人脊索瘤细胞系CM-319的建立及其生物学特性的观察

目的　建立人脊索瘤细胞系 ,为脊索瘤研究提供实验模型。方法　取经病理证实的新鲜脊索瘤手术标本 ,进行体外原代组织块培养。对存活细胞进行形态学观察、组织化学染色、细胞周期检查、染色体分析、电镜观察、异种移植和体外侵袭实验等。结果　建成细胞系CM 319,经近两年的体外培养 ,已连续传代百余次。其形态学表现、组织化学染色、电镜观察和异种移植等均符合脊索瘤细胞特征。细胞倍增时间为 33h。细胞周期测定显示 :G1 期为 5 5 .6 % ,G2 期为 2 1.9% ,S期为2 2 .5 % ,G2 G1 为 1.90。染色体具有亚三倍体核型。异种移植成瘤率 10 0 % ,具有侵袭性。结论　CM 319是一株人脊索瘤细胞系 ,可用于对脊索瘤的研究。     

小鼠子宫颈癌U14细胞系的建立及生物学特性研究

目的：建立小鼠宫颈癌肿瘤细胞系。观察其生物学特性。方法：采用肿瘤原代培养法对小鼠U14肿瘤进行体外传代培养，定期对培养细胞进行形态学观察．进行免疫组织化学鉴定、细胞周期检查、染色体检测、细胞生长测定，进行615、C57BL／6j小鼠移植观察体内成瘤情况，并用pEGFP-N1质粒转染U14细胞。结果：细胞呈贴壁和悬浮混合生长，CK阳性特征。体外连续培养10个月，传代50代，细胞倍增时间为21．83h，细胞周期测定G1期为34％，G2期为26．4％，S期为39．6％。培养U14细胞3-4天处于对数生长期，染色体为亚四倍体核型，众数为64～84条。615小鼠、C57BL／6j小鼠移植成瘤率均为100％．无支原体污染。建立了GFP（＋）的U14-GFP单克隆细胞株。结论：成功建立了小鼠U14子宫颈癌细胞系及GFP标记的U14-GFP细胞株，体内移植可建立常规及带荧光标记的肿瘤模型，可用于体内体外相结合的肿瘤研究。     

小鼠乳腺癌细胞系Ca761-03的建立及其生物学特性研究

目的：建立体外培养的小鼠乳腺癌细胞系，明确其生物学特性。方法：利用乳腺癌移植瘤组织，进行体外原代培养，并对其纯化和反复传代，进行生长曲线，倍增时间，软琼脂集落形成，细胞周期，染色体众数，免疫组织化学染色及体内成瘤率，转移率等鉴定。结果：建立了一个小鼠乳腺癌细胞系，命名为Ca761-03。其生长迅速，呈贴壁生长。倍增时间为25．98h；平均软琼脂克隆形成率为5．39％；G1期31.8％，S期57.3％，G2＋M期10．9％；CK染色为阳性，ER，PR均为阴性；体内移植成瘤率100％，肺转移率100％，未见淋巴结转移。结论：成功建立了小鼠乳腺癌细胞系．并对其生物学特性进行了较系统的观察与研究。     

小鼠子宫颈癌U14细胞系的建立及生物学特性研究

目的:建立小鼠宫颈癌肿瘤细胞系,观察其生物学特性。方法:采用肿瘤原代培养法对小鼠U14肿瘤进行体外传代培养,定期对培养细胞进行形态学观察,进行免疫组织化学鉴定、细胞周期检查、染色体检测、细胞生长测定,进行615、C57BL/c小鼠移植观察体内成瘤情况,并用pEGFP-N1质粒转染U14细胞。结果:细胞呈贴壁和悬浮混合生长,CK阳性特征。体外连续培养10个月,传代50代,细胞倍增时间为21.83小时,细胞周期测定G1期为34%,G2期为26.4%,S期为39.6%。培养U14细胞3-4天处于对数生长期,染色体为亚四倍体核型,众数为64～84条。615小鼠、C57BL/c小鼠移植成瘤率均为100%,无支原体污染。建立了GFP( )的U14-GFP单克隆细胞株。结论:成功建立了小鼠U14子宫颈癌细胞系及GFP标记的U14-GFP细胞株,体内移植可建立常规及带荧光标记的肿瘤模型,可用于体内体外相结合的肿瘤研究。     

