日本血吸虫天然抗原分子的柱层析分离纯化与鉴定

目的分离纯化日本血吸虫成虫(AWA)和未成熟虫卵(SIEA)可溶性抗原中的单一蛋白,为血吸虫病免疫诊断、预防提供新的抗原分子。方法柱层析分离纯化成虫和未成熟虫卵可溶性抗原,SDS—PAGE及银染色进行分析鉴定。结果得到了三种不同大小血吸虫分子抗原AwA18000u,SIEA42000u,SIEA130000u。结论实验证明柱层析法是一种快速分离纯化血吸虫单一组分抗原简单而有效的方法。     

眼镜王蛇神经毒素的提纯及其性质的研究

本文用SP-SephadexC-25柱层析法分离广西眼镜王蛇蛇毒,得到19个组分,其中7个组分有毒性。对毒性较强,含量较高的4个毒性组分(即神经毒素Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ和Ⅹ)用SephadexG-50凝胶过滤法进行纯化,并对神蛇经毒素Ⅶ和Ⅹ用CM-SephadexC-50柱层析法做了进一步纯化。经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定,这4个神经毒素均为单一条带。用SDS-PAGE法测得神经毒素Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ和Ⅹ的分子量分别为7800,6700,8400和8000,并用它们进行了小鸡颈二腹肌神经—肌肉接头传递的阻遏试验,结果表明这4个神经毒素均有阻遏神经—肌肉接头传递的作用,而且阻遇作用基本不可逆,属于突触后神经毒素。     

组织因子单克隆抗体及对照抗体的制备、纯化和鉴定

目的纯化组织因子(TF)单克隆抗体及对照抗体。方法给小鼠腹腔注射杂交瘤8A3和9E10细胞,产生的腹水应用凝胶过滤层析法和Protein A亲和层析法纯化组织因子抗体及对照抗体,并用SDS-PAGE和BCA法检测纯化后单克隆抗体的纯度及蛋白浓度。结果单抗纯化后电泳重链和轻链都呈一条带,TF抗体和对照抗体的最终浓度分别为0.7726mg/ml和0.8592mg/ml。结论应用层析法和凝胶过滤和Protein A亲和分离层析法纯化抗体,能够得到纯度较高的单克隆抗体。     

蝎毒抗癌多肽组分Ⅲ的分离方法研究

目的：探索蝎毒抗癌多肽组分Ⅲ的分离和纯化方法：方法：蝎毒经预处理后,分别采用ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ阳离子交换凝胶柱层析法和ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ阳离子交换凝胶柱ｅｐｈａｄｅｘＧ－５０凝胶柱联合层析法,分离ＡＰ－Ⅲ,用ＨＰＬＣ仪检测２种方法分离出的ＡＰ－Ⅲ的纯度及产率。结果：单独用ｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ阳离了交换凝胶柱分离,ＡＰ－Ⅲ产率为２．２４％,纯度为８９％。ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０凝胶柱与Ｓｅｐ     

亲和层析法纯化系统性红斑狼疮特异性60KD Ro／SSA抗原

目的建立亲和层析法纯化Ro／SSA自身抗原系统中60KD组分的方法。方法从猪脾提ENA(可提取核抗原)，以硫酸铵沉淀、离子交换层析进行初步纯化。挑选单纯抗60KD SSA抗体阳性的病人的血清，制备亲和层析柱。用ELISA法检测所制备的抗原。结果60KD SSA抗体阳性标准血清ELISA检测为阳性，Sm和RNP、Jo-1、Scl-70的标准抗血清为阴性。结论该方法能获得高纯度的抗原，可用于ELISA检测等目的。     

蝎毒抗癌多肽组分Ⅲ的分离方法研究

目的：探索蝎毒抗癌多肽组分Ⅲ(antineoplastic polypeptide-Ⅲfrom APBMV,AP-Ⅲ)的分离和纯化方法。方法：蝎毒经预处理后,分别采用pharose FF阳离子交换凝胶柱(cm×5 cm交换柱,流速0．8 ml／min,梯度洗脱1 200 min)层析法和Sepharose FF阳离子交换凝胶柱与Sephadex G-50凝胶柱(柱：100cm×5 cm;流速：0．5 ml／min)联合层析法,分离AP-Ⅲ,用HPLC仪检测2种方法分离出的AP-Ⅲ的纯度及产率。结果：单独用Sepharose FF阳离子交换凝胶柱分离,AP-Ⅲ产率为2．24％,纯度为89％。Sephadex G-50凝胶柱与Sepharose FF阳离子交换凝胶柱联用,其产率及纯度分别提高至4．72％和％。结论：Sephadex G-50与Sepharose FF联用可提高AP-Ⅲ的产率及纯度,从而为开发和利用AP-Ⅲ提供了实验依据。     

日本血吸虫抗原的纯化及其应用价值的研究——Ⅱ.虫卵抗原五种提取液圆盘电泳的初步比较

用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分析血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)五种提取液:H-SEA、U-SEA、H-SEA_1、U-C-SEA_1、JEU.其显示的电泳区带分别为8、6、1、1、1条。其中 H-SEA_1显有1条区带,具有纯度较高,糖蛋白性质的抗原组分。用 ELISA 法检测血吸虫特异性抗体,它有较高的敏感性与特异性.其纯化方法简便有效,操作过程主要是经高速离心后用高氯酸处理,沉淀除去非糖蛋白物质,然后经葡萄糖凝胶柱层析。尿素溶解性虫卯抗原(JEU)亦显示1条电泳区带.     

