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相似文献
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1.
背景:通过动员自身或移植外来的骨髓来源肝干细胞可促进肝再生,但是,在大规模临床应用前,其安全性需要进一步研究。 目的:采用含体积分数5%淤胆血清的培养基诱导大鼠骨髓间充质干细胞向肝干细胞方向分化,将这些骨髓来源肝干细胞接种到裸鼠体内,观察其是否具有成瘤性。 方法:用含体积分数5%淤胆血清的培养基培养大鼠骨髓间充质干细胞;以免疫荧光法检测白蛋白、甲胎蛋白及细胞角皮素18在诱导后细胞的表达;以糖原染色及尿素合成检测细胞功能。 将培养14 d的大鼠骨髓来源肝干细胞接种于裸鼠皮下,观察局部有无新生物形成。 结果与结论:用含体积分数5%淤胆血清的培养基培养大鼠骨髓间充质干细胞,4 d后出现细胞集落,细胞为圆形;7 d后集落变大,其周围开始出现多角形细胞;培养14 d后可见细胞呈多角形和排列成铺路石样,免疫荧光染色发现这些细胞表达角皮素18、甲胎蛋白和白蛋白,糖原染色显示细胞内有糖原颗粒;培养第12~15天的培养液中尿素氮浓度逐渐升高。经诱导的大鼠骨髓来源的肝干细胞接种到裸鼠皮下,30 d后局部未见新生物形成,组织结构未见异常。结果提示用体积分数5%淤胆血清培养基诱导的大鼠骨髓源性肝干细胞可能无成瘤性。  相似文献   

2.
体外培养骨髓源性神经干细胞的细胞遗传学分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的评价体外培养的成人骨髓源性神经干细胞的遗传稳定性。方法制备骨髓源性神经干细胞的染色体标本,以常规染色和G显带进行染色体的核型分析。结果体外培养的成人骨髓源性神经干细胞的染色体数目为正常人类的46条染色体,未见非整倍体染色体像;G显带图像核型分析显示其为二倍体正常核型,染色体中未发现有缺失、倒位、易位、双着丝粒和环状染色体等结构异常。结论体外培养分化形成的骨髓源性神经干细胞保持了遗传学上的稳定性.为其进一步的临床应用提供了实验依据。  相似文献   

3.
目的探讨神经细胞黏附分子(NCAM)受体作为大鼠骨髓源性干细胞检测标志,并利用原子力显微镜(AFM)扫描培养不同时段的细胞,获得细胞表面特异性超微结构。方法分离SD大鼠骨髓基质细胞,用神经干细胞培养基、脑源性神经细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、维甲酸持续诱导培养,在诱导培养后第6、8、10和12天应用SABC法免疫组化技术,检测NCAM受体表达情况;并对诱导培养后的细胞进行AFM扫描,检测细胞表面的形貌结构。结果光学显微镜下可见NCAM受体在诱导培养后第10天已经有表达。细胞超微结构的扫描测定显示细胞表面平均粗糙度在(11.2±1.5)nm,骨髓源性神经干细胞发育不同时段的细胞表面特征主要表现为细胞中央部表面粗糙而周边部光滑,细胞周边部均存在云雾状结构。结论NCAM受体可以作为大鼠骨髓源性神经干细胞的表面标记;AFM超微结构的明确,为进一步鉴定骨髓源性神经干细胞提供可能。  相似文献   

