人脑出血后海马神经元损伤与Caspase-3的关系

目的　研究人脑出血后海马神经元损伤与凋亡促进因子Caspase- 3之间的关系。方法　选取10例因脑出血而死亡的尸检脑标本,应用HE染色,Caspase- 3免疫组织化学染色和Caspase- 3m RNA原位杂交,观察脑出血时海马CA1 区神经元损伤变化与Caspase- 3表达之间的关系。结果　海马CA1 区,出血5 h可检测Caspase- 3免疫组化染色的阳性细胞(10 .4个/高倍视野) ,2 2～4 8h时达高峰(2 1.7～2 4 .3个/高倍视野)。Caspase- 3m RNA原位杂交阳性表达始于5 h(6 .75个/高倍视野) ,2 4 h达高峰(14 .6 0～18.30个/高倍视野) ;二者均在72 h后呈明显下降趋势。出血2 4 h,可检测到TUNEL阳性细胞,持续至72 h。Caspase- 3m RNA与Caspase- 3呈正相关,相关系数为0 .717(P<0 .0 5 )。4～16 h受损神经元形态基本正常,2 4～4 8h细胞凋亡特征明显,72 h后,几乎所有神经元形态呈现严重病理变化。结论　人脑出血后海马神经元发生一系列形态学变化,其演变规律与凋亡促进因子Caspase- 3有密切相关性。     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血后细胞凋亡及Caspase-3的影响

目的 探讨亚低温对脑缺血损伤的保护作用。方法 用原位末端标记（TUNEL）和原位杂交技术分别观察亚低温组、常温组脑缺血不同时间点神经细胞凋亡的变化及Caspase-3的表达。结果 （1）常温组脑缺血后凋亡神经细胞主要分布于缺血周围区,随着时间的延长凋亡细胞数逐渐增加,至12h达高峰,24h后开始下降,7d时仍高于假手术组;（2）亚低温组脑缺血后,凋亡神经细胞也主要位于缺血周围区,数量相对较少,其变化规律与常温组相似,同一时间点相比较,亚低温组均显著低于常温组;（3）常温组脑缺血2h后,神经细胞Caspase-3开始表达,并随着时间的延长而增强,24h达高峰,其后逐渐下降,至7d略高于假手术组;（4）亚低温组脑缺血后,神经细胞Caspase-3的表达也主要位于缺血周围区,其变化规律与常温组相似,同一时间点相比较,亚低温组均显著低于常温组。结论 脑缺血后,缺血周围区神经细胞的凋亡是一个动态的渐进过程,Caspase-3基因在介导脑缺血损伤神经元凋亡过程中起关键作用。亚低温对短暂性脑缺血后的神经元凋亡有明显的抑制作用,亚低温可能通过Caspase-3途径抵抗脑缺血损伤。     

胰岛素对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

目的探讨胰岛素对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响。方法将动物随机分为假手术组、缺血组及干预组,参照zea longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞（mid-dle cerebral artery occlusion,MCAO）再灌注模型,干预组大鼠在脑缺血即刻给予胰岛素及葡萄糖腹腔注射,分别在左侧MCAO2h再灌注不同时间点断头取脑,脑皮质神经元Caspase-3的表达通过免疫组化法来测定,并采用TUNEL法原位标记DNA片段,检测TUNEL阳性细胞的变化。结果缺血组大鼠脑皮质Caspase-3的表达较假手术组显著增强（P〈0.01）,TUNEL阳性细胞数较假手术组显著增多（P〈0.01）;给予胰岛素处理后,Caspase-3的表达较缺血组明显减弱（P〈0.01）,TUNEL阳性细胞数较缺血组明显减少（P〈0.01）,但两者均显著高于假手术组（P〈0.01）。结论短暂的脑缺血再灌注可导致脑皮质神经元Caspase-3的表达增加,促进细胞凋亡,胰岛素可下调脑皮质神经元Caspase-3的表达,发挥神经保护作用。     

MCPG在神经元氧糖剥夺模型中的抗凋亡作用

目的通过神经元氧糖剥夺模型研究Ⅰ组代谢型谷氨酸受体拮抗剂α-甲基-4-羧苯基甘氨酸（MCPG）对神经元损伤的保护作用,并初步探讨其机制。方法大鼠皮层神经元原代培养2w后,采用氧糖剥夺法建立损伤模型,通过乳酸脱氢酶（LDH）活性测定及碘化丙啶（PI）/Hoechst33342双染鉴定神经元损伤程度;加入Ⅰ组代谢型谷氨酸受体拮抗剂MCPG（1mmol/L）,通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测神经元凋亡情况,并采用蛋白印迹法研究凋亡相关因子caspase-3、细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）、磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）的表达变化,讨论MCPG抗凋亡作用与ERK1/2信号通路的关系。结果 MCPG能抑制ERK1/2信号通路的活化并降低凋亡相关因子caspase-3的表达,减轻氧糖剥夺造成的神经元凋亡。结论 MCPG能够通过ERK1/2信号通路减轻氧糖剥夺造成的神经元凋亡。     

