人巨细胞病毒感染对早孕绒毛细胞Cyclins表达的影响及其机制的初步探讨

目的:探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染孕妇后致宫内感染的机制。方法:检测15例血清HCMV IgM(+)早孕妇女绒毛中HCMVmRNA的表达;检测HCMVmRNA表达阳性的绒毛原位杂交蜕膜中诱生型一氧化氮合酶(induced ni-tric oxide sythnase,iNOS)mRNA的表达,用免疫组化技术检测细胞周期蛋白(Cyclins)D、E、B、A蛋白的表达,用生化方法测定绒毛组织中的超氧化物歧化酶(superoxide dis-mutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA);以同期血清HCMV IgM(-)、绒毛HCMVmRNA(-)的15例孕妇绒毛为对照组。结果:(1)15例血清HCMV IgM(+)孕妇中5例绒毛组织HCMVmRNA阳性,宫内传播率为33.33%;(2)5例HCMV-mRNA阳性绒毛Cy-clin D、Cyclin E表达发生率均较对照组高(80%vs 7.1%;80%vs 15.5%);而两组均无Cyclin A及Cyclin B表达;(3)HCMV-mRNA阳性蜕膜中iNOS-mRNA呈强表达,其吸光度为0.5021±0.0189显著高于对照组的0.1860±0.0119,差异有统计学意义(P<0.05);(4)HCMV mRNA阳性绒毛中SOD、MDA均高于对照组(178.35±13.25 vs 102.27±10.12;22.18±5.02 vs 10.15±4.56),(P均<0.05)。结论:孕早期绒毛活动性HCMV感染可导致Cyclin异常表达,NO、SOD、MDA对Cyclin的异常表达起了重要的作用。     

iNOS和caspase 3在胚胎停育绒毛和蜕膜组织中的表达

目的：探讨胚胎停育绒毛组织和蜕膜组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase 3）和诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）的表达和临床意义。方法：选择2013年3月-2014年5月就诊于武警后勤学院附属医院妇产科计划生育门诊的30例不明原因早期胚胎停育的患者（病例组）和30例正常早期妊娠妇女（对照组）为研究对象,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测2组绒毛组织和蜕膜组织中caspase 3和iNOS mRNA的表达水平,采用免疫印迹法检测2组绒毛组织和蜕膜组织中caspase 3蛋白的表达水平。结果：①病例组绒毛组织和蜕膜组织中caspase 3 mRNA、总的caspase 3蛋白和活化的caspase 3蛋白的表达水平均高于对照组（P＜0.01）。②病例组绒毛组织和蜕膜组织中iNOS mRNA表达水平低于对照组（P＜0.01）。结论：正常早孕和胚胎停育患者绒毛组织和蜕膜组织中均有iNOS和caspase 3的表达,iNOS和caspase 3可能参与凋亡的增加进而引起胚胎停育的发生。     

子痫前期肾病综合征胎盘及子宫蜕膜的免疫病理观察

目的:探讨胎盘、蜕膜组织中免疫球蛋白IgG、IgM沉积与子痫前期肾病综合征的病因、肾功能及肾脏病理改变的相关关系。方法:正常妊娠妇女(Ⅰ组)、非肾病综合征型子痫前期(Ⅱ组)和子痫前期肾病综合征(Ⅲ组)患者各30例,采用HE染色、免疫组化法观察子宫蜕膜及胎盘绒毛血管内皮细胞IgG、IgM沉积和病理改变,并对围生儿预后、产妇肾脏功能及产后肾脏病理变化和免疫沉积进行相关性分析。结果:(1)IgG、IgM在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组胎盘绒毛血管内皮细胞及子宫蜕膜螺旋形小动脉中的沉积依次增强。3组差异有统计学意义(P<0.05);(2)IgG、IgM在同一组的胎盘与子宫蜕膜沉积呈正相关(r=0.985);(3)IgG、IgM在胎盘与子宫蜕膜沉积强度与同组终止妊娠周数、新生儿出生体重和围生儿病死率相关;(4)IgG、IgM在胎盘与子宫蜕膜沉积强度与同组24h尿蛋白、血浆BUN、Cr、UA有相同的变化趋势;(5)Ⅲ组1例子痫前期肾病综合征肾脏病变与胎盘及蜕膜明显的免疫复合物沉积相一致。结论:(1)免疫复合物损伤是子痫前期肾病综合征发病的重要因素之一;(2)免疫复合物沉积与子痫前期肾病综合征临床转归密切相关。     