hTERT反义寡核苷酸对脊索瘤细胞周期及增殖的影响

目的：探讨hTERT反义寡核苷酸（ASODN）抑制CM-319细胞端粒酶活性对脊索瘤细胞的细胞周期及增殖的影响。方法：用脂质体介导hTERT正义寡核苷酸（SODN）和反义寡核苷酸（ASODN）转染CM-319脊索瘤细胞株72小时后,MTT法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率变化。结果：hTERT的ASODN转染细胞的端粒酶活性及细胞生长都明显受到抑制。流式细胞仪检测显示：ASODN组细胞出现早期凋亡峰,细胞阻滞于S期,而hTERT的SODN则无此作用。ASODN组细胞凋亡率为16.01%,而hTERT的SODN组为2.3%。结论：端粒酶hTERT为靶点的反义寡核苷酸可明显抑制脊索瘤细胞的增殖,且具有促凋亡作用。     

hTERT反义寡核苷酸对脊索瘤细胞周期及增殖的影响

目的:探讨hTERT反义寡核苷酸(ASODN)抑制CM-319细胞端粒酶活性对脊索瘤细胞的细胞周期及增殖的影响。方法:用脂质体介导hTERT正义寡核苷酸(SODN)和反义寡核苷酸(ASODN)转染CM-319脊索瘤细胞株72小时后,MTT法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率变化。结果:hTERT的ASODN转染细胞的端粒酶活性及细胞生长都明显受到抑制。流式细胞仪检测显示:ASODN组细胞出现早期凋亡峰,细胞阻滞于S期,而hTERT的SODN则无此作用。ASODN组细胞凋亡率为16.01%,而hTERT的SODN组为2.3%。结论:端粒酶hTERT为靶点的反义寡核苷酸可明显抑制脊索瘤细胞的增殖,且具有促凋亡作用。     

人骨肉瘤细胞体外培养与桂皮酸诱导分化的实验研究

目的:体外培养手术切取人骨肉瘤标本并由植物成分桂皮酸(cinnamic acid,CINN)处理,研究其对肿瘤细胞增殖的抑制作用及诱导分化作用.方法:应用原代法培养手术切除标本,传代至第10代获得相当的细胞量后,设立对照组使用CINN处理,对各组骨肉瘤细胞进行形态学观察,组织化学染色,免疫组织化学染色,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期和裸鼠移植瘤试验.结果:以浓度为2×10-3 mol/L的CINN处理人骨肉瘤细胞,其存活细胞形态学观察和染色结果均显示分化改变,增殖抑制率第2天为23.3%,第4天为41.7%,第6天为50.6%.FCM检测显示,对照组细胞G1期72.5%,G2期24.9%,S期2.6%;实验组细胞G1期60.9%,G2期9.6%,S期29.5%.处理后的细胞裸鼠移植瘤生长较对照组缓慢,切片呈现大片坏死.结论:原代法体外培养人骨肉瘤细胞成功,体外实验CINN有抑制骨肉瘤细胞增殖和诱导其分化的作用.     

裸小鼠高分化食管鳞状细胞癌株(RE25/N)的建立及其生物学特性的研究

大鼠食管癌裸小鼠细胞株在国内外均很少见,本实验室于1986年11月开始,将体外恶性转化的大鼠食管癌细胞系(RE_(25-3))接种于Swiss及NC两种裸小鼠皮下,并传代获得成功,至今已传至14代,该移植瘤具有生长稳定、接种成功率高(100％),潜伏期短及无自发消退等特点。形态学观察:光镜下肿瘤为高分化鳞癌;电镜观察,超微结构符合高分化鳞癌的改变。流式细胞仪(FCM)的DNA分析,其DNA含量的DI值与其在体外培养的母细胞系相似,但细胞周期各期细胞的比例有明显差异。在裸小鼠体内生长的移植瘤,其S期及G_(2+)M期细胞比例明显降低,说明体内生长的移植瘤其生长增殖能力较体外培养的细胞系为低,生长较慢,可能与宿主对移植瘤的作用有关。     

