山楂叶总黄酮对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织解偶联蛋白2表达的影响

目的:观察解偶联蛋白2(UCP2)在高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织的表达及山楂叶总黄酮(TFHL)对其的影响.方法:以高脂饮食喂养12周诱导SD大鼠建立NASH模型,同时分别以250,125 mg·kg~(-1)·d~(-1)的TFHL和195.4 mg·kg~(-1)·d~(-1)的易善复进行干预,观察大鼠肝组织的病理改变,血清ALT,AST水平,肝组织匀浆TG,CHOL,MDA含量和T-AOC的活性,RT-PCR检测UCP2基因mRNA在肝组织中表达,ELISA检测肝组织UCP2含量.结果:NASH模型组大鼠肝组织重度脂肪变、炎细胞浸润,血清ALT,AST水平和肝组织TG,CHOL,MDA,UCP2含量较正常大鼠明显增高,UCP2 mRNA表达显著增强,T-AOC活性明显降低.肝组织UCP基因的表达与MDA含量呈明显正相关,与T-AOC活性则呈负相关.TFHL高、低剂量组大鼠肝组织炎症活动程度、肝匀浆MDA和UCP2含量以及肝组织UCP2 mRNA表达均较模型组大鼠显著降低,而肝匀浆T-AOC的活性则较模型组大鼠明显增高.结论:TFHL可能是通过抑制氧应激/脂质过氧化反应和肝组织UCP2过表达的途径减轻肝脏炎症损伤,从而防止NASH的进一步发展.     

山楂叶总黄酮对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织CYP2E1表达的影响

目的:观察细胞色素P4502E1(CYP2E1)在高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织中的表达及山楂叶总黄酮(TFHL)对其的影响。方法:以高脂饮食喂养12周建立NASH大鼠模型,分别以250、125mg/kg体质量/d的TFHL和195.4mg/kg体质量/d的易善复进行干预,观察大鼠肝组织的病理改变,肝组织匀浆MDA含量和SOD、GSH-Px的活性,RT-PCR和免疫组化法检测CYP2E1基因mRNA和蛋白在肝组织中表达。结果:①NASH模型组大鼠肝组织出现重度脂肪变、不同程度的炎细胞浸润及坏死灶,肝组织MDA含量较正常组大鼠显著增高,肝匀浆SOD、GSH-Px的活性明显降低,肝组织CYP2E1基因mRNA和蛋白表达显著增强。②肝组织CYP2E1基因的表达与MDA含量呈明显正相关,与SOD和GSH-Px活性则呈明显负相关。③TFHL高、低剂量组大鼠肝组织炎症活动程度、肝匀浆MDA含量、肝组织CYP2E1基因mRNA和蛋白表达均较模型组大鼠显著降低,而肝匀浆SOD、GSH-Px的活性则较模型组大鼠明显增高。结论:CYP2E1参与高脂饮食诱导的大鼠NASH的发生发展,TFHL能抑制CYP2E...     

山楂叶总黄酮对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织NF-κB及其抑制物表达的影响

目的:研究NF-κB及其抑制因子(IκB)在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)发生中的作用,观察山楂叶总黄酮(TFHL)对其的影响,探讨TFHL防治NASH的作用机制。方法:以高脂饮食喂养SD大鼠12周建立大鼠NASH模型,同时分别以250、125mg.kg-1.d-1的TFHL和195.4mg.kg-1.d-1的易善复进行干预,观察大鼠肝组织的病理改变,血清MDA、SOD、TNF-α水平,RT-PCR和免疫组化法检测NF-κB及其抑制物IκB基因m RNA和蛋白在肝组织中的表达。结果:高脂脂饮食诱导NASH大鼠肝组织出现重度脂肪变、不同程度的炎细胞浸润及坏死灶,血清MDA、TNF-α含量较正常大鼠显著增高,SOD活性下降,肝组织NF-κB p65、IκBα基因的mRNA和蛋白表达明显增强;同时肝组织NF-κB p65、IκBα蛋白表达与血清TNF-α和MDA含量呈明显正相关,与血清SOD活性呈明显负相关;TFHL和易善复能显著改善NASH大鼠的炎症程度,能提高大鼠的血清SOD水平,降低MDA和TNF-α的含量,降低肝组织NF-κB p65、IκBα基因的mRNA和蛋白的表达。结论:TFHL能减少NASH大鼠脂质...     

