UCA1-miR-582-EZH2轴对肺癌细胞A549生物学功能的影响机制

目的 探究尿路上皮癌相关1基因(UCA1)调控miR-582-5p-Zeste增强子同源物(EZH)2信号轴在非小细胞肺癌(NSCLC)中的调控机制。方法 逆转录-聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测UCA1、miR-582-5p和EZH2在NSCLC组织及细胞系(NCI-H460、A549和NCI-H1299)中的表达;Western印迹检测EZH2在NSCLC组织中的蛋白表达;原位杂交(FISH)检测UCA1和miR-582-5p的信号强度;双荧光素酶报告基因检验miR-582-5p抑制剂靶向UCA1和EZH2的调控机制;qRT-PCR检测下调UCA1/miR-582-5p对EZH2 mRNA的调控关系;Transwell、TUNEL细胞凋亡和CCK8分别检测下调UCA1-miR-582-5p-EZH2轴对侵袭、凋亡和增殖的调控能力。结果 UCA1和EZH2在NSCLC组织和细胞系中高表达,miR-582-5p则相反为低表达。UCA1竞争性结合miR-582-5p,且miR-582-5p抑制剂可以回补siUCA1负调控EZH2。siUCA1-In-miR-582-5p-siEZH2...     

lncRNA Dleu2通过调控miR-150-5p对胃癌细胞恶性行为、USF2表达的影响

目的 探究长链非编码(lnc)RNA淋巴细胞白血病缺失基因(Dleu2)通过调控miR-150-5p对胃癌细胞恶性行为、上游刺激因子(USF)2表达的影响。方法 取MKN1细胞将其分为胃癌细胞(SC)组,胃癌细胞+lncRNA Dleu2-NC(LN)组,胃癌细胞+lncRNA Dleu2抑制剂(LI)组、胃癌细胞+lncRNA Dleu2激动剂(LM)组、胃癌细胞+miR-150-5p-NC(MN)组、胃癌细胞+miR-150-5p抑制剂(MI)组、胃癌细胞+miR-150-5p激动剂(MM)组、胃癌细胞+lncRNA Dleu2抑制剂+miR-150-5p激动剂(DP)组。实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测正常胃上皮细胞及4种胃癌细胞系中lncRNA Dleu2、miR-150-5p表达水平,将阴性对照、lncRNA Dleu2、miR-150-5p类似物转染至胃癌细胞中,小室法检测细胞恶性行为,Western印迹检测USF2蛋白表达,双荧光素酶报告实验证实lncRNA Dleu2和miR-150-5p的相互作用。结果 与正常胃癌上皮细胞系GES-1相比,胃癌细胞系中...     

circPRMT5、EZH2在宫颈癌组织中表达及与预后的关系

目的 探讨环状RNA(circRNA)蛋白质精氨酸甲基化转移酶(circPRMT)5、果蝇zeste基因增强子同源物(EZH)2在宫颈癌(CC)患者中表达水平及其临床意义。方法 选取84例CC患者癌组织和对应癌旁正常组织,检测circPRMT5、EZH2 mRNA表达水平;分析癌组织circPRMT5、EZH2 mRNA表达水平与临床病理特征及预后的关系、癌组织circPRMT5表达水平与EZH2 mRNA的相关性及影响CC患者预后的因素。结果 CC患者癌组织circPRMT5、EZH2 mRNA表达水平均显著高于癌旁正常组织(P<0.05);癌组织circPRMT5、EZH2 mRNA表达水平与肿瘤分化程度、淋巴结转移、FIGO分期相关(P<0.05);癌组织circPRMT5表达水平与EZH2 mRNA呈正相关(P<0.05);circPRMT5、EZH2低表达组36个月生存率均明显高于circPRMT5、EZH2高表达组(P<0.05);circPRMT5、EZH2 mRNA、FIGO分期、淋巴结转移是影响CC患者不良预后的独立危险因素(P<0.05...     