4.
背景:近年来研究发现,神经营养因子在骨髓间充质干细胞的分化中发挥重要作用。目前脑组织中具有再生能力的神经干细胞在体外是否具有直接诱导骨髓间充质干细胞分化为多巴胺能神经元的作用还未见报道。 目的:观察大鼠间充质干细胞在胶质细胞源性神经营养因子与神经干细胞共培养两种诱导条件下体外分化成多巴胺能神经元的能力。 方法:分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代细胞分2组培养,一组细胞应用胶质细胞源性神经营养因子单独诱导,另一组细胞与已培养成球的神经干细胞共培养进行诱导,共培养之前行Brdu标记。诱导3 d后以免疫组织化学法检测各组贴壁细胞神经元特异性标志物神经原纤维和多巴胺能神经元特异性标志物酪氨酸羟化酶的表达,观察间充质干细胞的分化情况。 结果与结论:胶质细胞源性神经营养因子单独诱导组间充质干细胞在诱导24 h后胞体回缩呈锥形,突起延长且数量增多,有神经元样形态,且细胞间相互连接成网络状,3 d后部分细胞表达神经原纤维,其中少部分同时表达酪氨酸羟化酶。与神经干细胞共培养组神经干细胞球很快解离,迅速贴壁,共培养的贴壁细胞大量增殖且多呈神经元样,胞体细长多突起,相互间连接成网,多数贴壁细胞分别单独表达神经原纤维和酪氨酸羟化酶,少数细胞可见Brdu/神经原纤维,Brdu/胶质纤维酸性蛋白,Brdu/酪氨酸羟化酶双标阳性。提示间充质干细胞在胶质细胞源性神经营养因子、神经干细胞存在的情况下可定向转化为神经元,并有向多巴胺能神经元分化的可能。在该实验条件下胶质细胞源性神经营养因子效果好于神经干细胞。  相似文献   

5.
目的探讨猫骨髓分离培养、诱导分化神经干细胞的可行性。方法无菌条件下行骨穿,梯度密度离心获取猫骨髓基质细胞,以“神经干细胞培养基”培养,用分化诱导因子进行体外培养和诱导分化。结果猫骨髓基质细胞在相应培养条件下能在体外培养中增殖、分化,克隆形成细胞球(或称“神经球”),这些细胞球能表达神经干细胞特异性抗原nestin,而且能进一步诱导分化出胶质样细胞和神经元样细胞,免疫细胞化学检测可见有胶质源性纤维酸性蛋白抗体(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗原表达。结论猫骨髓基质细胞在一定条件诱导下可分化成神经胶质样和神经元样细胞。  相似文献   

6.
背景 干细胞中microRNA的表达研究可以为干细胞自我增殖和分化潜能特性的分子机制提供重要的信息。骨髓基质细胞和脊髓源神经干细胞具有共同的神经再生潜能特点,如二者均可以形成神经克隆球,体内体外均可以分化为神经元和神经胶质细胞。本研究探讨了两种神经系统特异表达的microRNA—miR-124a和miR-128a在骨髓基质细胞和脊髓源神经干细胞中的表达差异。 方法 采用全骨髓培养法体外分离培养获得大鼠骨髓基质细胞。取胚胎大鼠脊髓组织制备成单细胞悬液,接种到限定性无血清培养液中培养,待形成克隆球后传代扩增获得神经干细胞,免疫荧光检测Nestin的表达进行细胞鉴定。分别取传代培养至第3代的骨髓基质细胞和脊髓源神经干细胞,应用TaqMan microRNA Assays技术,检测miR-124a和miR-128a的表达。 结果 倒置显微镜下观察,骨髓基质细胞呈贴壁生长,生长迅速,细胞呈团簇状,分布不均,显示出集群生长趋势。之后细胞间逐渐紧密贴附,呈条索状融合。传至第3代的细胞形态趋于一致,呈多角或短梭形,经流式检测发现大于95%的细胞CD71表达阳性。脊髓源神经干细胞经原代及传代培养均可形成细胞克隆球,且具有增殖能力,免疫荧光标记结果显示神经干细胞呈Nestin表达阳性。MicroRNA定量检测结果显示miR-124a和miR-128a在脊髓源神经干细胞中的表达均低于骨髓基质细胞在中的表达。 结论 骨髓基质细胞和脊髓源神经干细胞中miR-124a、miR-128a的表达具有明显的差异,提示二者在microRNA水平具有不同的表达特点。  相似文献   

