苦参素对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响

目的探讨苦参素对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞-间质转分化的影响及可能机制。方法大鼠行单侧输尿管结扎（UUO）建立肾小管间质纤维化模型。实验分为假手术、UUO及苦参素治疗组。治疗组在UUO的基础上每天以苦参素100mg/kg腹腔注射。各组于术后第7、14、21天分别处死5只大鼠,分别检测大鼠血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）及24h尿蛋白定量。用PAS及Masson染色法观察肾脏病理改变。用免疫组织化学法观察转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad3、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Ⅰ型胶原（ColⅠ）的表达。用RT-PCR法测定肾组织TGF-β1及α-SMA mRNA水平。结果与UUO组比较,苦参素治疗组肾脏TGF-β1、Smad3、α-SMA及ColⅠ的表达明显减少,肾小管损害和肾间质纤维化的程度也明显减轻。治疗组TGF-β1 mRNA及α-SMA mRNA表达显著低于对应时间点的UUO组。结论苦参素可下调TGF-β1、ColⅠ的表达,抑制肾小管上皮细胞转分化及肌成纤维细胞的活化与增殖,其作用途径可能是通过下调Smad3的表达,从而干预Smad3介导的细胞内信号转导,最终减轻肾间质纤维化。     

槲皮素抗肺纤维化的分子机制研究

目的:探究槲皮素在体外抑制小鼠肺纤维化的潜在分子机制。方法:用TGF-β刺激小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞NIH3T3构建体外纤维化模型,然后用槲皮素处理,MTT法检测各组细胞不同时间(0、12、24、48 h)细胞增殖情况。ELISA法检测细胞培养液中Ⅰ型胶原Col1和透明质酸酶HA的含量;收集细胞并提取总RNA和总蛋白,采用RT-PCR法检测细胞中TGF-β1超家族信号转导蛋白7(Smad7)mRNA的表达;Western blot检测细胞中TGF-β1超家族信号转导蛋白7(Smad7)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)的表达。结果:槲皮素能够抑制TGF-β诱导NIH3T3细胞的增殖(P0.05)。ELISA检测结果显示槲皮素处理组细胞分泌的Col1与HA的含量较空白组降低(P0.05)。Western blot和RT-q PCR结果显示,Smad7表达水平较对照组显著升高(P0.05),α-SMA、FN蛋白的表达水平显著降低(P0.05)。结论:槲皮素能够缓解TGF-β诱导的小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞NIH3T3纤维化,作用机制可能是通过调控Smad7信号来实现的。     

芪参养肝方抗肝纤维化的实验研究

目的观察芪参养肝方对刀豆蛋白A(Con A)肝纤维化小鼠肝脏的肝星状细胞(HSC)活化、胶原合成及细胞因子α-SMA、TGF-β1分泌的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法将40只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、芪参养肝方组,造模期间芪参养肝方组给予芪参养肝方药液灌胃。检测3组小鼠肝功能、肝组织中羟脯氨酸含量和α-SMA、Col I、ColⅢ、TGF-β1mRNA表达以及α-SMA、Col I、TGF-β1蛋白表达情况。结果模型组血清ALT、AST水平及肝组织中羟脯氨酸含量均明显高于正常组(P均<0.05),而芪参养肝方组各指标水平均明显低于模型组(P均<0.05)。HE、天狼猩红染色显示,芪参养肝方组肝小叶破坏及胶原纤维增生较模型组明显减轻,胶原沉积明显好转。模型组肝组织中α-SMA、TGF-β1、Col I、ColⅢmRNA表达量及α-SMA、TGF-β1、ColⅠ蛋白表达量均明显高于正常组(P均<0.05),而芪参养肝方组各指标水平均明显低于模型组(P均<0.05)。结论芪参养肝方能抑制Con A肝纤维化小鼠α-SMA、TGF-β1分泌及HSC活化,促进活化的HSC凋亡;并能下调ColⅠ、ColⅢmRNA表达,抑制胶原纤维增生;其有保肝降酶、抗肝纤维化作用。     

