法舒地尔可能通过P13-K／Akt信号通路抑制大鼠脑缺血／再灌注区神经元的凋亡

目的探讨法舒地尔对大鼠脑缺血／再灌注损伤神经元是否具有抗凋亡作用并探讨其抗凋亡机制。方法大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血／再灌注损伤模型。运用TUNEL法检测大鼠脑缺血／再灌注区神经细胞的凋亡，免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达，Western blot法检测Akt以及Rho激酶特异性底物蛋白MYPT的磷酸化表达。结果法舒地尔能明显减少TUNEL染色阳性细胞数，增加Bcl-2的表达，降低Bax、Caspase-3的表达，升高Akt的磷酸化水平以及降低MYPT的磷酸化水平。结论①法舒地尔能减少大鼠脑缺血／再灌注区神经细胞凋亡。②法舒地尔的抗凋亡机制可能与其抑制Rho激酶活性，进而激活P13-K／Akt传导通路有关。     

法舒地尔对大鼠脑缺血再灌注损伤炎症反应的影响

目的：观察法舒地尔对大鼠脑缺血再灌注损伤炎症反应的影响,探讨其抗炎机制。方法：大脑中动脉线栓法（MCAO）制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,缺血1.5h再灌注24h。法舒地尔术前腹腔注射给药15mg/kg,术后12h再次给药。术后对大鼠神经功能进行评分,TTC染色观察脑梗死体积;用干湿重法测定脑含水量;分光光度法测定髓过氧化物酶（MPO）活性;伊文思兰法（EB）测定血脑屏障的损伤程度;免疫组化检测大鼠脑缺血区细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）、NF-κB p65的表达;ELISA法检测IL-8的含量;Western blot法检测单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和核抽提物中NF-κBp65蛋白的表达;RT-PCR检测NF-κB p65mRNA的表达。结果：法舒地尔能明显改善脑缺血再灌注损伤大鼠神经缺陷症状,缩小脑梗死体积,明显降低缺血侧脑组织的含水量、EB含量及MPO活性;显著抑制ICAM-1、VCAM-1、IL-8和MCP-1蛋白的表达;降低NF-κB p65mRNA和蛋白的表达;减少脑组织核抽提物中NF-κB p65的蛋白量（P〈0.05vsMCAO组）。结论：法舒地尔通过抑制NF-κBp65的活化,进而抑制黏附分子及趋化因子的表达,减轻脑缺血再灌注损伤的炎症反应。     

桑黄素通过抑制TXNIP/NLRP3/Caspase-1信号通路对脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡的影响

目的 探讨桑黄素(Morin)通过调控硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶1(Caspase-1)信号通路,对脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡的影响。方法 将60只大鼠随机均分为假手术组、模型组、Morin低剂量(Morin-L,10 mg/kg)组、Morin高剂量(Morin-H,40 mg/kg)组、Morin-H+pLVXNC组(40 mg/kg Morin+pLVX-NC)、Morin-H+pLVX-TXNIP组(40 mg/kg Morin+pLVX-TXNIP)。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型(除外假手术组),给药1 h后再灌注。再灌注72 h后,进行神经功能缺损评分;取出全脑进行脑含水量测定;苏木精-伊红(HE)染色观察脑皮质半暗带病理损伤情况;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)检测脑组织梗死面积;酶联免疫吸附试验检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-18含量;Western blot检测脑皮质中TXNIP/NLRP3/Caspase-1信号通路蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分,...     

