电镜半薄切片染色液的改良及应用

电镜是观察组织细胞超微结构的一种手段。但由于切片太小，有时难于观察到目标结构，为此需大量制备样品造成工作量大且消耗多。为使超薄切片能精确地切到目标部位，在行超薄切片前要做半薄切片进行定位。一般是在超薄切片机上切取数张1—2μm厚的切片进行染色观察。半薄切片的染色常规方法有：甲苯胺兰染色法、天青Ⅱ美兰染色法、H-E染色法和Giemsa染色法等，无论哪种方法都需预先做脱树脂处理，     

半薄切片技术

半薄切片(semithin section)又称厚切片(thick section).是相对于电镜的超薄切片(Ultrathin section)而讲的。半薄切片厚度是0.5～2μ,介于光镜石蜡切片(7μ)和电镜超薄切片(0.07μ)之间。半薄切片的制法是按电镜常规制备的树脂包埋组织块,在超薄切片机或经     

把普通光学切片机改装成修块和半薄切片两用仪器的经验介绍

半薄切片(Semi thin section)介于石腊切片和超薄切片之间,是连接细胞微观与超微观结构的重要技术环节。这种切片厚度在0.5—1.0微米之间。由于细胞成份保存良好, 受色反应优异而具有光学高分辨性,在油镜下呈现类似低倍电镜的图像。因此,半薄切片已广泛用于细胞学和病理学的研究,制备精确的光镜照片和超微结构的定位观察。半薄切片一般是用超薄片机制备。但是,这种仪器价格昂贵,不能普及,限制了半薄切片的广泛开展。1964年,徐国明     

一种简单而快捷的半薄切片脱树脂新方法

目前, 在HE染色、特殊染色或免疫组化染色研究方面多采用普通石蜡包埋的切片, 其切片厚度最薄达4 μm,若更薄的切片,切割有一定的难度.对于各种染色而言,越薄的切片,细胞与组织结构越清晰,染色效果越好.环氧树脂包埋的组织块(Epon)不仅用于透射电子显微镜超薄切片的制备,也可用于光镜半薄切片的制备[1].本研究摸索出一种简单而快捷的脱树脂的方法,现介绍如下.     

环氧树脂连续半薄切片制备技术

在制备超薄切片之前,有些生物样品需要制作半薄切片,在光镜下确定所要观察的结构,并在环氧树脂包埋块上对此结构进行准确的定位,避免盲目的超薄切片,从而提高电镜的观察效率。用环氧树脂包埋的生物样品,如果采用适宜的染色方法对半薄切片进行染色,在光镜下观察,可获得比石蜡切片保存的更多的结构     

有关制作半薄切片捞片的改进

在制作电镜的超薄切片前,可用超薄切片机先切数片1μm～2μm 厚的半薄切片进行染色,在光镜下观察以确定方向和部位,同时对特殊细胞观察的筛选更为需要。从而提高所要观察以超薄切片上组织和细胞的准确性。并且半薄切片用甲苯胺     

手工制取玻璃刀及玻璃刀持刀器的制作

玻璃刀虽主要用于制取电镜超薄切片,但制取光镜半薄切片也需用玻璃刀。用专用制刀机制取玻璃刀,操作简单且成功率高,但专用制刀机多为进口,普及推广较难。手工制刀经过摸索也可达到良好效果,就半薄切片来讲对刀的要求不似电镜超薄切片那样高,若经一段实践,制出     

透射电镜超薄切片法与负染法探讨

透射电镜生物样品超薄切片技术是医学生物学研究中常用的方法。其它一些制备技术如免疫电镜、电镜细胞化学、放射自显影等,都必须进行超薄切片;而超薄切片所显示的生物样品的微细结构,也是识别扫描电镜图像、冷冻蚀刻复型及其他电镜图像的基础。负染色是相对正染色而言...     

自制半薄切片调温烤片装置介绍

半薄切片(厚切片)有助于超薄切片的定位,以及光镜与电镜观察的密切结合,是应用电镜技术进行生物医学研究的手段之一。半薄切片制片过程中,在载玻片上展片与贴片及切片染色,是该技术的重要步骤。按传统的方法,展片时用酒精灯火焰加热,温度不易控制,且成批制片费时。贴片则是在玻片上涂蛋白甘油,长期保存易生霉,或置50～70℃烤箱中数小时,因空气导热慢,耗时较多,而染色通过火焰加热,易沸腾造成过染或沉淀。因此,我室用自动恒温电熨斗试制了一种半薄切片调温烤片装置(易制作、成     

影响透射是生物样品超薄切片效果因素分析

由于电镜技术的不断发展,样品制备技术的不断改进,制备切片厚度在50nm 以下的超薄切片已成为透射电镜生物样品制备的常规制样技术。但是如何制得高质量的超薄切片,得到清晰的高反差电镜图像客观存在很多因素影响,比如超薄切片机性能好坏、玻璃切片刀是否锋利、组织包埋块硬度怎样、操作者技术经验等等。笔者根据几年的切片经验就上述影响超薄切片的几个因素作简略分析如下。1 具有性能良好的超薄切片机一台性能良好的超薄切片机是切出没有刀痕与颤痕的优质超薄切片的重要保证。我们电镜室1997年购置的德国徕卡牌超薄切片机,就是性能优…     

利用超薄切片机制作半薄切片技术

近年来,由于半薄切片机的问世,为电镜工作者制作半薄切片进行定向选择,克服超薄切片的盲目性和电镜视野的局限性,创造了良好条件。但是,国内目前所使用的半薄切片机仍靠进口,价格昂贵。而定位部分的照明光源又不能达到满意效果,对定向选择带来一定困难,操作麻烦,花时间多。两年来,我室利用超薄切片机制作半薄切片,对心肌、肾等组织进行定向选择,省时省力,并获得了满意的效果。现将具体操作步骤介绍如下:     