氧化苦参碱对TGF-β1诱导的PANC-1细胞Smad3/Gli1通路相关因子表达的影响

目的研究氧化苦参碱(OM)对接受转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的人胰腺导管癌PANC-1细胞中Smad3/Gli1通路相关因子表达的影响。方法以TGF-β1刺激PANC-1细胞模拟胰腺纤维化模型,并观察给予OM干预对Smad3/Gli1通路相关因子表达的影响。通过细胞转染技术将Gli1及Smad3的RNA干扰质粒转染入PANC-1细胞;通过Western blotting技术检测Smad3、Gli1和α-SMA的蛋白表达,ELISA技术检测纤连蛋白(FN)和I型胶原(Co L-I)在细胞培养上清中的表达。结果与对照组相比,PANC-1细胞接受TGF-β1刺激后Smad3、Gli1和α-SMA的蛋白表达显著升高;与TGF-β1组相比,OM和TGF-β1共同处理组Smad3、Gli1和α-SMA的蛋白表达显著降低。转染Smad3干扰质粒后,Gli1、α-SMA、FN和Co L-I表达显著下降。与TGF-β1组比较,转染Gli1干扰质粒后加TGF-β1组α-SMA、FN和Co L-I表达显著降低。结论 OM可能通过调节PANC-1细胞TGF-β1/Smad3/Gli1通路发挥抗胰腺纤维化作用。     

蒿属香豆素对MCD饮食诱导的非酒精性脂肪性肝纤维化小鼠保护性作用的研究

目的:探讨中药茵陈蒿的主要成分蒿属香豆素对蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)诱导的非酒精性脂肪性肝纤维化小鼠的作用及分子机制。方法:采用MCD饲料喂养小鼠6 周进行造模,将50只20 g左右的ICR雄性小鼠随机分为五组:空白对照组,模型组,丹酚酸B组(10 mg/kg),蒿属香豆素低剂量组(30 mg/kg),蒿属香豆素高剂量组(60 mg/kg)。造模后1周灌胃,5周后取小鼠肝脏组织和血清进行实验,对肝脏组织进行病理检查。通过试剂盒检测各组小鼠血清生化指标,比色法测肝脏组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。Western blot方法测小鼠肝脏组织液α-SMA,Ⅰ型胶原蛋白,E钙黏蛋白,波形蛋白、转化生长因子β₁(TGF-β₁)通路蛋白的表达。结果:不同剂量蒿属香豆素组和丹酚酸B组的NAS评分、MDA水平、α-SMA、Ⅰ型胶原、波形蛋白的表达明显降低,E钙黏蛋白、SOD水平显著增高(P<0.05),TGF-β₁及p-Smad2/3的表达降低,Smad7的表达明显增高(P<0.05)。结论:蒿属香豆素能抑制TGF-β/Smad通路,有效改善肝脏脂质沉积,降低小鼠肝脏组织内氧化应激水平,逆转上皮间质转化,减轻纤维化。     

镰形棘豆提取物对人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:本实验通过观察镰形棘豆提取物含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的作用,探讨其在肾间质纤维化方面的作用及机制。方法:采用镰形棘豆提取物(300mg/kg)给大鼠灌胃,每天2次,连续3天。3天后大鼠股动脉采血,分离血清,即得镰形棘豆提取物含药血清。体外培养HK-2细胞,培养基为含10%胎牛血清的DMEM/F12(1:1);细胞分为4组:空白对照组、空白血清对照组(TGF-β1 10 ng/ml+10%空白血清)、镰形棘豆提取物组(TGF-β1 10 ng/ml+10%镰形棘豆提取物含药血清)、转化生长因子-β1诱导组(TGF-β1 10 ng/ml)。药物干预细胞后,采用免疫组化技术测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达,ELISA技术测Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和纤连蛋白(FN)的含量,荧光定量PCR检测转化生长因子-β受体I(TβRI)、受体II(TβRII)的mRNA表达,Western blot检测Smad 2、smad 3的蛋白表达。结果:正常的HK-2细胞只表达E-cadherin,不表达α-SMA。但经TGF-β1诱导后细胞转分化,E-cadherin的表达开始减弱,α-SMA表达逐渐增强,药物干预后,α-SMA表达明显减弱,E-cadherin表达增强。与空白对照组相比,TGF-β1诱导组ColⅠ、ColⅢ、FN的含量显著增加,在24h时分别为(197.4±0.7)、(32.7±0.2)、(754.5±4.1),72h时分别为(216.4±0.8)、(38.3±0.1)(995.4±1.5),P﹤0.05;与TGF-β1诱导组相比,镰形棘豆提取物组ColⅠ、ColⅢ、FN的分泌显著下降,72h时作用更为显著,含量分别为(205.5±0.7)、(35.0±0.3)、(892.4±0.9),P﹤0.05。与空白对照组相比,TGF-β1诱导组TβRI(11.08±0.10)、TβRII(11.57±0.12)的mRNA表达和Smad 2(0.971±0.017)、smad 3(0.972±0.011)的蛋白表达显著上升,P﹤0.05;与TGF-β1诱导组相比,镰形棘豆提取物组TβRI(9.788±0.379)、TβRII(8.452±0.250)mRNA表达和Smad 2(0.536±0.013)、Smad3(0.530±0.035)蛋白表达也减少,P﹤0.05。空白血清则无此作用。结论:镰形棘豆提取物能够减少细胞外基质成分分泌,调控Smads信号通路,抑制肾小管上皮细胞转分化,在一定程度上具有防治肾间质纤维化的作用。     

