骨髓间充质干细胞移植后大鼠脑缺血区微血管密度及VEGFmRNA表达的动态变化

目的探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)移植促进大鼠脑缺血后神经功能恢复的可能机制.方法采用线栓法复制大鼠脑缺血2小时再灌注动物模型,实验动物分缺血对照组和移植治疗组,再灌注24小时后移植治疗组经颈动脉移植体外培养异体骨髓间充质干细胞.于移植后1周、2周、4周、12周分批处死实验动物,采用免疫组织化学染色及原位杂交技术观察缺血区脑组织的新生血管及VEGF mRNA表达的动态变化.结果①大鼠脑缺血后1周时缺血区皮层即可见大量的微血管增生,2周时达到高峰,4周、12周时有所下降.1周、2周、4周、12周时移植组比对照组缺血区皮层微血管密度(MVD)明显增高,P＜0.05;②大鼠脑缺血后1周及2周时缺血区脑组织中均可见大量的VEGF mRNA.阳性细胞,阳性信号主要分布于皮层及血管周围的神经细胞,缺血后4周及12周对照组VEGFmRNA阳性信号很弱,而移植组VEGF mRNA阳性信号仍较强.结论MSCs可能通过促进微血管增生改善缺血区血运修复缺血区损伤组织,从而改善脑缺血大鼠神经功能.     

骨髓间充质干细胞移植大鼠脑缺血区微血管密度和肝细胞生长因子的表达

背景:应用骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血可促进损伤神经功能的恢复,目前其作用机制尚未明确。目的:分析骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血保护作用的机制。方法:采用线栓法复制大鼠大脑中动脉栓塞模型,随机分为假手术组、大脑中动脉栓塞组、溶剂对照组和骨髓间充质干细胞组。骨髓间充质干细胞组于脑梗死1d后经侧脑室注射入骨髓间充质干细胞,溶剂对照组则注射同等剂量的PBS。结果与结论:大鼠脑缺血后缺血区皮质可见大量的微血管生成,2周达高峰。骨髓间充质干细胞组缺血区微血管密度显著高于大脑中动脉栓塞组和溶剂对照组(P<0.01)。治疗后4,7,14d骨髓间充质干细胞组脑组织中肝细胞生长因子的表达水平显著高于大脑中动脉栓塞组和溶剂对照组(P<0.01)。提示骨髓间充质干细胞移植可促进大鼠缺血区微血管生成,改善缺血区血运,从而改善脑缺血大鼠的神经功能。     

骨髓间充质干细胞移植大鼠脑缺血区微血管密度和肝细胞生长因子的表达

背景：应用骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血可促进损伤神经功能的恢复,目前其作用机制尚未明确。目的：分析骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血保护作用的机制。方法：采用线栓法复制大鼠大脑中动脉栓塞模型,随机分为假手术组、大脑中动脉栓塞组、溶剂对照组和骨髓间充质干细胞组。骨髓间充质干细胞组于脑梗死1d后经侧脑室注射入骨髓间充质干细胞,溶剂对照组则注射同等剂量的PBS。结果与结论：大鼠脑缺血后缺血区皮质可见大量的微血管生成,2周达高峰。骨髓间充质干细胞组缺血区微血管密度显著高于大脑中动脉栓塞组和溶剂对照组（P〈0.01）。治疗后4,7,14d骨髓间充质干细胞组脑组织中肝细胞生长因子的表达水平显著高于大脑中动脉栓塞组和溶剂对照组（P〈0.01）。提示骨髓间充质干细胞移植可促进大鼠缺血区微血管生成,改善缺血区血运,从而改善脑缺血大鼠的神经功能。     

骨髓间充质干细胞移植对脑缺血区微血管增生及Notch1表达的影响

目的 观察骨髓问充质干细胞(BMSC)移植对脑缺血皮质区血管形成的影响及微血管Notch1表达的变化.方法 用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注损伤动物模型.随机分为假手术对照组、单纯脑缺血损伤组和脑缺血后BMSC移植组.采用免疫组织荧光染色法检测各组缺血皮质区Ⅷ因子及Notch1的表达.结果 (1)植入的BMSC可以趋向性迁移到脑缺血损伤区域.(2)BMSC移植组脑缺血皮质区新生微血管密度较单纯脑缺血损伤组和假手术对照组明显增高.(3)BMSC移植组缺血皮质区多数微血管内皮细胞阳性表达Notch1,且明显多于单纯缺血组和假手术对照组.结论 BMSC移植可促进脑缺血区血管新生,且可能与促进Notch1表达有关.     

