造血干细胞移植术后人巨细胞病毒包膜糖蛋白gB抗原血症及gB特异性CD8＋T细胞测定

目的探讨HCMVgB抗原血症在HCMV感染中的诊断价值以及gB诱导的特异性CD8＋T细胞在控制病毒激活中的作用。方法根据移植术后时间进行分组,免疫组化法检测92份异基因造血干细胞移植术后白细胞样本中的gB、IE和pp65抗原,分析gB抗原检测在监测HCMV感染中的意义。应用SYFPEITHI和REVEALTM主要组织相容性抗原-肽结合力测定筛选出潜在T细胞表位,进而合成MHC-肽五聚体,应用基于流式细胞术的五聚体染色分析筛选出gB相对优势表位。结果 HCMV gB抗原与pp65和IE抗原检测均呈正相关,其阳性率（82.6%）和pp65抗原阳性率（90.2%）差异无显著意义（P=0.065）,但比IE抗原阳性率（92.4%）低（P=0.035）。三种抗原检测阳性率在移植术后1年内无显著差异;而在移植术1年后,gB阳性率低于IE和pp65阳性率（P=0.005）,并且在gB阴性而IE或pp65阳性的标本中,IE或pp65阳性值处于一个较低的范围（1~6/5×104WBC）。gB332-340可能是CD8＋T细胞的免疫优势靶位,其诱导的gB特异性CD8＋T细胞与gB抗原血症的发生呈现负相关。结论 HCMV gB对移植术后早期诊断感染有潜在的价值,并可能是一个提示病毒感染能力的指标;在对长期随访病人HCMV感染的监测中,gB与pp65、IE正相关,或许成为诊断HCMV感染的重要补充;gB特异性CD8＋T细胞的免疫应答在控制HCMV感染中可能起到重要作用。     

人巨细胞病毒pp65 IgG亲和指数在人巨细胞病毒原发感染小鼠模型中的标志作用

目的 通过对人巨细胞病毒(human eytomegalovims,HCMV)原发感染BALB/c模型小鼠感染状态的实验研究,探索检测HCMV pp65 IgG亲和指数(avidity index,AI)在原发感染诊断中的意义和作用.方法 取6～8周龄SPF(Specific Pathogen Free)级BALB/c雌性小鼠30只,分为5组,每组6只,分别用2×105、2×105、2×104、2×103和2×102PFU/ml的5个剂量的病毒悬液腹腔注射小鼠,1.0 ml/只;另取浓度为2×106PFU/ml剂量的病毒,经56℃30 min灭活后,1.0 ml/只腹腔注射雌性小鼠共6只,作为灭活对照组;同株同代的HF细胞悬液1.0 ml/只腹腔注射雌性小鼠共6只,作为HF细胞对照组.各组小鼠于屏障系统内饲养1个月后,检测小鼠的感染状态.病毒分离检测脑、肺组织中感染性病毒颗粒,观察HCMV特异性细胞病变效应,PCR试验检测细胞培养物UL83基因,间接免疫荧光试验检测细胞玻片pp65抗原;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测小鼠脑、肺组织中HCMV pp67的转录;同时,用本室自制的截短pp65抗原制备的ELISA试剂盒检测血清标本中HCMVpp65特异性IgM抗体和IgG-Al.结果 2×104PFU/ml和2×105PFU/ml剂量的病毒感染小鼠后,脑、肺组织中均可检测到感染性病毒颗粒,感染率均为100%;RT-PCR均可检测到小鼠脑、肺组织中pp67转录产物;血清学检测这两组小鼠HCMV pp65 IgM均为阳性,HCMV pp65 IgG-AI＜50%;检测结果判断该两组小鼠为HCMV原发感染.余低剂量病毒组、灭活病毒组和人胚成纤维细胞(HF)对照组检测结果均为阴性.结论 HCMV AD169株可感染BALB/c小鼠,初次感染病毒1个月后可表现原发感染状态;以HCMV pp65重组蛋白为抗原榆测特异性IgM抗体以及相应IsG-AI间接ELISA法,可作为对HCMV原发感染的初筛手段,是诊断HCMV原发感染有效的方法之一.     

