红芪多糖对线粒体途径介导的膀胱癌细胞凋亡的影响

目的：观察红芪多糖对线粒体途径介导的膀胱癌细胞凋亡的影响,并探讨可能机制。方法：取对数期T24细胞,随机分为对照组（常规培养）、红芪多糖组（加入红芪多糖0.8 μg/L）、SP600125组（加入SP600125 10 μmol/L）、联合组（加入红芪多糖0.8 μg/L、SP600125 10 μmol/L）。MTT法检测细胞增殖能力;双染法检测细胞凋亡率;JC-1法检测细胞线粒体损伤;免疫印迹法检测细胞相关蛋白表达。结果：与对照组比较,红芪多糖组24、48、72 h吸光度值、线粒体膜电位、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白表达量降低;凋亡率,Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）蛋白表达量,p-c-Jun氨基末端激酶（JNK）/JNK、p-c-Jun/c-Jun升高（均P<0.05）。SP600125组24、48、72 h吸光度值,线粒体膜电位、Bcl-2蛋白表达量升高;凋亡率,Bax、Caspase-3蛋白表达量,p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun降低（均P<0.05）。与红芪多糖组比较,联合组24、48、72 h吸光度值、线粒体膜电位、Bcl-2蛋白表达量升高;凋亡率,Bax、Caspase-3蛋白表达量,p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun降低（均P<0.05）。结论：红芪多糖可抑制膀胱癌T24细胞增殖,并通过介导线粒体途径促进其凋亡,作用机制可能与激活JNK/c-Jun信号通路有关。     

黄连素对人胃癌细胞SGC7901凋亡影响的研究

目的:探讨黄连素对人胃癌细胞SGC7901凋亡的影响。方法:MTS法检测不同浓度的黄连素(100、150、200μmol/L)对胃癌细胞的抑制作用,Hoechst 33258染色检测不同浓度的黄连素(100、150、200μmol/L)对细胞凋亡的影响;Real Time Q-PCR检测胃癌细胞中Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax的mRNA表达;Western blot检测胃癌细胞中Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果:不同浓度的黄连素能显著降低人胃癌细胞SGC701活性(P<0.05,P<0.01),促进其凋亡,升高Cleaved Caspase-3、Bax的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),降低Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:不同浓度的黄连素可诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能与升高Cleaved Caspase-3、Bax的表达,降低Bcl-2的表达有关。     

MAPK信号转导通路在人参多糖诱导白血病K562细胞凋亡中的作用

目的 探讨人参多糖诱导白血病K562细胞凋亡的机制.方法 将对数生长期K562细胞分成对照组和人参多糖组,对照组细胞常规培养,人参多糖组细胞培养体系中加入人参多糖0.4 g/L.各组细胞培养48 h后,流式细胞术和Hoechst33258染色法检测K562细胞凋亡情况;RT-PCR检测细胞p38、JNK基因表达;采用免疫荧光实验检测细胞中p-p38、p-JNK蛋白表达,测定Caspase-3的活性;Western blotting检测细胞中p38、JNK、p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3蛋白的变化.结果 与对照组比较,人参多糖组K562细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),出现明显的细胞核固缩现象,K562细胞p38 mRNA与JNK mRNA明显增多.免疫荧光检测显示,p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3表达明显增强且向胞核转移;Western blotting检测显示,人参多糖组K562细胞p38、JNK总蛋白无明显变化(P＞0.05); p-p38、p-JNK、cleaved Caspase-3有增加的趋势(P＜0.05).结论 人参多糖能促进K562细胞凋亡,其作用可能是通过影响MAPK信号传导通路实现的.     

