加减益气聪明汤及单味黄芪药物血清对成纤维细胞胶原合成速率的影响

本实验观察了加减益气聪明汤和单味黄芪鼠血清对体外培养成纤维细胞胶原合成速率的影响。结果表明与青年鼠血清比较，老年鼠血清可明显增高成纤维细胞胶原合成速率；而加减益气聪明汤鼠血清和单味黄芪鼠血清均可显著降低成纤维细胞胶原合成速率。提示补气方药可以通过抑制胶原蛋白的合成，改善结缔组织增生和血管硬化，增加血管弹性，提高供血量，从而使衰老机体的动脉硬症状得到改善。     

益气活血化瘀方药对血管胶原转换及相关基因表达的影响

目的：观察益气活血化瘀中药对大鼠血管细胞外基质(ECM)重塑的影响并探讨其分子机制。方法：采用^3H—TdR和^^3H—Pro掺入实验和血管壁羟脯氨酸含量测定检查血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活性及胶原合成与降解程度;应用Northern印迹和Ⅳ型胶原酶(MMP-2)酶图分析检测MMP-2和骨桥蛋白表达的变化。结果：益气活血化瘀中药可显著抑制bFGF对VSMC的促胶原合成作用,降低血管内皮剥脱大鼠血管壁胶原转换速率,下调MMP-2和骨桥蛋白在体外培养的VSMC及血管壁中的表达水平,抑制VSMC增殖。中药血清去蛋白后对VSMC的影响不发生明显变化。结论：益气活血化瘀中药通过调节MMP-2和骨桥蛋白基因表达及降低胶原转换速率可抑制和(或)减缓ECM重塑。     

粉防己碱抑制瘢痕形成机理的研究

目的：探讨粉防己碱对瘢痕形成的抑制作用及其机理。方法：采用瘢痕成纤维细胞体外培养和兔实验性瘢痕模型,观察粉防己碱对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的作用。结果：体外实验粉防己碱组^3H－TdR掺入率和^3H－脯氨酸掺入率均较对照组明显降低,呈剂量依赖关系;动物实验粉防己碱能明显减少瘢痕组织中成纤维细胞的数量,降低胶原面密度,减轻瘢痕纤维化程度。结论：粉防己碱对瘢痕成纤维细胞过度增殖和胶原沉积具有抑制作用,可能是其抗瘢痕纤维化的主要机制之一。     

益气升陷活血方对心梗后心衰低血压大鼠心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响

目的:探讨益气升陷活血方及其拆方对心梗后心衰低血压大鼠心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响。方法:采用大鼠心脏左冠状动脉结扎术,建立心衰模型,将LVEF值≤50%、尾动脉收缩压≤90 mm Hg的大鼠随机分为4组,即心衰低血压组、益气升陷活血方组、益气升陷组、活血化瘀组,灌胃干预8周。用免疫组化及RT-PCR检测心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原,并实时定量PCR检测心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原m RNA的含量。结果:与心衰低血压组比较,所有治疗组心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及m RNA的含量均降低(P<0.05);与活血化瘀治疗组比较,益气升陷组、全方治疗组,心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原m RNA的含量均降低,全方治疗组更显著(P<0.05)。结论:全方治疗组、益气升陷组、活血化瘀组能减轻心梗后心衰大鼠心肌纤维化的程度,减少心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量,其中全方治疗组较益气升陷治疗组、活血化瘀治疗组的改善作用明显,益气升陷组次之。     

黄芪水蛭及其不同比例配方含药血清对大鼠系膜细胞增殖和分泌Ⅳ型胶原影响的比较研究

目的:探讨黄芪(RA)、水蛭(H i)及其不同比例配方对大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增殖和分泌Ⅳ型胶原含量的影响。方法:应用ELISA法测定GMCs增殖和Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的含量。结果:水蛭和黄芪均可抑制GMCs增殖和降低Col-Ⅳ的含量,但黄芪的作用弱于水蛭(P<0.01)。结论:水蛭和以水蛭为主的配方在抑制体外培养的大鼠GMCs增殖和Col-Ⅳ的分泌作用方面强于黄芪和以黄芪为主的配方。     