荧光定量聚合酶链反应在患儿巨细胞病毒感染快速检测中的应用

巨细胞病毒 (HCMV)感染分原发性感染、潜伏性感染和激活性感染。患儿HCMV感染多为原发性感染 ,尤其是新生儿HCMV感染主要通过母体在宫内感染引起母婴垂直传播或分娩时通过产道或哺乳期通过乳汁传播婴儿[1] 。HCMV一旦感染终生相伴 ,通常无症状 ,病毒潜伏在宿主细胞中 ,多种诱因可使潜伏的病毒被激活 ,而引发明显的临床症状。小儿先天性或获得性感染HCMV可引起婴儿肝炎综合征、生长发育受阻或中枢神经系统障碍、神经性耳聋等并发症 ,其后果非常严重。HCMV感染的诊断通常检测血清中HCMV IgG和IgM抗体 ,或采用核酸杂交和聚合酶链…     

聚合酶链反应在检测人类巨细胞病毒中的应用

人类巨细胞病毒(HCMV)在成年人群中感染很普遍，且随年龄增长，感染率明显增高。但多数呈不显性感染或潜伏感染，损伤机体的免疫功能。HCMV的先天性感染或围产期感染常常危害胎儿和新生儿，因此早期准确诊断HCMV感染对指导防治，促进优生优育工作有重要的意义。笔采用聚合酶链反应(PCR)技术检测HCMV，现报告如下。     

肾移植受者人巨细胞病毒活动性感染的监测

目的 推广一种肾移植受者人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染的实验室诊断方法.方法 运用免疫组织化学的催化信号扩增法通过抗巨细胞病毒低基质磷蛋白65(pp65)单克隆抗体AAC10对外周血白细胞中的HCMV pp65抗原进行标记识别.结果 检测61例肾移植受者中HCMV pp65抗原阳性36例(59%),有症状的20例(33%),平均抗原指数(98±31)/(2×105)WBC;而无症状的活动性感染HCMV pp65抗原指数平均为(21±22)/(2×105)WBC.同时检测50名健康人,结果pp65抗原全为阴性.结论 该法简便、敏感,可作为肾移植后HCMV病的早期诊断并可指导抗病毒治疗.     

人巨细胞病毒被膜磷蛋白65检测的临床意义

肾移植受者中人巨细胞病毒(HCMV)感染较为常见，其中10％～30％为术后有症状的HCMV感染。HCMV被膜磷蛋白65(HCMV—pp65)是HCMV DNA复制时即出现的一种抗原，在出现临床症状数日或1周前可检出HCMV-pp65阳性标本。我们采用间接免疫荧光染色法(IFA)，检测肾移植术后病人外周血多形核细胞(PMNLs)中HCMV-pp65，以辅助临床对HCMV进行早期诊断与治疗。     