胎盘组织中诱导型一氧化氮合酶和巨噬细胞的表达与妊娠高血压综合征发病的关系

目的　通过测定妊娠高血压综合征 (妊高征 )孕妇胎盘组织中诱导型一氧化氮合酶和巨噬细胞的表达 ,探讨其在妊高征发病中的作用。方法　应用免疫组织化学方法检测 30例妊高征孕妇 (妊高征组 ,其中轻度 2例 ,中度 7例 ,重度 2 1例 )和 2 2例正常妊娠妇女 (对照组 )胎盘组织中诱导型一氧化氮合酶和巨噬细胞的表达。结果　 (1)妊高征组孕妇胎盘组织中诱导型一氧化氮合酶和巨噬细胞表达的阳性率分别为 (2 9± 0 7) %和 (3 0± 0 8) % ,对照组孕妇分别为 (2 1± 0 8) %和 (2 1±0 7) % ,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1)。 (2 )轻、中度妊高征孕妇胎盘组织中诱导型一氧化氮合酶和巨噬细胞表达的阳性率分别为 (2 8± 0 7) %和 (2 8± 1 0 ) % ,重度妊高征孕妇分别为 (3 0±0 7) %和 (3 1± 0 8) % ,两者之间比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　妊高征患者胎盘组织中诱导型一氧化氮合酶和巨噬细胞均有高表达 ,这可能是引起胎盘功能不良和胎儿 胎盘循环阻力改变的原因之一 ,并可能在妊高征的发病中起重要作用     

妊娠高血压综合征患者胎盘绒毛组织内皮素1和内皮型一氧化氮合成酶的基因表达及其脐动脉血流变化

目的　研究妊娠高血压综合征 (简称妊高征 )患者胎盘绒毛组织内皮素 1(endothelin- 1,ET- 1)及内皮型一氧化氮合成酶 (endothelial nitric oxide synthase,e NOS)的基因表达 ,探讨 ET- 1及一氧化氮在妊高征患者胎儿胎盘循环中对脐动脉血流变化的作用。　方法　对妊高征患者及正常妊娠孕妇的胎盘绒毛组织 ,用地高辛标记的 ET- 1及 e NOS互补脱氧核糖核酸 (com plem entary deoxyri-bonucleotide,c DNA)探针进行点印迹杂交 ,利用 L eica QWIN图象处理系统测量每个杂交点的平均光密度值。在分娩前一日用彩色超声多普勒仪测定其脐动脉血流 S/ D值。　结果　妊高征患者胎盘绒毛组织 ET- 1基因表达明显增多 ,其平均光密度值妊高征组为 0 .43± 0 .0 3,正常组为 0 .2 3± 0 .44两组间差别显著 P<0 .0 5。而妊高征组胎盘绒毛组织 e NOS基因的表达明显低于正常对照组 ,其平均光密度值妊高征组为 0 .19± 0 .2 2 ,正常组为 0 .38± 0 .0 2 ,两组间差别显著 P<0 .0 5。妊高征组脐动脉S/ D值明显高于正常对照组 ,分别为 5 .92± 2 .13和 2 .11± 0 .2 2 ,两组间差别显著 P<0 .0 5。　结论　妊高征患者胎盘绒毛组织 ET- 1的表达明显增加 ,而内 e NOS的表达明显减少 ,脐动脉血流阻力亦明显增加。妊高征患者脐动脉血流     

