阴益气中药复方能提高其数量(P<0.05),降低其亲和力(P<0.05);相反,甲低类阳虚模型免大脑中枢胆碱能M一受体的数量增多(P<0.05),亲和力无明显改变,温补肾阳中药复方能降低其数量。提示中枢胆碱能M一受体的变化,可能是中医阴虚(甲亢)阳虚(甲低)病理生理功能改变的原因之一,中药对此具有纠正调整作用。     

Effects of Phenamiphos on Muscarinic Acetylcholine Receptor in the Brain Synaptosome in Rats and Its Mechanism

ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＰｈｅｎａｍｉｐｈｏｓｏｎＭｕｓｃａｒｉｎｉｃＡｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅＲｅｃｅｐｔｏｒｉｎｔｈｅＢｒａｉｎＳｙｎａｐｔｏｓｏｍｅｉｎＲａｔｓａｎｄ　Ｉｔｓ　ＭｅｃｈａｎｉｓｍＳＵＮＬｉ（孙黎），ＭＡＴａｎ－ｇｅｎｇ（马谭庚），ＬＩ...     

咪达唑仑对健康成年大鼠和东莨菪碱大鼠脑内M受体的影响

目的:观察预先腹腔注射咪达唑仑对健康成年大鼠和东莨菪碱大鼠大脑皮层及海马组织中胆碱能毒蕈碱样受体(M-R)的近期和远期影响.方法:(1)近期影响组38只SD大鼠随机分为4组:对照组(Con,n=9),咪达唑仑组(Mid,n=9),东莨菪碱组(Sco,n=10),咪达唑仑+东莨菪碱组(Mid+sco,n=10).第1,2,3天,Mid组和Mid+sco组大鼠每天腹腔注射咪达唑仑50 mg/kg,Con组和Sco组大鼠每天腹腔注射同体积的生理盐水.第4,5,6天,Sco组和Mid+sco组大鼠每天腹腔注射东莨菪碱0.8 mg/kg,Con组和Mid组大鼠每天腹腔注射同体积的生理盐水.(2)远期影响组36只SD大鼠随机分为4组:对照组(Con,n=9),咪达唑仑组(Mid,n=9),东莨菪碱组(Sco,n=9),咪达唑仑+东莨菪碱组(Mid+sco,n=9).第1,2,3天,Mid组和Mid+sco组大鼠每天腹腔注射咪达唑仑50 mg/kg,Con组和Sco组大鼠每天腹腔注射同体积的生理盐水.第10,11,12天,Sco组和Mid+sco组大鼠每天腹腔注射东莨菪碱0.8 mg/kg,Con组和Mid组大鼠每天腹腔注射同体积的生理盐水.(3)给药完毕后急性处死大鼠,分离脑组织的皮层和海马,用放射配体结合分析法测定M-R与[3H]QNB的特异性结合量.选择近期影响组大鼠的海马组织进行M-R受体饱和实验,用Scatchard曲线分析受体的平衡解离常数(Kd)和最大结合容量(Bmax)的变化.结果:(1)近期影响组海马M-R与[3H]QNB特异性结合量Con组高于Mid组、Sco组和Mid+Sco组(均P＜0.01);Mid组高于Sco组(P＜0.05)和Mid+sco组(P＜0.01);Sco组高于Mid+sco组(P＜0.05).皮层M-R与[3H]QNB特异性结合量各组间比较,差异无统计学意义.Mid组、Sco组海马M-R Kd值高于Con组和Mid+sco组(P＜0.01);Con组Bmax值高于Mid组(P＜0.05)、Sco组和Mid+sco组(均P＜0.01),Mid组高于Sco组和Mid+sco组(均P＜0.01),Sco组高于Mid+sco组(P＜0.05).(2)远期影响组:Con组、Mid组海马M-R与[3H]QNB特异性结合量高于Sco组和Mid+sco组(均P＜0.01).各组间皮层M-R与[3H]QNB特异性结合量差异无统计学意义.结论:预先腹腔注射50 mg/kg咪达唑仑连续3 d对皮层M-R没有影响,可在短时期内降低健康成年大鼠和东莨菪碱大鼠海马M-R与[3H]QNB的特异性结合量与海马M-R密度和亲和力发生改变有关,对健康成年大鼠和东莨菪碱大鼠海马M-R与[3H]QNB的特异性结合量无长期影响.     