重组人IL-31蛋白纯化方法的比较研究

目的 比较两种方法纯化rhIL-31的效果.方法 将含pET32a/rhIL-31的重组菌E.coil.BL21(DE3)经IPTG诱导表达,通过超声波破碎,包涵体的提取溶解,分别经G75凝胶层析和镍琼脂糖凝胶FF层析进行蛋白纯化,通过SDS-PAGE对纯化结果进行比较分析.结果 镍琼脂糖凝胶FF层析法的杂蛋白去除率高于凝胶层析法,所得蛋白纯度略高.结论 比较重组人IL-31蛋白的纯化效果,镍琼脂糖凝胶FF层析的效果比G75凝胶层析的效果好.     

小鼠H-2抗原的提取与纯化

为建立一种简易获取较大量纯化小鼠组织相容性抗原（Ｈ－２抗原）的方法，采用去污剂溶解小鼠脾细胞膜，单克隆抗体亲和层析法纯化获取小鼠Ｈ－２抗原。结果：电泳显示纯化物为４５ｋｄ（重链）和１２ｋｄ（轻链）两条带，且该纯化物具有明显的免疫学及生物学活性（效价１６４０）。结论：这种亲和层析法纯化的组织相容性抗原，可用于器官移植研究及组织相容性抗原的免疫功能研究。     

光果甘草异黄酮类成分光甘草定的制备工艺

目的:研究提取和分离新疆光果甘草(Glycyrrhiza glabraL)的异黄酮类活性成分光甘草定(Glabrid-in,GB)的工艺。方法:用丙酮粗提光果甘草提取物,用氧化铝和硅胶柱层析法分离不同极性的组分,用制备型薄层层析法和重结晶法进行纯化,再用核磁共振、质谱、红外和紫外光谱法进行结构鉴定。结果:从光果甘草的干燥根中分离获得GB纯品,原制备工艺得到优化。结论:本方法在少量快速制备GB纯品中具有重要作用。     

4种抗原用于斑点免疫金银染色试验诊断日本血吸虫病的比较

采用斑点免疫金银染色(Dot-IGSS)试验对4种日本血吸虫抗原的敏感性及特异性进行比较。结果显示粗提成虫抗原(AWA)、尿素溶解性成虫抗原(JWU)、硫酸铵沉淀成虫抗原(AW)和可溶性虫卵抗原(SEA)检测40例日本血吸虫病人血清抗体的敏感性均达100.0％,40例正常人血清的可疑阳性反应分别为2.5％、0、2.5％和0,40例肝吸虫病人血清的可疑交叉率分别为2.5％、0、2.5％和0,表明在高敏感的IGSS检测系统中,粗提成虫抗原的敏感性和特异性与部分纯化者和虫卵抗原无显著性差异(P>0.05)。     

日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3对日本血吸虫病的诊断价值

目的 探讨纯化的日本血吸虫(中国大陆株)重组信号蛋白14—3—3(rSjl4—3—3)诊断血吸虫病的价值。方法 利用纯化的rSjl4—3—3抗原与成虫抗原，间接EUSA法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清。结果 急、慢性血吸虫患者血清rSjl4—3—3抗体检出率为100％和92．0％，与正常人血清未出现交叉反应；抗AWA抗体检出率为98．0％和94．0％，与正常人有7．3％的交叉反应。结论 rSjl4—3—3为抗原诊断日本血吸虫病显示出高度的敏感性和特异性，具有实用价值。     

日本血吸虫不同发育阶段抗原检测IgG及IgG_4的疗效考核价值

目的 :建立具有疗效考核价值的抗原 -抗体检测系统。方法 :用日本血吸虫不同发育阶段抗原 (AWA、AMA、AESA、SEA、SIEA)检测治疗前及治疗后不同时间慢性血吸虫病人血清中特异性IgG及IgG4 并测定肺吸虫病人、肝吸虫病人和健康人血清的交叉反应性。结果 :不同发育阶段抗原 -IgG检测系统间对慢性血吸虫病人、肺吸虫病人、肝吸虫病人和健康人血清测试的阳性率无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,慢性血吸虫病人治疗后 12个月IgG的阴转率以SIEA最高 (90 .0 % ) ,其次为AMA(77.5 % ) ,最低为AESA(2 0 .0 % ) ;检测慢性血吸虫病人治疗前的特异性IgG4 的阳性率AWA最高 (85 .0 % ) ,其次为AMA(80 .0 % ) ,最低的为SIEA(37.5 % ) ,治疗后 12个月的IgG4 阴转率SIEA最高 (97.5 % ) ,其次为AMA(95 .0 % )和AWA(85 .0 % ) ,最低的为SEA(6 2 .5 % )。结论 :AMA -IgG、SIEA -IgG、AWA -IgG4 和AMA -IgG4 检测系统具有较好的疗效考核价值 ,且以SIEA -IgG和AMA -IgG4 两个检测系统最好。     