大蒜素对KG-1细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

大蒜素是大蒜中主要的生物活性物质,具有抗菌、降血脂等多种药理作用。该研究通过凋亡相关指标的检测,来探讨大蒜素对KG-1细胞增殖抑制的分子生物学机制。采用流式细胞术检测大蒜素诱导KG-1细胞的凋亡率;采用RT-q PCR法检测大蒜素对KG-1细胞Bax,Bcl-2,survivin,ERK基因mRNA表达水平的影响;通过Western blot法检测大蒜素对KG-1细胞caspase 3,cleaved caspase 3,ERK1/2,p-ERK1/2,survivin蛋白表达水平的变化。结果表明,与对照组相比,大蒜素能够显著抑制KG-1细胞的增值活性,并且呈显著浓度依赖性和时间依赖性;流式细胞术检测显示大蒜素能够诱导KG-1细胞的凋亡,并且主要是晚期凋亡。RT-q PCR结果显示,大蒜素作用于KG-1细胞后,与凋亡相关的基因Bax的mRNA表达升高,Bcl-2,survivin,ERK基因的mRNA表达降低;Western blot法结果显示,大蒜素作用于KG-1细胞后执行凋亡的蛋白caspase 3及其活性形式cleaved caspase 3升高,促生存的相关蛋白survivin,ERK1/2和其活性形式p-ERK1/2表达下降,其中p-ERK1/2的下调呈剂量依赖性。以上结果提示,大蒜素主要通过诱导KG-1细胞的晚期凋亡来抑制其增殖;凋亡的执行有cleaved caspase 3的参与;凋亡的诱导涉及到蛋白水平,ERK1/2,survivin表达的降低和p-ERK1/2剂量依赖性的减弱;mRNA水平涉及到Bax的升高,survivin,Bcl-2,ERK1/2的下调。     

慢性肾衰竭营养不良大鼠骨骼肌细胞凋亡及中药的干预实验

目的:观察慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)营养不良大鼠骨骼肌细胞凋亡情况,及中药肾衰养真胶囊对其的影响。方法:SD雄性大鼠,采用5/6肾切除同时予4%酪蛋白饮食制作CRF营养不良大鼠模型,随机分为正常组,模型组,中药组和西药组。治疗4周后,检测肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、白蛋白(Alb)、血红蛋白(Hb),TUNEL法检测骨骼肌细胞凋亡率,Western Blot检测骨骼肌细胞凋亡蛋白酶3(Caspase-3)活性片段(Cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因相关蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平。结果:模型组大鼠骨骼肌细胞凋亡率明显增加(P0.01),Cleaved Caspase-3和Bax表达均显著增加(P0.01),Bcl-2表达显著下降(P0.01)。中药干预后,CRF营养不良大鼠骨骼肌细胞凋亡率显著减少(P0.01),Cleaved Caspase-3和Bax表达均显著下降(P0.01),Bcl-2表达显著增加(P0.01),同时大鼠Alb、Hb显著升高(P0.01)。结论:Caspase-3依赖的细胞凋亡可能参与了CRF营养不良骨骼肌蛋白的降解,并诱导了骨骼肌萎缩。中药肾衰养真胶囊可能通过下调Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,抑制骨骼肌细胞凋亡,从而改善CRF营养不良。     

亚麻木酚素联合硼替佐米诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制研究

目的:探讨亚麻木酚素(SDG)联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bortezomib,Bor)对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其机制。方法:MTT法检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞法和Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡;比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性;Real Time PCR检测Caspase-3、BCL-2、BAXmRNA的表达;Western Blot检测BCL-2、Bax及p-JNK的蛋白表达。结果:SDG联合Bor能明显抑制细胞生长,上调Caspase-3活性,促进p-JNK、BAX mRNA和蛋白的表达,抑制BCL-2 mRNA和蛋白的表达,诱导细胞凋亡。结论:SDG联合Bor可显著诱导肺腺癌A549细胞的凋亡,其机制可能与其激活JNK信号通路有关。     

基于ERK/MAPK信号通路探讨青藤碱对SW480结肠癌细胞活性抑制作用的研究

目的:探讨青藤碱对SW480结肠癌细胞活性抑制作用及对细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号通路的影响。方法:选用SW480人结肠癌细胞株,设对照组、空白组及青藤碱不同剂量组,分别采用相应药物进行处理。采用CCK-8法检测青藤碱对SW480细胞增殖的抑制作用,采用流式细胞术分析青藤碱对SW480细胞凋亡的影响,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测各组SW480细胞B淋巴细胞瘤2(B lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 related X protein,Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteine-containing aspartic acid proteolytic enzymes-3,Caspase-3)、细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinase 1/2,ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(phosphorylated ERK1/2,p-ERK1/2)蛋白表达水平。结果:干预24、48、72 h后,与对照组比较,青藤碱4、8、16、20 mmol/L组SW480细胞增殖抑制率较高,且青藤碱4 mmol/L组8 mmol/L组16 mmol/L组及20 mmol/L组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,青藤碱4、8、16 mmol/L组SW4800细胞凋亡率较高,Bax、Caspase-3蛋白表达水平较高,且青藤碱4 mmol/L组8 mmol/L组16 mmol/L组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,青藤碱4、8、16 mmol/L组Bc L-2、p-ERK1/2蛋白表达水平较低,且青藤碱4 mmol/L组8 mmol/L组16 mmol/L组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:青藤碱能剂量依赖性抑制SW480结肠癌细胞增殖活性,促进细胞凋亡,其作用可能与抑制ERK/MAPK信号通路活性,调节Bc L-2、Bax、Caspase-3等相关凋亡蛋白表达有关。     