栀子苷介导GLP-1R/Akt信号通路改善大鼠脑缺血再灌注损伤和神经元凋亡的研究

目的 观察栀子苷对脑缺血再灌注损伤（CIRI）模型大鼠的神经保护作用及对胰高血糖素样肽-1受体（GLP-1R）/蛋白激酶B（Akt）信号通路的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,栀子苷低、高剂量组及尼莫地平片组,每组10只。采用线栓法制备CIRI大鼠模型,缺血2 h再灌注24 h后,栀子苷低、高剂量组大鼠分别ig给予10、40 mg·kg^-1的栀子苷,尼莫地平片组大鼠ig给予8.1 mg·kg^-1尼莫地平,假手术组和模型组大鼠ig等体积生理盐水,每天1次,连续7 d。造模后及给药结束后,分别对各组大鼠进行神经功能缺损评分;给药结束后,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）及白细胞介素-6（IL-6）水平,苏木素-伊红（HE）染色检测脑组织病理学变化,尼氏染色检测神经元与尼氏小体变化,免疫组化染色检测脑组织B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和Bcl-2关联X蛋白（Bax）表达,蛋白质印迹法（Western blotting）检测脑组织细胞色素C（Cyt-C）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶-9（Caspase-9）、胰高血糖素样肽-1受体（GLP-1R）及磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分显著升高（P＜0.05）,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著升高（P＜0.05）;皮质细胞间质疏松、增宽,有大量神经元细胞质萎缩和细胞核损伤;脑神经元皱缩,尼氏小体变小,数目明显减少。大鼠脑组织Bcl-2表达显著降低（P＜0.05）,Bax表达显著升高（P＜0.05）;脑组织中Cyt-C、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,GLP-1R和p-Akt蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。与模型组比较,栀子苷高剂量组和尼莫地平片组大鼠神经功能缺损评分均显著降低（P＜0.05）,血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著降低（P＜0.05）,皮质细胞较为整齐,神经元细胞和尼氏小体损伤减小,Bcl-2表达显著升高（P＜0.05）,Bax表达显著降低（P＜0.05）,同时,Cyt-C、Caspase-3及Caspase-9蛋白表达水平显著下降（P＜0.05）,GLP-1R和p-Akt蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。结论 栀子苷能够改善大鼠CIRI,减少神经元凋亡,其作用机制可能与激活GLP-1R/Akt信号通路有关。     

牛蒡子苷元通过抑制PI3-K/Akt信号通路诱导肝癌细胞凋亡

目的 探讨天然木脂素类化合物牛蒡子苷元对肝癌细胞生长的抑制作用及其可能机制。方法 采用不同浓度的牛蒡子苷元处理HepG2 和Hep3B 细胞,通过MTT 法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,免疫印迹检测细胞中caspase-9 和caspase-3 的活化情况以及抗凋亡蛋白的表达。进一步通过转染Akt 质粒以及使用PI3K 抑制剂,探讨牛蒡子苷元对肝癌细胞PI3K/Akt 信号通路的影响。结果 牛蒡子苷元能以浓度依赖性方式显著抑制肝癌细胞增殖并促进其凋亡,同时抑制肝癌细胞中PI3K/Akt 信号通路活化,降低抗凋亡蛋白Bcl-xL、Mcl-1 和survivin 的表达,抑制mTOR 和S6K 的磷酸化;细胞过表达Akt 活化蛋白后可抑制牛蒡子苷元的上述效应,而PI3K 抑制剂联合作用可增强上述效应。结论 牛蒡子苷元可通过抑制PI3K/Akt 信号通路下调抗凋亡蛋白的表达进而促进肝癌细胞凋亡。     

大黄素可能通过抑制Akt信号通路诱导HL-60细胞凋亡

为研究大黄素(emodin)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖、凋亡的影响及Akt信号通路在其中的作用, 应用MTT法检测大黄素对HL-60细胞增殖的影响；细胞周期分析、线粒体细胞凋亡流式检测法分析细胞周期变化及细胞凋亡；Western blotting检测Akt信号通路蛋白表达水平的变化。结果显示，大黄素能有效抑制HL-60细胞的增殖，作用48 h的IC₅₀约为20 μmol·L^-1， 并能诱导其凋亡, 随药物作用浓度的增加， 凋亡率也逐渐上升； 大黄素作用后， HL-60细胞G_0/G1期细胞增多， 而S期及G₂期的细胞减少； Western blotting检测结果显示， 大黄素下调HL-60细胞Akt、p-Akt、IκB-α、p-IκB-α、p65、p-p65、mTOR及p-mTOR蛋白的表达。因此,大黄素能有效抑制HL-60细胞增殖，将细胞阻滞于G_0/G1期，诱导其凋亡；Akt信号通路可能参与了大黄素抑制HL-60细胞增殖、诱导凋亡的过程。     

大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的动态变化

目的观察大鼠脑缺血再灌注后大脑皮质和纹状体神经细胞凋亡的动态变化。方法采用大鼠脑缺血2h,再灌注1h,6h,12h,24h和48h的脑缺血再灌注模型。用HE染色体和TUNEL标记的方法,观察大鼠大脑皮层和纹状体神经细胞凋亡的变化。结果在脑缺血再灌注早期有部分神经细胞发生凋亡,随再灌注时间的延长,凋亡细胞数目逐渐增多。24～48h达高峰。结论在脑缺血再灌注损伤时神经细胞凋亡起着重要作用。     