血红素氧合酶在正常妊娠绒毛和胎盘组织中的表达及定位

目的　探讨血红素氧合酶 (HO)的两种同工酶基因及蛋白在正常早期妊娠绒毛和晚期妊娠胎盘组织中的表达。方法　选择正常妊娠 6～ 10周的孕妇 (早孕组 )和妊娠 3 7～ 41周的孕妇 (晚孕组 )各 2 0例 ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,检测绒毛和胎盘组织中诱导型HO(HO 1)mRNA及结构型HO(HO 2 )mRNA的表达 ;并采用免疫组织化学 (免疫组化 )方法 ,进行HO蛋白定位和半定量分析。结果　两组HO 1mRNA的表达均较弱 ,早孕组绒毛HO 1mRNA表达水平为 ( 0 3 1±0 19) ,晚孕组胎盘HO 1mRNA表达水平为 ( 0 2 8± 0 14 ) ,两组比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5) ;而两组HO 2mRNA的表达均较强 ,晚孕组胎盘表达水平为 ( 1 12± 0 58) ,早孕组绒毛表达水平为 ( 0 70±0 48) ,两组比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5)。免疫组化定位结果显示 ,HO 1蛋白主要定位于绒毛间质细胞和胎盘滋养细胞 ,HO 2蛋白主要定位于胎盘滋养细胞及血管内皮细胞 ,绒毛间质也有染色。蛋白半定量结果显示 ,胎盘细胞染色分数为非正态分布 ,HO 1在早孕组绒毛滋养细胞、间质细胞和血管内皮细胞中的染色分数中位数分别为 9 0、2 6和 2 8,晚孕组分别为 8 7、2 0和 1 4,两组比较 ,差异均无显著性 (P >0 0 5)。HO 2在早孕组绒毛血管内皮细胞中     

胎盘生长因子与子痫前期发病及一氧化氮关系的研究

目的:探讨胎盘生长因子(PLGF)在子痫前期发病中的作用及其与一氧化氮的关系。方法:选择妊娠期高血压疾病患者45例,其中妊娠期高血压10例,轻度子痫前期12例,重度23例;选择同期正常妊娠妇女20例作为对照组。采用免疫组织化学染色法和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测两组患者胎盘PLGF蛋白及mRNA的表达。采用硝酸盐还原酶法测定两组胎盘组织NO浓度的变化。结果:(1)免疫组化结果显示,轻度和重度子痫前期的胎盘绒毛合体滋养细胞、绒毛间质PLGF表达均显著低于正常妊娠组(P<0.05),妊娠期高血压组与正常组无差别;PLGF在妊娠期高血压、子痫前期组及正常妊娠组分布范围基本一致,主要分布在绒毛合体滋养细胞和间质细胞胞浆,部分血管合体膜上也有表达;(2)轻、重度子痫前期胎盘组织PLGF mRNA平均灰度分别为3.33±0.39、1.97±0.29,显著低于正常妊娠组的平均灰度4.87±0.60(P<0.01);(3)轻、重度子痫前期胎盘组织中NO浓度分别为8.20±5.56μmol/g、6.46±2.25μmol/g,显著低于对照组18.10±7.12μmol/g(P<0.05);妊娠期高血压组胎盘组织NO浓度与对照组差异无显著性;(4)胎盘组织中胎盘生长因子表达水平与胎盘组织NO浓度呈显著正相关(r=0.54,P<0.05)。结论:子痫前期胎盘组织中胎盘生长因子水平降低,NO浓度下降,可能在子痫前期的发病中起一定作用。     