急性髓系白血病患者血浆lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平与病理特征和预后的关系

目的 探讨急性髓系白血病（AML）患者血浆长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因16(lncRNA SNHG16)、微小RNA-183-5p(miR-183-5p)水平与病理特征和预后的关系。方法 选取93例AML患者为AML组,选取同期40例体检中心查体健康者为对照组,采用qPCR法检测血浆lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平。采用Pearson相关法分析AML患者血浆lncRNA SNHG16与miR-183-5p水平的相关性及与病理特征的关系。Kaplan-Meier法绘制不同血浆lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平AML患者生存曲线。结果 AML组血浆lncRNA SNHG16水平高于对照组,miR-183-5p水平低于对照组（P均<0.01）。Pearson相关性分析显示,AML患者血浆lncRNA SNHG16与miR-183-5p水平呈负相关（r=-0.704,P<0.01）。不同白细胞计数、骨髓原始细胞比率、预后危险分层AML患者血浆lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平比较差异有统计学意义（P均<0.05）...     

lncRNA SNHG8负调控miR-411-5p影响神经母细胞瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)、小核仁RNA宿主基因子8(SNHG8)对神经母细胞瘤(NB)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测31例NB病人NB组织和瘤旁组织中SNHG8和miR-411-5p表达水平。体外培养NB细胞系SK-N-SH,双荧光素酶报告基因实验验证SNHG8和miR-411-5p调控关系。将SK-N-SH细胞分为对照组、si-NC组、si-SNHG8组、si-SNHG8+anti-miR-NC组和si-SNHG8+anti-miR-411-5p组,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质免疫印迹(Western Blot)法检测Ki67、活化的半胱天冬酶-3(Cleaved-Caspases-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平。结果:与瘤旁组织比较,NB组织中SNHG8表达水平升高(P<0.05),miR-411-5p表达水平降低(P<0.05)。SNHG8在S...     

EZH2、EAF2在NSCLC中的表达及意义

目的探讨果蝇Zeste基因增强人类同源物(Enhancer of Zeste Homolog,EZH2)、RNA聚合酶2延长因子相关因子-2(RNA polymeraseⅡelongation factor-associated factor 2,EAF2)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及意义。方法选取2016年1月至2018年3月我院保存的NSCLC组织110例,同时选取癌旁组织作为对照,采用免疫组化染色法检测EZH2、EAF2表达。结果 NSCLC组织EZH2阳性表达率为61.82%,明显高于癌旁组织(P0.05),而EAF2阳性表达率为34.55%,明显低于癌旁组织(P0.05);Ⅲ期、中低分化、有淋巴结转移患者EZH2阳性表达率分别为83.33%、76.32%和86.54%,明显高于Ⅰ-Ⅱ期、高分化、无淋巴结转移患者(P0.05),而EAF2阳性表达率分别为11.11%、15.79%和15.38%,明显低于Ⅰ-Ⅱ期、高分化、无淋巴结转移患者(P0.05);EZH2和EAF2表达呈负相关(r_s=-0.531,P0.05)。结论 EZH2在NSCLC中呈高表达,而EAF2呈低表达,与患者临床病理特征有一定的相关性。     

原发性肝癌中p15、p16基因缺失和STK15基因过表达的研究

目的 探讨肿瘤组织p15、p16基因缺失和STK15基因过表达与原发性肝癌的关系。 方法 术中取原发性肝癌组织和相应癌旁正常组织标本30例,术前均未经化学疗法及放射疗法治疗。提取DNA并应用聚合酶链反应(PCR)技术检测p15第二外显子(p15E2)和p16第二外显子(p16E2)纯台缺失。提取RNA,逆转录合成cDNA,应用PCR技术检测STK15基因的表达。以β-肌动蛋白基因作为内对照。测定癌组织和癌旁正常组织中STK15基因和β-肌动蛋白基因的平均密度值(ADV)。 结果 在癌组织中p15E2缺失率为13.3％(4／30),p16E2缺失率为16.7％(5／30),p15E2和p16E2共缺失率为6.7％(2／30)。在30例癌组织中有19例(63.3％)STK15基因表达高于邻近正常组织。STK15基因ADV／β-肌动蛋白基因ADV比值,癌组织为1.53±0.31,癌旁正常组织为0.91±0.25,t=2.86,P<0.01。 结论 p15E2、p16E2纯合缺失和STK15过表达可能在原发性肝癌的发生发展中发挥一定作用。     

