188Re标记免疫靶向磁性纳米微粒及其生物学分布

目的研究^188Re标记具有HER-2／neu癌基因靶向特异性的Herceptin免疫磁性纳米微粒及其在小鼠体内的生物学分布。方法利用戊二醛作为交联剂，将人源性单克隆抗体Herceptin与化学修饰的磁性纳米微粒进行连接，构建免疫磁性纳米微粒。采用直接标记法将^188Re标记到免疫磁性纳米微粒上。采用羰基铼标记法，以fac-[^188Re（CO）3（H2O）3]^＋作为放射性标记前体，对表面固载组氨酸的磁性纳米微粒进行标记。分别测定所制备^188Re标记物的标记率和体外稳定性及免疫磁性纳米微粒的单克隆抗体免疫活性，并观察^188Re标记的磁性纳米微粒及免疫磁性纳米微粒的小鼠体内生物分布。结果经扫描电镜证实免疫磁性纳米微粒的单个粒径大小平均为60nm，而表面固载组氨酸的磁性纳米微粒的粒径平均为30nm。^188Re对Herceptin、免疫磁性纳米微粒及固载组氨酸的磁性纳米微粒的标记率均〉90％，在小牛血清中具有良好的体外稳定性，并且磁性纳米微粒上连接的单克隆抗体仍保持较高的免疫活性。小鼠体内分布实验显示^188Re标记的磁性纳米微粒及免疫磁性纳米微粒在血液中有较高的放射性分布且血循环时间较长，同时两者在肝内均有较多的摄取。结论^188Re标记的磁性纳米微粒及免疫磁性纳米微粒在体外及动物体内较稳定，无明显的^188Re脱落。可用于下一步荷瘤裸鼠体内的研究。     

[188Re(CO)3(H2O)3]+间接标记免疫磁性纳米微粒的实验研究

目的探讨标记单克隆抗体磁性纳米微粒的实验条件。方法以[二（2-吡啶甲基）-氨基]-乙酸（PADA）作为双功能螯合剂，将[^188Re（CO）3（H2O）3]^＋间接标记到耦联了单克隆抗体的磁性纳米微粒。结果[^188Re（CO）3（H2O）3]^＋间接标记免疫磁性纳米微粒的标记率大于80％，在小牛血清和生理盐水中48h后稳定性仍能保持在90％以上。结论使用PADA作为双功能螯合剂，[^188Re（CO）3（H2O）3]^＋间接标记免疫磁性纳米微粒的标记率高，稳定性好，适于进一步体内研究。     

抗人肝癌188Re-免疫磁性纳米微粒的生物学分布和肿瘤细胞抑制实验

目的探讨抗人肝癌188Re-免疫(Hepama-1)磁性纳米微粒免疫学活性、体内生物学分布、肝靶向性及抑瘤作用。方法对比188ReO4-、188Re-Hepama-1、188Re-磁性纳米微粒,研究尾静脉注射188Re-免疫磁性纳米微粒后4h、24h在昆明小鼠体内的分布情况;在肝区外加磁场及无磁场状态下,研究新西兰大白兔体内的肝磁靶向性;采用溴化四甲基唑法,研究4种188Re标记物对肝癌细胞株SMMC-7721的抑制效果。结果188Re-免疫磁性纳米微粒在肝内摄取量最大;在磁区肝组织放射活性较非磁区肝组织明显增加,二者的放射活性比值为1.87;对肝癌细胞株SMMC-7721半数抑制放射性活度仅为188ReO4-的1/4左右。结论188Re-磁性纳米微粒具有良好的磁感应性能、免疫活性及明显的肝靶向性。     

载药磁性纳米微粒靶向治疗肿瘤研究进展

载药磁性纳米微粒是将药物、生物活性物质或治疗用放射性核素等包裹于磁性纳米微粒内或吸附、连接于磁性纳米微粒表面，或混合、溶解于材料基质中而构成，其大小为纳米级。在足够强的外加磁场作用下，其在体内定向移动、定向浓集，从而达到提高治疗效果、降低毒副作用的目的。     

188Re-DTPA-DG致MCF-7乳腺癌细胞凋亡实验研究

目的研究不同放射性浓度^188Re-DTPA-脱氧葡萄糖（DG）对人MCF-7乳腺癌细胞凋亡的影响及其作用机制.方法用流式细胞仪检测^188Re-DTPA-DG处理后MCF-7乳腺癌细胞的凋亡.将人MCF-7乳腺癌细胞分成3组：^188Re-DTPA-DG实验组、^188ReO-4对照组和生理盐水组.其中前2组分3个不同放射性浓度组：37、55.5、74kBq/ml.结果^188Re-DTPA-DG、^188ReO-4均能导致肿瘤细胞发生凋亡,实验组与^188ReO-4对照组及生理盐水组在不同放射性浓度下差异均有显著性（P＜0.01）,随着放射性浓度增加,凋亡程度增大;^188Re-DTPA-DG较^188ReO-4更易诱导凋亡发生.结论^188Re-DTPA-DG能导致肿瘤细胞凋亡,并且与放射性浓度相关;其机制可能是辐射导致DNA严重损伤,使细胞周期发生阻滞.     