7.
背景:传统的胚胎来源和脑来源的神经干细胞由于取材困难,并受伦理道德的约束,应用受到极大限制。 目的:拟利用无血清神经培养基体外培养大鼠骨髓源性神经干细胞。 方法:抽取大鼠股骨和胫骨的骨髓,采用全骨髓培养及贴壁筛选法分离培养骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞周期及细胞免疫表型,油红O染色及茜素红染色鉴定其成骨、成脂能力。取传至4~6代的大鼠骨髓间充质干细胞,加入含表皮生长因子、碱性成纤维生长因子、B27的DMEM/F12无血清神经培养基进行诱导,采用免疫荧光染色及流式细胞仪予以鉴定。 结果与结论:P5骨髓间充质干细胞(91.5±3.1)%处于G1期,高表达CD90及CD29,不表达CD45及CD34,成脂诱导后在胞质中可见桔红色脂滴,成骨诱导后可见黑色矿化结节。骨髓源性神经干细胞巢蛋白免疫荧光染色呈阳性,流式细胞仪检测其阳性率为(97.2±1.1)%,NSE,β-Tubulin,GFAP及MAP-2抗原免疫荧光染色均呈阳性表达。表明在无血清神经培养基中加入特定生长因子,骨髓间充质干细胞可诱导为神经干细胞;在体外适当条件下,骨髓源性神经干细胞具有增殖和分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞的能力。  相似文献   

8.
背景:骨髓基质干细胞可定向诱导分化为神经元样细胞,但目前培养的方法尚不统一。 目的:采用预诱导与全反式维甲酸和脑源性神经营养因子为培养体系,拟在体外诱导大鼠骨髓基质干细胞向神经细胞分化。 设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-12/2008-06在新疆医科大学第一附属医院医学研究中心干细胞室完成。 材料:清洁级雄性SD大鼠2只,由新疆医科大学动物试验中心提供。 方法:采用贴壁法体外分离培养大鼠骨髓基质干细胞,经反复传代细胞逐渐纯化。取生长状态良好的第3代骨髓基质干细胞,按8×107 L-1密度接种后,改换含10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子、20 μg/L表皮生长因子的神经干细胞培养体系进行预诱导,48 h后去除预诱导液,加入含10 μg/L脑源性神经生长因子、1 μmol/L全反式维甲酸的神经干细胞培养体系定向诱导骨髓基质干细胞分化为神经细胞。以未诱导的骨髓基质干细胞作为对照。 主要观察指标:流式细胞仪检测第3代骨髓基质干细胞表面标志的表达,诱导后免疫荧光染色和流式细胞仪检测巢蛋白阳性的表达,免疫荧光染色鉴定神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白的表达。 结果:第3代骨髓基质干细胞CD29,CD44表达率分别为97.1%,99%,CD45表达率为0.5%,CD34呈阴性表达。预诱导48 h后巢蛋白阳性率为24%,而对照组仅为4.6%。诱导48 h后,巢蛋白染色呈阳性,并可见大量神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞出现;对照组均呈阴性表达。 结论:神经干细胞培养体系联合全反式维甲酸与脑源性神经生长因子,可在体外高效、稳定地诱导骨髓基质干细胞转化为神经元样细胞,并进一步向神经元和神经胶质细胞方向分化。  相似文献   

9.
背景:目前尚未见骨髓间充质干细胞对活化的小胶质细胞特异性反应的报道,且有关骨髓间充质干细胞在特定微环境下如何维持多巴胺能神经元的存活也缺乏相应的实验证据。 目的:观察骨髓间充质干细胞在活化的小胶质细胞刺激下保护多巴胺能神经元存活的作用。 方法:取Wistar大鼠,贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,体外培养并活化小胶质细胞,酶消化法培养中脑多巴胺能神经元。实验分为5组:骨髓间充质干细胞组;小胶质细胞组;脂多糖+小胶质细胞组;骨髓间充质干细胞+脂多糖+小胶质细胞组;分别取各实验组的培养上清,对中脑多巴胺神经元进行培养。单纯多巴胺能神经元组采用体积分数为10%胎牛血清+DMEM/F12进行培养。采用免疫荧光技术检测不同微环境对多巴胺能神经元存活的影响及不同微环境对骨髓间充质干细胞释放胶质细胞源性神经营养因子的影响。 结果与结论:含有骨髓间充质干细胞的实验组胶质细胞源性神经营养因子的释放量均较相应的对照组高。酪氨酸羟化酶免疫荧光染色结果发现,单纯多巴胺能神经元组神经元的存活率为15%;小胶质细胞组多巴胺能神经元的存活率为10%;骨髓间充质干细胞组多巴胺能神经元的存活率为35%;脂多糖+小胶质细胞组多巴胺能神经元的存活率为5%;而骨髓间充质干细胞+脂多糖+小胶质细胞组多巴胺能神经元的存活率达到了28%,高于除骨髓间充质干细胞组外的其他各组(P < 0.05)。此外体外培养多巴胺能神经元存活率随培养时间延长下降,但含有骨髓间充质干细胞实验组的多巴胺能神经元存活率明显高于相应对照组。提示小胶质细胞活化刺激骨髓间充质干细胞上调胶质细胞源性神经营养因子表达,使得多巴胺能神经元免受毒素的损害,抑制了多巴胺能神经元的延迟性死亡。  相似文献   