长链非编码RNAs XIST通过靶向miR-377-3p调节肝癌细胞增殖、凋亡的机制

目的探讨长链非编码RNAs染色体失活特异转录本(XIST)靶向调控miR-377-3p对肝癌细胞活力和凋亡的影响及机制。方法将XIST特异性siRNA(si-XIST)及si-XIST+anti-miR-377-3p(同时抑制XIST和miR-377-3p表达)转染人肝癌HepG2细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测XIST和miR-377-3p mRNA表达,细胞增殖-毒性检测(CCK)-8法及流式细胞术分别检测细胞活力凋亡率。双荧光素酶报告系统检测XIST与miR-377-3p的靶向关系。Western印迹检测β-catenin、cyclinD1和Bax蛋白表达。结果抑制XIST表达可明显降低HepG2细胞活力,诱导细胞凋亡(P<0.05)。XIST与miR-377-3p存在靶向关系。抑制miR-377-3p表达可明显减弱si-XIST对HepG2细胞活力抑制、凋亡促进、β-catenin和cyclinD1表达下调及Bax表达上调作用(P<0.05)。结论长链非编码RNAs XIST可靶向调节miR-377-3p,通过下调Wnt/β-catenin信号通路,抑制肝癌HepG2细胞活力,诱导细胞凋亡。     

lncRNA SNHG6调控miR-335-3p/PDCD4途径对缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)小核RNA宿主基因6(SNHG6)对缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤的影响.方法 体外培养大鼠心肌细胞系H9C2建立缺氧复氧模型.实时定量PCR(RT-qPCR)检测SNHG6、微小RNA(miR)-335-3p表达水平.蛋白质印记法检测PDCD4蛋白表达.流式细胞术检测H9C2细胞...     

IL-29通过调控lncRNA DLEU1/miR-149-5p通路影响结肠癌细胞的增殖和凋亡

目的探讨白介素-29(IL-29)对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法 IL-29诱导SW480细胞,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,qRT-PCR检测lncRNA DLEU1和miR-149-5p表达,Western blot法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)蛋白表达。双荧光素酶实验验证lncRNA DLEU1和miR-149-5p靶向关系。转染DLEU1小干扰RNA或miR-149-5p模拟物至SW480细胞,上述相同方法观察抑制DLEU1表达或过表达miR-149-5p对SW480细胞增殖和凋亡的影响。结果 IL-29、抑制DLEU1表达或过表达miR-149-5p均可降低SW480细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达(P 0. 05),提高细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达(P 0. 05)。IL-29可降低SW480细胞DLEU1表达(P 0. 05),促进miR-149-5p表达(P 0. 05)。DLEU1靶向负调控miR-149-5p表达。过表达DLEU1可逆转IL-29对SW480细胞增殖和凋亡的影响。结论 IL-29可能通过调控DLEU1/miR-149-5p通路抑制结肠癌细胞增殖,并诱导其凋亡。     

miR-142-5p靶向调控TGF-β2促进人巨噬细胞凋亡

目的探讨miR-142-5p在动脉粥样硬化组织中的表达及对人巨噬细胞凋亡的作用。方法构建动脉粥样硬化大鼠模型,qRT-PCR检测动脉粥样硬化组织中miR-142-5p的表达水平。50μg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激人巨噬细胞、血管平滑肌细胞(VSMC)、内皮细胞24 h后,提取细胞RNA,qRT-PCR检测细胞中miR-142-5p的表达水平。靶基因预测软件预测miR-142-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因鉴定靶基因的正确性。细胞转染miR-142-5p mimic、mimic control、miR-142-5p inhibitor、inhibitor control,Western blot和qRT-PCR检测miR-142-5p对靶基因的调控作用,流式细胞仪检测miR-142-5p和靶基因对巨噬细胞凋亡的作用。结果 miR-142-5p在动脉粥样硬化组织中表达上调,与正常组织相比差异显著(P0.01)。血管平滑肌细胞和内皮细胞经ox-LDL刺激后miR-142-5p的表达水平与刺激前没有明显变化,而巨噬细胞经ox-LDL刺激后miR-142-5p的表达水平较刺激前明显升高(P0.01)。预测miR-142-5p的靶基因为转化生长因子β2(TGF-β2)。miR-142-5p mimic与TGF-β2共转染后荧光素酶活性最低;miR-142-5p mimic组TGF-β2蛋白和mRNA的表达水平与mimic control组相比明显下降,miR-142-5p inhibitor组TGF-β2蛋白和mRNA的表达水平与inhibitor control组相比明显升高(P0.01);miR-142-5p mimic组细胞凋亡率明显高于mimic control组,TGF-β2 siRNA组细胞凋亡率明显高于siRNA control组(P0.01)。结论 miR-142-5p在动脉粥样硬化中过度表达,miR-142-5p通过下调靶基因TGF-β2促进人巨噬细胞凋亡。     