188Re-DTPA-DG的制备和荷瘤裸鼠实验研究

目的建立^188Re标记DTPA-脱氧葡萄糖（DG）的方法，观察其在荷瘤裸鼠体内分布和治疗效果。方法DTPA—DG的^188Re标记体系有氯化亚锡、葡萄糖酸钠，pH值5．5，反应体系温度为37％，反应3h，用纸层析法以生理盐水和丙酮作展开剂，测定标记物的放化纯及其在体外的稳定性。将标记物经荷乳腺癌MCF-7裸鼠尾静脉注射，于注射后1，4，8，12，24h显像。经尾静脉注射0．1ml 92．5GBq／L的^188Re—DTPA—DG，21d后观察疗效。结果^188Re—DTPA—DG的放化纯可达到95．0％。^188Re—DTPA—DG荷瘤裸鼠显像示肿瘤组织摄取高，病灶／健侧后肢对应部位放射性计数（T／NT）比值在12和24h分别为5．9和7．8。^188Re-DTPA-DG组裸鼠治疗21d后肿瘤体积[（823．6±50．58）mm^3]明显比生理盐水组[（1162．7±73．08）mm^3]小，2组间差异有统计学意义（P〈0．01），抑瘤率为29．2％。结论^188Re—DTPA—DG经荷瘤裸鼠尾静脉注射后可被肿瘤组织高选择性摄取，其对肿瘤生长抑制作用明显，可能成为肿瘤内照射治疗药物。     

188Re/99Tcm-IGF-1类似物的制备及与胰腺癌细胞结合实验研究

目的 研究188Re/99Tcm标记胰岛素样生长因子1类似物(IGF-1A)的方法,及其与胰腺癌细胞的结合特点.方法 采用直接标记法标记经修饰的IGF-1A,标记条件设定:吐温-80用量2～10 μl;不同时间点测定标记率;SnClz·2H2O质量浓度变化为0.75～25 g/L;IGF-1A的用量20～100 μg;洗脱液的体积10～500 μl;通过实验确定最佳标记条件.测定标记物的体外稳定性及其与胰腺癌Patu8988细胞的结合率.荷瘤裸鼠尾静脉注射99Tcm-IGF-1A后显像,瘤内注射188Re-IGF-1A后平面显像.结果 最佳188Re标记条件为:100 μl SnCl2·2H2O(10 g/L)加入50 μl IGF-1A(2 g/L);300 μl Na3PO4和10 μl质量分数0.1%吐温-80,混匀后加人50 μl 188ReO4-新鲜洗脱液;在IGF-1A体系中加入洗脱液体系,混匀,室温下反应30 min;加入500 μl NaH2PO4,将pH值调至7.0左右,标记完成.最高标记率为(94.07±0.32)%,胶体含量为(5.50±1.50)%,与50 μl 5×106个胰腺癌细胞(Patu8988)的最高总结合率为(24.13±2.03)%,特异性结合率为12.68%.最佳99Tcm标记条件为:SnCl2·2H2O质量浓度为3 g/L,质量分数0.1%吐温-80用量为2 μl,IGF-1A用量为40 μl,余同188Re标记.最高标记率为(94.43±0.75)%,胶体含量为(3.47±0.71)%,与胰腺癌细胞最高总结合率为(22.95±3.94)%,特异性结合率为19.31%.99Tcm-IGF-1A显像6 h内肿瘤显影清晰,188Re-IGF-1A瘤内注射显像48 h内肿瘤显影清晰.结论 用直接标记法进行188Re/99Tcm标记IGF-1A,方法简便,具有较高标记率和良好稳定性,能与胰腺癌Patu8988细胞特异性结合.     