10.
背景:人骨髓间充质干细胞在长期体外培养传代过程中,可突变为肿瘤干细胞,且移植后在体内能够形成恶性肿瘤,具有多向恶性分化特征,如畸胎瘤等。 目的:探讨应用自体血清培养的人骨髓间充质干细胞在体外增殖过程中及其诱导分化为心肌样细胞后的潜在致瘤性。 设计、时间及地点:细胞学体外观察及体内植入实验,于2007-11/2008-04在河南省肿瘤医院干细胞实验室完成。 材料:非恶性肿瘤的冠状动脉粥样硬化性心脏病患者骨髓3 mL和外周静脉血50 mL。近交系BALB/C清洁级雌性小鼠12只,随机分为骨髓间充质干细胞组、心肌样细胞组、空白对照组,4只/组。 方法:分离的人骨髓间充质干细胞从第2代开始,用自体血清培养并传至第9代。取生长良好的第6代细胞,加入10 μmol/L 5-氮杂-2 -脱氧胞苷向心肌样细胞定向诱导40 d。将经或未经诱导的骨髓间充质干细胞制成单细胞悬液,调整浓度至3.0×1010 L-1,吸取0.2 mL分别接种于骨髓间充质干细胞组、心肌样细胞组小鼠皮下,空白对照组注射等量含胎牛血清的DMEM/F12培养液,40 d后留取活检组织。 主要观察指标:流式细胞仪检测第1,3,6,9代细胞表面抗原CD34,CD44,CD45,HLA-DR的表达,测定细胞周期,并进行染色体核型分析,光镜下观察诱导后免疫组化结果。TRAP ELISA法检测端粒酶活性。Western blotting法分析c-myc和p16基因的表达。 结果:第1,3,6,9代人骨髓间充质干细胞在自体血清体外培养过程中生长状态良好,数量充足,表面抗原标志CD44呈阳性,CD34,CD45及HLA-DR均呈阴性,80%以上细胞处于G0/G1期,正常二倍体分裂象>90%,染色体核型正常,诱导后细胞Vimentin呈阳性表达,且表达心肌特异性标记Desmin,Troponin T。第3,6,9代人骨髓间充质干细胞及诱导后的心肌样细胞端粒酶活性分别呈弱阳性、阳性,但差异无显著性意义(P > 0.05),且c-myc和p16蛋白表达亦无明显差异。 结论:人骨髓间充质干细胞在体外用自体血清培养可满足临床需要,数量充足,生长良好,无核型变异,定向诱导能分化为心肌样细胞。植入动物体内后无肿瘤发生,且端粒酶活性和c-myc,P16基因的表达无显著改变。  相似文献   

11.
骨髓源性神经干细胞体外培养体系的安全性评价   总被引:4,自引:2,他引:2  
目的评价成人骨髓源性神经干细胞体外培养体系的安全性。方法对骨髓源性神经干细胞的培养上清分别进行无菌试验、支原体检测、热原质检测和异常毒性试验。结果骨髓源性神经干细胞的培养上清经培养无细菌和真菌生长,PCR检测未扩增出支原体的特异性片断,培养上清的热原质含量符合规定的限度,进行异常毒性试验的动物在观察期内未出现局部和全身异常反应,结论骨髓源性神经干细胞的培养体系中不含有对人体移植具有潜在危害的因素,整个培养流程和培养体系是安全可靠的。  相似文献   