MicroRNA-499-5P在结肠癌、结肠腺瘤组织中的表达及其临床意义

目的:探讨micro RNA-499-5p(miR-499-5p)在结肠癌、结肠腺瘤中的表达水平及其与临床病理特征的相关性.方法:分别提取40例结肠癌组织、结肠腺瘤组织和正常结肠黏膜组织标本的总RNA,采用逆转录实时定量PCR检测(real-time quantitative PCR,q RT-PCR)方法检测mi R-499-5p的表达量,并分析其与临床分期、分化程度、淋巴结转移等临床病理特征的关系.结果:miR-499-5P在结肠癌组织中、结肠腺瘤组织中相对表达水平均高于正常结肠黏膜组织(P0.001),其表达与TNM分期(P=0.016)、分化程度(P0.001)、浸润深度(P0.001)、淋巴结转移(P=0.008)相关.结论:相对于正常结肠黏膜组织,mi R-499-5P在结肠癌、结肠腺瘤组织中表达明显上调,且在结肠癌中的表达水平与临床分期、浸润深度、分化程度及是否有淋巴结转移有关.     

结直肠癌组织中miR-338-3p、SMO的表达变化及意义

目的观察结直肠癌组织中微小RNA(miRNA)-338-3p(miR-338-3p)与Smoothened(SMO)的表达变化,并探讨其意义。方法 30例结直肠癌患者,手术时留取癌组织及癌旁组织,抽提其中的总RNA及蛋白质,采用实时荧光定量PCR检测标本中的miR-338-3p,用半定量RT-PCR检测SMO mRNA,Western blot检测SMO蛋白。结果结直肠癌组织中miR-338-3p的表达量(2-ΔΔCt)为0.153 7±0.126 4,SMO mRNA的相对表达量为0.371±0.116,SMO蛋白的灰度值为3.195±1.623,癌旁组织分别为0.901 5±0.426 3、0.366±0.117、0.733±0.305,两种组织中的miR-338-3p、SMO蛋白表达量相比,P均<0.01;miR-338-3p与SMO蛋白的表达呈负相关(r=-0.877,P<0.01)。结论结直肠癌组织中miR-338-3p表达明显下调,SMO蛋白表达明显上升;miR-338-3p可能通过转录后基因沉默机制使SMO蛋白表达下降,从而抑制结直肠癌的发生发展。     

lncRNA LINC00958靶向调控miR-597-5p对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)LINC00958影响乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用与机制。方法 定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LINC00958和miR-597-5p在乳腺癌组织中的表达。MDA-MB-231细胞转染si-LINC00958或miR-597-5p或共转染si-LINC00958和anti-miR-597-5p。qRT-PCR检测LINC00958和miR-597-5p表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测MDA-MB-231细胞增殖,Transwell检测细胞迁移、侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测Ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。双荧光素酶报告实验分析LINC00958与miR-597-5p的靶向关系。结果 与癌旁组织比较,41例乳腺癌组织中LINC00958表达显著上调,miR-597-5p表达显著下调(P<0.05)。抑制LINC00958表达显著降低MDA-MB-231细胞增殖、Ki-67表达水平、迁移、侵...     

1型糖尿病小鼠心肌组织miR-142-3p的lncRNA和circRNA靶标分析

目的:利用生物信息学对1型糖尿病小鼠心肌组织中微小RNA(miR)-142-3p进行长链非编码RNA(lncRNA)和环状RNA(circRNA)靶标预测。方法:22只C57小鼠随机分为糖尿病模型组(n=15)和对照组(n=7),糖尿病模型组小鼠经腹腔一次性注射链脲佐菌素(STZ)建立1型糖尿病小鼠模型,对照组注射柠檬酸缓冲液。建模8周后终止实验,检测左室质量指数(LVWI)和心脏功能,HE染色结合定量分析软件检测心肌细胞大小;通过miRNA表达谱芯片技术甄别miRNAs的差异性,qRT-PCR确定差异表达;采用微小RNA靶标分析软件miRanda和TargetScan进行靶标预测,对预测到的circRNA宿主基因(host gene)进行基因功能聚类解析。结果:(1)糖尿病模型组心肌组织中miR-142-3p表达显著降低;(2)在高严谨条件下,用miRanda和TargetScan能够同时预测到miR-142-3p的靶标lncRNA有35个、circRNA有14个;(3)宿主基因功能预测显示miR-142-3p参与糖代谢相关的信号通路。结论:miR-142-3p可能通过调控部分lncRNA和circRNA,参与糖尿病心肌病的发生。     