188Re标记几种小分子配体的研究

目的：通过对^188Re配位化学理论研究,探讨^188Re标记化学反应的内在规律。方法：用多种配体进行^188Re标记反应,观察诸多因素对反应的影响;运用化学热力学,动力学和结构化学等进行综合分析,揭示^188Re标记反应的因果关系。结果：^188Re-GH;pH值2,SnCl21mg,室温反应30min,标记率85．9％,^188Re－MDP：pH值2,SnCl2 1mg,室温反应30min,标记率85％。^188Re－MIBI：pH值2,SnCl2 1mg,100℃反应30min, 标记率58％。^188Re－柠酸：pH值2,SnCl21mg,室温反应30min,标记率92．1％。结论：从^188Re标记化学实验现象所抽象出的理论表述有助于指导^188Re标记化学实验工作。     

磁性微粒动脉栓塞临床病理学分析

目的 观察磁性微粒(Fe3O4)栓塞肿瘤后病理学变化,探讨其动脉栓塞作用.方法 采用Seldinger技术,通过Fe3O4微粒栓塞18例肿瘤患者(原发肝癌8例,肾癌6例,肾肌脂肪瘤3例及乳腺癌1例)后行外科手术切除,标示常规HE染色切片.结果 所有病例栓塞后肿瘤组织细胞均发生坏死.结论 Fe3O4微粒动脉栓塞对肿瘤治疗彻底,而且靶区组织间的栓塞颗粒对接触的细胞均未造成明显毒性作用.     

经动脉导管磁性微粒栓塞肿瘤的临床分析

目的探讨磁性微粒(Fe3O4)经动脉导管栓塞肿瘤机理与临床应用。方法采用Seld inger技术插管,用Fe3O4 5-Fu混悬药液栓塞94例肿瘤患者,其中5例肝癌栓塞后靶区外置磁场,15例栓后手术切除标本HE染色制片,25例栓塞1月后DSA复查,前后图像对照作统计学处理。结果病理提示肿瘤组织坏死彻底,栓塞前后DSA图像定量分析P值<0.05,临床观察栓后综合征明显下降。结论Fe3O4微粒是一种永久性栓塞颗粒,具有缓慢栓塞作用,对减少栓后临床并发症有一定作用。     

用188Re直接标记octreotide

目的　探讨具有较高标记率和良好稳定性的1 88Re直接标记octreotide的方法。方法　采用预锡化法标记octreotide。①分别在标记后 1、2、3、4、5、6h测定标记率 ;②乙酸缓冲液pH值从3 8～ 5 .8;③淋洗液体积从 5 0～ 2 5 0 μL ;④多因素分析法同时改变octreotide和氯化亚锡的用量 ;⑤标记完成 0 .5h后分别加入人血清或生理盐水 5 0 μL ,室温下放置 48h以测定标记物体外稳定性。 结果1 88Re直接标记octreotide最佳标记条件 :0 .1mL葡萄糖酸钠 ( 0 .3mol L) ,0 .0 4mL浓盐酸溶解的SnCl2 ·2H2 O ( 2 0g L) ,0 .0 4mL 0 .2mol L乙酸缓冲液 (pH值 5 .0 ) ,0 .0 5mLoctreotide( 2g L) ,1 88ReO-4 淋洗液0 .1mL。1 88Re octreotide可达到最大标记率 ( 92 .6± 1.9) % ,室温下放置 2 4h标记率为 ( 86.6± 1 8) % ,在标记物中加入人血清 5 0 μL后室温下放置 2 4h标记率为 ( 84.2± 2 .7) %。标记反应中胶体含量均小于 8%。结论　预锡化直接标记法简便快速 ,能够得到较高的标记率 ,稳定性好 ,无需进一步纯化。     

125I标记雄激素受体TFO抗前列腺癌细胞增殖的研究

目的探讨反基因放射治疗对雄激素受体（AR）表达和前列腺癌细胞增殖的影响。方法用Iodogen法对AR三螺旋形成寡核苷酸（TFO）进行直接^125I标记，经脂质体介导转染LNCaP前列腺癌细胞株，于转染后24和48h分别采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）方法测定癌细胞增殖活性，RT-PCR方法检测ARmRNA表达，免疫组织化学方法检测AR蛋白表达。结果^125I-TFO的标记率为63．7％，放化纯为95．6％，比活度为80．1kBq／μg。相同TFO浓度下，^125I-TFO组LNCaP细胞的AR表达水平显著低于TFO组（P〈0．01），^125I-TFO对LNCaP细胞增殖的抑制率显著高于TFO（P〈0．01）。结论反基因放射治疗对AR表达和前列腺癌细胞增殖的抑制作用明显强于单纯的反基因治疗。     

