人源抗乳腺癌单链抗体ScFv的基因克隆

乳腺癌的发病率在我国呈上升趋势。鼠源性单克隆抗体(mAb)抗不适用于人体,而人源化mAb则在乳腺癌的诊断、靶向治疗中具有较高的应用价值。为此,我们从乳腺癌细胞体外致敏乳腺癌患者外周血中分离的淋巴细胞,利用噬菌体抗体库技术克隆了人抗体基因,以期获得抗乳腺癌的人源化单链抗体。1材料和方法1.1 材料 质粒提取试剂盒(Wizard plus SV minipreps DNApurification)、DNA纯化试剂盒(Wizard DNA clean up)、SfiI和Not I内切酶、T4 DNA连接酶均购于Promega公司;RNA纯化     

NDRG1基因与乳腺癌转移的关系及其转染对乳腺癌细胞株增殖及侵袭力的影响

目的探讨NDRG1基因与乳腺癌转移的关系及其转染对乳腺癌细胞株增殖及侵袭力的影响。方法免疫组织化学SP法、即时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)检测10例新鲜乳腺浸润性导管癌和27例石蜡包埋乳腺癌组织中NDRG1蛋白和mRNA的表达。脂质体介导NDRG1基因瞬时转染高侵袭高转移性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231;用5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)掺入法、流式细胞术观察NDRG1基因转染后对细胞增殖和细胞周期的影响;细胞体外侵袭实验和迁移实验观察转染后细胞侵袭和迁移能力的变化。结果NDRG1蛋白和mRNA表达分别为:无转移的乳腺癌组织阳性率为100%(14/14)和0·82±0·14,而有转移的乳腺癌组织中为69·2%(9/13)和0·17±0·11,均明显降低;对两株细胞的检测中,高侵袭高转移的MDA-MB-231细胞株中NDRG1mRNA的表达水平(0·14±0·02)明显低于低侵袭低转移的MCF7细胞株(1·51±0·11)。NDRG1基因瞬时转染MDA-MB-231细胞后,与未转染组和pEGFP-N3组相比,pEGFP-NDRG1-N3转染组中,细胞BrdU掺入率降低,细胞周期G0/G1期比例增高,S期比例明显减低;同时细胞体外侵袭能力下降,而体外迁移能力则差异无统计学意义。结论NDRG1基因的表达与乳腺癌的转移呈负相关关系,提示该基因可望成为早期预测乳腺癌转移的分子生物学标记物之一;NDRG1基因通过脂质体转染高侵袭高转移性人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,可抑制肿瘤细胞增殖、降低其侵袭能力,提示其可作为一个候选的肿瘤转移抑制基因,并有望成为乳腺癌基因治疗的新的候选基因。     

miR-183在人乳腺癌中表达及意义

目的:研究miR-183在人乳腺癌组织和细胞株中表达状况及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:使用实时定量PCR方法检测miR-183在人乳腺细胞株和临床乳腺病变组织中表达;使用脂质体介导的miRNA转染技术,检测转染miR-183后对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移活力的影响。结果:高度侵袭力的乳腺癌细胞株miR-183表达较低侵袭乳腺细胞株显著下调(P<0.01);临床人乳腺癌组织中miR-183表达较乳腺良性病变组织显著下调(P<0.01);使用miR-183抑制物和模拟物分别转染乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231后,乳腺癌细胞侵袭和迁移活力分别上调和下调(P<0.05),而细胞增殖活力改变不明显(P>0.05)。结论:乳腺癌中miR-183表达出现失调。miR-183可能参与了乳腺癌细胞侵袭和迁移过程。     

单克隆抗体通讯(季刊) 1993年第9卷笫1～4期 总目次

论著 胃癌单克隆抗体的硼化及其硼中子俘获治疗效应…徐梁张学庸吕一辛等(卜1) 胃癌MG7抗原与其组织发生关系的研究······……李春启刘为纹李继昌等(1一6) 6株胃癌单克隆抗体结合释放方式和内化量的研究 及意义················································……蔡学君陈希陶胡家露等(1一9) 体外免疫制备抗大肠癌循环抗原的单克隆抗体··········...··……佘剑孙去病(1一13) 抗人肺癌单克隆抗体WL3Cg的制备、鉴定及血清·····················…     

