血吸虫病治疗前后IgG及其亚类的变化和疗效考核的研究

目的：欲寻找一种用于血吸虫病疗效考核的IgG亚类短期抗体。方法：用各种ELISA方法检测了264份治疗前和治疗后不同时间慢性血吸虫病人及50份正常人血清中的可溶性虫卵抗原（SEA）和成虫抗原（AWA）特异性IgG、IgG1和IgG4,以及日本血吸虫31／32kD肠相关抗原（GAA）。结果：治疗前IgG阳性率（SEA97．6％,AWA100％）与IgG1（SEA94％,AWA95．2％）无差别,高于IgG4（SEA62．7％,AWA73．4％）及GAA（62．7％）阳性率;治疗后IgG4消退较快,治疗后12月时阴转率达97．6％。正常血清检测上述四种指标假阳性率均在3％左右,无差别。结论：IgG1的诊断价值与IgG相仿,二者与粪检符合率均较高;而IgG4可能为一种短期抗体,可望作为疗效考核的评价指标。     

日本血吸虫三类循环抗原和循环抗体对感染家兔疗效考核价值的研究

采用三株分别定位于日本血吸虫表皮膜、肠道上皮和虫卵的单克隆抗体A6,SJ31／32和SE9作为捕获抗体建立检测三类循环抗原的斑点酶联免疫吸附实验（DOT－ELISA）方法,并利用该方法和普通ELISA分别观察了日本血吸虫感染家兔血清中三类循环抗原和IgG抗体的动态变化情况。结果表明：感染日本血吸虫家免在经砒喹酮治疗之后的第8周,睦相关抗原,可溶性虫卵抗原和肠相关抗原的转阴率分别为80％,70％和20％,而减后第18周全部转阴;IgG抗体一直维持较高水平。因此,MAA和SEA具有改好的疗效考核价值,GAA的疗效考核效果较差,IgG抗体不具有疗效考核作用。     

日本血吸虫循环抗原动态消长的实验研究

目的：了解日本血吸虫三类循环抗原（CAg）在感染家兔的动态变化及治疗后的消长情况。方法：制备日本血吸虫的三株单抗，以辣根过氧化物酶标记，分别建立检测日本血吸虫肠相关抗原（GAA）、膜相关抗原（MAA）和可溶性虫卵抗原（SEA）的斑点酶联免疫吸附试验（dot－ELISA），观察感染日本血吸虫家兔血中三类抗原的动态变化情况。结果：家兔感染后第4wk，有39％家兔血中GAA呈阳性反应，而仅8．6％家兔MAA、SEA呈阳性反应，第8wk三类CAg均呈阳性反应，并于第10wk左右达高峰。未治疗组家兔直至感染后第27wk，血中三类CAg一直维持较高水平。感染后第9wk家兔接受吡喹酮治疗，治疗后第4wk，CAg水平开始下降，治疗后第6wk有10％家兔SEA阴转，治疗后第8wk，GAA阴转率为20％，SEA为70％，MAA为80％，治疗后第14wk除1例外，三类CAg全部阴转。结论：GAA早期诊断效果较好，而MAA和SEA在治疗后较GAA消失快，三类CAg的诊断和疗效考核价值不相同     

24-26KD和90KD蛋白质抗原用于血吸虫病诊断的可能性探讨

应用从日本血吸虫抽提并纯化的24-26KD和90KD蛋白质抗原,ELISA检测免疫鼠和感染鼠血清中特异性抗体的结果表明,24-26KD和90KD抗原检测免疫鼠血清中特异性抗体时优于SEA和SWAP粗抗原。上述两种抗原还可检测感染鼠血清中特异性抗血吸虫抗体,若感染血清稀释度不超过1:160,90KD检测时ELISA的平均OD值均较SEA,SWAP高;而24-26KD检测时,平均OD值虽低于其它抗原,但检测效果相同。上述两种抗原初步应用於正常人和血吸虫病人皮内试验的结果表明无假阳性反应,阳性率和成虫冷浸抗原相似,从而初步提示24-26KD和90KD抗原用于血吸虫病免疫诊断的可能性。     

