99Tcm-HYNIC-Annexin V的制备及其在健康小鼠体内的分布

目的制备人膜联蛋白V（Annexin V），应用联肼尼克酰胺（HYNIC）偶联后进行^99Tc^m标记，评价^99Tc^m-HYNIC-Annexin V在健康小鼠体内的分布。方法采用基因工程方法构建Annexin V的原核载体并诱导其表达，与自行合成的双功能螯合剂HYNIC偶联，并进行^99Tc^m标记。测定^99Tc^m-HYNIC-Annexin V的标记率、放化纯，并研究其在健康小鼠体内的生物分布特性。结果Annexin V在大肠杆菌中获得稳定表达，经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及Western Blotting检测，得到纯度较高的蛋白质。Annexin V经HYNIC偶联后，其^99Tc^m标记率可达90％左右，放化纯〉90％。小鼠体内分布结果表明，^99Tc^m-HYNIC-Annexin V血液清除迅速，主要从肾脏和肝脏排泄。结论Annexin V可在原核生物中稳定表达。其与HYNIC偶联后，^99Tc^m-标记率和放化纯较高，方法简单，条件温和。     

一种新的用于靶向化合物研发的体内高通量筛选方法

目的建立组织靶向化合物的体内完全随机高通量筛选模型：方法以氨基酸为原料，采用固相合成法合成C端氯化三肽组合文库。^99Tc^m-标记文库的结构通量为8000，即含有8000种不同化学结构的^99Tc^m-标记三肽化合物：体内筛选采用定位扫描和重复模式：实验动物采用SD大鼠和A549肺癌荷瘤裸鼠．通过测定每克组织百分注射剂量率（％ID／g）或显像，测定^99Tc^m-标记文库或单肽的组织分布。结果通过无创伤性显像或组织放射性计数测定组合文库的组织分布和代谢，实现体内完全随机高通量筛选，可用于发现、优化和设计具有组织特异性分布的（标记）化合物。这种组织靶向性分布有很高的化学结构特异性，在整个体内筛选过程中，非靶组织放射性本底同时受到监测。结论标记组合文库体内示踪技术是一种可靠、简易、灵敏的体内完全随机高通量药物筛选技术，可用于组织靶向药物（特别是放射性药物）的研究。     

99Tcm-RGD环肽二聚体的制备及其体内外评价

目的评价^99Tc^m标记的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）环肽二聚体E[c（RGDfK）]：的体内外特性及其用于整合素α，B，阳性肿瘤显像的可行性。方法以三羟甲基甘氨酸（tricine）和三苯基膦三磺酸钠（TPPTS）作为协同配体，以联肼尼克酰胺（HYNIC）作为双功能连接剂，采用无亚锡一步法制备^99Tc^m-HYNIC—E[c（RGDfK）]：，通过U87人神经胶质瘤细胞测定其半数抑制浓度（IC50），观察其体外与整合素α，B，受体的结合解离动力学、细胞内化及外化，评价其在荷人神经胶质瘤裸鼠的生物分布。结果^99Tc^m-HYNIC-E[c（RGDfK）]，的标记率〉95％，经Sep-PekC18柱纯化后其放化纯〉99％。与RGD环肽单体C（RGDyK）相比，HYNIC偶联的E[C（RGDfK）]：二聚体具有更高的整合素α，β3亲和力，IC50分别为80．0和9．07nmol／L。细胞实验显示，^99Tc^m-HYNIC—E[C（RGDfK）]：与整合素α，β，结合较快，并迅速被受体介导内化。生物分布实验显示，^99Tc^m -HYNIC—E[C（RGDfK）]：主要经肾脏排泄，在注射后0．5和4h，标记物在肿瘤的每克组织百分注射剂量率（％ID／g）分别为（2．46±0．66）和（3．10±0．35）％ID／g，标记物在肿瘤中的滞留时间足够长。1显像示注射后1h肿瘤清晰可见，注射后4h显像效果更佳。结论^99 Tc^mHYNIC-E[C（RGDfK）]：是一种有前景的用于整合素α，β3，阳性肿瘤显像的显像剂。     