补阳还五汤合参芪地黄汤化裁调控 VEGF-C/VEGFR3 通路抑制淋巴管新生对糖尿病肾病小鼠的保护作用

目的 基于调控 VEGF-C/VEGFR3 通路抑制淋巴管新生探讨补阳还五汤合参芪地黄汤化裁对糖尿病肾 病 （DKD） 小鼠的保护作用及机制。方法 将 24 只雄性 db/db 小鼠随机分为模型组、中药组 （补阳还五汤合参芪 地黄汤化裁,生药量 24.44 g·kg-1 ） 和西药组 （厄贝沙坦,13.5 mg·kg-1 ） ,每组 8 只,另外取 8 只 db/m 小鼠作为 对照组。灌胃给药,每日 1 次,连续 12 周。检测小鼠血糖 （FBG） 、总胆固醇 （TC） 、甘油三脂 （TG） 、尿白蛋白/ 肌酐比值 （ACR） 及肾脏指数;采用 HE、Masson 染色法观察肾脏组织病理变化;免疫组化法检测肾脏组织纤连 蛋白 （FN） 、Ⅰ型胶原蛋白 （ColⅠ） 、波形蛋白 （Vimentin） 、α 平滑肌肌动蛋白 （α-SMA） 、转化生长因子 β1 （TGF-β1） 、血管内皮生长因子受体 3 （VEGFR3） 、血管内皮生长因子 C （VEGF-C） 、淋巴管内皮透明质酸受体 1 （LYVE-1） 、平足蛋白 （PDPN） 、肿瘤坏死因子 α （TNF-α） 和白细胞介素 1β （IL-1β） 的表达;Western Blot 法检 测肾脏组织 ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、LYVE-1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达; Real-time PCR 法检测肾脏组织 FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、VEGFR3、TNF-α、IL-1β mRNA 表达。 结果 与对照组比较,模型组小鼠的血清 FBG、TG、TC、ACR 水平及肾脏指数均明显升高 （P＜0.05） ;肾小 球肥大,系膜外基质增加,基底膜增厚,囊腔变窄,肾小管上皮细胞变性、坏死,间质有大量炎性细胞浸润, 肾小管萎缩,纤维化水平明显升高 （P＜0.05）;肾间质中 FN、ColⅠ、Vimentin、α -SMA、TGF- β1、 VEGFR3、LYVE-1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达,胞质中 VEGF-C 蛋白表达及肾小管毛细血管周围 VEGFR3、 PDPN 蛋白表达均明显上调 （P＜0.05） ;肾脏组织中 ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、 LYVE-1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达均明显上调（P＜0.05）;肾脏组织中 FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、 VEGFR3、TNF-α、IL-1β mRNA 表达水平均明显升高 （P＜0.05） 。与模型组比较,中药组小鼠的血清 TG、TC、ACR 水平均明显降低 （P＜0.05） ;肾脏组织损伤有不同程度好转,炎性细胞浸润有一定程度减轻,纤维化水平 明显降低 （P＜0.05） ;肾间质中 FN、ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、LYVE-1、TNF-α、IL-1β 蛋白表达,胞质中 VEGF-C 蛋白表达及肾小管毛细血管周围 VEGFR3、PDPN 蛋白表达均明显下调 （P＜0.05） ; 肾脏组织中 ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达均明 显下调 （P＜0.05） ;肾脏组织中 FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、VEGFR3、TNF-α、IL-1β mRNA 表达水平均明 显降低 （P＜0.05） 。结论 补阳还五汤合参芪地黄汤化裁可降低 DKD 小鼠肾脏组织炎症及纤维化水平,其机制 可能与调控 VEGF-C/VEGFR3 通路抑制淋巴管新生有关。     