山楂叶总黄酮对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏PPARs表达的影响

目的:观察山楂叶总黄酮(TFHL)对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织PPARα、PPARγ表达的影响,探讨TFHL防治NASH的作用机制。方法:以高脂饮食喂养12周建立NASH大鼠模型,分别以250、125mg.kg-1.d-1的TFHL和195.4mg.kg-1.d-1的多烯磷脂酰胆碱进行干预,RT-PCR检测肝组织PPARα、PPARγmRNA的表达,ELISA法检测大鼠肝组织匀浆TNF-α、PPARα的含量。结果:NASH模型组大鼠肝组织PPARαmRNA和蛋白、PPARγmRNA表达均较正常组明显降低,肝组织匀浆TNF-α含量较正常组显著增高,PPAR-α、γ基因mRNA表达均与TNF-α水平呈明显负相关。TFHL高、低剂量组和多烯磷脂酰胆碱组大鼠肝组织匀浆TNF-α含量均较模型组大鼠显著降低;肝组织PPARα基因mRNA和蛋白、PPARγmRNA表达均较模型组明显增高。结论:PPARα、PPARγ参与了非酒精性脂肪性肝病的损伤过程,可能是NASH发生的重要机制,TFHL和烯磷脂酰胆碱可能通过促进PPARα、PPARγ的表达,降低TNF-α的水平,从而减轻肝脏的炎性病变,有效地防治NASH。     

山楂叶总黄酮对非酒精性脂肪性肝炎大鼠组织COX-2/Nrf2表达的影响

观察山楂叶总黄酮(THFL)对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝脏COX-2/Nrf2表达的影响,探讨其抗NASH的作用机制。32只SD大鼠随机分成正常组、模型组、THFL高剂量组及THFL低剂量组,每组8只,以高脂饮食12周建立NASH大鼠模型,同时以250,125 mg·kg-1·d-1的TFHL进行干预,常规HE染色观察大鼠肝组织脂肪变和炎症程度,比色法测定T-AOC水平,免疫组织化学法检测肝组织8-OHdG水平及COX-2,Nrf2,HO-1蛋白表达,Real time-PCR法检测肝组织中COX-2,Nrf2,HO-1 mRNA表达。模型组大鼠肝组织脂肪变和炎症程度气球样变及NAFLD活动度积分(NAS)较正常组明显增强,总抗氧化能力(T-AOC)下降,DNA损害标志物8-OHdG水平增加,COX-2,Nrf2,HO-1 mRNA和蛋白表达较正常组显著增强;应用高、低剂量的TFHL干预后,肝组织炎症程度和NAS较模型组显著降低,8-OHdG水平、COX-2 mRNA和蛋白表达较模型组减少,Nrf2和HO-1 mRNA和蛋白的表达则较模型组显著增高。COX-2/Nrf2通路参与高脂饮食诱导的NASH的发生发展,TFHL能通过进一步促进Nrf2/HO-1表达,从而负调节COX-2,抑制COX-2的过表达,减轻氧化反应导致的细胞损伤和肝组织炎症,防止NASH的进展。     

基于网络药理学探讨山楂叶治疗非酒精性脂肪性肝炎作用机制

目的：利用网络药理学的研究方法探索山楂叶治疗非酒精性脂肪性肝炎的作用机制。方法：通过TCMSP筛选出山楂叶的有效成分及SwissTargetPrediction数据库获取药物的主要成分靶点基因;运用Genecards数据库查找疾病靶点基因;通过Venny2.1在线作图工作平台获取山楂叶成分靶点与疾病靶点的交集图,通过Cytoscape3.7.2软件构建药物-有效成分-靶点基因网络;并通过String数据库构建PPI蛋白网络、DAVID数据库进行基因GO分析和KEGG通路分析。结果：通过筛选共获得山楂叶有效成分6个,其中5个有效成分符合条件,分别为异鼠李素、槲皮素、山柰酚、豆甾醇、谷甾醇,药物靶点基因148个,疾病靶点基因有729个,共取得交集靶点基因41个。GO分析得出胆固醇储存的负调节、基因表达的负调控、胰岛素受体信号通路等10个生物过程,受体复合物、大分子复合物等10个细胞组成,酶结合、锌离子结合等10个分子功能。KEGG通路分析得出癌症的途径、HIF-1信号通路、AMPK信号通路等20条与之密切的相关通路,结论：山楂叶通过多靶点、多途径发挥其治疗非酒精性脂肪性肝炎的作用。     