加减益气聪明汤对高脂动脉粥样硬化兔脂质代谢和血液流变学的影响

本实验观察到,加减益气聪明汤可显著降低高脂动脉粥样硬化兔血清总胆固醇、甘油三酯、心脑组织过氧化脂质含量,提高血清高密度脂蛋白及心、脑组织超氧化物歧化酶含量,减轻动脉粥样斑块形成程度。实验还发现,加减益气聪明汤能明显纠正高脂动脉粥样硬化兔血小板聚集功能异常亢进,延缓体外血栓形成,改善血液粘度。     

固真饮延缓皮肤胶原衰老的实验研究

温补肾阳方药固真饮能显著提高雄性老年大鼠皮肤中新生胶原、中性盐溶性胶原及酸溶性胶原含量,降低不溶性胶原含量,增加肝组织蛋白含量,并能抑制肝组织胶原酶活性,表明该方药具有良好的抗大鼠皮肤老化的作用。     

黄芪对老年大鼠脑M受体,心肌β受体等的调节作用

为探讨温阳益气药的抗衰老机制,本文主要观察了老年大鼠脑M受体、心肌β受体、血浆环核苷酸、LPO、SOD、T_3、T_4皮质醇的改变以及黄芪的调节作用,分别用放射自显影方法、放射配基结合分析法、放射免疫分析法测定脑M胆碱受体、心肌β受体、血浆环核苷酸。结果表明:M受体包括M_1亚型受体主要分布在大脑皮质、海马、纹状体部位,老年大鼠这三个部位的密度显著低于青年大鼠,老年服黄芪组三个部位的受体密度显著高于老年对照组;老年大鼠心肌β受体最大结合容量Bmax显著低于青年大鼠,黄芪可以显著提高老年大鼠心肌β受体Bmax;老年大鼠cAMP,cGMP含量均显著升高,但cAMP/cGMP比值降低,黄芪可以纠正这种失衡。另外,老年大鼠血浆SOD活力降低,LPO含量升高,甲状腺激素T_3,T_4和皮质醇含量均显著降低,黄芪对这些改变均具有调节作用。说明:黄芪抗衰老的作用是多方面的,是针对多个系统的综合性调节。     

杞菊合剂对压力负荷性高血压大鼠左室肥厚的作用

目的：探讨杞菊合剂对压力负荷性高血压大鼠左室肥厚的防治作用和机理。方法：用腹主动脉缩窄法造成压力负荷性高血压大鼠模型，以苯那普利作为对照，观察杞菊合剂对血压、左心室重量、微结构以及心肌中胶原含量和钙调神经磷酸酶活性的影响。结果：杞菊合剂可以减轻左心室重量，降低血压，减少胶原的增生，并且使心肌中钙调神经磷酸酶活性降低，微结构稳定。结论：杞菊合剂可以防治心肌肥厚，其作用机制与其降低血压和降低钙调神经磷酸酶活性有关。     

蛇床子总香豆素对新生大鼠成骨细胞的作用

目的：研究蛇床子总香豆素（TCFC）在体外对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖及成骨作用的影响。方法：酶消化法分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞;^3H-胸腺嘧啶和^3H-脯氨酸掺入法分别测定细胞增殖和胶原合成;磷酸苯二钠法测定细胞内骨碱性磷酸酶（ALP）活性;并以抗骨质疏松药物异丙黄酮（ipriflavone,IP)作为阳性对照药物。结果：TCFC对新生大鼠成骨细胞的增殖,ALP活性,骨胶原合成具有显的促进作用。结论：TCFC抗骨质惊讶松的作用与其增加成骨细胞的数量,促进细胞胶魇蛋白及ALP的活性有关。     

杞菊合剂对压力负荷性高血压大鼠左室肥厚的作用

探讨杞菊合剂对压力负荷性高血压大鼠左室肥厚的防治作用和机理。方法 :用腹主动脉缩窄法造成压力负荷性高血压大鼠模型 ,以苯那普利作为对照 ,观察杞菊合剂对血压、左心室重量、微结构以及心肌中胶原含量和钙调神经磷酸酶活性的影响。结果 :杞菊合剂可以减轻左心室重量 ,降低血压 ,减少胶原的增生 ,并且使心肌中钙调神经磷酸酶活性降低 ,微结构稳定。结论 :杞菊合剂可以防治心肌肥厚 ,其作用机制与其降低血压和降低钙调神经磷酸酶活性有关。     