缓衰口服液对动脉粥样硬化性肾动脉狭窄小鼠肾脏低氧-微血管荒废-肾间质纤维化的影响

目的探讨缓衰口服液对动脉粥样硬化性肾动脉狭窄(ARAS)小鼠肾脏低氧-微血管荒废-肾间质纤维化病理过程的影响机制。方法通过对Apo E-/-小鼠喂以高脂饲料,并行左侧肾脏切除术,建立ARAS动物模型。手术2周后,将模型小鼠随机分为缓衰口服液组(中药组)、模型组,另设空白组(C57BL/6J小鼠)。中药组用缓衰口服液0.01 m L/(g·d)灌胃,空白组和模型组予0.01 m L/(g·d)生理盐水灌胃。给药12周后,取材,检测肾功能,Masson染色观察肾间质纤维化程度,免疫组化法检测各组小鼠肾脏Ⅳ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血管性血友病因子(v WF)的表达,RT-PCR检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和转化生长因子-β(TGF-β)的表达情况。结果与空白组比较,模型组小鼠肾功能不全明显,肾动脉狭窄严重,肾间质纤维化明显,HIF-1α、TGF-β、Ⅳ型胶原和α-SMA表达明显增加(P0.05),v WF表达明显减少(P0.05);与模型组比较,中药组HIF-1α、TGF-β、Ⅳ型胶原和α-SMA表达明显减少(P0.05),v WF表达明显增加(P0.05)。结论缓衰口服液对ARAS小鼠的肾功能和肾间质纤维化有明显改善作用,该作用可能与其对缺血性肾脏HIF-1α和TGF-β表达的抑制有关。     

黄芪甲苷对大鼠心肌纤维化的影响

目的:研究黄芪甲苷(astragaloside IV)对大鼠心肌纤维化的影响和作用机制。方法:异丙肾上腺素腹腔注射造成心肌纤维化模型。大高鼠随机分为空白对照组、异丙肾上腺素模型组(10mg/kg)、异丙肾上腺素+普萘洛尔组(40mg/kg)、异丙肾上腺素+黄芪甲苷组(40mg/kg);30天后处死大鼠,分别测量大鼠全心质量指数HMI和左心室质量指数LVMI,进行组织形态学染色,测定血清中Ⅰ型前胶原羧基端前肽(PⅠCP)及其抑制物Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(ⅠCTP);分别检测转化生长因子β(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、Smad2/3、Smad4、Smad7、肌动蛋白α(α-SMA)的表达。结果:异丙肾上腺素模型组的HMI、LVMI较空白组明显增加;血清中PⅠCP、ⅠCTP含量增高;TGF-β1、Smad2/3、Smad 4、α-SMA含量增高,Smad7含量减少。与模型组相比,黄芪甲苷(40mg/kg)能明显降低HMI及LVMI的比例,降低TGF-β1、Smad2/3、Smad 4、α-SMA含量,Smad7含量增加,PⅠCP、ⅠCTP含量降低。结论:黄芪甲苷对异丙肾上腺素所致的大鼠心肌纤维化有保护作用,可能与黄芪甲苷能降低TGF-β1以及α-SMA产生、能够抑制TGF-βSmad通路有关。     