基质金属蛋白酶9、2及其抑制物在胎盘粘连发生中的作用

目的探讨基质金属蛋白酶(MMP)9、2及基质金属蛋白酶抑制物(TIMP)1、2在胎盘粘连发生中的作用。方法选择孕足月分娩的胎盘粘连产妇23例作为胎盘粘连组,其中9例分娩后即刻取蜕膜组织作为蜕膜粘连组;正常足月分娩产妇28例作为正常胎盘组,其中11例分娩后即刻取蜕膜组织作为正常蜕膜组。应用实时定量聚合酶链反应(Real timePCR)技术检测4组产妇MMP9、MMP2、TIMP1、TIMP2mRNA表达水平。结果(1)胎盘粘连组及正常胎盘组产妇MMP9mRNA表达水平分别为(3.84±0.24)和(3.21±0.76)copy/μg,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);蜕膜粘连组及正常蜕膜组产妇MMP9mRNA表达水平分别为(3.81±0.66)和(2.50±0.49)copy/μg,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)胎盘粘连组及正常胎盘组产妇TIMP1mRNA表达水平分别为(5.92±0.46)和(5.91±0.56)copy/μg,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);蜕膜粘连组及正常蜕膜组产妇TIMP1mRNA表达水平分别为(6.63±0.51)和(7.09±0.55)copy/μg,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)胎盘粘连组及正常胎盘组产妇MMP2mRNA表达水平分别为(5.53±0.59)和(4.55±1.13)copy/μg,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);蜕膜粘连组及正常蜕膜组产妇MMP2mRNA表达水平分别为(6.07±0.83)和(5.97±0.76)copy/μg,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(4)胎盘粘连组及正常胎盘组产妇TIMP2mRNA表达水平分别为(4.69±0.60)和(3.79±1.06)copy/μg,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);蜕膜粘连组及正常蜕膜组产妇TIMP2mRNA表达水平分别为(5.06±0.33)和(3.98±0.60)copy/μg,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胎盘组织中MMP9、2升调节及其蜕膜组织中TIMP1降调节与胎盘粘连的发生有关;TIMP2在胎盘粘连发生中的作用尚待进一步研究。     

转化生长因子β1及其受体与体外受精-胚胎移植后流产关系的研究

目的　了解转化生长因子β1(TGF- β1)及其受体(TβR)在绒毛及蜕膜组织中的表达,初步探讨TGF- β1与体外受精胚胎移植(IVF- ET)后流产及自然流产的关系。方法　应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)连接法,检测10例IVF -ET后流产患者(IVF- ET组)和20例早期自然流产患者(自然流产组)的绒毛及蜕膜组织中的TGF -β1及TβR(Ⅰ、Ⅱ型)表达情况,其表达水平以阳性染色部位的吸光度(A)值表示,并与20例人工流产者(对照组)进行比较。结果　TGF- β1及TβR在早孕绒毛滋养细胞、蜕膜组织腺体及间质细胞中均有阳性染色, 3组表达部位相同。TGF β1在IVF ET组蜕膜及绒毛组织中表达水平(A值,中位数,下同)分别为0 167、0 .199,自然流产组为0 .198、0 .201,对照组为0 .277、0 .274;TβR Ⅰ在IVF- ET组蜕膜及绒毛组织中表达水平为0 144、0 150,自然流产组为0 .202、0. 201,对照组为0 .238、0 .281;TβR Ⅱ在IVF ET组蜕膜及绒毛组织中的表达水平为0 .199、0 .145,自然流产组为0. 153、0 .156,对照组为0 .300、0 .301。上述指标,IVF -ET、自然流产组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0. 01)。结论　TGF -β1及TβR在IVF- ET后流产及自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达下降,在IVF- ET后流产发病中起重要作用,     

半乳糖凝集素-3在早期绒毛和蜕膜中的表达

目的:了解半乳糖凝集素-3(galectin-3)在早孕期绒毛与蜕膜中的表达,为进一步探讨稽留流产发病机制提供理论依据。方法:分别获取手术流产组(n=20)、药物流产组(n=20)及稽留流产组(n=20)患者的流产绒毛及蜕膜,用免疫组织化学法及实时荧光相对定量PCR法检测各组绒毛及蜕膜组织中半乳糖凝集素-3的表达。结果:免疫组织化学显示稽留流产组绒毛半乳糖凝集素-3强阳性表达率(30.00%)明显低于手术流产组(80.00%)(P<0.01)。RT-PCR结果进一步证实稽留流产组绒毛半乳糖凝集素-3 mRNA的相对表达量(2-△△Ct=0.31±0.70)明显低于手术流产组(2-△△Ct=1.00±0.00)(P<0.01),药物流产组蜕膜半乳糖凝集素-3 mRNA的相对表达量(2-△△Ct=0.74±2.20)明显低于手术流产组(2-△△Ct=1.00±0.00)(P<0.01)。结论:半乳糖凝集素-3与妊娠早期绒毛及蜕膜发育有关,其表达降低可能促进了稽留流产的发生。     