吴茱萸碱抑制HDAC6促进人白血病K562细胞周期阻滞和凋亡的机制研究

目的探讨吴茱萸碱通过抑制组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)促进人白血病K562细胞周期阻滞以及凋亡的机制。方法采用CCK-8法检测吴茱萸碱对K562细胞增殖的影响;流式细胞术检测K562细胞周期和凋亡;化学比色法检测K562细胞HDAC6活性;Western blotting法检测K562细胞中HDAC6、Cyclin D1、CDK4、Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、ERK、p-ERK、p38和p-p38蛋白的表达。结果 CCK-8法结果提示,吴茱萸碱在一定浓度范围内(1~16μmol/L)可以有效抑制K562细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性;流式细胞术结果显示,吴茱萸碱可将K562的细胞周期阻滞于G0/G1期;2、4、8μmol/L吴茱萸碱诱导K562细胞48 h后,其凋亡率分别为(11.47±1.05)%、(12.77±0.79)%和(18.58±1.37)%,与对照组(2.79±1.01)%相比差异显著(P0.01);化学比色法结果显示,吴茱萸碱能有效抑制HDAC6的活性;Western blotting结果显示,吴茱萸碱能上调Bax、Cleaved Caspase-3、p38和p-p38蛋白的表达,下调CDK4、Cyclin D1、Bcl-2、HDAC6、ERK和p-ERK蛋白的表达。结论吴茱萸碱可能是通过抑制HDAC6的活性,激活MAPK信号通路,进而上调促凋亡蛋白的表达,下调周期蛋白的表达,从而抑制K562细胞的增殖,诱导细胞周期阻滞和凋亡。     

肿节风总黄酮促进白血病K562细胞凋亡的效应及机制研究

目的:研究肿节风总黄酮促进人白血病K562细胞凋亡的效应及分子机制。方法:用系列浓度的肿节风总黄酮干预K562细胞24、48、72 h后,化学发光法检测细胞活力计算IC_(50),并依此将细胞分为空白对照组、肿节风总黄酮25、50、100μg/mL剂量组进行实验。AO-EB染色法及流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果:肿节风总黄酮能够明显降低K562细胞存活率,且呈时间和剂量依赖关系,24、48、72 h的IC_(50)分别为(64.90±5.16)μg/mL、(50.60±4.00)μg/mL、(34.90±2.46)μg/mL。与空白对照组相比,50、100μg/mL的肿节风总黄酮明显促进K562细胞凋亡。Western blot实验显示,与空白对照组相比,肿节风总黄酮100μg/mL剂量组Caspase-3蛋白表达显著下调;肿节风总黄酮50和100μg/mL剂量组Cleaved Caspase-3蛋白表达显著上调,Bcl-2的蛋白表达显著下调;Bcl-2/Bax比值明显减小,Cleaved Caspase-3/Caspase-3比值明显增大。结论:肿节风总黄酮能有效促进K562细胞凋亡,其机制可能与其下调Bcl-2、Caspase-3蛋白,上调Cleaved Caspase-3蛋白的表达有关。     