黄芪甲苷对大鼠心肌纤维化的影响

目的:研究黄芪甲苷(astragaloside IV)对大鼠心肌纤维化的影响和作用机制。方法:异丙肾上腺素腹腔注射造成心肌纤维化模型。大高鼠随机分为空白对照组、异丙肾上腺素模型组(10mg/kg)、异丙肾上腺素+普萘洛尔组(40mg/kg)、异丙肾上腺素+黄芪甲苷组(40mg/kg);30天后处死大鼠,分别测量大鼠全心质量指数HMI和左心室质量指数LVMI,进行组织形态学染色,测定血清中Ⅰ型前胶原羧基端前肽(PⅠCP)及其抑制物Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(ⅠCTP);分别检测转化生长因子β(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、Smad2/3、Smad4、Smad7、肌动蛋白α(α-SMA)的表达。结果:异丙肾上腺素模型组的HMI、LVMI较空白组明显增加;血清中PⅠCP、ⅠCTP含量增高;TGF-β1、Smad2/3、Smad 4、α-SMA含量增高,Smad7含量减少。与模型组相比,黄芪甲苷(40mg/kg)能明显降低HMI及LVMI的比例,降低TGF-β1、Smad2/3、Smad 4、α-SMA含量,Smad7含量增加,PⅠCP、ⅠCTP含量降低。结论:黄芪甲苷对异丙肾上腺素所致的大鼠心肌纤维化有保护作用,可能与黄芪甲苷能降低TGF-β1以及α-SMA产生、能够抑制TGF-βSmad通路有关。     

当归红芪超滤物对辐射后心肌成纤维细胞的增殖和胶原分泌的影响

目的:研究当归红芪超滤物对辐射后心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响。方法:采用差速贴壁法原代分离培养大鼠心肌成纤维细胞;当归红芪超滤物干预或射线辐射心肌成纤维细胞后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞分泌Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)的含量;心肌成纤维细胞通过2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色在流式细胞仪下检测活性氧(ROS)的含量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测心肌成纤维细胞中COL-Ⅰ和转化生长因子-β(TGF-β)的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测相关蛋白的表达。结果:低剂量射线(0.5 Gy)辐射心肌成纤维细胞后,细胞内ROS的升高促进细胞增殖和胶原分泌的作用;当归红芪超滤物可以促进细胞中转录因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白的核转位来清除ROS,最终抑制辐射诱导的心肌成纤维细胞的增殖和胶原分泌;并且当归红芪超滤物明显抑制心肌成纤维细胞中COL-Ⅰ和TGF-βmRNA表达。结论:当归红芪超滤物可以抑制低剂量辐射诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌。     

通心络对自发性糖尿病大鼠心肌组织胶原网络重构的影响

目的:观察通心络对自发性糖尿病(GK)大鼠心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原阳性表达及含量、细胞转化生长因子(TGF-β1)含量的影响。方法:4月龄GK大鼠30只,随机分为GK对照组、通心络大、小剂量组,另取4月龄Wistar大鼠10只作正常对照,分别灌胃12周。灌胃结束后,制备心肌切片,免疫组化染色,计算胶原I、胶原Ⅲ阳性面密度比值以代表表达程度;取心肌匀浆,酶联免疫方法测定心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1含量。结果:与同月龄正常大鼠相比较,GK大鼠血糖明显增高(P0.01),通心络药物组有降低趋势,但无差异(P0.05)。与正常大鼠比较,GK大鼠心肌胶原Ⅰ阳性面密度比值明显增高(P0.01),胶原Ⅲ阳性面密度比值明显降低(P0.01),心肌匀浆胶原Ⅰ含量明显增高(P0.01),胶原Ⅲ含量降低(P0.05),心肌胶原Ⅰ/Ⅲ比值明显增高(P0.01),TGF-β1含量降低(P0.01);与7月龄GK大鼠比较,通心络组胶原Ⅰ阳性面密度明显降低(P0.01),高、低剂量组之间有差异(P0.05),胶原Ⅲ阳性面密度明显升高(P0.01);胶原Ⅰ含量明显降低(P0.01),胶原Ⅲ含量明显提高(P0.01),胶原Ⅰ/Ⅲ比值降低(P0.01),TGF-β1含量明显提高(P0.01),高、低剂量组之间无差异(P0.05)。结论:通心络可降低GK大鼠心肌胶原Ⅰ阳性表达,Ⅰ型胶原含量,升高胶原Ⅲ阳性表达,Ⅲ型胶原含量,降低胶原Ⅰ/Ⅲ比值,升高TGF-β1含量,具有改善心肌间质网络重构作用。     