骨髓间充质干细胞移植对脑缺血区微血管增生及Notch1表达的影响

目的观察骨髓间充质干细胞（MSC）移植对脑缺洫皮质区血管形成的影响及微血管Noteh1表达的变化。方法用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注损伤动物模型,随机分为假手术对照组、单纯脑缺血损伤组和脑缺血后BMSC移植组。采用免疫组织荧光染色法检测各组缺血皮质区Ⅷ因子及Notch1的表达。结果（1）植入的BMSC可以趋向性迁移到脑缺血损伤区域。（2）BNSC移植组脑缺血皮质区新生徽血管密度较单纯脑缺血损伤组和假手术对照组明显增高。（3）BMSC移植组缺血皮质区多数微血管内皮细胞阳性表达Notch1,且明显多于单纯缺血组和假手术对照组。结论BMSC移植可促进脑缺血区血管新生,且可能与促进Notch1表达有关。     

间充质干细胞移植对大鼠脑缺血区GDNF表达的影响

目的观察骨髓间充质干细胞移植对大鼠大脑中动脉栓塞后神经功能的影响及GDNF的表达。方法采用线栓法大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,颈内动脉移植MSCs,Bederson神经功能评分观察大鼠神经功能,免疫组织化学和原位杂交技术检测GDNF表达。结果MSCs移植可显著提高大鼠局灶性脑缺血后神经功能,缺血周边区GDNF蛋白及mRNA表达水平均高于对照组。结论MSCs移植可促进神经功能恢复,可能通过增加GDNF的表达起到脑保护作用。     

颞叶癫痫大鼠海马内谷氨酸脱羧酶蛋白表达的动态变化及其意义

目的：观察大鼠颞叶癫痫发生后海马谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase，GAD)亚型GAD67蛋白的动态变化，探讨其意义和可能机制。方法：112只雄性SD大鼠随机分为实验组(n=70)与对照组(n=42)，实验组大鼠选用海人酸腹腔注射法建立颞叶癫痫模型，对照组大鼠腹腔注射无菌生理盐水。选取腹腔注射后3，6，12，24，48h，7，30d为研究的时间点，颞叶海马的CA1区、CA3区、齿状回为研究部位。腹腔给药后每天观察大鼠的行为学变化，大鼠处死前进行脑电图描记。免疫组织化学法检测GAD67蛋白的表达。结果：海人酸致痫后6h实验组大鼠海马齿状回、CA3,CA1区的GAD67蛋白表达分别为0．60&;#177;0．02，0．61&;#177;0．02，0．58&;#177;0．02，致痫后24h分别为0．33&;#177;0．03，0．32&;#177;0．03，0．31&;#177;0．02，均较对照组(0．23&;#177;0．02,0．21&;#177;0．02，0．20&;#177;0．02)增高(P&;lt;0．05或0．01)，6h时增高显著。结论：颞叶癫痫大鼠海马GAD67蛋白表达的增高是癫痫发生后机体的内源性抗痫机制之一。     

骨髓间充质干细胞移植大鼠脑梗死区的超微结构变化

背景：近来的研究发现骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)对缺血性脑血管病有治疗作用，接受细胞移植的脑梗死区超微结构的观察可进一步证实该作用。目的：观察接受MSCs局部注射移植的大鼠脑梗死区超微结构的变化，以了解MSCs移植对梗死区超微结构的影响。设计：随机对照实验研究。单位：解放军第三军医大学西南医院神经病学中心。材料：实验于2002-04／2002-09在解放军第三军医大学动物所及中心实验室完成。实验动物为健康幼年及成年Wistar大鼠12只，雌雄不限。随机分为移植组6只和对照组6只。干预：建立大鼠大脑中动脉栓塞模型，将体外分离培养的大鼠MSCs注射至大鼠脑梗死区，两组大鼠于移植后第4周电镜观察大鼠脑梗死区超微结构变化。主要观察指标：移植组及对照组大鼠脑梗死区超微结构变化。结果：接受移植的梗死区可见外形幼稚的细胞存活，并围绕在神经元周围，梗死区神经元胞浆中出现了丰富的游离核糖体，而对照组大鼠梗死区神经元胞核固缩，并有嗜神经细胞现象。结论：大鼠MSCs移植对缺血性脑损伤具有一定修复作用。     