人肺腺癌细胞系Ch-Huang-1的建立和生物学特性研究

背景与目的肺癌是严重威胁人类生存和发展的恶性疾病之一,本研究旨在建立人肺腺癌细胞系,探讨其生物学特性,为进一步明确肺癌的发生机理,提供一个技术平台。方法取人肺腺癌新鲜手术肿瘤标本,经组织块体外培养并克隆建系,命名为Ch-Huang-1。采用光镜、细胞生长曲线、染色体核型分析、克隆形成率及免疫缺陷小鼠成瘤实验对细胞系生物学特性进行分析。结果细胞系及移植瘤标本证实具有腺癌恶性细胞特征。生长曲线呈S型,细胞群体倍增时间为36 h。分裂指数曲线为倒V字型,培养第30小时处于分裂期的细胞最多。克隆形成率为0.803%±0.078%。观察到肿瘤细胞染色体数目为亚三倍体,有明显的染色体异常。裸鼠皮下异种移植形成移植瘤。结论根据细胞系特征显示该细胞系是一新建的肺腺癌细胞系。     

青蒿琥酯对人乳腺癌MCF-7细胞裸鼠移植瘤的作用及IGF—IR的影响

[目的]观察青蒿琥酯对人乳腺癌MCF-7裸鼠移植瘤生长的作用，并探讨其抑制肿瘤的机制。[方法]建立人乳腺癌MCF-7裸鼠移植瘤模型，给予不同剂量青蒿琥酯治疗并观察其对移植瘤的抑制作用；电镜观察移植瘤细胞形态学改变；流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期的变化：免疫组化检测移植瘤细胞p53、bcl-2、bax和caspase-3的表达情况，分析它们之间的相关性；Westernblot检测IGF—IR蛋白的表达：[结果]给药12d后，低剂量、高剂量青蒿琥酯组、CTX组和联合给药组抑瘤率分别为（24．39±10．20）％、（40．24±7．02）％、（57．01±5．84）％和（68．29±5．1）％；青蒿琥酯使肿瘤细胞阻滞于G0／G1期而使S期细胞减少；在青蒿琥酯组中，bcl-2的蛋白表达量明显下降，bax、caspase-3蛋白表达上调，p53蛋白表达量与对照组比较无差异：bcl-2／bax及bcl-2／caspase-3表达均呈负相关．IGF-IR蛋白表达下调。[结论]青蒿琥酯可显著抑制乳腺癌MCF-7细胞裸鼠移植瘤的生长，其机制可能与其影响细胞凋亡相关蛋白、诱导凋广、抑制细胞增殖有关．     

人肝癌裸鼠连续传代的病理变化特征

目的：探讨裸鼠人肝癌20年连续传代的病理变化特征。方法：裸鼠人肝癌组织模型（SMMU-LTNM）连续观察20年（1987—2007年），皮下移植瘤传至228代，建立腹腔移植瘤、肝原位移植瘤及NOD-SCID小鼠肝原位移植瘤的病理资料，经光镜、电镜、图像分析、染色体分析、周围血液AFP检测等方法分析病理变化特征。结果：（1）上述4种肿瘤模型的局部侵袭和转移均长期存在：皮下移植瘤的局部侵袭率为59．70％（40／67），肺内转移率为37．10％（23／62）；腹腔移植瘤的肺内转移率为59．02％（36／61）；肝原位移植瘤的肝内转移率为18．18％（4／22），肺内转移率为31．82％（7／22）；NOD—SCID小鼠肝原位移植瘤的肺内转移率为53．85％。（2）皮下移植瘤的组织学变化：第10代前的瘤细胞分化和组织结构与原人肝癌近似，以Ⅱ级分化、粗梁型为主；第11代至225代瘤细胞以分化Ⅲ级、团块型为主，电镜下亦证实瘤细胞分化更差。（3）AFP检测第32代前为92500μg／L，第33代至130代AFP下降为6729μg／L，220代AFP检测为1000—5000μg／L。（4）腹腔移植瘤的瘤细胞群体与肺转移瘤的瘤细胞群体DNA含量分布范围明显增宽，2C-6C不等，峰值明显右移，前者的分布范围比后者更宽；DNA含量分别为2．60±0．20和2．10±0．26。（5）染色体检测，第55—206代（相隔12年）部分瘤细胞染色体变为裸鼠染色体。结论：裸鼠皮下移植瘤可连续传代20年，局部侵袭及转移的恶性生物学行为不变；瘤细胞分化更差，AFP下降，部分瘤细胞染色体变为裸鼠染色体。这些病理变化可能与裸鼠内环境影响和瘤细胞的多潜能分化有关。     