人巨细胞病毒感染巨核祖细胞及反义寡核苷酸抗病毒感染作用的研究

目的探讨人巨细胞病毒 (HCMV)对人巨核细胞及其前体细胞的抑制作用及其机制 ,并观察HCMV反义寡核苷酸 (ASON)的抗病毒感染作用。方法在半固体培养基上定向诱导CD34 细胞向巨核细胞分化。用HCMVAD16 9病毒株感染培养的巨核细胞和经ASON预处理的CD34 细胞 ,观察CFU MK形成率的变化 ,分别用PCR、RT PCR法检测CFU MK细胞中HCMV即刻早期蛋白 (IEP)基因DNA和mRNA、即刻早期基因 (UL36 )mRNA表达。用MTT法测定ASON的细胞毒性。结果CD34 细胞在半固体培养基中定向分化为巨核祖细胞。HCMVAD16 9株能明显抑制巨核细胞的体外增殖 ,与灭活病毒组比较 ,三个不同病毒滴度感染组的CFU MK分别减少了 2 1.6 %、33.8%、4 6 .3% ,显示抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系 ;HCMV感染的CFU MK细胞中可检出HCMVIEP基因DNA、IEP基因mRNA和UL36mRNA。 0 .0 8μmol/L的UL36ASON (UL36Anti)能使HCMV感染细胞CFU MK形成率恢复正常 ,与 10 0 0 0TCID50 HCMV感染组比较 (分别为 5 8.2 4± 7.4 2和 31.17± 4 .4 5 ) ,差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,RT PCR未能检出UL36mRNA。而改变UL36Anti中 1个碱基的ASON(MM1) ,浓度只有达到 0 .4 0 μmol/L才能对抗HCMV的作用。MTT结果表明UL36Anti显著影响细胞生长的浓度为 90 .0 0 μmol/L。结     

肾移植受者人巨细胞病毒活动性感染的监测

目的:建立一种新的快速诊断肾移植受者人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染的方法.方法:运用免疫组织化学的催化信号扩增法通过抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体AAC10对外周血白细胞中的人巨细胞病毒pp65抗原进行标记识别.结果:检测61例肾移植受者中,HCMV pp65抗原阳性36例,活动性感染率为59%(36/61),有症状的HCMV 20例,占所有受者33%(20/61),平均抗原指数(98±31)个/2 ×105 WBC;而无症状的活动性感染HCMV pp65抗原指数平均为(21±22)个/2×105 WBC.同时检测50名健康人,结果pp65抗原全为阴性.结论:该法敏感、简便,可作为肾移植后HCMV病的早期诊断并可指导抗病毒治疗.     

白颖苔草提取物抗人巨细胞病毒作用机制的实验研究

目的初步探讨白颖苔草提取物抗人巨细胞病毒（human cytomegaloviras,HCMV）的作用机制。方法通过不同时间点干预HCMV—HEL感染细胞模型,确定提取物是在病毒入侵细胞前或后发挥抗病毒作用;应用RT—PCR检测即刻早期基因UL122、早期基因UI朋、晚期基因UL86mRNA的转录表达,探讨提取物发挥抗病毒作用的时段;通过观察HCMV—UL32荧光病毒在HEL增殖过程中的荧光信号变化,确定提取物是在HCMVUL32基因特录前或者转录后发挥作用。结果无论将提取物在病毒入侵细胞前、后进行干预HCMV—HEL感染模型,均可抑制细胞病变的发生;RT-PCB．结果提示干预模型的HCMVUL122、UL44基因的结果为阳性,而晚期基因UL86的转录表达为阴性;提取物可有效抑制荧光病毒的荧光信号的表达。结论白颖苔草提取物抗HCMV的作用机制主要是抑制中晚期的基因转录,而对病毒的入侵过程和即刘早期、早期基因的转录表达无明显影响。     

人巨细胞病毒活动性感染对尿毒症的影响

目的分析人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染对尿毒症的影响。方法收集13例HCMV活动性感染尿毒症患者、58例HCMV潜伏感染尿毒症患者和58位健康对照者(健康对照组)的外周静脉血样本,比较3组HCMV IgG抗体、HCMV IgM抗体、HCMV IE-1基因、HCMV pp65抗原、血清肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)、红细胞(RBC)计数、血细胞比容(HCT)、血红蛋白(Hb)含量和淋巴细胞百分比等指标,分析HCMV活动性感染对尿毒症的影响。结果尿毒症组Cr、BUN、RBC计数、HCT、Hb含量与健康对照组比较差异均有统计学意义(P0.05)。与HCMV潜伏感染组比较,HCMV活动性感染组Cr、BUN、淋巴细胞百分比显著升高(P0.05、P0.01),RBC计数、HCT和Hb含量有一定程度降低,但差异无统计学意义(P0.05)。结论 HCMV活动性感染可能对尿毒症病情有一定的影响。