骨髓间充质干细胞移植入脑缺血大鼠侧脑室后的迁移及分化:免疫荧光标记

目的:骨髓间充质干细胞可以分化成神经细胞替代受损组织,并可分泌生长因子和营养因子来促进其体内细胞的存活和分化。实验将体外扩增和Hoechst33342标记的骨髓间充质干细胞移植入缺血性大鼠侧脑室内,观察干细胞在大鼠脑内的生存、迁移、分化情况及对神经功能恢复的影响。方法:实验于2004-12/2007-06在南京大学医学院附属鼓楼医院科研部完成。①取体质量120～160g的SD大鼠用于制备移植细胞;另取80只体质量250～300g的SD大鼠用于制作大脑中动脉闭塞模型。实验方法符合动物伦理学要求。②应用直接贴壁法分离纯化及扩增大鼠骨髓间充质干细胞,荧光染料Hoechst33342标记。③将造模成功的75只大脑中动脉闭塞大鼠按随机数字表法分为3组:模型对照组15只;磷酸缓冲液组30只;骨髓间充质干细胞移植组30只,将骨髓间充质干细胞立体定向移植到大鼠缺血侧脑室中。④术后1,3,6,12,24d测定大鼠神经功能损害评分,荧光显微镜下观察Hoechst33342标记的骨髓间充质干细胞在脑内的生存和迁移情况,采用免疫荧光法检测胶质原纤维酸性蛋白和微管相关蛋白2的表达。结果:①细胞移植后6d,12d骨髓间充质干细胞移植组大鼠的神经功能评分均显著低于磷酸缓冲液组(P<0.05)。②移植的骨髓间充质干细胞可在大鼠脑组织中存活,并向缺血区域迁移。③移植第24天Hoechst33342/微管相关蛋白2、Hoechst33342/胶质原纤维酸性蛋白双阳性细胞占Hoechst33342阳性细胞的百分率为(10.45±1.35)%,(8.73±1.38)%。结论:骨髓间充质干细胞可以在动脉闭塞局灶性脑缺血模型大鼠脑中存活,并向缺血区域附近迁移,在一定条件下可分化为神经元和星形胶质细胞,同时能促进局灶性脑缺血大鼠的神经功能恢复。     

骨髓间充质干细胞移植人脑缺血大鼠侧脑室后的迁移及分化：免疫荧光标记

目的：骨髓间充质干细胞可以分化成神经细胞替代受损组织，并可分泌生长因子和营养因子来促进其体内细胞的存活和分化。实验将体外扩增和Hoechst33342标记的骨髓间充质干细胞移植入缺血性大鼠侧脑室内，观察干细胞在大鼠脑内的生存、迁移、分化情况及对神经功能恢复的影响。 方法：实验于2004—12／2007—06在南京大学医学院附属鼓楼医院科研部完成。①取体质量120～160g的SD大鼠用于制备移植细胞；另取80只体质量250～300g的SD大鼠用于制作大脑中动脉闭塞模型。实验方法符合动物伦理学要求。②应用直接贴壁法分离纯化及扩增大鼠骨髓间充质干细胞，荧光染料Hoechst33342标记。③将造模成功的75只大脑中动脉闭塞大鼠按随机数字表法分为3组：模型对照组15只；磷酸缓冲液组30只；骨髓间充质干细胞移植组30只，将骨髓间充质干细胞立体定向移植到大鼠缺血侧脑室中。④术后1，3，6，12，24d测定大鼠神经功能损害评分，荧光显微镜下观察Hoechst33342标记的骨髓间充质干细胞在脑内的生存和迁移情况，采用免疫荧光法检测胶质原纤维酸性蛋白和微管相关蛋白2的表达。 结果：①细胞移植后6d，12d骨髓间充质干细胞移植组大鼠的神经功能评分均显著低于磷酸缓冲液组（P〈0．05）。②移植的骨髓间充质干细胞可在大鼠脑组织中存活，并向缺血区域迁移。③移植第24天Hoechst33342／微管相关蛋白2、Hoechst33342／胶质原纤维酸性蛋白双阳性细胞占Hoechst33342阳性细胞的百分率为（10．45±1．35）％，（8．73±1．38）％。 结论：骨髓间充质干细胞可以在动脉闭塞局灶性脑缺血模型大鼠脑中存活，并向缺血区域附近迁移，在一定条件下可分化为神经元和星形胶质细胞，同时能促进局灶性脑缺血大鼠的神经功能恢复。     

骨髓间充质干细胞移植对脑缺血后室管膜下区神经干细胞增殖及Notch1表达的影响

目的观察骨髓间充质干细胞（BMSC）移植对脑缺血后室管膜下区神经干细胞增殖的影响及Notch1表达的变化。方法用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注动物模型,随机分为假手术对照组、单纯脑缺血损伤组和脑缺血后BMSC移植组。采用免疫荧光细胞染色法检测各组缺血侧室管膜下区Nestin、Ki-67及Notch1的表达。结果（1）BMSC移植组缺血侧室管膜下区Nestin和Ki-67阳性细胞数较单纯脑缺血损伤组和假手术对照组明显增高;（2）BMSC移植组缺血侧室管膜下区Notch1的表达明显高于单纯缺血组和假手术对照组。结论BMSC移植可促进脑缺血后室管膜下区神经干细胞增殖,且可能与促进Notch1表达有关。     