大鼠局灶性脑缺血再灌流后Caspase-3激活与神经元凋亡的关系

目的探讨Caspase-3与局灶性脑缺血后神经元凋亡的关系。方法局灶性脑缺血再灌流大鼠模型,按再灌流时间不同随机分为5组。用半定量RT-PCR观察了脑缺血后不同时程Caspase-3mRNA表达及四肽荧光底物法检测Caspase-3蛋白酶活性;用TUNEL方法检测不同时程细胞凋亡。结果脑缺血2h再灌流2h组Caspase-3mRNA水干即已升高(P＜0.05)),蛋白酶活性轻度升高,再灌流6h后两者均明显升高(P＜0.05);脑缺血再灌流后不同时程细胞凋亡具有与Caspase-3相似的变化趋势。结论提示脑缺血后细胞凋亡的发生与Caspase-3的激活有关。     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对体外培养的大鼠海马神经元氧糖剥夺后凋亡的影响

目的 探讨粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对体外培养大鼠海马神经元氧糖剥夺(OGD)后凋亡的影响.方法 体外培养乳鼠海马神经元并分为正常对照组、OGD组、GM-CSF 1 ng/ml、10ng/ml、20 ng/ml和100 ng/ml组;制备OGD模型,并给与相应剂量的GM-CSF干预.应用流式细胞仪及Annexin V/PI双染色法检测神经元凋亡率,测定上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性了解神经元细胞膜损伤程度,RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA表达.结果 与正常对照组相比,OGD组细胞凋亡率及LDH活性明显升高(均P＜0.01);与OGD组相比,除GM-CSF 1 ng/ml组外,GM-CSF各浓度组神经元凋亡率及LDH活性明显降低(均P＜0.01),其中GM-CSF 20 ng/ml组对神经元凋亡影响最显著.与正常对照组比较,OGD组Bcl-2 mRNA表达明显下降,Bax mRNA表达显著升高,Bcl-2/Bax降低(均P＜0.01);与OGD组比较,GM-CSF 20 ng/ml组Bcl-2 mRNA表达升高,Bax mRNA表达降低,Bcl-2/Bax增加(均P＜0.01).结论 GM-CSF能够有效地抑制OGD后海马神经元的凋亡,20 ng/ml抗凋亡的效果最佳.其神经保护作用机制可能与其调节凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达有关.     

大鼠脑缺血预处理后脑组织Caspase-3蛋白的表达

目的探讨凋亡相关基因caspase-3蛋白在脑缺血预处理过程中的表达和意义.方法用免疫组织化学染色技术分别检测假手术对照组(S组)、缺血预处理对照组(A组)、缺血组(B组)和缺血预处理组(C组)大鼠脑组织石蜡切片中caspase-3蛋白的表达情况.结果缺血组(B组)和缺血预处理组(C组)各组CA1区caspase-3蛋白免疫反应强度明显高于假手术对照组(S组)(P＜0.01);末次再灌注48h的B2组和C2组以及末次再灌注72 h的B3和C3组比较caspase-3蛋白表达均有显著性增高(P＜0.05,P＜0.01).结论脑缺血预处理的保护机理可能与抑制caspase-3蛋白表达、减少脑细胞凋亡有关.     

大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后caspase-3、Bcl-2和Bax在脑皮质神经元中的表达。方法将动物随机分为假手术组及缺血组,参照zea longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,各组大鼠分别在左侧MCAO2h再灌注不同时间点断头取脑,脑皮质神经元中caspase-3、Bcl-2和Bax的表达通过免疫组化法来测定。结果缺血组大鼠脑皮质caspase-3的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bcl-2的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bax的表达较假手术组显著增强(P<0.01)。结论短暂性脑缺血再灌注上调脑皮质神经元中caspase-3和Bax的表达促细胞凋亡,上调脑皮质神经元中Bcl-2的表达抗细胞凋亡。     

Caspase-3反义寡核苷酸抗凋亡作用的研究

目的 研究caspase-3反义寡核苷酸对6-OHDA诱导大鼠中脑多巴胺神经元凋亡的保护作用.方法 向四组SD大鼠的中脑黑质部位注入反义、错义、正义寡核苷酸及NS,然后再注入6-OHDA,取中脑做连续切片,原位杂交及免疫组化检测黑质caspase-3的表达及TH的表达,原位末端标记法(Tunel)检测黑质细胞的凋亡.结果 反义组Tunel阳性细胞数为82±8.6,方差分析显示反义组阳性细胞数显著性低于其他各组(P＜0.05);反义组手术侧TH阳性细胞数为168.6±11.4,与对侧阳性细胞比值为63%±11.3%,显著性高于其余各组(P＜0.05).结论 有效阻断caspase-3的表达可减轻6-OHDA诱导的多巴胺神经元凋亡,caspase-3可作为保护性治疗帕金森病的靶点.     