冠心病病人血清lncRNA TUG1和miR-140-3p水平与血清炎性因子、斑块稳定性指标的相关性

目的:探讨冠心病病人长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)、微小RNA-140-3p(miR-140-3p)与血清炎性因子、斑块稳定性指标的关系。方法:选取我院收治的140例冠心病病人为研究对象,其中稳定型心绞痛(SAP)病人(SAP组)68例,不稳定型心绞痛(UAP)病人(UAP组)72例,同期选取66名健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清lncRNA TUG1、miR-140-3p水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清炎性因子白介素(IL)-6、IL-1β、IL-18、C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)及斑块稳定性指标正五聚素-3(PTX3)、脂蛋白相关磷脂酶-A2(Lp-PLA2)、成纤维细胞生长因子-23(FGF23)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平,采用彩色多普勒超声诊断仪测量内膜中层厚度(IMT);采用Pearson相关分析法分析冠心病病人血清lncRNA TUG1、miR-140-3p水平与炎性因子、斑块稳定性指标的相关性。结果:UAP...     

敲减lncRNA BAIAP2-AS1对胶质瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制

目的 探讨敲减长链非编码RNA(lncRNA)BAIAP2反义RNA 1(BAIAP2-AS1)对胶质瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制。方法 体外传代培养胶质瘤细胞系A172、LN229、U251及正常人星形胶质细胞系NHA。取传3代、对数生长期细胞,采用RT-qPCR法检测各细胞中微小RNA-491-5p(miR-491-5p)、BAIAP2-AS1、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）mRNA表达,选择lncRNA BAIAP2-AS1、miR-491-5p、MGMT mRNA相对表达量变化较显著的胶质瘤细胞进行后续实验。取上述胶质瘤细胞,随机分为空白对照组、BAIAP2-AS1 shRNA组、NC shRNA组、BAIAP2-AS1 shRNA+miR-491-5p inhibitor组、BAIAP2-AS1 shRNA+NC inhibitor组,BAIAP2-AS1 shRNA组、NC shRNA组分别转染BAIAP2-AS1 shRNA、NC shRNA,BAIAP2-AS1 shRNA+miR-491-5p inhibitor组、BAIAP2-AS1shRN...     

lncRNA DCST1-AS1靶向miR-874-3p对直肠癌细胞增殖和凋亡的影响

背景长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)在直肠癌(rectal cancer, RC)中异常表达并可能参与肿瘤发生及发展过程, lnc RNA DCST1-AS1在肿瘤中表达上调,但其在RC发生及发展过程中的作用机制尚未阐明,假设lnc RNA DCST1-AS1在RC细胞中表达水平升高,并可能促进肿瘤发生及发展.目的研究lncRNA DCST1-AS1对RC细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制.方法实时荧光定量聚合酶链式反应检测30例RC组织和癌旁组织中lncRNA DCST1-AS1和miR-874-3p RNA的水平,对RC SW1463细胞进行转染,分为si-NC组、siDCST1-AS1组、miR-NC组、miR-874-3p组、pcDNA组、pcDNA-DCST1-AS1组、si-DCST1-AS1+anti-miR-NC组和si-DCST1-AS1+anti-miR-874-3p组,MTT实验和流式细胞术分别检测各组SW1463细胞增殖光密度(optical density, OD)值和凋亡率, Western blot检测细胞中细胞周期蛋白1(CyclinD1)、p21、B淋巴细胞瘤-2 (B-cell lymphoma-2, Bcl-2)和Bcl-2相关蛋白(Bcl-2-associatedXprotein,Bax)表达,双荧光素酶报告系统验证lncR NA DCST1-AS1和miR-874-3p的关系.结果与癌旁组织组相比,在RC组织组中lncRNA DCST1-AS1的含量显著升高(P 0.05), miR-874-3p含量显著降低(P0.05);与对照si-NC和miR-NC组比较, si-DCST1-AS1组和miR-874-3p组RCSW1463细胞的OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白含量均降低,细胞凋亡率、p21和Bax蛋白含量均升高; lncRNA DCST1-AS1靶向负调控miR-874-3p的表达;与si-DCST1-AS1+anti-miRNC组比较, si-DCST1-AS1+anti-miR-874-3p组SW1463细胞OD值、CyclinD1和Bcl-2蛋白含量升高,细胞凋亡率、p21和Bax含量降低.结论 lncRNADCST1-AS1通过靶向miR-874-3p调控RC SW1463细胞增殖和凋亡, lncRNA DCST1-AS1可能是RC潜在的分子靶点.     