苦参素通过p38/JNK信号途径对海马神经元凋亡的影响

探讨苦参素(oxymatrine,OMT)对海马神经元凋亡的影响及其机制。采用MTT法测定OMT对海马神经元存活率的影响;生物化学法测定OMT对LPS诱导的海马神经元乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率的影响;Hochest 33342染色观察海马神经元凋亡形态;实时定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-q PCR)方法检测海马神经元中Bax,Bcl-2,Caspase-3 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测海马神经元中p38,p-p38,JNK,p-JNK,Bax,Bcl-2和Caspase-3的表达。结果发现,不同剂量的OMT(0.37~6.0 g·L~(-1))和海马神经元共培养24 h,海马神经元生长状态良好;LPS刺激后,海马神经元LDH释放率增加(P0.01),JNK和p38的磷酸化水平明显增加(P0.01),Bax/Bcl-2的比例及Caspase-3的表达上调(P0.01),海马神经元凋亡增加。OMT预处理后,能明显降低海马神经元经LPS刺激后的LDH释放(P0.05或P0.01),减少p38和JNK磷酸化水平,降低Bax/Bcl-2的比例及Caspase-3的表达(P0.01),海马神经元凋亡减少。综上,OMT能降低经LPS激活的p38和JNK磷酸化水平,下调Bax/Bcl-2的比例和Caspase-3的表达,从而抑制海马神经元凋亡。OMT通过p38/JNK信号途径抑制海马神经元的凋亡。     

逍遥散对慢性应激大鼠海马组织DUSP14基因表达及对MAPK信号通路的影响

目的：探讨逍遥散对慢性应激大鼠海马组织双特异性磷酸酶 14 （DUSP14） mRNA 表达及对 p38 丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）、c-Jun 氨基末端蛋白激酶（JNK）、细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）、细胞外信号调节蛋白激酶 5（ERK5）等四类丝裂原活化蛋白激酶 （MAPKs） 信号通路活化状态的影响。方法：将 80 只大鼠分为空白组、模型组、氟西汀组及逍遥散组。空白组大鼠常规饲养,每天灌胃 2 mL 生理盐水;模型组大鼠每天灌胃 2 mL 生理盐水后进行慢性应激刺激;氟西汀组和逍遥散组分别灌胃氟西汀和逍遥散后进行慢性应激刺激;剂量均为 10 mL/（kg · d）。检测各组大鼠海马组织 DUSP14 mRNA 表达及p38、磷酸化 p38 （p-p38）、JNK、磷酸化 JNK （p-JNK）、ERK、磷酸化 ERK （p-ERK）、ERK5、磷酸化 ERK5 （p-ERK5） 的相对含量。结果：与空白组比较,模型组 DUSP14 mRNA 表达显著上调 （P＜0.01）,p-p38/p38、p-JNK/JNK、p-ERK5/ERK5 均显著升高 （P＜0.01）,p-ERK/ERK 显著降低 （P＜0.01）。与模型组比较,逍遥散组和氟西汀组 DUSP14 mRNA 表达均下调 （P＜ 0.01）;逍遥散组 p-p38/p38、p-JNK/JNK 显著降低（P＜0.01）,p-ERK/ERK 显著升高（P＜0.01）;氟西汀组 p-p38/p38、p-JNK/JNK、p-ERK5/ERK5 均显著降低 （P＜0.01）,p-ERK/ERK 显著升高 （P＜0.01）。与氟西汀组比较,逍遥散组 p-JNK/JNK、p-ERK5/ERK5 均较高（P＜0.05,P＜0.01）。结论：逍遥散和氟西汀对慢性应激引起的 DUSP14 mRNA 表达变化及 MAPK 各信号通路活性变化的调节作用趋势基本一致,对 p38 MAPK 信号通路的调节作用相当,但在 ERK5 MAPK 通路中逍遥散未表现出活性调节作用,在 ERK、JNK MAPK 通路活化状态调节过程中氟西汀更显优势。     