大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧模型的建立

目的 体外大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧试验模型的建立.方法 取 Wistar 大鼠乳鼠脑组织,采用过滤、消化、离心等技术获取大脑皮质神经元并培养,通过倒置显微镜、免疫细胞化学鉴定,采用MTT 法、酶学检查、光学显微镜等评价该模型.结果 (1)形态学、免疫细胞化学(NSE)鉴定所培养的细胞为神经元;(2)氧糖剥夺/复氧前后细胞形态结构变化显著,MTT 法及LDH释放测定均提示神经元损伤随氧糖剥夺时间呈时间依赖关系,与正常对照组有显著差异(P<0.05).结论 成功地建立体外大脑皮质神经元的氧糖剥夺/复氧模型.     

红藻氨酸致惊大鼠海马神经元Caspase-3表达与神经元凋亡

目的:研究Caspase-3在红藻氨酸(Kainate,KA)致惊大鼠海马中的变化及其在海马神经元凋亡中的作用.方法:在KA所致大鼠惊厥模型中,用免疫组织化学方法检测惊厥后不同时间点大鼠海马中Caspase-3的表达,用电子显微镜和原位末端标记法(TUNEL)检测惊厥后不同时间点大鼠海马神经元凋亡.结果:惊厥后1 d,大鼠海马内Caspase-3的表达就明显升高,一直持续到惊厥后3 d;大鼠海马内凋亡细胞从惊厥后3 d即明显增多,一直持续到惊厥后7 d.结论:KA所致惊厥后,大鼠海马内Caspase-3表达明显升高,神经元凋亡明显增多,而且Caspase-3的变化发生在神经元凋亡增多之前,提示Caspase-3可能参与了KA致惊厥大鼠海马神经元凋亡的发生.     

低氧预适应小鼠脑室管膜bcl-2表达和caspase-3活性变化

目的探讨小鼠脑室管膜bcl-2和caspase-3在低氧预适应中的表达变化。方法将Blb／c近交系小鼠随机分为空白对照组（H0组）、低氧对照组（H1组）和低氧预适应组（H4组）。用免疫荧光和激光共聚焦显微镜等技术，测定bcl-2和caspase-3表达的荧光强度。结果H1和H4组的bcl-2表达均显著高于H0组，其中H4组又显著高于H1组。H1和H4组caspase-3的表达显著高于H0组，H4组显著低于H1组。结论低氧预适应过程中，小鼠脑室管膜区通过bcl-2的高表达和caspase-3的低表达，抵御室管膜细胞凋亡，参与脑保护机制。     

Caspase-3在戊四氮点燃大鼠海马组织中的表达

目的：研究Caspase-3在戊四氮（pentylenetetrazole,PTZ）急性点燃大鼠海马组织中的表达情况。方法：通过腹腔注射戊四氮建立急性点燃大鼠模型，运用逆转录聚合酶链式反应技术分析Caspase-3 mRNA在癫痫发作后的表达情况。结果：癫痫发作后海马组织Caspase-3 mRNA的表达水平早期即出现升高（8h组与对照组相比，P＜0．05），且持续较长一段时间（5d组与对照组相比，P＜0．05）。结论：Caspase-3可能参与了癫痫后海马神经元的凋亡过程。     

Activation of caspase-3 in β-amyloid-induced apoptosis of cultured rat cortical neurons