大鼠脑缺血/再灌注后神经元凋亡及caspase-12 mRNA和蛋白表达的改变

目的研究大鼠局灶性脑缺血/再灌注后caspase-12 mRNA及蛋白的表达,明确内质网信号通路在脑缺血后神经元凋亡调控中的作用。方法60只Wistar♂大鼠随机分为假手术组和缺血组。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型,应用原位末端标记法(TUNEL)、免疫组化染色、RT-PCR技术检测脑缺血/再灌注后各组凋亡细胞数和caspase-12 mRNA及蛋白的表达。结果脑缺血/再灌注后,随着再灌注时间的延长,凋亡细胞数和caspase-12mRNA及蛋白的表达逐渐增高。在脑缺血/再灌注后24h达高峰。与假手术组相比,缺血组在各时间点凋亡细胞数、caspase-12 mRNA及蛋白表达均明显升高(P<0.01)。结论脑缺血/再灌注后神经元凋亡数明显增高,caspase-12 mRNA及蛋白的表达明显升高,提示内质网通路参与了脑缺血/再灌注后神经元凋亡的调控。     

亚砷酸钠抑制PI3K/Akt 信号通路促进乳腺癌细胞凋亡的实验研究

目的　探讨亚砷酸钠促进乳腺癌细胞凋亡的作用及机制。方法　用不同浓度的亚砷酸钠分别作用于乳腺癌细胞（MCF-1/MDA-MB-231）48 h,MTT 法检测细胞增殖情况;用4 μg/mL的亚砷酸钠作用于乳腺癌细胞6 h、12 h、24 h、48 h 和72 h 后,MTT 法检测细胞增殖情况;同时采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot 检测PI3K、p-PI3K、Akt 及p-Akt 的表达水平。结果　0.5 μg/mL、1 μg/mL、2 μg/mL、4 μg/mL、8 μg/mL亚砷酸钠作用48 h 后,MCF-1、MDAMB-231 细胞存活率均明显低于对照组（P<0.05）。MCF-1、MDA-MB-231 细胞经亚砷酸钠作用后细胞凋亡率明显高于对照组（P<0.01）。亚砷酸钠作用后的乳腺癌细胞中PI3K、Akt 的表达水平与对照组比较无显著差异（P>0.05）,而p-PI3K、p-Akt的表达水平明显低于对照组（P<0.01）。结论　亚砷酸钠可抑制乳腺癌细胞增殖,且其效应随作用时间的增加而增强;亚砷酸钠可促进乳腺癌细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt 信号通路的激活有关。     

法舒地尔预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞色素C和caspase-3表达的影响

目的研究法舒地尔对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤细胞色素C(CytC)和caspase-3蛋白表达的影响,探讨其脑保护机制。方法线栓法制作大鼠中动脉缺血再灌注损伤模型。成年雄性SD大鼠120只随机分成3组:假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注模型组(Mod组)、法舒地尔干预组(Fas组),再分为再灌注3h、12h、24h和48h,以及TTC染色组5个亚组,每组8只大鼠。缺血再灌注后进行神经功能缺损评分(NDS),免疫组织化学方法检测脑组织中CytC蛋白、cas-pase-3的表达,TTC染色测量鼠脑梗死体积并计算百分比。结果①Sham组大鼠无神经功能缺损,NDS评分为0,TTC染色亦未见脑组织梗死;Mod组和Fas组大鼠均有明显的神经功能缺损,TTC染色亦可见明显的脑组织梗死;但与Mod组相比,Fas组神经功能缺损少、NDS评分低(P<0.01),脑梗死体积减小(P<0.05)。②与Sham组相比,脑缺血再灌注后,Mod组和Fas组大鼠脑组织CytC和caspase-3的表达显著升高(P<0.01),其中CytC表达高峰出现在12h,caspase-3表达高峰出现在24h;Fas组和Mod组间比较显示Fas组CytC和caspase-3的表达又显著低于Mod组(P<0.01)。结论①法舒地尔能减轻大鼠脑局灶性缺血再灌注引起的神经功能缺损,减小脑梗死体积。②部分抑制脑缺血再灌注引起的CytC和caspase-3表达增加可能是法舒地尔的脑保护机制之一。     

Luteolin inhibits apoptosis and improves cardiomyocyte contractile function through the PI3K/Akt pathway in simulated ischemia/reperfusion