抗人乳腺癌单克隆抗体HD1的特性

HD1是由1株抗人乳腺癌杂交瘤腹水扩增,亲和层析纯化得到的单克隆抗体,分泌抗体(IgG)的蛋白含量:上清为10μg/ml,腹水为1.5mg/ml。用ABC法检测,HD1与3株人乳腺癌细胞系呈阳性反应,而与胃癌、结肠癌等细胞和正常成纤维细胞、淋巴细胞呈阴性反应。组织化学染色显示对部分乳腺癌石蜡切片为阳性,而对多种正常组织为阴性。HD1对3株乳腺癌细胞系的亲和力在1.3×10~(-8)～2.7×10~(-8)mol/L之间。免疫印迹实验表明,HD1可使乳腺癌细胞MCF-7和475-A细胞膜Mr为60000的抗原组分染色,使另一株乳腺癌细胞BCaP-37 Mr为56000和94000的组分着色。对3株乳腺癌细胞有抗体介导的细胞毒效应(18％～27％)。以上的研究有助于对HD1性质及其相对应抗原的了解,为抗乳腺癌单抗的应用提供了可靠的依据     

单克隆抗体通讯(季刊)1990年第6卷第1～4期总目次

评述全军单克隆抗体的研究进展刘成贵(1一王)论著抗人白细胞间素一2多克隆及单克隆抗体的生物学特征···············……王小宁予(1一5)抗人白细胞问素一2 McAb亲和力排列及亲和指数的测定·············一王小宁等(1一11)抗乙肝病毒核心心抗体抗独特型抗体的研究兀.制备抗人 HBcAb的抗独特型抗体的探讨·······························,·、··……左冬梅等(卜巧)角蛋白和过氧化物酶双特异性杂交瘤的建立···························……全呈东…     

免疫学杂志1989年第5卷1—4期题目索引

免疫学进展淋巴毒素_一一个有肿瘤坏死活性的淋巴因子 ……………………………李昌本(1):lAIDS的免疫学………··…………·朱锡华(2);1人白细胞分化抗原研究进展………白炎(3)t141 专家论坛基因的预成论………………………杜平(4),211 基础免疫学抗人IgM单克隆抗体在免疫单扩散中的应用 …………………………邹明发等(1)l 6人肺癌细胞A 5¨产生的免疫抑制因子对 T细胞的作用及其生物学特性 …………………………王茹端等(1):10B淋巴细胞对免疫球蛋白和兔抗鼠IgM抗体 的提呈作用……………尹廷贵等(1):15CD8类MeAb·SM4的研制与鉴定…     

HIV-1 P24人源化单克隆抗体的制备及鉴定

目的 通过建立新型人源化抗HIV-1 P24单克隆抗体制备技术平台,研制1～2种抗HIV-1 P24抗体.方法 使用连接P24的磁珠分选特异性分泌P24抗体的B细胞,有限稀释后,提取总mRNA,采用逆转录和巢式PCR扩增免疫球蛋白重链和轻链基因,经测序鉴定后克隆到真核表达载体Cloning vector AbVec-hIgG1、Cloning vector AbVec-hIgKappa、Cloning vector AbVec-hIgLambda中;通过瞬时转染293T细胞得到重组抗体;使用proteinA亲和层析纯化抗体.结果 成功筛选到5对抗HIV-1 P24的人源单克隆抗体基因.结论 本研究初步成功地建立了人源化HIV-1 P24单克隆抗体的制备及纯化方法,为HIV早期诊断以及筛选其他人源化单克隆抗体奠定了基础.     

人源性噬菌体抗体库的构建和抗CEA抗体的筛选及表达

目的构建人源性噬菌体抗体库,筛选和表达人源性抗癌胚抗原(CEA)单克隆抗体。方法从结肠癌患者肠系膜淋巴结中的淋巴细胞克隆出免疫球蛋白Fd段和κ链基因,建成噬菌体抗体库。用人CEA对抗体库进行筛选,将得到的阳性克隆进行表达及检测。结果抗体库库容为5．2×106,Fab基因重组率为30％。ELISA及Western blot分析检测,证实表达出人源抗CEA单克隆抗体。DNA序列测定,证实所获基因为人免疫球蛋白可变区基因。结论成功构建噬菌体抗体库,从中获得人源性抗CEA的单克隆抗体。     

HER2阳性乳腺癌靶向治疗新药帕妥珠单抗的研究进展

人类表皮生长因子受体(HER)成为乳腺癌治疗中的一个重要的靶点,HER2阳性乳腺癌患者与HER2阴性患者相比往往预后不良,抗HER2靶向治疗彻底改变了HER2阳性乳腺癌患者的命运,HER2阳性乳腺癌患者的预后有了明显改善。帕妥珠单抗是不同于曲妥珠单抗的一类针对HER2的人源性单克隆抗体,这种新分子靶向药物进一步提高了HER2阳性乳腺癌治疗的疗效,延长了HER2阳性乳腺癌患者的生存期。本文主要综述了帕妥珠单抗的研究进展,着重介绍了帕妥珠单抗的临床疗效、安全性和耐受性。     