电镜半薄切片H-E快速染色方法

为了避免超薄切片的盲目性,对于一些较复杂的组织,在进行超薄切片之前,最好做半薄切片,经染色、光镜检查,可精确地选择预检部位,提高观察效率。临床外检和穿刺得到的标本,通常很小,又做石 蜡又做电镜,不仅烦锁,有时也不允许。一般的半薄切片染色,只能用于定位,并不能用于诊断,而且染色时间长,要经过几种试剂和加热等处理,操作复杂,效果并不令人满意。我们在我校病理教研室工作的     

连续半薄切片技术在淋巴管学研究中的应用

70年代末森坚志提出采用色素穿刺注射法、加墨汁的硝酸银溶液局部动脉注入法、加墨汁生理盐水灌流的环氧树脂半薄切片法,确认淋巴管后超薄切片电镜观察来综合研究器官内淋巴管。本文就连续半薄切片技术应用于淋巴管研究总结如下。     

石蜡半薄切片制作透射电镜的方法

[目的]介绍石蜡半薄切片转制透射电镜的制样方法。[方法]对石蜡半薄切片进行脱蜡、水化、锇酸固定、缓冲液漂洗、梯度酒精脱水、环氧树脂包埋、超薄切片机切片、透射电镜下观察。[结果]组织细胞的超微结构保存完好,足以满足病理诊断之用。[结论]用石蜡半薄切片转制电镜比用石蜡组织块转制电镜方法简单,快速易行。     

对半薄切片苏木素伊红染色法的某些改良

半薄切片染色除可供光镜观察外,还可为超薄切片提供准确部位,以使电子显微镜检查有的放矢,对有关组织、细胞的超微结构进行详细观察。目前国内介绍的半薄切片H-E染色法,除操作较复杂费时外,其不足之处是:经较长时间的氢氧化钾纯酒精饱     

影响透射电镜生物样品超薄切片效果因素分析

由于电镜技术的不断发展,样品制备技术的不断改进,制备切片厚度在50nm以下的超薄切片已成为透射电镜生物样品制备的常规制样技术.但是如何制得高质量的超薄切片,得到清晰的高反差电镜图像,客观存在很多因素影响,比如超薄切片机性能好坏、玻璃切片刀是否锋利、组织包埋块硬度怎样、操作者技术经验等等.笔者根据几年的切片经验就上述影响超薄切片的几个因素作简略分析如下.     

用长刃口玻璃刀切制1微米半薄切片

<正> 目前,制作组织切片所用切片刀有三种,即钢刀、钻石刀和玻璃刀。钢刀不能切半薄切片和塑料包埋的组织块;钻石刀虽能切各种厚度的切片,但因价格昂贵而未能推广和普及。目前电镜制样用的三角玻璃刀,刃口长度为5～6毫米。这种刀虽能切厚度<0.1微米的超薄切片和厚度0.1～2微米的半薄切片,但不能切大片。1976年 Bennett     

无污染超薄切片的制作

一张优良的超薄切片除应具备超薄、平整、无皱格、无刀痕、无震间外，还须干净、染色强度适中，且无染色污染等现象．但在电镜标本制作过程中，最容易出现的问题就是切片污染。本文主要介绍无污染超薄切片的制作体会。至无痕用网的改良一般超薄切片需要有支持膜的铜网承载。支持股能有效地吸附切片，并能加强切片承受电子束轰击的抵抗力。所以通常人们采用有胶钢同进行挖片。但它存在影响分辨率、易污染等缺点。于是我们改用无股银网直接措片，电镜下观察图像清晰、分辨率高．在电子染色时容易着色，并且简化了操作，减少了制膜等环节中可能…     

半薄切片制作技术的几点改进

环氧树脂半薄切片在形态学研究中应用较多,是介于超微结构观察和常规光镜观察之间的制样手段,也是电镜超薄切片定位的必要手段。由于其厚度比石蜡切片薄,清晰度、分辨率均优于石蜡切片,已广泛应用于光电镜定位、对照观察,甚至可代替石蜡切片。但在半薄切片制作技术中还存在一些尚待改进的问题。如切片染色,以往常用的方法有甲苯胺蓝法、H.E法等,前者一般采用水溶液,通常不易着色;后者步骤较复杂,耗时较长,且难以着色。我们对甲苯胺蓝法(单色染色)及Sata变法(多色染色)做了一些改进,得到了较为满意的效果。困扰半薄切片的另一问题是脱片,常致制样失败。以往大多采用甘油蛋白作贴片剂,效果不甚理想。也曾采用涂布树脂包埋剂防止脱片,但操作较麻烦。我们从免疫细胞化学中受到启示,改用明胶-硫酸铬钾液作为半薄切片粘贴剂。方法简便易行,效果也好,在大量的半薄切片染色中,极少发现脱片。……     

电镜半薄切片美蓝-天青Ⅰ快速染色法

为了提高透射电镜对组织观察的准确性,在进行电镜样品超薄切片前,对大多数研究样品以及临床外检的标本,需做半薄切片进行光镜定位。为缩短整个定位程序的时间,提高电镜观察效率,我们以Field氏染法为基础,改进了半薄切片染色方法,应用于国产环氧树脂618包埋组织的半薄切片染色。通过对肾、肺、胃、皮肤、十二指肠、支气管、骨、神经、耳蜗、角膜等组织染色,均获得较满意的效果。与