三氧化二砷对大肠癌LoVo细胞的影响及其与5-Fu的协同作用

目的：观察三氧化二砷(Arsenic Trioxide，As2O3)对大肠癌LoVo细胞的体外杀伤作用，并研究其和5-氟脲嘧啶(5-FU)的协同作用。方法：用MTT法检测细胞的体外生长抑制情况。用光镜、电镜观察细胞的形态学变化，流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果：As2O3对LoVo细胞的抑制作用随着浓度和作用时间的增加而增大，通过光镜、电镜可观察到细胞的凋亡。经流式细胞仪检测As2O3作用后的肿瘤细胞，G0/G1细胞从42．3％下降到31．3％，S期细胞从39％上升到62％。药物作用48h，As2O3(0．3mg／L)组抑制率为30．38％，而联合治疗组抑制率增至73．75％。结论：As2O3对LoVo细胞具有杀伤作用，其对LoVo细胞生长抑制的影响主要作用于G0／G1期细胞。As2O3与5-FU对大肠癌LoVo细胞具有协同作用。     

C2-神经酰胺对问皮瘤细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的：采用人工合成的外源性C2-神经酰胺研究其对体外培养的间皮瘤细胞和体内移植瘤的移植作用，为是否能将C2-神经酰胺作为治疗人恶性间皮瘤的新化疗药提供初步理论依据。方法：在体外实验中，C2-神经酰胺作用于人恶性间皮瘤细胞后，采用CCK-8法测定细胞增殖中活细胞数目并制作细胞剂量和时间的生长曲线。荧光激活流式细胞分离术（FACS）观察间皮瘤细胞周期的变化。DNAladder对凋亡细胞进行分析。Fluorescentassay法检测间皮瘤细胞的Caspase-3活性。在体内实验中，建立荷瘤裸鼠动物模型。随机分为四组，C2-神经酰胺腹腔注射组、C2-神经酰胺皮下注射组、DMSO组和生理盐水组。观察治疗后裸鼠自然状态、重量，计算肿瘤体积，2l天时处死裸鼠，肉眼及镜下观察。免疫组织化学染色观察C2-ceram-ide对人间皮瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭的影响。结果：体外实验中，在一定的时间与剂量范围内，C2-神经酰胺对间皮瘤细胞的抑制呈现剂量依从和时间依从性。FACS及DNA电泳细胞凋亡分析均表明，C2-神经酰胺在体外可诱导间皮瘤细胞的凋亡。FACS检测到G0／G1期细胞明显减少，s期细胞增多，细胞周期阻滞于G2／M期。Caspase-3活性测定发现C2-神经酰胺能增加间皮瘤细胞Caspase-3的活性。体内实验中，C2-神经酰胺组裸鼠肿瘤的重量、体积均小于未治疗组。C2-神经酰胺组肿瘤组织Caspase-3蛋白表达明显强于未治疗组。结论：本实验证实C2-ceramide在体内、外均可抑制恶性间皮瘤细胞增殖、侵袭，诱导间皮瘤细胞凋亡，进一步了解间皮瘤细胞的生物学特性，为临床试验奠定了一定的基础。     

表达P53基因的人胰腺癌细胞系JF305的建立

利用自建的人胰腺癌裸鼠移殖瘤，成功地建立了人胰腺癌细胞系ＪＦ３０５历时一年余，２－３天传代一次，至今传代１０３次，平均倍增时间为４９．５小时，集落形成率为３０．６％，多次冻存、复苏，细胞生长稳定。重新接种于裸鼠皮下后形成移植瘤的生物学及形态学特征与该细胞系所来源的肿瘤相似，为中分化腺癌，染色体分析为人类染色体核型，数目在６６－１３０，免疫细胞化学染色发现ＪＦ３０５有ＣＥＡ和Ｐ５３抑癌基因蛋白的过度     