撤药析方分析五灵胶囊配伍及组方成分抗肝纤维化作用

目的: 探讨五灵胶囊(Wuling Capsule,WL)组方成分和撤药组在方中的效应及对全方功效的影响。 方法: 采用四氯化碳多次注射,饮用10%乙醇溶液并以高脂低蛋白饲料饲养制备小鼠肝纤维化模型,分别给予试验药物治疗10 d,酶法测定各实验组小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、胆碱酯酶(CHE);体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6细胞并采用转化生长因子(TGF-β1)诱导其活化,研究撤药组及组成成分对HSC-T6表达Ras/ERK,TGFβ/Smad信号通路蛋白的影响,Western blot检测α-SMA,Ras,CollagenⅠ,ERK,p-ERK,TβRⅠ,TβRⅡ,Smad2/3蛋白的表达。 结果: WL、组成成分和撤药组降低肝纤维化小鼠血清ALT和增加CHE活性,柴胡和灵芝无降ALT作用,各撤药组及组成成分对TGF-β1诱导 HSC-T6表达α-SMA,CollagenⅠ,ERK,p-ERK,TβRⅠ,TβRⅡ,Smad2/3蛋白具有差异性生物学效应。 结论: 组方配伍对WL治疗纤维化小鼠作用产生相加的影响,抑制对TGF-b1诱导HSC-T6表达ERK和TGF-β/Smad信号通路蛋白表达,继而影响HSC-T6转录和合成COL-Ⅰ。     

益肺汤调控TGF-β1/Smad2通路抗肺纤维化机制研究

目的:研究益肺汤含药血清对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肺成纤维细胞(NIH-3T3)的影响,探讨其抑制肺纤维化的作用机制。方法:采用SPF级C57小鼠灌胃益肺汤,1次/d,连续给药3 d制备含药血清。实验分为正常对照组、模型组、模型+正常血清组、模型+含药血清组,给药48 h后0.1%FBS的培养基饥饿处理24 h, 100 ng/μl的AngⅡ诱导造模24 h。免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA);免疫荧光检测Smad2;Western blot检测Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、α-SMA、纤维连接蛋白(FN)、Smad2;ELISA检测细胞上清转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况。结果:Western blot和免疫荧光显示,造模后,α-SMA、FN、ColⅠ、Smad2的蛋白相对表达显著升高,差异具有统计学意义(均P<0.05)。益肺汤含药血清干预48 h后造模,α-SMA、FN、Smad2、ColⅠ的相对量较模型组下降(均P<0.05)。ELISA结果显示,造模后,TGF-β1的相对表达显著升高(P<0.05),益肺汤含药血清干预48 h后,TG...     

虫草素调控eIF2α/TGF-β/Smad信号通路 改善肾间质纤维化的机制

目的:观察冬虫夏草主要有效成分——虫草素(cordycepin)对肾间质纤维化及其e IF2α/TGF-β/Smad信号通路的干预作用和机制。方法:将15只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和虫草素组,建立小鼠单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾间质纤维化模型,虫草素组小鼠经皮下注射虫草素(5 mg·kg-1·d-1),同时,以生理盐水干预对照组和模型组,共5 d。实验结束后,取小鼠结扎侧的肾脏,观察肾间质纤维化病理特征,并测定肾组织I型胶原(collagen type I,Col I)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)核酸表达(Northern blot);另外,在体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E细胞),在转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β联合或不联合虫草素干预后,观察I型胶原、IV型胶原(collagen type IV,Col IV)核酸表达的变化(Northern blot),并检测e IF2α、磷酸化e IF2α(phosphorylated e IF2α,p-e IF2α)以及Smad2/3、磷酸化Smad2/3(phosphorylated Smad2/3,p-Smad2/3)蛋白表达的变化(Western blot)。结果:虫草素在体内改善模型鼠肾间质纤维化,包括纤维化的病理特征以及I型胶原、α-SMA核酸的表达;虫草素在体外促进NRK-52E细胞p-e IF2α的高表达,抑制TGF-β诱导的p-Smad2/3以及I型、IV型胶原的表达水平。结论:虫草素在体内有改善肾间质纤维化的作用,它可能是通过诱导e IF2α磷酸化,抑制TGF-β/Smad信号通路中的关键信号分子——p-Smad2/3表达,减少肾组织胶原和α-SMA表达等途径而改善肾间质纤维化。     