基于单个外周血浆细胞技术筛选MRSA人源性单克隆抗体的实验研究

目的建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(meticillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)人源性单克隆抗体筛选方法。方法从52份重组MRSA多价亚单位疫苗的Ⅰ期临床研究受试者血液样本中筛选出抗体滴度高的血样,利用流式细胞术分选其外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中浆细胞,以mRNA为模板PCR扩增抗体重链、轻链可变区基因,通过重叠延伸PCR分别将将抗体重链、轻链可变区基因与CMV启动子、人恒定区及多聚A尾连接,构建成单克隆抗体线性表达载体,PEI瞬时转染293T细胞进行抗体表达。结果流式细胞术分选出1 120个浆细胞,筛选出了39个针对MRSA 5种保护性抗原α-溶血素(Hla)、铁离子表面决定蛋白B(Isd B)、金葡菌蛋白A(SpA 5)、肠毒素B(SEB)及锰离子结合蛋白C(Mnt C)的人源性单克隆抗体,ELISA结果显示抗体能与抗原蛋白结合。结论通过单个外周血浆细胞技术,成功筛选出了能够与抗原结合的MRSA人源性单克隆抗体,为研究MRSA治疗性人源性抗体奠定了良好基础。     

灵芝孢子油及灵芝提取物孢子油对乳腺癌血管生成调节因子的作用

目的探讨灵芝孢子油及灵芝提取物孢子油对人源高恶性乳腺癌血管生成调节因子的作用。方法不同剂量的灵芝孢子油、灵芝提取物孢子油分别刺激体外培养的人源高恶性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞及MDA-MB-231细胞制作的荷廇小鼠,Western blotting检测表皮生长因子受体(EGFR)的蛋白表达变化,Real-time PCR检测肿瘤血管生成相关因子EGFR、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMPs)、血小板反应素-1(TSP-1)、血小板衍生因子(PDGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)转录水平的基因表达变化。结果灵芝孢子油、灵芝提取物孢子油均可在体内和体外抑制人源高恶性乳腺癌细胞MDA-MB-231的EGFR蛋白表达,且有剂量依赖性;均可在体内和体外抑制VEGF RNA表达,增强血管生成抑制因子TSP-1 RNA表达;灵芝提取物孢子油比灵芝孢子油的作用更为显著。结论灵芝孢子油、灵芝提取物孢子油均有抑制肿瘤血管生成因子表达和促进血管生成抑制因子表达的作用,其中灵芝提取物孢子油比灵芝孢子油的作用更为显著。     

人TEM7膜外段单克隆抗体的制备及其在不同来源肿瘤组织中的定位研究

目的　利用制备的抗人肿瘤血管内皮标志物 7(TEM7)单克隆抗体通过免疫组织化学的方法 ,检测TEM7蛋白在不同来源的肿瘤组织中的定位 ,为以TEM7为靶标的肿瘤血管导向治疗提供必要的理论基础。方法　利用PCR的方法 ,将TEM7膜外段重组到原核表达载体pET 32b中 ,在大肠杆菌中表达 ,蛋白经离子吸附层析纯化后免疫雌性BALB/c小鼠 ,传统的杂交瘤融合技术制备鼠抗人TEM7膜外段单克隆抗体。以酶联免疫吸附实验 (ELISA)、Westernblot筛选及鉴定分泌特异性抗人TEM7膜外段单克隆抗体的杂交瘤细胞株。最后采用免疫组织化学ABC的方法 ,分别对不同来源的70例肿瘤组织及癌旁正常组织进行了TEM7蛋白定位的研究。结果　制备了抗人TEM7单克隆抗体 ,经过Westernblot鉴定具有高度的特异性。对肿瘤及癌旁正常组织免疫组织化学ABC染色的结果可见TEM7蛋白定位于 :大肠癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、肝细胞癌、肾细胞癌和前列腺癌的血管内皮细胞 ;大肠癌、胃癌、乳腺癌、肺癌和肝细胞癌的肿瘤细胞 ;大肠癌、胃癌和乳腺癌的血管平滑肌细胞 ;胃癌的胃壁平滑肌细胞 ;肝细胞癌的胆管上皮细胞。结论　成功制备了特异性抗人TEM7膜外段的单克隆抗体 ;TEM7在肿瘤组织中并非特异性地表达于肿瘤血管内皮细胞 ,还可见于肿瘤组织的癌细胞、血管平滑     

治疗性单抗的免疫原性研究进展

治疗性单克隆抗体(Tberapeutic mAb)已经成为药物工业发展最快的领域之一,2003年到2004年之间其种类增长了48.1%.到目前为止,有26个治疗性单抗被美国食品药品管理局(FDA)批准应用于临床,超过150个抗体正在进行临床实验,其中包括8个鼠源性单克隆抗体、6个嵌合型单克隆抗体、11个人源化单克隆抗体和1个全人型单克隆抗体.这些抗体在临床上均取得了很好的效果,但是都不同程度地遇到了过敏反应和抗.     