华蟾毒配基联合索拉非尼通过AURKA/Ras/Raf/ERK信号通路对肝癌Huh7细胞增殖与凋亡的影响

目的研究华蟾毒配基联合索拉非尼对肝癌Huh7细胞增殖与凋亡的影响及作用机制。方法 MTT法检测Huh7细胞增殖;Hoechst33342/PI荧光双染法检测Huh7细胞凋亡形态变化;流式细胞仪检测细胞周期;免疫细胞化学法检测Ki67蛋白表达;Western blotting法检测Bax、Bcl-2、Caspase-8、极光激酶A(AURKA)、Ras、Raf、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和p-ERK蛋白的表达变化。结果华蟾毒配基、索拉非尼及联合用药对Huh7细胞的增殖均有抑制作用,联合用药组的增殖抑制作用更明显,具有协同效应;荧光染色可见细胞凋亡形态变化;索拉非尼引起Huh7细胞周期S期阻滞,华蟾毒配基和联合用药引起Huh7细胞周期G2/M期阻滞,联合用药组G2/M期阻滞较单药组更明显;华蟾毒配基和索拉非尼均能减弱Ki67表达,联合用药组的作用更为显著;华蟾毒配基、索拉非尼及联合用药上调Bax和Caspase-8蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax/Bcl-2比例,对ERK蛋白表达无明显影响,显著下调AURKA、Ras、Raf和p-ERK蛋白表达,联合用药组的作用更为显著(P0.05)。结论华蟾毒配基联合索拉非尼通过AURKA/Ras/Raf/ERK信号通路抑制肝癌Huh7细胞增殖,诱导其凋亡。     

总丹参酮通过线粒体途径诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的实验研究

目的:探讨总丹参酮对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响及作用机制。方法:体外培养乳腺癌细胞MCF-7,随机分为4组,加入不同浓度总丹参酮(0、0.5、1、2μg/mL)处理48 h。四甲基偶氮唑(MTT)法检测各组细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞的凋亡率,免疫印迹试验(Western blot)检测细胞浆中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)、活化的多聚ADP-核糖聚合酶(Cleaved PARP)、Smac、Cytochrome c、和线粒体Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bak蛋白的表达,采用试剂盒检测Caspase-3、Caspase-9的活性。结果:总丹参酮能显著抑制乳腺癌细胞MCF-7的活力,诱导细胞凋亡,显著上调Cleaved PARP、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Smac、Cytochrome c蛋白表达及线粒体中Bax、Bak蛋白的表达(P0.05),而细胞中Bax、Bak蛋白水平无明显变化。结论:总丹参酮能显著抑制乳腺癌细胞MCF-7活力,诱导凋亡,其作用机制与线粒体途径有关。     

二参颗粒对氯化钴诱导的H9C2细胞氧化应激介导的细胞凋亡的保护作用

目的:通过观察二参颗粒对氯化钴(CoCl_2)诱导的缺氧损伤和大鼠心肌细胞H9C2凋亡的影响,阐明二参颗粒对心脏的保护作用。方法:以500μmol/L的CoCl_2与H9C2细胞共同作用24 h,建立心肌细胞缺氧缺血模型。将H9C2细胞分为空白对照组、模型对照组、二参颗粒50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL组。酶联免疫法检测胞外培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,流式细胞术检测胞内活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位(MMP)和凋亡水平,蛋白质印迹分析法检测细胞内Bcl-2/Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞活力下降、活性氧(ROS)荧光表达值升高、线粒体膜电位JC-1单体阳性细胞显著升高以及细胞培养液中LDH含量升高,凋亡率显著升高,凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的蛋白表达上调,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,二参颗粒能有效改善细胞活力,降低LDH的含量,显著降低胞内ROS荧光表达值,改善线粒体膜电位和凋亡水平,下调凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的蛋白表达,升高Bcl-2/Bax的比值(P<0.05或P<0.01)。结论:二参颗粒可以抑制CoCl_2诱导的心肌细胞ROS水平,减少氧化应激发生,进而改善氧化应激介导的心肌细胞的细胞凋亡。     

丫蕊花甾体皂苷YB16对人前列腺癌细胞PC-3增殖与凋亡的影响

目的:探讨丫蕊花甾体皂苷YB16对人前列腺癌细胞PC-3增殖与凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养PC-3细胞,给予不同浓度的YB16(0.125~16μmol·L-1),以噻唑蓝(MTT)比色法检测YB16对PC-3的细胞毒性,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,吖啶橙(AO)染色、流式细胞术检测YB16对PC-3的凋亡影响,逆转录-聚合酶链式反应(RTPCR)检测YB16对PC-3细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),B细胞淋巴瘤-xl(Bcl-xl),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2,Bcl-xl,Bax,激活型Caspase-3(cleaved-Caspase-3)蛋白表达,并对结果进行分析。结果:YB16能显著抑制PC-3细胞的生长,具有剂量依赖性(P0.05);YB16能促进细胞的凋亡,相差显微镜,AO染色法观察可见细胞具凋亡特征性改变;YB16能下调Bcl-2,Bcl-xl,上调Bax,Caspase-3 mRNA和蛋白的表达(P0.05)。结论:YB16能抑制PC-3细胞增殖,促进PC-3发生凋亡,其机制可能与促进Caspase-3表达有关,具有良好的抗肿瘤作用。     