^99Tc^m标记RGD环肽在荷肺腺癌裸鼠中的显像研究

目的制备^99Tc^m标记的含RGD序列的^99Tc^m-联肼尼克酰胺（HYNIC）-c（RGDfK）环肽单体,评价其在整合素表达阳性的肺腺癌严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠肿瘤模型中的生物学分布,并进行显像研究。方法（1）以HYNIC为双功能螯合剂,以三羟甲基甘氨酸（tricine）和乙二胺二乙酸为协同配体,采用二步法制备^99Tc^m标记HYNIC—c（RGDfK）,进行细胞结合实验,测定标记物生物学活性;（2）将荷A549肺腺癌模型小鼠分为7组[第7组作为竞争性抑制组,注射显像剂前0．5h先注射HYNIC-c（CRDGfk）100μg],每组5只,经尾静脉注射7．4MBq的^99Tc^m-HYNIC-c（RGDfK）,于注射后0．5,1,2,4,8,12h处死,计算荷A549肺腺癌小鼠模型各脏器％ID／g,同时采用ROI技术研究^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）在小鼠体内的生物学分布,计算不同时间点的T／NT比值（NT选取肌肉）;（3）取6只荷瘤裸鼠,其中3只为竞争性抑制组,经尾静脉注射7．4MBq的^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）,于注射后0．5,1,2,4,8,12h进行静态1显像。结果^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）的标记率〉90％,放化纯〉95％。^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）与A549肺腺癌细胞特异性结合率最高为36．14％,体内分布实验显示^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）在肾的摄取率始终高于20％ID／g,注射后0．5h肿瘤％ID／g为10．52±1．48,8h为17．26±2．81,12h为8．93±0．90,竞争性抑制组注射后0．5h为2．29±0．85。通过ROI技术测得T／NT在8h达6．87。注射后1h肿瘤可显影,4～8h显影更清晰。结论^99Tc^m标记HYNIC—c（RGDfK）易于制备,具有良好的靶向性。     

^99Tc^m标记异腈类配合物的研究进展

^99Tc^m标记的异腈类配合物是目前国内外应用最广泛的心肌灌注显像剂，在肿瘤的诊断方面也有重要应用。本简要介绍了异腈配体合成及标记化合物的制备方法．并对^99Tc^m标记异腈类配合物的发展、分类及应用进展作了归纳总结。     

荷瘤裸鼠整合素αv β3受体显像的实验研究

目的探讨99Tcm标记精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）小分子多肽（GY11）作为肿瘤显像剂的可能性.方法利用SnCl2直接还原法进行GY11的^99Tcm标记.建立荷人黑色素瘤A375、肺癌H460和宫颈癌HeLa BALB/c裸鼠肿瘤模型,分别进行体内分布和肿瘤显像研究.结果GY11的^99Tcm标记率为80%.黑色素瘤A375荷瘤裸鼠体内分布显示,^99Tcm-GY11主要经肾脏快速从血液中清除,注射后2 h肿瘤摄取量为3.13%ID/g,肿瘤/血和肿瘤/骨骼肌比值随时间的推移而增加,注射后1和6 h比值分别为3.0、4.3和8.1、15.1.对于黑色素瘤A375和肺癌H460荷瘤裸鼠,^99Tcm-GY11静脉注射后2 h肿瘤均能清楚显示,24 h后显像更清晰;2 h后宫颈癌HeLa肿瘤能显影,但6 h后肿瘤放射性基本清除.结论^99Tcm-GY11有望成为肿瘤αvβ3受体显像剂.     

小鼠双微体扩增基因反义探针用于荷人前列腺癌裸鼠的显像研究

目的探讨^99Tc^m标记针对小鼠双微体扩增基因（MDM2）mRNA的ASON（MDM2反义探针）用于前列腺癌无创性基因显像的价值。方法以HYNIC为螯合物,对含MDM2mRNA某段序列的ASON、错义寡核苷酸（ASONM）进行^99Tc^m标记,检测标记率及放化纯。建立荷人前列腺癌LNCaP裸鼠肿瘤模型,分为3组（每组10只）,进行^99Tc^m-HYNIC—ASON和^99Tc^mHYNIC—ASONM、^99Tc^mO4^-（对照）肿瘤显像。测量肿瘤／对侧肢体（T／M）比值,采用单因素方差分析对测量数据进行统计学分析。结果ASON的^99Tc^m标记率为（65．15±2．05）％,ASONM的^99Tc^m标记率为（64．93±2．18）％。^99Tc^m-HYNIC—ASON和^99Tc^m-HYNIC—ASONM经纯化后,放化纯均达90％以上。不同探针注射后1、4和10h时,^99Tc^m-HYNIC—ASON组T／M比值分别为3．217±0．125、3．749±0．201和4．028~0．186;^99Tc^m HYNIC—ASONM组分别为1．579±0．128、1．715±1．140和1．683±0．139;对照组分别为2．146±0．132、1．847±0．124和1．528±0．152.^99Tc^m-HYNIC—ASON1、4、10hT／M比值与对照组和错义组差异均有统计学意义（F=213．37～235．41,t=3．527～4．738,均P〈0．01）,而^99Tc^m-HYNIC—ASONM组各T／M比值与对照组差异均无统计学意义（t=2．154、2．287和2．236,均P〉0．05）。结论^99Tc^m标记的MDM2反义探针可在荷人前列腺癌裸鼠模型的肿瘤组织中特异性聚集,可以在早期对前列腺癌进行无创性的基因诊断。     