黑地黄丸通过调控IGF-1表达对慢性肾衰竭大鼠肾纤维化的抑制作用

目的 探讨黑地黄丸对慢性肾衰竭大鼠肾纤维化的影响及其作用机制。方法 Wistar大鼠随机分为空白组(正常饲养)和造模组,造模组大鼠采用5/6肾切除手术构建CRF大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、黑地黄丸组(10.43 g/kg)及黑地黄丸+IGF-1R阻断剂(JB1)组(连续7 d皮下注射18μg/kg JB1后灌胃10.43 g/kg黑地黄丸)。给药8周后,检测大鼠血清Scr、BUN水平,HE和Masson染色观察肾组织病理变化,免疫组化法检测肾组织TGF-β、HIF-1α、α-SMA蛋白表达,Western blot法检测肾组织IGF-1R、TGF-β蛋白表达,RT-qPCR法检测肾组织IGF-1R、TGF-β mRNA表达。结果 与空白组比较,模型组血清Scr、BUN水平升高(P<0.05),肾组织纤维化程度加重,纤维化面积增加(P<0.05),肾组织TGF-β、HIF-1α、α-SMA蛋白表达和TGF-β mRNA表达升高(P<0.05),IGF-1R mRNA和蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,黑地黄丸组大鼠血清Scr、BUN水平降低...     

参地补肾胶囊对高糖培养的肾小管上皮细胞TGF-β1、α-SMA和E-cadherin mRNA表达的影响

目的:观察参地补肾胶囊对高糖培养下肾小管上皮细胞TGF-β1、α-SMA、E-cadherin mRNA表达的影响,探讨参地补肾胶囊抗肾间质纤维化的作用机制。方法:以高糖培养的人肾小管上皮细胞作为研究对象,采用血清药理学研究方法和Real-time PCR检测技术,观察空白对照组、高糖模型组、参地补肾胶囊组和贝那普利组的TGF-β1、α-SMA、E-cadherin mRNA的表达,采用SPSS19.0统计软件进行统计分析。结果:高糖培养下的人肾小管上皮细胞TGF-β1、α-SMA mRNA的表达与空白对照组比较明显增加(P0.05),E-cadherin mRNA的表达与空白对照组比较明显降低(P0.05);参地补肾胶囊组能够下调肾小管上皮细胞对TGF-β1、α-SMA mRNA的表达,上调E-cadherin mRNA的表达,与高糖模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:本研究表明参地补肾胶囊通过下调高糖刺激的人肾小管上皮细胞对TGF-β1、α-SMA mRNA的异常表达,上调E-cadherin mRNA的异常表达,从而发挥抗肾间质纤维化的作用。     

止消通脉宁干预转化生长因子-β1诱导人肾小管上皮细胞表型转化的研究

目的观察止消通脉宁药物血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)表型转化的影响,并探讨其机制。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养并分为空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁药物血清)。药物干预24 h后,免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。在24、48、72 h应用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和纤连蛋白(FN)的含量。结果正常HK-2细胞表达E-cadherin,不表达α-SMA,经TGF-β1刺激后细胞表型发生转变,E-cadherin的表达明显减弱,α-SMA表达明显增强,且ColⅠ、ColⅢ和FN的分泌明显增加,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。止消通脉宁药物血清干预后α-SMA表达明显减弱,E-cadherin表达明显增强;同时抑制了ColⅠ、ColⅢ和FN的分泌,与TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论止消通脉宁在一定程度上能够抑制人肾小管上皮细胞表型转化,减少细胞外基质成分的分泌,具有防治肾间质纤维化的作用。     

益气活血法对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

[目的]观察益气活血法中药方剂对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、果蝇MAD类似基因2/3(Smad 2/3)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的调节,探讨其对肾小管上皮细胞转分化的影响.[方法]采用单侧输尿管结扎致.肾间质纤维化大鼠模型.将30只大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、中药大剂量组、中药中剂量组、中药小剂量组、西药组.术后14 d,观察梗阻肾组织病理改变,用免疫组化方法检测肾组织TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达.[结果]益气活血法能减轻肾间质纤维化程度,并能下调TGF-β1、Smad 2/3和α-SMA的表达.[结论]益气活血法可通过下调TGF-α、Smad 2/3和α-SMA的表达,从而抑制大鼠肾小管上皮细胞转分化.     