由人免疫球蛋白转基因小鼠制备人抗乙酰胆碱受体单克隆抗体

目的：从人免疫球蛋白（Ig）转基因小鼠制备人源性抗乙酰胆碱受体（AChR）单克隆抗体。方法：以电鳐（Torpedo）AChR（tAChR）作为基础免疫原，分别以tAChR或人AChR（hAChR）α亚单位1～210位氨基酸（Hα1-210）与thioredoxin（Trx）融合制备的融合蛋白Trx-Hα1-210作为加强免疫原，注射人Ig转基因小鼠。应用ELISA检查由该小鼠制备的杂交瘤细胞培养上清液中人源性抗tAChR或抗Trz-Hα1-210单克隆抗体的分泌，应用放射免疫测定法（RIA）测定抗tAChR或抗Trx-Hα1-210单克隆抗体与hAChR的交叉反应性。结果：从tAChR作为加强免疫原组小鼠得到433株分泌人源性抗tAChR单克隆抗体的细胞株，从抗Trx-Hα1-210作为加强免疫原组小鼠得到20株分泌人源性抗Trx-Hα1-210单克隆抗体的细胞株。但这些人源性抗体均不能与hAChR起交叉反应。结论：由人Ig转基因小鼠制备人源性抗AChR单克隆抗体是可行的。     

免疫学杂志1990年 第6卷第1—4期 总目录

专素论坛寄生分子学和分子免疫学一菲论“基因预成论” ……·…………………………”向近敏(2):75免疫学进晨T细胞活化与粘附分子……………朱锡华(1):3一种新的炎症细胞因子一IL一8 ………………………尹廷贵 代建农(2):80NF·KB及其与淋巴细胞、细胞因子、病毒的基因 调控………………………·…··郑力新<3):147细胞素网络功能的研究进展………杜平(4):219基锄免疫学应用牛乳头瘤病毒载体产生人IL一4哺乳类细胞株 的建立………………………王志华等(1):13用抗人B因子单克隆抗体对B因子等位基因变异型 抗原决定簇的初步研究……黄…     

EV71 VP1人源单克隆抗体筛选

目的 通过建立新型人源化单克隆抗体制备技术平台,筛选抗EV71 VP1单克隆抗体.方法 使用耦联EV71 VP1抗原的磁珠对EV71感染者外周血淋巴细胞进行分选,得到分泌EV71VP1特异性抗体的B淋巴细胞.有限稀释后,低渗裂解细胞,采用逆转录和巢式PCR扩增免疫球蛋白重链和轻链基因,经测序鉴定后克隆到真核表达载体Cloning vector AbVec-hIgG1、Cloning vectorAbVec-hIgKappa、Cloning vector AbVec-hIgLambda中.通过瞬时转染293T细胞得到重组抗体.结果 成功筛选到1对抗EV71 VP1的人源单克隆抗体基因.结论 本研究初步成功地建立了人源化单克隆抗体的筛选方法,为手足口病早期诊断、治疗以及筛选其他人源化单克隆抗体奠定了基础.     

全军第五届单抗研究协作组学术会议论文摘要(索引)

一、传染病类001单·克隆抗体治疗日本乙型脑炎的实验研究···,··························……张明杰等(1)D02日本乙型脑炎病毒单抗介导ADCC效应的研究····················,···……张明杰等(1)003单克隆抗体治疗日本乙型脑炎病毒感染恒河猴的实验研究·········……张明杰等(1)004单克隆抗体治疗日本乙型脑炎患者的初步观察·,’’·····················一张明杰等(2)005日本乙型脑炎病毒单克隆抗体的抗原结合位点及亲和力测定······……张明杰…     

抗乳腺癌人单克隆抗体CM-1用于导向治疗的研究

我们制得了抗乳腺癌的人单克隆抗体CM-1,并用其偶联同位素和抗肿瘤药物分别进行了乳腺癌患者转移灶定位诊断的研究和导向治疗的实验研究。初步结果简报如     

贝伐珠单抗仿制药生物活性测定方法的开发与应用

正贝伐珠单抗是一种人源化的抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)重组单克隆抗体,其人类免疫球蛋白G(IgG)片段占93%,其余的是鼠源结构,人源化部分可以使该药的t1/2延长和免疫原性降低~[1]。VEGF是血管生成的重要调控因子,VEGF-A/VEGFR2信号由PLC-γ1通过促进其激动激酶C