12.
目的 :体外通过逆转录病毒将v myc基因转染从胎龄 10~ 12周人工流产胚胎脑皮质分离的神经干细胞后观察其生物学特性的改变。方法 :体外分离、培养、鉴定人胚胎脑皮质来源的神经干细胞 ,使用构建了v myc基因的逆转录病毒转染神经干细胞后对其进行普通及电子显微镜观察 ,生长情况的测定、染色体分析以及裸鼠移植。结果 :转染v myc基因的神经干细胞仍然保持着未分化状态 ,能够自我更新以及具有多向分化潜能 ,并且生长速率明显加快 ,分裂增殖能力明显增强。然而这种细胞的染色体存在结构异常与数目异常 ,将其植入裸鼠皮下短期内能形成肿瘤。结论 :转染v myc基因的神经干细胞具有正常神经干细胞的基本特性 ,但同时也存在染色体异常与致瘤性。  相似文献   

13.
目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,MSCs)体外分化为神经干细胞(neural stemcells,NSCs)的可能性。方法取4~6周SD大鼠双侧股骨和胫骨骨髓细胞进行体外培养,通过传代得到纯化的MSCs后换用分化液诱导,通过形态学观察诱导后细胞形态变化,并用免疫荧光检测不同天数细胞nestin的表达率;NSCs分化实验对所诱导的NSC的分化潜能进行检测。结果MSCs诱导后的细胞nestin表达率随天数增加逐渐升高,1周后形成高表达nestin的神经干细胞球形细胞团;在含血清培养基中可自然分化为神经元和神经胶质样细胞。结论MSCs能于体外分化出神经干细胞,且具有进一步的分化能力,骨髓来源的神经干细胞将可能作为种子细胞用于神经系统疾病的治疗。  相似文献   

14.
BACKGROUND: MicroRNA (miRNA) expression in stem cells provides important clues for the molecular mechanisms of stem cell proliferation and differentiation. Bone marrow stromal cells and spinal cord-derived neural stem cells exhibit potential for neural regeneration. However, miRNA expression in these cells has been rarely reported. OBJECTIVE: To explore differential expression of two nervous system-specific miRNAs, miR-124 and miR-128, in bone marrow stromal cells and spinal cord-derived neural stem cells.DESIGN, TIME AND SETTING: An In vitro, cell biology experiment was performed at the Department of Biotechnology, Shanxi Medical University from June 2008 to June 2009.MATERIALS: TaqMan miRNA assays were purchased from Applied Biosystems. METHODS: Rat bone marrow stromal cells were isolated and cultured using the whole-bone marrow method, and rat spinal cord-derived neural stem cells were obtained through neurosphere formation. TaqMan miRNA assays were used to measure miR-124 and miR-128 expression in bone marrow stromal cells and spinal cord-derived neural stem cells.MAIN OUTCOME MEASURES: Morphology of bone marrow stromal cells and spinal cord-derived neural stem cells were observed by inverted microscopy. Expression of the neural stem cell-specific marker, nestin, the bone marrow stromal cell surface marker, CD71, and expression of miR-124 and miR-128, were detected by real-time polymerase chain reaction. RESULTS: Cultured bone marrow stromal cells displayed a short fusiform shape. Flow cytometry revealed a large number of CD71-positive cells (> 95%). Cultured spinal cord-derived neural stem cells formed nestin-positive neurospheres, and quantitative detection of miRNA demonstrated that less miR-124 and miR-128 was expressed in bone marrow stromal cells compared to spinal cord-derived neural stem cells (P < 0.05). CONCLUSION: Bone marrow stromal cells and spinal cord-derived neural stem cells exhibited differential expression of miR-124 and miR-128, which suggested different characteristics in miRNA expression.  相似文献   