Luteolin, a naturally occurring polyphenol flavonoid, has demonstrated to exert myocardial protection effects. However, the mechanisms have not been fully elucidated. In the present study, we investigated whether luteolin pretreatment was associated with cardioprotection in a rat ischemia/reperfusion (I/R) model. Luteolin significantly not only restored contractility of the left ventricle, but also reduced the infarct size and lactate dehydrogenase leakage during I/R. In addition, luteolin pretreatment significantly improved cardiomyocyte shortening amplitude, decreased the apoptotic rate, upregulated Bcl-2 expression, downregulated Bax expression and raised the Bcl-2/Bax ratio under a simulated ischemia/reperfusion (SI/R) condition. Moreover, luteolin pretreatment increased protein kinase B (Akt) phosphorylation, phospholamban phosphorylation and the expression of sarcoplasmic reticulum calcium ATPase following SI/R. The phosphoinositide 3-kinase (PI3K)/Akt pathway is one of the most important intracellular survival signal pathways. To determine whether luteolin-induced cardioprotection was mediated by the PI3K/Akt pathway, we utilized the PI3K inhibitor LY294002. Inhibition of Akt activity markedly abolished luteolin-induced positive contraction and inhibition of apoptosis in SI/R cardiomyocytes. These results showed that luteolin inhibits apoptosis and improves cardiomyocyte contractile function at least partly through the PI3K/Akt pathway in SI/R.     

L-硝基精氨酸对大鼠局灶性脑缺血后神经元凋亡的影响

目的观察非选择性一氧化氮合酶抑制剂L-硝基精氨酸(L-NA)对大鼠局灶性脑缺血诱导的神经元凋亡的影响,探讨L-NA对脑缺血的保护作用及其机制.方法健康雄性SD大鼠,体重250～300 g,随机分为假手术组(SH组)、缺血组(IS组)、L-NA治疗组(L-NA组).IS和L-NA组按缺血后时间分为三个亚组:2 h、6 h、12 h.每组6只大鼠.L-NA组每次按20mg/kg,ip给药,每日2次,连续3 d.IS组给等容量的生理盐水.插线法制备大鼠大脑中动脉阻断模型.采用流式细胞仪(FCM)检测脑组织细胞凋亡率,Western blot法和免疫组化法检测Caspase-3蛋白的表达,FCM和免疫组化法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果大鼠脑缺血后,细胞凋亡率、Caspase-3和Bax蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达差异无显著性,Bcl-2/Bax降低,缺血12 h治疗3 d时,L-NA组中细胞凋亡率、Caspase-3和Bax蛋白表达显著低于相应的IS组,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax高于IS组,缺血2、6 h治疗3 d L-NA组中细胞凋亡率、Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达和Bcl-2/Bax与IS组比,差异无显著性.结论缺血后期应用L-NA对脑缺血有治疗作用,可能与降低Caspase-3、增加Bcl-2表达、降低Bax蛋白表达、调节Bcl-2/Bax蛋白平衡有关.     

瑞舒伐他汀通过调控UCP2-SIRT3通路减轻脑缺血/再灌注对神经元线粒体的损伤

目的探讨瑞舒伐他汀(rosuvastatin,RS)通过UCP2-SIRT3信号通路在脑缺血/再灌注(CIR)神经元线粒体损伤中的作用及其机制。方法建立SH-SY5Y细胞的脑梗死再灌注模型(OGD/R),给予不同浓度RS(40和2.5μmol·L^-1)分别处理,观察两组中细胞增殖和凋亡的变化及UCP2和SIRT3分子的表达;构建UCP2沉默细胞系,研究不同浓度RS对UCP2沉默前后细胞形态和线粒体膜电位的影响、以及SIRT3分子、线粒体外膜异位酶20(TOMM20)和线粒体合成相关蛋白(Drp1、Opa1和PGC1)的表达变化。结果RS能提高OGD/R细胞的存活率、抑制细胞凋亡、改变细胞形态、稳定细胞线粒体膜电位;增加OGD/R细胞中UCP2、SIRT3分子和TOMM20蛋白表达,并诱导Drp1和Opa1 mRNA的表达,抑制PGC1 mRNA的表达;沉默UCP2后能明显降低OGD/R细胞的存活率及TOMM20蛋白的表达,降低Drp1和Opa1 mRNA的表达,使PGC1 mRNA的表达增加。结论RS通过调控UCP2-SIRT3通路减轻CIR对神经元线粒体的损伤,发挥神经细胞保护作用。     