前哨淋巴结显像剂99Tcm-IT-Rituximab的制备及其定位性能

目的研究前哨淋巴结（SLN）显像剂^99Tc^m-亚氨基噻吩（IT）．美罗华（Rituximab）的标记方法及其定位效应。方法采用2-IT作为双功能连接剂，制备^99Tc^m-IT-Rituximab，确定最佳反应条件，评价标记抗体分子完整性及生物活性。观察比较^99Tc^m-IT-Rituximab及^99Tc^m-硫胶体（SC）2种示踪剂在小鼠淋巴结中的定位性能。将^99Tc^m—IT—Rituximab作为显像剂，对10例乳腺癌患者行乳腺癌SLN动态显像。结果2-IT与Rituximab连接的最佳物质的量比为10：1，4℃反应45min后，每分子抗体螯合上的游离巯基数平均为2．1个。IT—Rituximab分子保持完整、免疫活性保留完全。^99Tc^m-IT-Rituximab的标记率〉90％，其与B淋巴瘤细胞株Raji细胞的结合率为69．4％。动物显像结果显示^99Tc^m—IT—Rituximab可清晰定位小鼠SLN，注射后30min～24h SLN均可显影，2h后SLN显影清晰，至24h未见次级淋巴结显影。动物体内分布数据显示^99Tc^m-IT-Rituximab定位性能明显优于^99Tc^m-SC，24h时SLN百分注射剂量率（％ID）为4．49％，次级及第3级淋巴结基本无摄取，24h注射点滞留率为22．14％。结论该标记方法简单，标记率高；^99Tc^m—IT—Rituximab在SLN中定位性能良好，是一种潜在的新型SLN显像剂。     

99Tcm标重组H-Annexin Ⅴ在动物血栓显像中的研究

目的 评价人膜联蛋白V（H—Annexin V）对血栓的亲和性，对^99Tc^m直接标记H—Annexin V与通过联肼尼克酰胺（HYNIC）螫合标记AnnexinV进行比较。方法 在3种不同的反应条件下，分别用^99Tc^m of直接标记AnnexinV、H—AnnexinV及HYNIC—AnnexinV，然后测定标记率、稳定性及对兔股动脉血栓模型进行γ显像，比较损伤侧（T，血栓）及对侧（NT）的放射性比值。结果 在还原剂足量的情况下，^99Tc^mO4^-直接标记H—Annexin V方法简便，反应条件易于控制，^99Tc^m-H—Annexin V标记率达95％以上，17h后测放化纯仍〉80％，血栓显像示动脉损伤处有明显的放射性浓聚，损伤处平均放射性计数为健侧放射性计数的3．714倍。结论 ^99Tc^m-H—AnnexinV与血栓具有很好的亲和力，标记率及稳定性高，标记方法较为简单。     

整合素αvβ3受体靶向肿瘤显像研究进展

整合素αvβ3高表达于肿瘤细胞和肿瘤新生血管内皮细胞表面,而在正常组织和成熟血管内皮细胞表面呈低水平表达或不表达,整合素αvβ3能够与体内外含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）序列的物质发生特异性结合。通过对RGD肽进行结构修饰、多聚化等来构建体内理化性能稳定的RGD肽和RGD-蛙皮素等融合肽,再通过不同的偶联剂介导完成RGD肽的不同放射性核素（^18F、^111In、^64Cu、^68Ga、^125I、^99Tc^m、^123I、^86Y等）标记,成为近年来肿瘤靶向显像的研究热点,部分临床实验正在国内外进行有效开展。通过PET／CT、SPECT／CT和PET／MRI多模态显像定量检测肿瘤整合素αvβ3受体的表达水平,来完成抗肿瘤新生血管生成治疗患者的筛选、疗效预测和实时监测,已成为近年来研究的焦点和新的发展方向。     

Maximal oxygen uptake "classical" versus "contemporary" viewpoints

In two articles Timothy Noakes proposes a new physiological model in which skeletal muscle recruitment is regulated by a central "govenor," specifically to prevent the development of a progressive myocardial ischemia that would precede the development of skeletal muscle anaerobiosis during maximal exercise. In this rebuttal to the Noakes' papers, we argue that Noakes has ignored data supporting the existing hypothesis that under normal conditions cardiac output is limiting maximal aerobic power during dynamic exercise engaging large muscle groups.     

一站式心脏MRI对心肌病的评价

心肌病的一站式心脏MRI扫描包括梯度回波序列、自旋回波序列及反转恢复快速自旋回波序列平扫,梯度回波序列电影扫描,梯度回波序列首过灌注及延迟增强扫描和冠状动脉扫描等,可综合评价心脏解剖结构、心肌病理特点、心脏功能及冠状动脉状态等,从而达到使多种影像学检查综合起来的共同目的。心肌延迟强化的特点还可对部分心肌病进行危险度分级、病因分析、治疗指导、穿刺定位等,在临床中对心肌病的诊治具有举足轻重的作用。