15.
成人骨髓源性神经干细胞高迁移能力的基因分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 检测成人骨髓源性神经干细胞(Md-NSCs)中与细胞侵袭转移相关基因的表达情况,研究Md-NSCs在中枢神经系统中具有高迁移能力的基因基础. 方法 自正常成人志愿者获取成人骨髓基质细胞(BMSCs),于体外诱导培养获得Md-NSCs,应用寡核苷酸基因芯片检测Md-NSCs中与细胞侵袭转移相关基因的表达情况;应用实时定量PCR(RT-PCR)检测验证基因芯片的结果.结果 基因芯片检测结果显示,与新鲜正常成人骨髓细胞去红细胞相比较,Md-NSCs中与细胞侵袭转移相关基因(MMP1、MMP2、MMP17、ITGA3、RhoB、RhoC及RhoD)均呈高度表达:RT-PCR检测结果显示.MMP2、ITGA3、RhoC在Md-NSCs中高度表达,分别为新鲜正常成人骨髓细胞去红细胞含量的2.84×100倍、2.22×102倍及4.92×100倍. 结论 Md-NSCs在中枢神经系统中具有高迁移能力可能与该细胞中促进细胞侵袭转移相关基因的高度表达相关.另外.这些高度表达的基因属于重要的癌基因.因此对Md-NSCs致瘤性问题的深入研究值得重视.  相似文献   

16.
目的检测体外培养的人神经干细胞端粒酶活性,分析其与神经干细胞生物学特性的关系。方法分离、鉴定并扩增取自10~14周药物流产胎儿大脑皮质的神经干细胞,应用PCR-ELISA法检测神经干细胞端粒酶活性。结果经免疫组化检查,培养的细胞为人神经干细胞;其在体外培养过程中,仅在早期10代表达极低的端粒酶活性(相对活性为6.4%~21.2%),其后消失。结论神经干细胞表达端粒酶活性,但较低且不能长期维持,这可能是神经干细胞不能长期传代的原因之一。  相似文献   

17.
Human adult bone marrow-derived neural stemlike cells (MDNSCs) may serve as ideal seed cells for cell replacement therapy for human neurological disorders and injuries. However, the long-term safety of this cell population after transplantation must be thoroughly explored before clinical application, and tumorigenicity is a major concern. In this study, we generated MDNSCs capable of forming neurospherelike aggregates and with the potency to differentiate into neural lineage cells in vitro and investigated hundreds of cancer-related genes in MDNSCs in order to determine whether there were any characteristics that could help in the evaluation of their tumorigenic potential. According to the results of testing by PCR and DNA sequencing, there were no mutations at the frequent mutation sites of tumor-suppressor genes p53, p16, and Rb1. Of the 440 cancer-related genes covered by Oligo GEArray Human Cancer Microarray OHS-802, 63 were found to be significantly overexpressed compared with that in fresh normal human adult bone marrow depleted of red blood cells (RBCs). In particular, the overexpressed genes included those promoting cell proliferation and cell invasion and metastasis and members of several oncogenic signaling pathways. The overexpression of MYC, MMP2, Notch2, STC1, ITGA3, STAT5b, RhoC, and Wnt1 was also revealed by quantitative real-time RT-PCR. Because it has been shown that activation of some of these genes promote tumorigenesis, our findings highlight the need for further studies of long-term tumorigenicity in MDNSCs.  相似文献   

18.
Nurr1基因在体外培养大鼠骨髓源性神经干细胞的表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的获得表达孤儿核受体(Nurr1)基因的骨髓源性神经干细胞(BMSCs-NSCs)。方法构建携带Nurr1基因的重组腺相关病毒(AAV)载体AAV-pcDNA3.1-Nurr1,提取质粒,用脂质体转染法转染大鼠BMSCs-NSCs,并用RT-PCR和免疫细胞化学方法检测阳性细胞。结果经酶切鉴定和DNA测序,证实得到了序列正确的重组pAAV-Nurr1,获得了Nurr1阳性的BMSCs-NSCs。结论重组AAV携带的Nurr1基因能够在BMSCs-NSCs中表达,本研究为进一步探讨将该基因工程细胞用于帕金森病基因治疗提供了可能性,  相似文献   

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