二烯丙基二硫对裸鼠体内人结肠癌细胞增殖的影响

背景与目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)在体外可抑制多种肿瘤细胞增殖,但在体内抗肿瘤作用的研究报道较少.本实验旨在研究DADS对裸鼠体内人结肠癌SW480细胞增殖的影响.方法:建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型,实验动物分为DADS组及对照组.观察DADS作用后移植瘤体积和重量的变化,通过光镜和电镜观察移植瘤细胞形态学变化,通过免疫组织化学和形态定量图像分析系统检测瘤组织内增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达变化,用流式细胞术检测移植瘤细胞周期分布.结果:DADS在体内能明显抑制移植瘤的生长,相对肿瘤增殖率为49.85%;组织学分析显示DADS组瘤细胞异型性降低,核质比下降,胞浆内细胞器丰富,部分胞核呈退行性变,可见凋亡小体;免疫组化示两组移植瘤组织PCNA蛋白均有阳性表达,DADS组(149.02±4.26)与对照组(178.86±7.69)比较,裸鼠移植瘤组织内PCNA蛋白表达明显减弱(P＜0.05);流式细胞术分析显示,对照组移植瘤细胞中G2/M期细胞为18.8%,与对照组比较,DADS组G2/M期细胞(38.6%)显著增多.结论:DADS可体内抑制人结肠癌SW480细胞增殖,使癌细胞阻滞于G2/M期.     

高能X线诱导人鼻咽癌细胞系移植瘤凋亡的研究

目的通过研究高能Ｘ线诱导人鼻咽癌细胞系移植瘤的凋亡来观察其特异的形态学特征，凋亡与时间、剂量之间的关系。材料与方法ＣＮＥ－２细胞系移植瘤模型经加速器给予一定的剂量，按不同的时间取出肿瘤，于光镜下观察ＨＥ染色切片，并计数凋亡细胞；通过电镜及凝胶电泳分别观察了凋亡细胞的超微结构和特殊的梯度ＤＮＡ片段。结果发现照射后鼻咽癌凋亡细胞出现典型的形态学特征及梯度ＤＮＡ片断。照射４Ｇｙ和８Ｇｙ，分别于受照后０．５小时、２小时、６小时、１２小时、２４小时切取肿瘤，其凋亡指数分别为１．３２％、１．７１％、３．７７％和１．９１％（２４小时未测）；１．８４％、４．２１％、６．６０％、４．１９％及３．０４％。然后按０，２，４，８，１２，２０Ｇｙ照射肿瘤，６小时后其凋亡指数分别为０．３５％、２．３６％、３．７７％、６．６０％、９．９３％及１３．５９％。结论ＣＮＥ－２细胞移植瘤的最大凋亡率出现于照射后６小时，随着照射剂量的增加凋亡指数也随之增加，没有出现明显的变缓。     

肺癌细胞系XWLC-05的建立及其生物学特性研究

背景与目的:云南省宣威地区是我国肺癌高发地区之一,女性肺癌死亡率居全国首位,本研究旨在建立云南宣威女性肺腺癌细胞系,为肺癌高发区的防治研究提供理想的体外实验模型.方法:以手术切除的肺癌组织标本进行原代培养,通过光镜观察、电镜观察、绘制生长曲线、计算倍增时间、双层软琼脂培养、流式细胞仪、染色体及其显带分析、肿瘤标志物检测、异体移植实验及免疫组化检测等对其生物学特性进行分析鉴定,建立细胞系.结果:体外培养细胞生长稳定,细胞形态学、增殖动力学及浸润性生长结果表明该细胞系符合恶性细胞特征,染色体数目分布在55～69之间,众数为60～63;小鼠接种成瘤率为100%,瘤细胞形态与原患者的病理切片相似,命名为XWLC-05(Xuanwei Lung Cancer-05).结论:该细胞系符合建系标准,是一株新建的人肺腺癌细胞系.     