当归黄芪超滤膜提取物含药血清对辐射心肌成纤维细胞增殖和胶原的影响

目的：观测当归黄芪超滤膜提取物含药血清对辐射心肌成纤维细胞增殖和胶原的影响．方法：用胰酶-胶原酶消化法分离培养乳鼠心肌成纤维细胞,建立体外培养体系,将已经过药物干预24h的第2代细胞进行剂量10Gy的辐照．继续培养48h,检测细胞增殖、超氧化物歧化酶、羟脯氨酸含量的变化。结果：与空白组相比．模型组细胞增殖抑制．超氧化物歧化酶活力下降,羟脯氨酸含量增加;与模型组相比,药物组细胞增殖明显受到促进,超氧化物歧化酶活力提高．脯氨酸含量下降。结论：辐射明显抑制细胞增殖,提取物含药血清能剂量依赖性的促进辐照后细胞增殖．去除氧自由基．但对胶原含量并无影响。     

黄芪和丹参提取物配伍对大鼠心肌梗死后心肌组织病理变化的影响

目的:探讨黄芪和丹参提取物配伍对心肌梗死大鼠心肌组织病理变化的影响.方法:成功构建大鼠心梗模型后,随机分为模型组、黄芪组、丹参组、黄芪-丹参配伍组,每组8只大鼠,另设假手术组8只.术后48 h,黄芪、丹参及黄芪-丹参配伍组大鼠,均按20 mg· kg-1灌胃,其中黄芪-丹参配伍组,黄芪、丹参提取物按照1∶1配伍;对照组和假手术组给予生理盐水20 mL·kg-1灌胃.8周后测定大鼠的血流动力学变化;应用HE染色分析左心室心肌细胞组织形态学变化;采用Masson染色法检测左心室心肌胶原纤维;应用免疫组化法检测左心室心肌组织蛋白激酶D1(PKD1)的表达情况.结果:血流动力学检测结果表明,与模型组相比,假手术组、黄芪组-丹参组及黄芪丹参配伍组心脏左室收缩压(LVSP)、左室内压曲线最大上升和下降速率(±dp/dt)均显著升高(P＜0.01),左室舒张末压(LVEDP)均显著降低(P＜0.01),与丹参组相比,黄芪丹参配伍组LVSP,±dp/dt均明显升高(P＜0.05).HE染色分析,模型大鼠心肌细胞坏死严重,成纤维细胞增多,伴有炎症细胞浸润;黄芪、丹参单体组,细胞形态略显模糊,核肥大,成纤维细胞轻度增生,炎症细胞减少;黄芪-丹参配伍组细胞形态较清晰,成纤维细胞和炎症细胞少见.Masson染色结果表明,模型组大鼠心肌以胶原组织为主,各治疗组大鼠以红色心肌组织为主,间杂以胶原组织.免疫组化分析表明,模型组心肌组织胞浆中PKD1蛋白的表达极其明显(P＜0.01);和模型组相比,黄芪-丹参组心肌组织胞浆中PKD1蛋白的表达明显下调(P＜0.01),但仍清晰可见;和黄芪、丹参单体组相比,黄芪-丹参配伍组心肌组织胞浆中PKD1蛋白的表达进一步下调(P＜0.05).结论:黄芪-丹参配伍可明显改善心肌梗死后异常的血液流变学指标及组织的病理学病变,其作用机制可能与调控心肌组织PKD1蛋白的表达相关.     

补肾益气方及其拆方对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的影响

目的　观察比较补肾益气方及其拆方对氧化低密度脂蛋白 (OX -LDL)损伤血管内皮细胞的保护作用 ,以筛选有效单味药或最佳配伍方。方法　用体外法 ,以OX -LDL损伤血管内皮细胞为动脉粥样硬化 (AS)细胞病理模型 ,采用噻唑蓝 (MTT)法 ,通过测定细胞丙二醛 (MDA)含量及其培养液乳酸脱氢酶 (LDH)活力来评估各处理因素的药效。结果　补肾益气方与黄芪首乌配伍方具有明显抗OX -LDL损伤血管内皮细胞的作用 ,可提高OX -LDL损伤血管内皮细胞的活力 ,单味药黄芪具有提高OX -LDL损伤血管内皮细胞增殖能力 ,补骨脂黄芪配伍方能降低OX -LDL损伤血管内皮细胞的MDA含量 ,其他单味药和交叉配伍方均无明显作用。结论　补肾益气方抗OX -LDL对血管内皮细胞损伤作用主要是首乌黄芪协同作用的结果     