EZH2和VEGF在结直肠癌中的表达其与患者预后关系生物信学分析及验证

背景结直肠癌(colorectal carcinoma, CRC)是临床上常见的消化系统恶性肿瘤.但其确切发病机制和预后独立因素仍未阐明.本研究通过生物信息学方法分析了zeste基因增强子同源物2(enhancerofzestehomolog2,EZH2)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)基因在CRC中的表达情况及其和患者预后的感谢.并采用免疫组化检测了EZHE2和VEGF蛋白的表达情况及其与患者临床特征的关系.目的探讨EZH2和VEGF在CRC中的表达、突变情况及其与患者临床病理特征和预后的关系.方法首先在TCGA数据库中比较EZH2和VEGF基因mRNA在肠癌患者癌和癌旁组织中的表达,同时分析EZH2和VEGF基因的突变情况;采用STRING数据库建立EZH2和VEGF基因表达网络并筛选网络中的关键基因.根据EZH2和VEGF在肿瘤组织中的表达分为高低表达组, Cox回归模型Log-rank检验比较高低表达组患者总生存和无疾病进展生存是否存在差异.同时选取80例肠癌手术患者,留取患者癌组织和癌旁组织,采用免疫组织化学法检测上述组织中EZH2和VEGF蛋白表达水平.结果 TCGA数据库显示EZH2和VEGF基因在CRC组织中的表达水平显著高于对应的正常肠上皮组织(P <0.05),而与肠癌患者的临床分期并无明显相关性(P>0.05);EZH2和VEGF基因在人肠癌中的突变率分别为1.5%和1.9%,且EZH2和VEGF不同突变组织中mRNA表达水平存在明显差异.网络中共有22个蛋白,各蛋白平均相互作用指数为10.5,区域聚集指数为0.8,各蛋白富集明显(P<0.01). Cytohubb软件筛选出EZH2, DNMT1, HDAC2, YY1和SUZ12为网络中的关键基因;EZH2和VEGF高低表达与患者总生存期均无相关性(P>0.05),而VEGF高表达组患者无疾病进展生存期显著低于低表达组(HR=1.8, P<0.05).免疫组化显示, EZH2和VEGF在肠癌组织中的阳性表达率均显著高于癌旁组织(P<0.01).EZH2阳性表达与肠癌肿瘤直径、分化程度和Duke分期有关(P<0.05).而VEGF阳性表达与肠癌患者分化程度和Duke分期存在相关性(P<0.05).结论 EZH2和VEGF在肠癌组织中呈现明显上调表达和突变,其高表达与肿瘤大小、分会程度和Duke分期有关,并可作为肠癌预后的潜在分子标志物.     

circPUM1通过调控miR-524-5p表达对结肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨环状RNA PUM1(circPUM1)对结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结肠癌组织、癌旁组织中circPUM1、微小RNA-524-5p(miR-524-5p)的表达量。体外培养人结肠癌细胞株SW620,分别将si-NC、si-circPUM1、miR-NC、miR-524-5p mimics、si-circPUM1与anti-miR-NC、si-circPUM1与anti-miR-524-5p转染至SW620细胞。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证circPUM1是否能够结合miR-524-5p;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)表达量。结果结肠癌组织circPUM1的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),miR-524-5p的表达水平显著降低(P<0.05);干扰circPUM1表达或miR-524-5p过表达后,细胞活力显著降低(P<0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05),p21、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实circPUM1可靶向结合miR-524-5p的作用位点;抑制miR-524-5p表达可减弱干扰circPUM1表达对SW620细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的作用。结论circPUM1可通过海绵吸附miR-524-5p促进结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭,抑制细胞凋亡。