Amyloid β protein (Aβ) has been thought to participate in the neurodegeneration associated with Alzheimer's disease. We here report on caspase-3 activation by Aβ-treatment of cultured neurons. Treatment of rat primary cortical culture with Aβ 25–35, an active fragment of Aβ, induced neuronal death as determined by a decrease in neuron-specific microtubule-associated protein 2 (MAP2)-like immunoreactivity and by the release of cellular lactate dehydrogenase (LDH). Aβ 25–35 also induced elevation of caspase-3-like Ac-DEVD-MCA cleavage activity in advance of neuronal death with similar concentration-dependency for neuronal death. Inhibitor sensitivity of the Aβ-induced proteolytic activity was similar to that of human recombinant caspase-3. Cleavage of pro-caspase-3 and cleavage of its endogenous substrates, poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) and α-fodrin, were produced by Aβ-treatment. A caspase-3 inhibitor, Ac-DEVD-CHO, prevented Aβ-induced DNA fragmentation and cleavage of α-fodrin, but not of PARP. Caspase inhibitor of broad specificity, Z-VAD-CH₂-DCB, additionally prevented Aβ-induced cleavage of PARP and some early loss of cell membrane integrity measured by LDH release. However, Aβ-induced condensation of nuclear chromatin and most of the late disintegration of cell membranes were not prevented in the presence of these caspase inhibitors. These results suggest that activation of both caspase-3 and caspase(s) other than caspase-3 play distinct roles in Aβ-induced apoptosis of rat cortical neurons. Furthermore, in the presence of caspase inhibitors, Aβ-induced neuronal death still occurred with different morphological features.     

海人酸致癫痫持续状态后大鼠海马中Caspase-3动态表达变化研究

目的 观察海人酸(kainite acid,KA)致癫痫发作后大鼠海马中Caspase-3的动态变化,以便及时进行干预并控制凋亡的发生.方法 海人酸(KA)致痫急性发作后分别在12 h、24 h、3 d、7 d,采用免疫组化法计算阳性细胞的平均光密度值;Nissle染色法检测神经细胞丢失坏死情况;Westernblot方法检测海马组织中Caspase-3表达情况.结果 致痫后Caspase-3表达趋势在12 h开始表达增高,24 h～3 d达到高峰,3～7 d后明显下降,3 d对神经细胞表现典型的凋亡状态,明显高于对照组(P＜0.05).结论 癫痫持续状态(Status epilepticus,SE)同时上调了Caspase-3的表达,可导致神经细胞发生凋亡,为癫痫的神经保护治疗提供了理论依据.     

ATRA诱导胶质瘤C6细胞凋亡过程中Bcl-2和Caspase-3表达的研究

目的研究全反式维甲酸（ATRA）诱导胶质瘤C6细胞凋亡过程中Caspase-3和Bcl-2表达情况,探讨ATRA诱导胶质瘤C6细胞凋亡的机制。方法用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法绘制ATRA不同浓度不同时间（6、12、24、48、72h）对胶质瘤C6细胞作用后细胞生长曲线,逆转录酶-多聚酶链反应（RT—PCR）检测凋亡相关基因Bcl-2和Caspase-3 mRNA水平的表达变化影响,Western blot分析Caspased和Bcl-2在胶质瘤C6细胞中的表达情况。结果胶质瘤C6细胞经ATRA诱导后,细胞的增殖明显受到抑制,通过RT-PCR结果证实Bcl-2 mRNA在ATRA作用下明显呈低表达而Caspase-3 mRNA的表达随时间延长逐渐增高,Western blot检测结果显示ATRA作用后,下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达并激活了凋亡蛋白Caspase-3的表达。结论ATRA对胶质瘤C6细胞的增殖具有抑制作用。     

海人藻酸致痫大鼠海马Caspase-3酶活性变化

目的：检测KA致痫后鼠海马Caspase-3酶活性动态变化。方法：运用FIENA法特异性体外检测Caspase-3的活性，结果：KA致痫后6h，鼠海马即有Caspase-3活性显增高，一周内保持高水平，10天开始下降，而正常鼠海马几乎无活性Caspase-3检出。结论：Caspase-3参与癫痫后神经细胞的凋亡损害，特异性Caspase-3酶抑制剂能预防癫痫后凋亡的发生。     

3-硝基丙酸预处理对多巴胺能神经元保护作用的研究

目的:研究3-硝基丙酸(3-NPA)预处理对MPP+(1-甲基4苯基-吡啶离子)损害的多巴胺能神经元是否具有保护作用。方法:将MPP+加入到培养的多巴胺能神经元SH-SY5Y细胞中制作帕金森病的细胞模型,在加入MPP+(0.25mmol/L)前,分别单次或多次加入3-NPA(0.2mmol/L)形成预处理,应用四氮唑盐(MTT)检测细胞生存率,[3H]DA摄取率测定多巴胺能细胞突触前功能,观察3-NPA预处理对它们的影响。结果:3-NPA预处理后,预处理组细胞生存率分别为71.8％(单次),85.2％(多次),较MPP+组(54.3％)明显提高;[3H]DA摄取率分别为65.8％(单次)80.3％(多次),较MPP+组(50.1％)明显提高,且多次预处理较单次预处理效果更好。单加3-NPA对细胞无影响。结论:3-NPA预处理对多巴胺能神经元有明显的保护作用,多次预处理的保护作用更加显著。