SD大鼠抗日本血吸虫感染机理的初步研究

目的对SD大鼠天然抗日本血吸虫感染机理进行初步研究。方法用免疫印迹技术分析正常SD大鼠血清(NRS)、感染SD大鼠血清(IRS)对日本血吸虫成虫可溶性抗原(AWA)的识别；并用间接ELISA方法检测NRS抗AWA、日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)、日本血吸虫可溶性肺期童虫抗原(SSA)的IgG抗体及亚类；并观察了NRS、去补体血清对体外培养的童虫的杀伤作用。结果NRS可识别AWA中的75、47、34．5和23ku的抗原分子．IRS则主要识别分子质量为62～86、54．7、47、34．5、30．3和23ku的特异性条带；NRS抗AWA、SEA、SSA特异性IgG1抗体水平明显高于正常昆明鼠血清中相应的抗体水平，而IgG2b则无明显增高；SD大鼠去补体血清在体外对童虫的杀伤作用低于正常血清，培养48h童虫的死亡率分别为41．0%和76．2％。结论SD大鼠血清中存在天然抗日本血吸虫感染的抗体，此抗体在SD大鼠血清的杀伤机制中起重要作用。     

血吸虫感染小鼠早期诊断抗原的研究

目的对已知的6种日本血吸虫抗原的早期诊断价值进行评价,为研制用于哨鼠早期诊断的免疫试剂提供候选抗原。方法用日本血吸虫尾蚴感染小鼠,收集感染前及感染后不同时间的小鼠血清。采用重组日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白大亲水性肽段与谷胱甘肽的融合表达蛋白（GST-HD）、可溶性虫卵抗原（SEA）、血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团（TSP2HD）、血吸虫虫卵蛋白（IPSE）、日本血吸虫虫卵毛蚴抗原（SjMP-10）及日本血吸虫信号蛋白（Sj14-3-3）作为诊断抗原,采用酶联免疫吸附试验检测感染血吸虫后不同时间小鼠血清中特异性抗体IgM和IgG水平,通过分析感染后不同时间点抗原特异性抗体水平变化及阳性率,筛选具有血吸虫感染早期诊断价值的抗原分子。采用免疫印迹试验进一步验证其对血吸虫急性感染早期诊断的价值。结果感染后第18、21、28天,抗GST-HD抗体IgM阳性率分别为60%、70%、100%,特异性IgG阳性率分别为40%、60%、90%;抗SEA抗体IgM阳性率为50%、60%、90%,特异性IgG阳性率为20%、50%、70%;抗TSP2HD抗体IgM阳性率为30%、40%、50%,特异性IgG阳性率为20%、30%、70%;抗IPSE抗体IgM阳性率为20%、30%、50%,特异性IgG阳性率为20%、30%、60%;抗SjMP-10抗体IgM阳性率为10%、20%、20%,特异性IgG阳性率为10%、20%、30%;抗Sj14-3-3抗体IgM阳性率为0、10%、20%,特异性IgG阳性率为0、10%、30%。以GST-HD融合蛋白和SEA为抗原,检测小鼠早期感染血吸虫的敏感性高于Sj14-3-3、IPSE、TSP、MP-10,检测IgM的敏感性高于IgG。免疫印迹试验结果显示,SEA中分子量在73kDa左右的蛋白条带可被感染后1周小鼠血清所识别,并随着时间推移反应加强。GST-HD最早出现反应的血清是感染后第10天小鼠血清,反应强度在感染后第5周达到最强。结论重组GST-HD融合蛋白与SEA中分子量约73kDa的蛋白分子具有血吸虫感染早期诊断价值,免疫印迹试验的敏感性比酶联免疫吸附试验高。     

日本血吸虫不同抗原检测家兔感染及治疗前后IgG/IgM抗体动态

目的探索特异性抗体检测在日本血吸虫病诊断和疗效考核中的潜在应用价值。方法ELISA方法采用可溶性虫卵抗原(SEA)、成虫抗原(AWA)检测人工感染家兔治疗前后血清中特异性IgGI、gM抗体,评价特异性抗体检测的诊断和疗效考核价值。结果用SEA抗原检测IgM抗体,发现感染后7周不管治疗与否,抗体水平均快速下降。与SEA相比,感染后AWA特异性IgM抗体上升时间早,且治疗后5个月仍为阳性。SEA特异性IgG抗体水平最高,但治疗后5个月仍为阳性。结论采用SEA抗原检测IgG用于血吸虫病诊断效果较好;对早期感染的诊断可以考虑SEA抗原检测IgM抗体作辅助。AWA抗原检测IgM,对急、慢性血吸虫感染均有较好诊断效果。采用这两种抗原检测IgG和IgM,均无考核疗效意义。     

日本血吸虫抗独特型抗体NP30抗体检测法在云南大山区应用效果的评价

目的评价日本血吸虫抗独特型抗体NP30抗体检测法在云南大山区血吸虫病流行现场的应用效果.方法对云南大山区血吸虫病流行区的506位居民进行粪检,同时用NP30抗体检测法和血吸虫抗体ELISA检测试剂盒(SEA-ELISA)分别对其血清进行检测,评价NP30抗体检测法的敏感性;同时检测非流行区的100份血清确定其特异性.结果 NP30抗体检测法和SEA-ELISA法的粪检阳性符合率分别为87.80%(144/164)和84.76%(139/164);两者的特异性分别为96.00%(96/100)和94.00%(94/100),差异均无显著性(P均＞0.05),但在粪孵阴性人群血清样本中,NP30抗体检测法和SEA-ELISA法的检出率分别为44.15%(151/342)和70.47%(241/342),差异有显著性(P＜0.05).结论 NP30抗体检测法可用于云南大山区血吸虫病筛查.     