山楂叶总黄酮自乳化颗粒对大鼠非酒精性脂肪肝的防治作用

目的:研究山楂叶总黄酮自乳化颗粒(HLFSG)对非酒精性脂肪肝模型大鼠的治疗作用.方法:SD大鼠40只,随机分成4组,以高脂饲料喂养建立非酒精性脂肪肝大鼠模型,以罗格列酮0.36 mg· kg-1作阳性对照,观察HLFSG(50 mg·kg-1)ig后对大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和肝组织中TC,TG,游离脂肪酸(FFA),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)的影响.结果:与模型组比较,HLFSG能显著降低非酒精性脂肪肝大鼠TC,TG,LDL-C,FFA,ALT,AST和肝MDA水平(P ＜0.05,P＜0.01),并能显著升高HDL-C水平和肝SOD活性(P ＜0.05,P＜0.01).结论:HLFSG可降低脂肪肝大鼠的血脂,保护肝功能,从而起到治疗大鼠脂肪肝的作用.     

山楂叶总黄酮对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织TNF-α、Leptin和IL-8表达的影响

目的:观察山楂叶总黄酮(TFHL)对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝组织脂肪细胞因子TNF-α、Leptin和IL-8表达的影响,探讨TFHL防治NASH的作用机制。方法:以高脂饮食喂养12周建立NASH大鼠模型,分别以250、125mg/kg.d-1的TFHL和195.4mg/kg.d-1的易善复进行干预,观察大鼠肝组织的病理改变,RT-PCR检测肝组织TNF-α、Leptin的mRNA表达,ELISA法检测大鼠血清及肝组织匀浆TNF-α、Leptin和IL-8的含量。结果:NASH模型组大鼠肝组织出现重度脂肪变、不同程度的炎细胞浸润及坏死灶;肝组织TNF-α、LeptinmRNA表达较正常组明显增强,血清TNF-α、Leptin、IL-8含量及肝组织匀浆TNF-α、IL-8含量较正常组显著增高。TFHL高、低剂量组和易善复组大鼠肝组织炎症活动程度、肝组织TNF-αmRNA表达、血清和肝组织匀浆TNF-α、IL-8含量均较模型组大鼠显著降低;肝组织LeptinmRNA表达、血清Leptin含量与模型组比较差异无显著性。结论:TF-HL可能通过调节细胞因子网络,抑制TNF-α、IL-8等的分泌,保护肝组织,有效地防治NASH。     

清热化湿法对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝型脂肪酸结合蛋白的影响

目的研究肝型脂肪酸结合蛋白(liver fatty acid binding protein,L-FABP)在大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)形成中的作用及清热化湿法对其影响。方法采用高脂饮食复制大鼠NASH模型。实验分为正常对照组、空白模型组、清热化湿方防治组、东宝肝泰(复方蛋氨酸胆碱片)对照组。原位杂交和Western免疫印迹(Western blot)方法测定各组大鼠肝组织L-FABP mRNA和蛋白表达的变化。结果与正常组相比,空白模型组大鼠肝组织L-FABP mRNA和蛋白表达明显增强(P<0.01);与空白模型组相比,清热化湿方防治组和东宝肝泰对照组大鼠肝组织L-FABP mRNA和蛋白表达减弱(P<0.01),清热化湿方作用优于东宝肝泰(P<0.01或P<0.05)。结论 L-FABP mRNA和蛋白表达增强引起脂质代谢失衡,参与NASH的发病。清热化湿方能调节L-FABP mRNA和蛋白的表达是其通过调节脂质代谢来防治NASH的作用机理之一。     

槲皮素对非酒精性脂肪性肝炎大鼠的影响

目的探讨槲皮素对非酒精性脂肪性肝炎大鼠的影响。方法 36只大鼠给予高脂饲料10周造模后,随机分为空白组、模型组及槲皮素低、高剂量组(40、80 mg/kg),每组9只。HE、油红O、Masson染色检测大鼠肝组织炎症损伤、脂肪变性,纤维化程度,免疫组化F4/80检测Kupffer细胞活化水平,Western blot检测大鼠肝脏PI3K、AKT、NF-κB p65、p-AKT1、p-NF-κB p65蛋白表达,荧光定量PCR检测大鼠肝脏PI3K、AKT1、AKT2、NF-κB mRNA表达。结果与模型组比较,槲皮素高剂量组明显改善大鼠肝脏脂质沉积和肝脏纤维化,减轻炎症细胞浸润,降低NAS评分,减少Kupffer细胞活化水平(P0.05);还能显著提高PI3K、AKT表达,降低NF-κB表达(P0.05)。结论槲皮素能通过调控PI3K/AKT/NF-κB信号通路来改善非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织脂肪变性程度,减轻肝脏炎症。     