日本血吸虫成虫67kDa分子抗原的纯化及其对血吸虫病的诊断和疗效考核

目的 为检测日本血吸虫成虫67kDa分子抗原(SjAWA67)对血吸虫病的诊断及疗效考核价值。方法 通过SDS-PAGE和电渗方法,从日本血吸虫成虫抗原中分离纯化出67kDa分子抗原,并用该抗原包被酶标反应板微孔,进行ELISA检测。结果 SjAWA67的纯度已达到电泳纯和免疫纯,对急、慢性血吸虫病患血清的捡出率分别为100％和95％,与正常人血清、肝吸虫病和肺吸虫病患血清均未出现明显的交叉反应,44例血吸虫病患治疗后3、6和12个月后的阴转率分别达45．5％、75．0％和90,9％。结论 SjAWA67分子抗原具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。     

日本血吸虫重组32kD抗原的纯化和诊断应用

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结合电渗洗脱的方法分离，纯化日本血吸虫重组３２ｋＤ抗原；用酶联免疫印迹技术分析纯化抗原的免疫活性。用纯化抗原，日本血吸虫成虫抗原和可溶性虫卵抗原分别检测慢性血吸虫病人肺吸虫病，肝吸虫病人，钩虫和健康人血清抗体。     

日本血吸虫循环免疫复合物中抗原的鉴定

用低浓度ＰＥＧ（ＭＷ６０００）提取的日本血吸虫感染兔血清中循环免疫复合物（ＣＩＣ）直接免疫家兔，制备抗ＣＩＣ兔血清。采用酶联免疫印迹技术（ＥＩＴＢ）分析鉴定日本血吸虫ＣＩＣ中抗原成份。结果表明，ＣＩＣ中成虫及其排泄分泌物源性抗原成份有１７种，虫卵源性抗原成份有５种。用ＩＦＡＴ方法分析ＣＩＣ中抗原成份定位于成虫表膜及肠腔上皮。     

广州管圆线虫幼虫排泄分泌抗原及其诊断价值分析

目的对比分析广州管圆线虫幼虫排泄分泌抗原(LESA)与成虫抗原(AWA),探讨其诊断价值。方法广州管圆线虫三期幼虫感染小鼠,21 d后取小鼠脑内幼虫进行体外培养,收集幼虫排泄分泌蛋白,并与广州管圆线虫成虫匀浆蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析,分别用两种抗原建立LESA-ELISA和AWA-ELISA以检测小鼠血清和不同人群血清。结果SDS-PAGE和Western blot显示幼虫排泄分泌蛋白条带和抗原反应带较成虫少;LESA与小鼠感染血清和广州管圆线虫病患者血清在Mr40 000和Mr26 000处均出现强反应带;感染小鼠血清中抗LESA和AWA的IgG和IgM抗体自感染后开始上升,5 d后达到高峰,第10天后开始下降;LESA-ELISA用于检测广州管圆线虫病疑似病人血清阳性率低于AWA-ELISA;检测血吸虫和华支睾吸虫感染病人血清的交叉阳性率明显低于AWA-ELISA;检测献血员血清及其他非广州管圆线虫感染血清时,假阳性数较AWA-ELISA少。结论 LESA的抗原反应带较AWA少,尽管对广州管圆线虫病疑似病例血清抗体阳性率略低于AWA,但其特异性高;具有潜在的广州管圆线虫病早期诊断和现症感染诊断价值。     

膀胱癌可溶性抗原诱导细胞毒T细胞的实验研究

目的 观察膀胱癌可溶性抗原诱导细胞毒Ｔ细胞生长,为构建膀胱癌疫苗及过继性免疫治疗提供实验基础。方法 提膀胱癌可溶性抗原（ＴＳＡ）,用ＴＳＡ、抗ＣＤ－３单抗、ＩＬ－２联合诱导外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）,动态观察细胞增殖,进行细胞表型分析和细胞因子测定;并与ＩＬ－２诱导的ＬＡＫ细胞,抗ＣＤ－３单抗、ＩＬ－２诱导的ＣＤ３－ＡＫ细胞进行比较。结果 实验组细胞第８ｄ增殖７．５２倍,第１２ｄ增殖２８．９２倍     

赤子爱胜蚓纤维蛋白溶解酶的亲和层析纯化和生化特性

用慈菇蛋白酶抑制剂Sepharose 4B亲和层析方法从蚯蚓丙酮粉抽提液中得到较高纯度和活性的蚯蚓纤维蛋白溶解酶(纤溶酶)制剂。经快速蛋白质液相色谱(FPLC)分析,内含9个纤溶活性峰。对其中第九峰进行电泳测定,为单一条带,分子量为27000,还测定了其氨基酸组成,糖含量及酶的底物特异性。