人巨细胞病毒活动性感染对早孕绒毛细胞ERK1/2蛋白活性的影响

目的人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）活动性感染对早孕绒毛细胞外信号调节激酶（extracellular signal regulated kinase1/2,ERK1/2）的信号通路的影响,探讨HCMV宫内感染的可能机制。方法选取既往有异常妊娠史并行人工流产术的早孕妇女139例,应用逆转录-聚合酶链反应技术检测其胎盘绒毛组织HCMV-mRNA的表达;酶联免疫吸附试验法测定其血清HCMV-IgM;免疫印迹法及免疫组化法检测其ERK1/2活性及蛋白表达水平并进行半定量分析。结果139例孕妇中有15例胎盘绒毛组织HCMV-mRNA阳性,32例血清HCMV-IgM阳性,阳性率为23.0%（32/139）。依据HCMV-mRNA与HCMV-IgM检测结果,139例孕妇分为3组：A组：HCMV-mRNA与HCMV-IgM均阳性14例,其宫内传播率为43.8%（14/32）;B组：HCMV-mRNA阴性而HCMV-IgM阳性18例;C组：HCMV-mRNA与HCMV-IgM均阴性106例。另有1例HCMV-IgM阴性者其胎盘绒毛组织HCMV2mRNA阳性;②在所有标本绒毛组织中均可见总ERK1/2的表达,主要位于细胞滋养细胞的胞浆中,三组中总ERK1/2表达相似,但A组pERK1/2的表达强度明显高于B组,B组与C组无明显的差异;A组与B组和C组pERK1与pERK2比较,差异有统计学意义（P〈0.01,P〈0.05）。结论ERK1/2的信号通路可能在HCMV宫内活动性感染中起重要作用。     

Investigation of human cytomegalovirus infection in 103 cases with history of abnormal pregnancy]

Human cytomegalovirus (HCMV)-IgG, IgM antibodies were detected by indirect ELISA in 103 serum specimens from women with history of abnormal pregnancy. The results showed that the positive rates of HCMV-IgG and IgM of abnormal pregnant women were 90.29% and 13.59% respectively. The positive rate of HCMV-IgM in abnormal pregnancies was higher than that of normal pregnancies (4.07%, P less than 0.001). This suggested that the probability of abnormal pregnancy in HCMV-IgM positive women was higher than the negative ones. Thus detecting HCMV-IgM by ELISA could be used not only in early diagnosis of active HCMV infection in pregnant women, but also a way to prevent this delivery of malformed babies.     

孕妇巨细胞病毒感染及其宫内传播的探讨

探讨孕妇人巨细胞病毒感染的宫内传播情况以及先天性ＨＣＭＶ感染对胎婴儿的近期影响。方法酶联免疫吸附试验筛查孕妇血清ＨＣＭＶ－ＩｇＭ１８８１例,聚合酶链反应检测血ＨＣＭＶＤＮＡ６５６例;追踪感染孕妇的胎婴儿ＨＣＭＶ感染情况和近期预后。     