黄芪多糖对实验性2型糖尿病大鼠肝脏组织中解耦联蛋白2表达的影响

目的研究高脂加STZ诱导的糖尿病大鼠肝脏组织中解耦联蛋白2(UCP2)表达变化,并探讨黄芪多糖(APS)对糖尿病治疗作用及可能机制。方法将雄性SPF级SD大鼠随机分为正常对照组(A组)、正常+APS对照组(B组)、糖尿病组(C组)及APS治疗组(D组),每组8只,饲养期间定期检测动物血糖(BG、FBG)、口服葡萄糖耐量(OGTT)、血胰岛素(FINS),计算胰岛素敏感指数(ISI)。于APS治疗第8周末,取各组动物的肝脏组织冻存,以West-ern blotting检测UCP2的表达。结果C组出现高血糖、糖耐量降低等2型糖尿病特征,经APS治疗8周后,D组各项实验指标均有显著改变,并且肝脏组织中UCP2表达水平较C组明显上升(P<0.01)。结论APS能够降低血糖,改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗,其作用机制可能与APS增加肝脏组织中UCP2表达有关。     

三七对酒精性肝病大鼠肝组织CYP2E1表达的影响

目的:观察三七对酒精性肝病大鼠肝组织CYP2E1表达及MDA含量、SOD活性的影响,探讨其防治酒精性肝病的作用机制。方法:采用白酒-玉米油-吡唑混合液连续灌服14周建立酒精性肝病模型,同时以高、低剂量的三七粉和硫普罗宁进行干预14周。免疫组化Envision法检测肝组织CYP2E1表达,黄嘌呤氧化酶法检测肝组织匀浆SOD活性,硫代巴比妥酸法检测MDA含量。结果:造模4周组织CYP2E1表达、MDA含量及SOD活性与同期正常组比差异无显著性;随酒精造模时间的延长,大鼠肝组织CYP2E1表达增强,MDA含量增加,SOD活性降低,造模8周、14周时CYP2E1表达和MDA含量较同期正常组明显增加(P<0.05,P<0.01),SOD活性则较同期正常组明显降低(P<0.05,P<0.01),且CYP2E1表达水平与MDA呈明显正相关(r=0.458,P<0.01),与SOD呈明显负相关(r=-0.541,P<0.01);应用三七和硫普罗宁干预14周后,CYP2E1表达和MDA含量较模型14周组明显下降,SOD活性较模型14周组明显增强。结论:三七能够显著的抑制酒精性肝病大鼠CYP2E1的表达,减轻脂质过氧化反应,这可能是其防治酒精性肝病的作用机制之一。     

五田保肝液对酒精性肝纤维化大鼠肝组织MMP-2及其抑制剂表达的影响

[目的]研究五田保肝液对酒精性肝纤维化大鼠肝组织中Ⅳ型胶原以及基质金属蛋白酶2(MMP-2)及其抑制因子TIMP-2表达的影响,探讨五田保肝液对大鼠酒精性肝纤维化的治疗效果和可能机制。[方法]随机将100只Wistar大鼠分成6组:正常组、五田保肝液低、中、高剂量组、模型组、阳性药对照组,其中正常组10只,其他各组均18只。采用白酒加少量玉米油、吡唑的混合物灌胃,制备大鼠酒精性肝纤维化模型,造模12周后处死大鼠,以免疫组化法检测大鼠肝组织Ⅳ型胶原蛋白的表达,实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠肝组织MMP-2、TIMP-2mRNA的表达。[结果]各组Ⅳ型胶原蛋白的表达均比正常组显著升高,但五田保肝液各剂量组和阳性药组Ⅳ型胶原蛋白的表达比模型组降低;模型组大鼠肝组织MMP-2、TIMP-2的mRNA表达比正常组显著升高,但TIMP-2的mRNA表达升高幅度更大;五田保肝液和阳性药组MMP-2mRNA的表达较模型组升高,但TIMP-2mRNA的表达较模型组降低,且五田保肝液以中、高剂量效果更明显。[结论]五田保肝液可能通过上调MMP-2的表达、下调TIMP-2的表达,从而抑制大鼠酒精性肝纤维化的发生发展。     