局灶性脑缺血与细胞凋亡

近年研究表明细胞凋亡参与缺血性脑损伤的病理生理过程并在神经元损伤中具有重要作用,从细胞凋亡角度探讨脑缺血的发病机制及抗脑缺血的新途径已成为研究的热点。本文就近年脑缺血与细胞凋亡研究领域的进展,从以下几方面做一综述:细胞凋亡概述;局灶性脑缺血过程中存在细胞凋亡现象;凋亡在这一过程中的作用;脑缺血后神经元发生凋亡的可能机制和该领域中尚待解决的问题。     

玉郎伞查尔酮调控PI3K/Akt信号通路抗心肌缺血/再灌注损伤的作用及机制研究

目的探讨玉郎伞查尔酮(YLSC)调控PI3K/Akt信号通路抗心肌缺血/再灌注损伤的作用及机制。方法 40只♂SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、YLSC组、YLSC+PI3K抑制剂wortmannin组(YLSC+WM组)、PI3K抑制剂wortmannin组(WM组),每组8只。除假手术组外,其它各组大鼠均结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血模型,缺血30 min,再灌注120 min。实验结束后,采用比色法测定大鼠血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)及一氧化氮(NO)水平,ELISA法测定血清肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量,Western blot法检测心肌组织中总Akt(t-Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)及自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达,FQ-PCR法分析内皮型一氧化氮合酶(eN OS)、凋亡因子caspase-3及自噬相关基因Beclin1的表达量变化。结果与I/R组比较,YLSC组CK-MB、LDH以及TNF-α血清含量明显降低,NO水平升高,Beclin1、caspase-3及LC3-Ⅱ的表达量均明显下降,同时Akt的磷酸化水平与eN OS mR NA表达增加,上述各项指标差异具有统计学意义(P<0.05),而上述变化能够被PI3K/Akt信号通路的特异性阻断剂wortmannin所阻断,且其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 YLSC通过激活PI3K/Akt信号通路抑制缺血/再灌注所致的心肌细胞凋亡和过度自噬,从而发挥对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。     

Polygalasaponin F inhibits neuronal apoptosis induced by oxygen‐glucose deprivation and reoxygenation through the PI3K/Akt pathway

Cerebral ischaemia is a common cerebrovascular disease and often induces neuronal apoptosis, leading to brain damage. Polygalasaponin F (PGSF) is one of the components in Polygala japonica Houtt, and it is a triterpenoid saponin monomer. This research focused on anti‐apoptotic effect of PGSF during oxygen‐glucose deprivation and reoxygenation (OGD/R) injury in rat adrenal pheochromocytoma cells (PC12) and primary rat cortical neurons. OGD/R treatment reduced viability of PC12 cells and primary neurons. This reduced viability was prevented by PGSF, as shown by MTT assay. OGD/R insult decreased expression of Bcl‐2/Bax both in PC12 cells and primary neurons but elevated levels of caspase‐3 in primary neurons. However, PGSF may up‐regulate expression of Bcl‐2/Bax and down‐regulate caspase‐3 in these particular cells. Furthermore, Bcl‐2/Bax and the ratio between phosphorylated Akt and total Akt were decreased in PC12 cells treated with OGD/R, and both were increased by PGSF. Moreover, increase in the ratios of Bcl‐2/Bax and phosphorylated Akt/total Akt in PC12 cells was suppressed by phosphatidylinositol 3‐kinase (PI3K) inhibitor. Data suggest PGSF might prevent OGD/R‐induced injury via activation of PI3K/Akt signalling. The ability of PGSF to block the effects of OGD/R appears to involve regulation of Bcl‐2, Bax and caspase‐3, which are related to apoptosis.     

椒苯酮胺对全脑缺血/再灌注损伤大鼠的保护作用

目的:探讨新型钙增敏剂椒苯酮胺(piperphentonamine,PPTA)对全脑缺血/再灌注损伤大鼠的保护作用。方法:采用四血管阻断法建模。造模成功后,SD大鼠随机分为正常组、模型组、低、中和高剂量PPTA组(2.5,5,10 mg.kg-1)。Morris水迷宫测定大鼠学习记忆能力;Nissl染色观察海马神经元丢失情况;LDH试剂盒检测LDH活力;real-time PCR检测海马bax/bcl-2,caspase-3和iNOS mRNA的表达。结果:与模型组比较,5和10 mg.kg-1PPTA组大鼠逃避潜伏期显著缩短;细胞损伤减轻和LDH的释放减少;bax/bcl-2,caspase-3和iNOS基因表达下调。结论:PPTA能显著减轻脑缺血损伤大鼠海马神经元的凋亡和细胞损伤,并能有效改善其学习记忆能力。