SD大鼠抗日本血吸虫感染机理的初步研究

目的　对SD大鼠天然抗日本血吸虫感染机理进行初步研究。　方法　用免疫印迹技术分析正常SD大鼠血清(NRS)、感染SD大鼠血清 (IRS)对日本血吸虫成虫可溶性抗原 (AWA)的识别 ;并用间接ELISA方法检测NRS抗AWA、日本血吸虫可溶性虫卵抗原 (SEA)、日本血吸虫可溶性肺期童虫抗原 (SSA)的IgG抗体及亚类 ;并观察了NRS、去补体血清对体外培养的童虫的杀伤作用。　结果　NRS可识别AWA中的 75、47、3 4.5和 2 3ku的抗原分子 ,IRS则主要识别分子质量为 62～ 86、5 4.7、47、3 4.5、3 0 .3和 2 3ku的特异性条带 ;NRS抗AWA、SEA、SSA特异性IgG1 抗体水平明显高于正常昆明鼠血清中相应的抗体水平 ,而IgG2b则无明显增高 ;SD大鼠去补体血清在体外对童虫的杀伤作用低于正常血清 ,培养 48h童虫的死亡率分别为 41.0 %和 76.2 %。　结论　SD大鼠血清中存在天然抗日本血吸虫感染的抗体 ,此抗体在SD大鼠血清的杀伤机制中起重要作用。     

单克隆抗体NP28—5B对日本血吸虫卵肉芽肿形成的调节作用

本研究首先应用针对中国大陆株日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)中140kD靶抗原的单克隆抗体NP28-5B(lgG_1),经体内被动转移试验表明对虫卵致敏/虫卵攻击的小鼠肺肉芽肿模型中日本血吸虫虫卵肉芽肿形成具显著的抑制或调节作用(抑制率为53％,P<0.002),进一步提供证据表明抗体参与虫卵肉芽肿形成的调节网络,也将为日本血吸虫病抗病免疫和抗病疫苗研究提供重要的分子基础。作者对上述作用机理作了有限探讨。     

抗独特型抗体作为日本血吸虫病诊断抗原的研究

本研究用单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０作为抗原，进行ＥＬＩＳＡ检测日本血吸虫血清抗体，与用肠相关抗原ＧＡＡ和可溶性虫卵抗原ＳＥＡ对照，检测１００份急性病人血清，ＮＰ３０检出率为９５％；ＧＡＡ为９２％；ＳＥＡ为９７％，三埂无显著差别，５２例慢性病人中ＮＰ３０与ＧＡＡ检出率均为７３．１％，但与ＳＥＡ９４．２％有显著差别，在４０例已治愈病人中，ＮＰ３０转阴率为４２．５％与ＧＡＡ的４５％无差别。但ＳＥＡ仅为１     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的建株及初步鉴定

用感染8条日本血吸虫尾蚴,时间长达一年半的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用兔抗日本血吸虫肠相关抗原和兔抗可溶性虫卵抗原免疫血清与细胞培养上清进行ELISA筛选阳性克隆,最终建立了分泌单克隆抗独特型抗体细胞株NP30。作者用一系列试验证明,NP-30是日本血吸虫肠相关抗原的内影象抗独特型抗体,有替代日本血吸虫虫源性抗原用于血清学诊断的可能性。     

用抗日本血吸虫虫卵单克隆抗体NP28-5B检测循环抗原的研究

本研究使用杂交瘤技术制备鼠抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)单克隆抗体NP28-5B,其同型鉴定为IgGl,针对的靶抗原分子量为140kD。将酶标记单抗NP28-5B进行Dot-ELISA直接法检测急性患者血清100份和慢性血吸虫病患者血清200份中循环抗原,阳性率分别为96％和98％,检测正常人血清200份,仅3例假阳性(1.5％)。用双盲法检测血吸虫病流行区江西矶山岛居民血清339份,其中粪检阳性血清114份,阳性率为89.47％,粪检阴性血清225份,阳性率为69.33％,研究证明NP28-5B具有高度诊断潜能。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的建株...