应用聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验检测孕妇和胎儿巨细胞病毒感

OBJECTIVE: To evaluate polymerase chain reaction (PCR) and enzyme-linked immunosorbant assay (ELISA) on detection human cytomegalovirus (HCMV) infection in preghnant women and fetuses. METHODS: ELISA was used to screen for serum HCMV-IgM in 1881 pregnant women. Blood HCMV DNA was examined by PCR in 656 of them simultaneously. 99 fetuses or newborns of HCMV infected mothers and 47 of uninfected ones were detected by both methods. RESULTS: The positive rate of serum HCMV-IgM in pregnant women was 2.4%, and that of HCMV DNA was 12.0%, 17.2% of fetuses or newborns from infected mothers had either positive HCMV-IgM or positive HCMV DNA or both of them. The intrauterine transmission rate of HCMV in mothers with positive HCMV-IgM or positive HCMV DNA or both of them was 18.5%, 14.8% and 27.3% respectively. Simultaneous detection with ELISA and PCR in 656 pregnant women and 146 fetuses showed fine correlations and significant differences between two methods. PCR had significantly higher detection rates than that of ELISA. CONCLUSIONS: ELISA combined with PCR may raise the detection rate and diagnostic efficacy of HCMV infection in both pregnant women and fetuses.     

人巨细胞病毒宫内感染产前诊断方法的研究

目的:探索人巨细胞病毒(HCMV)宫内感染产前诊断的最佳方法。方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、巢式PCR(N-PCR)和逆转录PCR(RT-PCR)对比分析武汉、上海和沈阳3地3908例孕妇HCMV感染状况及其对妊娠结局的影响。结果:孕妇HCMV IgM检出率为6.24%,与HCMV DNA和晚期mRNA的检测符合率分别为59.03%和56.49%。活动性感染孕妇的宫内传播率(41.58%)明显高于对照组(15.87%)。HCMV晚期mRNA阳性的宫内感染儿流产、早产发生率明显升高。采集绒毛、羊水和脐血进行产前诊断的安全性良好。结论:在应用ELISA法进行初筛的基础上,联合应用N-PCR和RT-PCR技术检测HCMV DNA和晚期mRNA表达,是产前诊断HCMV宫内感染安全而可靠的方法之一。     

监测反复自然流产者血清HCMVIgM抗体及其绒毛组织DNA的研究

采用酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）对８５例反复自然流产（ＲＳＡ）妇女及１０７例无流产史早孕妇女的血清进行ＨＣＭＶＩｇＭ、ＨＣＭＶＩｇＧ检测，应用ＰＣＲ技术检测部分绒毛组织ＤＮＡ，直接法制备绒毛细胞染色体。结果显示：ＲＳＡ组ＨＣＭＶＩｇＭ阳性率（５８．８２％），明显高于对照组（１５．８９％）（Ｐ＜０．０１）。说明孕妇原发性ＨＣＭＶ感染与ＲＳＡ有相关性；ＨＣＭＶＩｇＭ阳性与流产次数有密切关系；ＨＣＭＶ可以通过胎盘屏障感染胎儿，导致流产     

人巨细胞病毒感染与异位妊娠

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染与异位妊娠的相关性.方法采用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测72例输卵管妊娠患者(病例组)血清中的抗HCMV抗体;聚合酶链反应(PCR)技术检测其中49例患者的输卵管、宫颈及宫腔标本中HCMV DNA;同时选择38例正常足月妊娠行剖宫产妇女作为对照2结果病例组血清抗HCMV IgG抗体检出率为31.9%,明显高于对照组(15.8%)(P＜0.05);IgM抗体检出率高于对照组,在统计学上无明显差异(P＞0.05).病例组宫颈、宫腔及输卵管标本中均检出HCMV DNA,且宫颈检出率为14.3%,明显高于对照组(P＜0.05).结论异位妊娠与HCMV感染存在相关性.     

检测人巨细胞病毒晚期mRNA在诊断子宫内活动性感染的价值

目的 探讨人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）晚期ｍＲＮＡ检测在宫内活动性感染中的应用价值。方法 采用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）法对４２例ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性孕妇外周血及部分胎儿附属物进行ＨＣＭＶ晚期ｍＲＮＡ检测。结果 ４２例ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性孕妇中,检出晚期ｍＲＮＡ２３便,两者符合率为５４．７％。对其中１３例晚期ｍＲＮＡ阳性孕妇胎儿附属物进行检测,７例阳性,母婴传播率为５３．８％,而１２例晚期ｍＲ