狼毒对恶性黑色素瘤细胞生长的影响及其分子作用机制的研究

目的 通过中药狼毒提取液(LD extrat,LDE)对恶性黑色素瘤B16细胞生长抑制作用的研究,探讨其诱导细胞发生凋亡的作用机制.方法 选用狼毒提取液处理的体外培养的黑色素瘤B16细胞株为研究对象,采用MTT法分别在24,48和72 h测定狼毒提取液对黑色素瘤B16细胞存活率的影响.用Hoechst 33258荧光染色法观察狼毒提取液诱导细胞凋亡的现象以及细胞形态的变化.用Western blotting方法分析研究细胞凋亡有关蛋白Bcl-2/Bax表达的变化.结果 狼毒提取液对恶性黑色素瘤B16细胞的抑制作用随药物浓度的升高而增强并呈现一定的时效和量效关系.狼毒提取液作用黑色素瘤B16细胞24 h后,能诱导恶性黑色素瘤B16细胞的凋亡.Western blot分析证实狼毒提取液能下调抗细胞凋亡蛋白Bcl-2的表达水平和上调促细胞凋亡蛋白Bax的表达,从而导致Bcl-2/Bax蛋白比率下调、引起癌细胞凋亡和细胞存活率降低.结论 狼毒提取液下调抗细胞凋亡Bcl-2蛋白和上调促细胞凋亡Bax蛋白的表达、降低Bcl-2/Bax蛋白比率可能是狼毒提取液诱导肿瘤细胞凋亡、抑制恶性黑色素瘤B16细胞生长重要作用的分子机制.     

祁州漏芦通过下调JNK和NF-κB抑制H_2O_2致肝细胞凋亡

研究祁州漏芦对H_2O_2所致HepG2细胞凋亡的抑制作用机制。建立H_2O_2诱导的人HepG2细胞损伤模型,采用MTT法检测细胞存活率;采用化学比色法检测LDH,ALT,AST活性;采用黄嘌呤氧化酶法检测细胞SOD活性,二硫代二硝基苯甲酸法检测GSH含量,采用硫代巴比妥酸法检测MDA生成量,比色法测定Caspase-3,8,9的相对活性;蛋白印迹法测定Cleaved Caspase-3(Casp-3),细胞色素c(Cyto c)和NF-κB,ERK,JNK,p38 MAPK及其磷酸化蛋白的表达。结果显示,祁州漏芦在质量浓度25~400 mg·L~(-1)对HepG2细胞活力无显著影响。H_2O_2降低细胞存活率,造成细胞损伤,并上调Casp-3,胞浆Cyto c,p-JNK以及核NF-κB蛋白水平。与模型组比较,祁州漏芦组细胞存活率升高;培养液中LDH,ALT和AST活性降低;细胞内MDA含量降低,SOD活性和GSH含量升高,Caspase-3,8,9相对活性降低,细胞Casp-3和胞浆Cyto c蛋白表达降低,细胞p-JNK及核NF-κB蛋白水平降低。提示,祁州漏芦对H_2O_2所致HepG2细胞凋亡具有抑制作用,其作用可能与其抑制JNK激活和NF-κB核转位作用有关。     