Smad3基因敲除对5/6肾切除慢性肾脏纤维化小鼠模型的影响

目的 观察Smad3基因敲除对5/6肾切除慢性肾纤维化小鼠模型的影响。方法 清洁级WT-C57及Smad3-KO(以下简写S3-KO)小鼠各24只，分为假手术野生组(SWT)、假手术Smad3-KO组(SS3-KO)和模型野生组(MWT)、模型Smad3-KO组(MS3-KO)4组，模型组以platt法建立慢性肾脏纤维化模型，造模后4周，检测各组小鼠血中肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24h尿蛋白(U-Pro/24h)含量、病理形态学变化；免疫荧光染色法观察肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),I型胶原蛋白(CollageI),纤维连接蛋白(FN)的表达面积变化；蛋白免疫印迹法(WB)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测各组小鼠肾组织TGF-β1、p-Smad3、α-SMA、CollageI、FN蛋白及mRNA的表达水平；免疫组化法观察肾组织内中性粒细胞阳性表达个数的变化。结果 与假手术组比较，MWT组P-smad3蛋白，Smad3mRNA明显增高(P<0.01),MS3-KO组虽有增高，但无显著性差异(P>0.05)。HE染色SWT,SS3-KO组肾小球形态基...     

黄芪总黄酮对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的影响

目的探究黄芪总黄酮对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的影响。方法大鼠随机分为正常组、模型组、阳性组(秋水仙碱,50 mg/kg)和黄芪总黄酮低、中、高剂量(25、50、100 mg/kg)组。HE染色观察大鼠组织病理学变化,ELISA法检测大鼠血清ALT、AST活性及HA、LN、PCⅢ、CⅣ、IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western blot法检测α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smad4蛋白表达。结果与模型组比较,黄芪总黄酮组能抑制肝细胞坏死、炎细胞浸润以及纤维化,显著降低ALT、AST活性,HA、LN、PCⅢ、CⅣ,以及IL-1β、IL-6、TNF-α水平和α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smad4蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论黄芪总黄酮可抑制四氯化碳诱导大鼠肝纤维化,其作用机制可能与抑制TGF-β1/Smad信号通路介导的炎症反应有关。     

穿心莲内酯对胰腺癌细胞顺铂敏感性的作用机制研究

目的：探讨穿心莲内酯对胰腺癌细胞顺铂敏感性的作用和机制。方法：将人胰腺癌细胞SW1990分成对照组、穿心莲内酯组(穿心莲内酯处理)、顺铂组(顺铂处理)、穿心莲内酯+顺铂组(穿心莲内酯、顺铂处理)、穿心莲内酯+顺铂+转化生长因子-β₁(TGF-β₁)组(穿心莲内酯、顺铂、TGF-β₁处理)、TGF-β₁组(TGF-β₁处理),Western Blotting检测TGF-β₁、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白表达,MTT检测增殖,流式细胞术检测凋亡,Transwell小室检测侵袭和迁移。结果：与对照组比较,穿心莲内酯组胰腺癌细胞TGF-β₁、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白表达量减少(P<0.05),TGF-β₁组胰腺癌细胞p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3蛋白表达量增多(P<0.05)。与对照组比较,穿心莲内酯组、顺铂组、穿心莲内酯...     

苗药宽叶腹水草对CCl4致肝纤维化小鼠的治疗作用及其机制研究

目的:研究苗药宽叶腹水草对CCl₄所诱导肝纤维化小鼠的治疗作用及可能机制。方法:将60只SPF级昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱(0.2kg)、高(800mg/kg)组及宽叶腹水草水提物低(200mg/kg)、中(400mg/mg/kg)剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组小鼠均皮下注射CCl₄(CCl₄与橄榄油溶液1∶1混合)诱导肝纤维化,2次/w,连续8w。从造模第5周开始,正常对照组和模型组小鼠灌胃生理盐水,其余各组小鼠均灌胃相应药物治疗,1次/d,连续4w。末次给药处死所有小鼠后,收集肝脏,计算肝脏指数,HE及Masson染色观察肝组织病理学变化;全自动生化仪检测肝功能指标ALT、AST、ALP、ALB、TP水平;ELISA法检测纤维化指标PCⅢ、ColⅣ、LN、HA及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平;试剂盒检测小鼠血清SOD、GSH-Px、MDA水平;WesternBlot检测肝组织中α-SMA、TGF-β、Smad2、Smad3蛋白表达。结果:宽叶腹水草能显著升高CCl