A hybridoma cell line secreting an IgM monoclonal antibody designated NP30 was obtained from a fusion of SP2/o and spleen cells of a BALB/c mouse chronically infected with schistosoma japonicum for one and a half year and identified by screening with immunized rabbit sera against gut-associated antigen (GAA) and soluble egg antigen (SEA) of S. japonicum, indicating that the NP30 was an anti-anti-antigen or anti-antibody. NP30 was further determined to be an anti-idiotypic antibody (anti-id) which was serologically and functionally identical to GAA, so that it could be portrayed as the internal image of GAA, which might have the potential to be used as an antigenic reagent in immunodiagnostic assays of schistosomiasis japonica.     

重组 GST-HD融合蛋白的血吸虫病早期诊断价值

目的研究重组日本血吸虫中国大陆株23kDa膜蛋白大亲水性肽段与谷胱苷肽的融合表达蛋白(GST-HD)用于血吸虫病早期诊断的价值。方法用日本血吸虫尾蚴感染家兔,收集感染前及感染后不同时间的家兔血清。用酶联免疫方法检测家兔感染血吸虫后不同时间的血清中抗GST-HD融合蛋白及可溶性虫卵抗原(SEA)抗体IgG水平,观察不同感染时间点家兔对GST-HD、SEA的反应状况。用GST-HD检测90份急性血吸虫病人血清及30份健康人血清,评估其对血吸虫急性感染诊断的价值。结果在感染后的第17、21、24天,抗GST-HD的阳性率分别是42.85%、92.80%和100.00%,而抗SEA的阳性率分别为14.28%、50.00%和84.60%,GST-HD融合蛋白检测血吸虫早期感染的敏感性明显高于SEA。GST-HD融合蛋白检测急性血吸虫病人的阳性预告值及阴性预告值分别为98.89%和96.67%,诊断效率为98.33%。结论日本血吸虫23kDa膜蛋白分子的大亲水肽段融合蛋白具较好的血吸虫病早期诊断潜能。     

NP30/抗体检测试剂盒在云南大山区型血吸虫病流行区的现场应用

目的用NP30/抗体检测试剂盒在大山区型血吸虫病流行区筛查病人,评价其应用价值。方法在云南省大山区型血吸虫病流行区,选择3个自然村作为现场,随机抽取10～70岁的村民作为调查对象,进行血吸虫病病史个案调查;收集粪便,作毛蚴孵化检查;静脉采血,分离血清,分别采用NP30/抗体检测试剂盒和酶联免疫吸附试验试剂盒（SEA/ELISA法）检测特异性IgE和总IgE抗体。结果3个村共筛查村民506人,粪便毛蚴孵化阳性164例,阳性率为32.41%;NP30和SEA/ELISA的阳性率分别为58.30%和75.10%。在164例粪检阳性血清样本中,NP30和SEA/ELISA的阳性符合率分别为87.80%和84.76%。在342例粪孵阴性血清样本中,NP30和SEA/ELISA的阳性率分别为44.15%和70.47%。结论NP30/抗体检测试剂盒具有较高的敏感性和特异性,可用于大山区型血吸虫病流行区病人筛查。     

弓形虫感染者血清IgM和IgG抗体免疫印迹谱分析

目的探索近期和慢性弓形虫感染的免疫诊断标志物。方法采用无毒灵敏的TMB为底物的酶联免疫印迹技术,分析弓形虫感染者IgM或IgG抗体阳性血清与弓形虫速殖子可溶性抗原的免疫反应谱。结果IgM抗体对p35、p38和p22的识别比例达80%以上,且反应带出现率较其它抗原组分高,而p32、p30与IgG抗体的反应带出现率和识别比例也分别高达40%和80%以上。其中,反应最强烈最具代表性的分别属p35(出现率81.5%,P<0.0001)和p32(出现率57.1%,P<0.0001)。结论p35、p38、p22可能为近期弓形虫感染的诊断标志物,p32和p30则可能是慢性弓形虫感染的诊断标志物。     

抗体差异度法推测血吸虫病患者感染时间的探讨

目的探讨抗体差异度法推测血吸虫病患者感染时间的可行性。方法检测小鼠和急性血吸虫病患者血清中的IgM、IgG抗体水平，并分别计算抗体差异度值，推测急性血吸虫病患者的感染时间；通过循环抗原检测和免疫印迹反应验证急性血吸虫病患者的感染情况，并与现场流行病学调查资料相比对。结果经抗体差异度值分组的急性血吸虫病患者的感染时间明显不同，差异度值大于0．61的患者感染时间约为4-5周，而小于0．61的患者感染时间在7-8周以上。结论抗体差异度法在推测急性日本血吸虫病患者的感染时间方面具有可行性。