人肝癌顺铂耐药细胞系的建立及其生物学特征

背景与目的：药物耐受性是当前肿瘤研究的热点,国内外普遍应用体外建立的耐药细胞系作为研究模型。为探讨肝癌对顺铂耐药的机理。本研究首次建立了人肝癌顺铂耐药细胞系并研究其生物学特性。方法：采用逐步递增顺铂浓度,间歇作用体外诱导法建立人肝癌顺铂耐药细胞系QGY/cDDP;MTT法测定药物敏感性,光镜,电镜,活细胞计数法,流式细胞仪及染色体分析等方法观察其生物学特征的改变。结果：历时3个月建成人肝癌顺铂耐药细胞系QGY/cDDP,其对顺铂的耐药指数为10.81,并且与5-氟尿嘧啶,表阿霉素等多种抗癌药有不同程度的交叉耐药性;QGY/cDDP的细胞形态及染色体数目发生改变;体外群体倍增时间较亲代细胞延长;细胞周期分析发现其S期与G2/M期细胞减少,G0/G1期细胞增多。结论：QGY/cDDP细胞具有耐药表型,且耐药性能稳定。     

Stathmin siRNA表达载体的构建及对LM8细胞生物学行为的影响

背景与目的:Stathmin在多种恶性肿瘤细胞中都有高水平表达,通过抑制其表达可以干扰恶性肿瘤细胞的分裂,影响肿瘤细胞的增殖与凋亡。本研究构建并观察stathmin基因RNA干扰表达载体转染LM8细胞系后对stathmin表达及细胞生物学行为的影响。方法:构建靶向stathmin干扰质粒pGenesil-1-Stathmin和通用对照质粒pGenesil-1-HK,以脂质体法将2个重组质粒分别转染骨肉瘤LM8细胞系。实时荧光定量PCR和Western印迹技术检测各组LM8细胞系stathmin在mRNA和蛋白水平的表达,MTT(噻唑蓝)法比色分析检测细胞体外生长抑制率,软琼脂集落形成实验观察单个细胞体外增殖活力,细胞HE染色观察细胞形态学的变化,Hoechst染色观察细胞凋亡特征并计算凋亡率,流式细胞术定量分析细胞周期变化,C3H小鼠移植瘤实验显示肿瘤细胞成瘤能力。结果:DNA测序证实成功构建pGenesil-1-Stathmin重组质粒。转染LM8细胞后,明显抑制stathmin基因表达;细胞体外生长抑制率显著增加;单个细胞体外增殖活力显著下降;细胞HE染色部分细胞呈典型的凋亡细胞形态学改变;Hoechst染色显示细胞凋亡特征,细胞凋亡率明显高于对照组;流式细胞术检测显示细胞周期阻滞于G2/M期,明显高于对照组;C3H小鼠移植瘤实验显示特异转染组致瘤率下降,肿瘤生长减缓。结论:成功构建的靶向干扰质粒pGenesil-1-Stathmin能有效抑制stathmin基因在骨肉瘤LM8细胞的表达并影响其相关生物学行为,其抑制骨肉瘤细胞的增殖与生长,为stathmin基因应用于骨肉瘤的基因治疗研究奠定了理论基础。     

人子宫内膜癌细胞系HECCL—1的建立及其生物学特性的初步观察

目的：建立人子宫内膜癌细胞系，瘩研究其生物学特性。方法：将传代稳定后的人子宫内膜癌裸小鼠移植瘤标本用贴壁培养法建立细胞系，用光学显微镜，电子显微镜观察细胞系的形态，研究细胞系的生长及生物学特性。结果：成功建立1株人子宫内膜癌细胞系，已传代60代，命名为HECCL－1。其生物学特征为：形态学具有腺上皮癌细胞的特点，细胞生长旺盛，DNA为非整倍体，连续传代后仍保留人类肿瘤染色体的特点，异种动物移植阳性，雌，孕激素受体表达均阴性。结论：HECCL－1细胞系的建立，为开展人类子宫内膜癌的基础及临床研究提供了理想的实验工具。