前列腺素E1对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

背景：目前还缺乏前列腺素E1对骨髓间充质干细胞增殖影响的研究。目的：观察前列腺素E1与骨髓间充质干细胞共培养对细胞增殖作用的影响。方法：体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞。取第3代细胞利用流式细胞仪鉴定细胞表面表型。以每孔1×104数量接种于96孔板,将前列腺素E1分别以O（对照组）,1,2,5,10,20,40,100pg／L的浓度作用骨髓间充质干细胞72h,以CCK-8法检测细胞增殖情况,观察最佳增殖浓度10％的前列腺素E1在不同时间（24,48,72h）对骨髓间充质干细胞增殖的影响。结果与结论：P3代骨髓间充质干细胞表面阳性率CDl1b／c为4．93％,CD29为99．93％,CD45为O．1％,CD90为99．58％,符合骨髓间充质干细胞特征。质量浓度为1,2,5,10,20,40,100t~g／L的前列腺素E1均可以促进骨髓问充质干细胞在体外的增殖,以10pg／L的作用最强。10pg／L前列腺素E1在作用48h后能显著促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖（P〈0．05）,其作用呈一定程度的时间依赖性,72h达最高。     

神经迁移蛋白Slit2与骨髓间充质干细胞及血管再生的关系

背景：骨髓间充质干细胞是骨髓中非造血干细胞的另一类重要干细胞,它可以促进血管再生,而神经迁徙蛋白Slit经多项研究证实也可促进血管再生。目的：针对骨髓间充质干细胞与Slit2的生物学功能、临床应用及促血管生成作用做一综述。方法：计算机检索中国期刊网全文数据库以及PubMed数据库1980至2014年期间有关骨髓间充质干细胞与Slit2的文章。检索词分别为“骨髓间充质干细胞”或“MSCs ”及神经迁徙蛋白Slit2。初检得到436篇文献,最终纳入文章65篇。结果与结论：骨髓间充质干细胞与Slit2二者在血管再生方面都起着重要作用,但二者促进血管再生是否具有相关性目前还尚有争议。假设骨髓间充质干细胞分泌Slit2,那么骨髓间充质干细胞促进血管再生是否与Slit2相关及Slit2/Robo是通过什么途径来调节骨髓间充质干细胞从而促进血管再生还需要更多的研究。如若相关,骨髓间充质干细胞联合Slit2移植将会为治疗脑梗死等中枢神经损伤提供了新的依据和思路。     

人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中26RFa的作用

背景：研究表明26RFa在骨形成、痛觉、内分泌、心血管以及能量代谢等方面都有重要的调节作用。目的：观察26RFa在成骨培养体系中对人骨髓间充质干细胞增殖分化的影响。 方法：通过MTT实验,以此确定26RFa对人骨髓间充质干细胞是否有促增殖作用及其起作用的最大活性浓度;将人骨髓间充质干细胞接种于6孔培养板上,实验分为2组：实验组含有10-11mol/L的26RFa,对照组不含26RFa。取成骨诱导8,12,16 d细胞用碱性磷酸酶试剂盒测定细胞内碱性磷酸酶活性;成骨诱导21,28 d后行茜素红染色和Von Kossa染色,计算每张玻片钙化结节数,Western blot检测cbfa1的表达。 结果与结论：成骨诱导8,12,16 d后细胞内碱性磷酸酶活性实验组高于对照组（P〈0.05,P〈0.01,P〈0.05）;21,28 d后茜素红染色和Von Kossa矿化结节数实验组均高于对照组;实验组细胞cbfa1表达明显高于对照组（P〈0.05）。说明在适宜的培养条件下,26RFa可促进人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。     

骨髓间充质干细胞对急性百草枯中毒肺损伤的保护作用

目的:通过骨髓间充质干细胞(BMSCs)的植入,观察其对急性百草枯(paraqua)中毒肺损伤的保护效果.方法:54只雌性受体大鼠随机分4组:百草枯组、BMSCs治疗组、BMSCs对照组和正常对照组,将体外分离和培养的BMSCs通过尾静脉注入受体体内,观察14 d内各组大鼠的存活率、肺干湿比、血浆中IL-1β、TNF-α、MDA、SOD、GSH- PX的水平变化.结果:与百草枯组相比,BMSCs治疗组明显延长大鼠的生存期,降低肺干湿比(P ＜ 0.05)和炎症介质IL-1β、TNF-α的含量(P ＜ 0.01),降低血浆中MDA的水平(P ＜ 0.05)和升高SOD、GSH- PX的水平(P ＜ 0.01).结论: BMSCs对急性百草枯中毒肺损伤具有保护作用.     