木犀草素对抗2型糖尿病大鼠心肌纤维化的机制研究

目的 探究木犀草素(LUT)是否通过调控腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)-沉默信息调节因子3(SIRT3)信号对抗2型糖尿病(T2D)大鼠心肌纤维化。方法 体内构建T2D模型。Masson染色观察病理学特征并测定心肌胶原容积分数(CVF);Western blot检测纤维连接蛋白(fibronectin)、胶原蛋白I(collagen I)、α-平滑肌动蛋白(α-SMA)和磷酸化AMPK(p-AMPK)、AMPK和SIRT3表达。体外培养心肌细胞H9C2,流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot分析各蛋白表达。结果 在体内,T2D模型大鼠心肌间质胶原纤维增加,CVF增大,fibronectin、collagen I和α-SMA水平增高,p-AMPK/AMPK和SIRT3水平降低(P<0.05);LUT干预后可明显改善以上情况(P<0.05)。在体外,高糖诱导后H9C2细胞凋亡水平升高,fibronectin、collagen I和α-SMA水平增高,p-AMPK/AMPK和SIRT3蛋白水平降低(P<0.05);LUT干预可改善HG对H9C2细胞的...     

天麻钩藤饮干预肾血管性高血压大鼠心肌胶原重构的研究

目的:探讨天麻钩藤饮对肾血管性高血压大鼠(RHR)胶原重构的影响.方法:采用经典的肾动脉钳夹方法建立RHR模型.将RHR随机分为3组.于术后5周开始给药,持续治疗8周,然后处死动物.给药方法:模型组7只:注射用水2ml/100g体重灌胃,每天 1次.天麻钩藤饮组8只:天麻钩藤饮2ml/100g体重灌胃,每天1次(每ml含生药1g).巯甲丙脯酸组9只:巯甲丙脯酸10mg/100g体重灌胃,每天1次.假手术组8只:除不夹肾动脉外,均与模型组相同.观测大鼠胶原浓度,Ⅰ、Ⅲ型胶原含量,心脏重量,左心室重量.结果: 天麻钩藤饮和巯甲丙脯酸均能明显降低肾血管性高血压大鼠LVI水平和胶原的含量 (P<0.01);积分法显示天麻钩藤饮组和巯甲丙脯酸组的Ⅰ型胶原含量明显较模型组减少(P<0.05,P<0.01).模型组和巯甲丙脯酸组的Ⅲ型胶原含量明显较假手术组增高(P<0.01),天麻钩藤饮组的Ⅲ型胶原含量与假手术组比较无明显差异.结论:1.天麻钩藤饮与巯甲丙脯酸均能通过降低肾血管性高血压大鼠LVI水平和胶原的含量来干预心肌纤维化.2.巯甲丙脯酸通过降低Ⅰ型胶原的含量,达到降低胶原浓度的作用来干预心肌纤维化;而天麻钩藤饮可通过同时降低Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量,达到降低胶原浓度的作用来干预心肌纤维化.其中两者对Ⅰ/Ⅲ型胶原比例是否降低还值得进一步研究.故认为天麻钩藤饮与巯甲丙脯酸干预高血压心肌纤维化的机理有所不同,这可能与中医药的多层次、多靶点的作用机制有关.     

麝香保心丸减轻自发性高血压大鼠心肌纤维化的研究

目的 探讨麝香保心丸对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化的作用及其可能的机制。方法 将12周龄SHR大鼠分为麝香保心丸治疗组、苯那普利阳性药物对照组及高血压模型对照组,研究麝香保心丸对治疗12周后的SHR大鼠收缩压(SBP)、左室重量(LVM)、左室重量指数(LVMI)、左室心肌胶原含量及细胞外基质纤连蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(1aminin,LN)、心脏成纤维细胞(cardiac fibroblast,cFb)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。结果 麝香保心丸对SHR无明显降压作用,但与苯那普利一样可降低LVM、LVMI、心肌胶原含量(P<0．05)。麝香保心丸可明显降低心肌LN、FN含量、心脏成纤维细胞数目和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达(P<0．05)。结论 麝香保心丸具有独立降压以外的防治SHR心肌纤维化作用,其机制可能与减少心肌TGF-β1表达和心脏成纤维细胞数目,减少心肌胶原合成及细胞外基质沉积等因素有关。