青钱柳三萜对链脲佐菌素损伤的INS-1细胞自噬和凋亡的影响

目的:观察青钱柳三萜对STZ损伤的INS-1细胞自噬和凋亡的影响。方法:用链脲佐菌素(STZ)诱导INS-1细胞建立损伤模型。MTT法检测不同浓度青钱柳三萜对INS-1细胞增殖的影响,荧光酶标仪检测青钱柳三萜对胞内活性氧(ROS)含量的影响,用放射免疫法测定其胰岛素分泌能力,比色法测定上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛(MDA)含量;比色法测定心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值,Western blot检测细胞中自噬调控蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)和凋亡调控蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表达。结果:当青钱柳三萜浓度低于25μg/ml时,无论单用青钱柳三萜还是与STZ联用均对INS-1细胞增殖具有促进作用,但是当其浓度大于100μg/ml或与STZ联用大于50μg/ml时,均对其细胞生长具有抑制作用;青钱柳三萜(6.25、12.5、25μg/ml)可抑制INS-1细胞凋亡,促进INS-1细胞分泌胰岛素,降低细胞内ROS含量;升高上清液中SOD、CAT和GSH-Px活性,降低MDA含量,降低自噬调控蛋白LC3-Ⅱ和凋亡调控蛋白Cleaved PARP的蛋白表达,上抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA表达,下调促凋亡蛋白Bax mRNA表达及Bcl-2/Bax,降低Caspase-9及Caspase-3的活性。结论:青钱柳三萜对STZ损伤的INS-1细胞具有较好的保护作用。它通过抑制STZ损伤的INS-1细胞过量产生ROS,增强内源性抗氧化酶GSH-Px、SOD、CAT的活性,降低自噬调控蛋白LC3-Ⅱ和凋亡调控蛋白Cleaved PARP的表达,上抗凋亡蛋白Bcl-2表达,下调促凋亡蛋白Bax表达及降低Caspase-9及Caspase-3的活性,进而提高INS-1细胞存活率,来发挥对受损INS-1细胞的保护作用。     

姜黄素联合FOLFOX诱导胃癌细胞发生凋亡及其机制研究

目的观察姜黄素联合FOLFOX（folinic acid fluorouracil oxaliplatin）对胃癌细胞株BGC-823生长的影响,并探讨其可能的发生机制。方法设立空白对照组、姜黄素组、FOLFOX组［5-FU（0.1 mmol/L）+奥沙利铂（5 μmol/L）］及姜黄素联合FOLFOX组。CCK8法检测细胞活性,Hoechst染色观察细胞凋亡,Caspase-3试剂盒检测Caspase-3活性, 实时荧光定量PCR法测定Bcl-2、Bax mRNA表达的变化,Western blot法测定Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果各用药组均能抑制BGC-823细胞增殖、诱导细胞凋亡、增加Caspase-3的活性、降低Bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白表达而增加Bax mRNA及Bax蛋白表达,且姜黄素联合FOLFOX组疗效优于姜黄素组及FOLFOX组,差异有统计学意义（P<0.01）。结论姜黄素联合FOLFOX组能够明显抑制BGC-823细胞的增殖,其联合作用可能通过促进Bax的表达及Caspase-3的活性、抑制Bcl-2表达,从而加速肿瘤细胞的凋亡。     

银杏叶聚戊烯醇抗Aβ_(25-35)介导dPC12细胞损伤的保护机制

目的:研究银杏叶聚戊烯醇(GP)抗Aβ_(25-35)诱导dPC12细胞损伤的保护机制。方法:以鼠肾上腺嗜铬细胞瘤单克隆细胞系(PC12细胞)为研究对象,通过LDH比色法检测GP对Aβ_(25-35)处理后dPC12细胞存活率的影响;流式细胞术检测不同浓度GP对dPC12细胞凋亡的影响;应用活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)试剂盒检测Aβ_(25-35)对dPC12细胞的氧化损伤,并研究GP的抗氧化作用及其机制;RT-PCR法检测Bax、Bcl-2和Caspase-3在mRNA水平的表达,并采用Western blot法检测Bax、Bcl-2、Caspase-3及Cleaved Caspase-3等凋亡相关因子在蛋白水平的表达。结果:GP可显著降低LDH漏出率以及细胞内ROS水平和MDA含量,对dPC12细胞有显著的抗氧化作用,具有显著的量效关系;GP对Aβ_(25-35)引起的dPC12细胞凋亡有一定的抑制作用,以高剂量组作用显著;GP能显著下调Aβ_(25-35)诱导损伤dPC12细胞内Caspase-3、Bax mRNA水平,并上调Bcl-2 mRNA水平,Bax/Bcl-2 mRNA比值降低,抑制细胞凋亡;GP能降低Aβ_(25-35)诱导损伤dPC12细胞内Caspase-3、Bax蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达,降低Bax/Bcl-2比值,抑制凋亡执行因子Caspase-3活化,从而抑制细胞凋亡。结论:GP可减少Aβ_(25-35)致损伤dPC12细胞的凋亡,其作用可能与其抗氧化作用和抑制细胞凋亡途径激活有关。