骨髓间充质干细胞对血管性痴呆大鼠海马CA1区突触素表达的影响

目的：观察静脉注射同种异体骨髓间充质干细胞对血管性痴呆（VaD）模型大鼠海马CA1区突触素表达的影响。方法：体外分离、扩增大鼠骨髓间充质干细胞（MSC），并用BrdU标记。大鼠双侧颈总动脉结扎法制备血管性痴呆模型。1周后经尾静脉注射MSCs，观察注射后4周大鼠海马CA1区突触素（SYN）表达的变化。结果：4周后VaD大鼠海马CA1区锥体细胞层内SYN表达较正常对照组减少，差异有显著性（P〈0．01）；MSCs注射后4周，大鼠海马CAl区可见荧光标记的MSCs，SYN表达较未注射组增加，差异有显著性（P〈0．01）。结论：静脉注射MSCs使VaD大鼠海马CA1区突触素表达增加。     

In vitro differentiation of bone marrow derived porcine mesenchymal stem cells to endothelial cells

Mesenchymal stem cells (MSCs) hold potential for the regeneration of damaged tissues in cardiovascular diseases. In this study, we investigated the potential of porcine MSCs to differentiate into endothelial cells (ECs) in vitro. The cultured bone marrow‐derived cells were CD11b^–CD34^–CD44⁺CD45^–CD90⁺ and showed mesodermal lineage differentiation, which is characteristic of MSCs. The MSCs were induced to differentiate into ECs using endothelial growth medium (EGM), with and without high concentrations of VEGF (EGM + VEGF; 50 ng/ml). Endothelial basal medium (EBM) without growth factors served as the control. The EC differentiation was assessed by the presence of vWF, ability to take up acetylated LDL, in vitro angiogenesis assay, flow cytometry and qPCR of EC markers vWF, VE‐cadherin, PECAM‐1, VEGF‐R1 and VEGF‐R2 after 10 days of stimulation. Cells cultured in EGM + VEGF medium demonstrated higher amounts of DiI‐AcLDL‐positive cells and enhanced the presence of vWF (90%), VE‐Cadherin‐ (60%) and PECAM‐1 (48%)‐positive cells, than in EBM. These cells showed profuse sprouting of capillary tubes and closed polygon formation in the angiogenesis assay. There was 1.5–2‐fold increase in the mRNA expression of endothelial markers in the cells stimulated with EGM + VEGF medium when compared to control. The results demonstrate the ability of porcine MSCs to differentiate into ECs under in vitro inducing conditions. The differentiated cells would provide new options for re‐endothelialization following interventional procedures and tissue engineering. Copyright © 2012 John Wiley & Sons, Ltd.     

全骨髓贴壁接触培养SD大鼠骨髓间充质干细胞

背景：体外分离培养出生长状态好、高纯度、增殖能力强和数量充足的大鼠骨髓间充质干细胞,是将其作为种子细胞用于组织和细胞移植的重要前提。 目的：建立简便、快速、有效的SD大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养方法,并观察其生物学特性。 方法：采用全骨髓法将 SD 大鼠双侧股骨和胫骨骨髓细胞进行体外分离培养,贴壁接种法进行细胞纯化、传代。观察细胞生长形态及特征,绘制细胞生长曲线,检测细胞表面标记物,采用体外诱导剂诱导细胞分别向成骨、成软骨、成脂方向分化。 结果与结论：全骨髓贴壁接种法分离培养的骨髓间充质干细胞生长旺盛、纯度高,细胞生长形态呈长梭形,极性排列,细胞生长呈S形生长曲线,群体倍增时间为29 h,细胞在连续传10代后仍具有较强的增殖能力。第3代骨髓间充质干细胞的表面标记物CD44、CD29、CD90均呈阳性表达,CD45、CD34、CD11b则呈阴性表达。第3代骨髓间充质干细胞分别经成骨、成软骨、成脂诱导剂诱导后,茜素红染色、碱性磷酸酶染色、von-kossa矿化结节染色、甲苯胺蓝染色和油红O染色均呈阳性。结果验证全骨髓贴壁接种法是一种简便可靠的体外分离培养方法,能获得纯度较高的骨髓间充质干细胞,经实验鉴定第3代骨髓间充质干细胞生物活性最佳,且具有多向诱导分化能力,适合作为后续实验的种子细胞。