芪茵颗粒对非酒精性脂肪性肝病大鼠胰岛素抵抗和CYP2E1表达的影响

目的观察芪茵颗粒对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠模型胰岛素抵抗(IR)和肝细胞色素酶CYP2E1表达的影响,探讨芪茵颗粒治疗NAFLD的作用机制。方法将72只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、芪茵颗粒低剂量组、芪茵颗粒中剂量组、芪茵颗粒高剂量组和硫普罗宁组,每组12只。除空白组常规饲养、自由进食水外,其余组均采用高脂乳剂给大鼠灌胃,每日1次,共10周。模型复制成功后,各给药组给予相应药物灌胃,空白组和模型组灌胃等体积蒸馏水,每日1次,共10周。检测各组大鼠血清TC、TG、ALT、AST、空腹血糖和空腹胰岛素水平,计算胰岛素抵抗指数(HOME-IR);称大鼠体质量,计算肝指数;光镜下观察肝脏病理组织学变化,计算肝脏NAS积分;免疫组化法检测各组大鼠肝组织中CYP2E1的阳性表达细胞数。结果实验结束后,芪茵颗粒中剂量组和高剂量组体质量均明显低于模型组(P均<0.05);模型组肝指数及血清TC、ALT、AST水平和HOME-IR均明显高于空白组(P均<0.05),各给药组肝指数及血清ALT和AST水平均明显低于模型组(P均<0.05),芪茵颗粒高剂量组、芪茵颗粒中剂量组及硫普罗宁组HOMEIR均明显低于模型组(P均<0.05)。模型组肝脏NAS积分和CYP2E1阳性表达率均明显高于空白组(P均<0.05),各给药组肝脏NAS积分和CYP2E1阳性表达率均明显低于模型组(P均<0.05);芪茵颗粒中剂量组和高剂量组肝脏NAS积分均明显低于芪茵颗粒低剂量组(P均<0.05),且芪茵颗粒中剂量组明显低于硫普罗宁组(P<0.05);芪茵颗粒中剂量组和高剂量组CYP2E1阳性表达率均明显低于芪茵颗粒低剂量组和硫普罗宁组(P均<0.05)。结论芪茵颗粒可以控制NAFLD大鼠体质量增长,降低肝脏转氨酶水平、肝指数及肝细胞CYP2E1的表达,改善肝组织脂肪变性及IR,从而发挥治疗NAFLD的作用。     

针刺对大鼠颅脑损伤后轴突导向因子Slit2表达的影响

目的:观察神经导向因子Slit2在大鼠颅脑损伤后的表达变化,探讨针刺干预颅脑损伤后大鼠Slit2表达的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为针刺组、模型组、正常组,用改良Feeney打击法制成颅脑损伤模型,分别于损伤后48h、6d组取损伤局部脑组织,采用免疫组化法观察神经导向因子Slit2的表达变化,并进行统计学分析。结果:颅脑损伤后,模型组、针刺组颅脑损伤48h、6d后大鼠颅脑损伤脑组织中Slit2的表达均升高。与模型组相比较,针刺组Slit2表达显著升高,并有显著性差异(P<0.05)。针刺48h组与针刺6d组相比较,针刺48h组Slit2表达显著高于针刺6d组,有显著性差异(P<0.05)。结论:成年SD大鼠颅脑损伤后,针刺治疗对大鼠颅脑损伤后轴突导向因子Slit2表达具有明显的促进作用,并呈一定规律性,提示Slit2与颅脑损伤脑组织的修复相关。     

壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠血清Fas/FasL表达的影响

目的观察壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠血清Fas/Fas L表达的影响,探讨该组方抗肝纤维化的作用机制。方法将SD大鼠随机分为空白组、模型组和治疗组,除空白组外其余大鼠均采用CCl4复合因素法制作肝纤维化大鼠模型,模型制作成功后,治疗组给予壮肝逐瘀煎灌胃,空白组及模型组仅予等容量生理盐水灌胃。10周末所有大鼠经股静脉采血后处死并获取肝组织,HE染色光镜观察肝组织结构变化,ELISA法测定血清Fas、Fas L水平。结果光镜观察空白组肝小叶完整、结构正常,造模组肝纤维化程度明显,治疗组肝纤维化程度较轻;ELISA测定显示治疗组大鼠血清Fas和Fas L水平显著低于模型组(P均0.05)。结论壮肝逐瘀煎可有效治疗大鼠肝纤维化,其作用可能是通过下调Fas、Fas L的表达,抑制肝星状细胞凋亡而实现的。