老年早期及老年晚期大鼠脑胆碱能M型受体的改变

采用放射自显影技术测定脑切片胆碱能Ｍ型受体，观察大鼠在老年早期和老年晚期不同脑区Ｍ型受体密度的变化。结果：所得脑切片自显影像灰度层次清晰，主要分布在皮质、海马、纹状体等部位，非特异结合灰度很低。图像分析仪分别给出不同脑区的平均灰度值，老年鼠皮质、海马、纹状体的灰度显著低于青年鼠，老年早期大鼠３个脑区分别降低２４８７％，１４１２％，１２７６％（Ｐ＜００５）；老年晚期分别降低２９４５％，２４３３％，１５３１％（Ｐ＜００５）。结论：老年大鼠大脑皮质、海马、纹状体部位胆碱能Ｍ型受体密度显著降低，老年晚期比老年早期降低的幅度更大     

大鼠低位脑干M受体亚型分析

放射受体结合试验表明脑桥、延髓存在M_1受体(约30～40％)和M_2受体(约60～70％);皮层海马M_1受体为主(约90％),小脑为M_2受体。东莨菪碱对皮层海马M_1受体的亲和力是小脑M_2受体亲和力的22.72倍,阿托品对小脑M_2受体亲和力是对皮层海马M_1受体亲和力的3.89倍。结果提示东莨菪碱、阿托品分别对M_1、M_2受体有一定的选择性。     

阿片受点不可逆部分激动剂A—α—CAM的药理作用机理

N-烯丙基-7α二(β-氯乙基)胺甲基-6,14-乙烯撑四氢奥利文(A-α-CAM)是阿片受点不可逆部分激动剂,与大鼠脑P_2膜及离体组织(GPI,MVD,RVD和RbVD)均表现为不可逆结合反应。A-α-CAM对豚鼠回肠(GPI)呈完全激剂效应,IC_(50)为2.6μmol/L,反复冲洗激剂效应不消失,亦不能被纳洛酮(Nx)翻转;对小鼠输精管(MVD)呈部分激剂效应,Ke值为0.153μmol/L,对大鼠输精管(RVD)和兔输精管(RbVD)呈抗剂效应。PA_2值分别为7.4和7.7,且此抗剂效应不易冲洗除去。巯基烷化剂-N-乙基顺丁烯二酰亚胺(NEM)可使阿片受点的结合能力降低,表明其结合活性与巯基有关。用吗啡预处理P_2膜以保护其阿片受点内巯基不被NEM烷化,再反复冲洗以暴露阿片受点内巯基,A-α-CAM仍可与之形成不可逆的结合反应,表明A-χ-CAM与阿片受点内巯基形成共价结合可能是其不可逆药理作用的生化机理之一。     

大鼠肾上腺髓质脑内移植后神经递质摄取及其...

Unilateral nigrostriatal pathway of rats was destroyed by using injection of 6-hydroxydopamine (6-OHDA), presenting the rotative movement model and transplanting isogenous rat adrenal medullary tissues into their lesioned lateral caudate nucleus. After 2 months, the rotative movement almost abolished by 34% out of the total transplanted rats, and it was significantly reduced by 57% of the same rats. Taking the above rats brain synaptosome, we found the lesioned side, the uptake of tyrosine, dopamine and choline increased significantly, nevertheless, in another group which transplanted with adrenal medullary tissue, the uptake of same neurotransmitters recover to the normal level. In addition, we also found that dopamine (DA2) receptor binding increased remarkably but muscarinic and GABAA receptors binding decreased significantly in lesioned side brain synaptic membrane, while the transplanted group didn't shown such changes.     

肺内M受体异质性的研究Ⅱ——豚鼠肺内两种不同亲和性M受体结合部位结合特性的初步研究

应用蛋白质修饰的方法,从分子水平对豚鼠肺内两种不同亲和性M受体结合部位的分子结合特性进行了研究。结果表明:这两种不同亲和性M受体结合部位在分子构象上存在着差异。在与配基结合时,高亲和性M受体结合部位依赖于受体蛋白质中巯基的存在,而低亲和性M受体结合部位则依赖于双硫键的存在。     

放射自显影技术研究老年大鼠不同脑区M胆碱受体的变化

目的： 观察自然衰老大鼠不同脑区Ｍ 胆碱受体包括Ｍ１ 亚型受体的变化。方法： 采用放射自显影技术显示大鼠脑Ｍ 受体,并用图像分析仪进行灰度分析,以反映Ｍ 受体在不同脑区的相对定量分布。结果： 所得脑切片自显影灰度层次清晰,主要分布在大脑皮质,海马,纹状体等部位,非特异结合灰度很低,图像分析仪分别给出不同脑区的平均灰度值,老年鼠皮质,海马,纹状体部位的灰度显著低于青年鼠,Ｍ 受体分别降低２４８７ ％ ,１４１２ ％ ,１２７６ ％ （ Ｐ＜ ００５） ,Ｍ１ 亚型受体分别降低１５７８ ％ ,８６９ ％ ,１２３６ ％ （ Ｐ＜ ００１） 。结论： 以上３ 个重要脑区Ｍ 胆碱受体密度的改变可能是脑衰老的一个重要机制