188 Re直接法标记生长抑素类似物RC-160及其体内分布研究

目的 探讨^188RE直接法标记生长抑素类似物RC－160的方法及观察其在小鼠体内的生物学分布。方法 酒石酸亚锡直接还原法进行RC－160的^188Re标记，标记完成后加入抗坏血酸以防标记产物的再氧化。硅胶纸层析测定放化纯，并行小鼠体内分布实验。结果 ^188Re－RC－160放化纯为96．2％，游离^188Re为0．8％，放射性胶体为3．0％。加抗坏血酸组在标记后24h放化纯为85％，对照组为50％。注射后0．5－1．0h血液中放射性下降了87．2％，肾脏无明显浓集，标记物24h内由消化系统排出体外。结论 ^188Re直接法标记RC－160放化纯高，方法简便，抗坏血酸的加入增加了标记物的稳定性。^188Re－RC－160在小鼠体现血液清除较快，经消化系统排除。     

99Tcm-RGD环肽二聚体的制备及其体内外评价

目的评价^99Tc^m标记的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）环肽二聚体E[c（RGDfK）]：的体内外特性及其用于整合素α，B，阳性肿瘤显像的可行性。方法以三羟甲基甘氨酸（tricine）和三苯基膦三磺酸钠（TPPTS）作为协同配体，以联肼尼克酰胺（HYNIC）作为双功能连接剂，采用无亚锡一步法制备^99Tc^m-HYNIC—E[c（RGDfK）]：，通过U87人神经胶质瘤细胞测定其半数抑制浓度（IC50），观察其体外与整合素α，B，受体的结合解离动力学、细胞内化及外化，评价其在荷人神经胶质瘤裸鼠的生物分布。结果^99Tc^m-HYNIC-E[c（RGDfK）]，的标记率〉95％，经Sep-PekC18柱纯化后其放化纯〉99％。与RGD环肽单体C（RGDyK）相比，HYNIC偶联的E[C（RGDfK）]：二聚体具有更高的整合素α，β3亲和力，IC50分别为80．0和9．07nmol／L。细胞实验显示，^99Tc^m-HYNIC—E[C（RGDfK）]：与整合素α，β，结合较快，并迅速被受体介导内化。生物分布实验显示，^99Tc^m -HYNIC—E[C（RGDfK）]：主要经肾脏排泄，在注射后0．5和4h，标记物在肿瘤的每克组织百分注射剂量率（％ID／g）分别为（2．46±0．66）和（3．10±0．35）％ID／g，标记物在肿瘤中的滞留时间足够长。1显像示注射后1h肿瘤清晰可见，注射后4h显像效果更佳。结论^99 Tc^mHYNIC-E[C（RGDfK）]：是一种有前景的用于整合素α，β3，阳性肿瘤显像的显像剂。     

188Re(Ⅴ)-DMSA药盒制备及其质量评估

目的研制188Re(Ⅴ)-二巯基丁二酸(DMSA)标记配方并制备药盒,评价药盒的质量.方法酸性环境下,SnCl2·2H2O还原高价态ReO4-为Ⅴ价,并与DMSA反应,制备药盒,以高压液相色谱仪(HPLC)测定该药盒的标记率、标记物的体外稳定性、药盒的稳定性,并与99Tcm(Ⅴ)-DMSA在小鼠体内分布比较.结果药盒标记率为100%,标记物室温放置24 h后标记率＞97%;药盒置-20和4℃条件下3个月后,标记率＞95%;188Re(Ⅴ)-DMSA与99Tcm(Ⅴ)-DMSA在小鼠体内分布相似,在骨骼高浓聚,经肾脏排泄.结论188Re(Ⅴ)-DMSA药盒性能优良.     

125I-WH16制备及与HepG2人肝癌细胞结合特性研究

目的　研究高比活度亲肝癌肽1 2 5I WH16的制备及其与HepG2人肝癌细胞的体外结合特性。方法　采用Iodogen法碘标记WH16 ,用高效液相色谱法分离纯化并鉴定标记产物。①将1 2 5I WH16与HepG2细胞进行体外细胞量 (或保温时间 ) 计数实验 ,以得到较佳的体外结合条件 ;②比较HepG2与正常肝细胞 (L0 2 )的1 2 5I WH16平均结合计数 ,以检验其特异性 ;③1 2 5I WH16与HepG2细胞进行体外饱和结合实验 ,研究其亲和特性。结果　①1 2 5I标记率 5 0 % ,1 2 5I WH16比活度 8 2 1× 10 1 5Bq mol,放化纯 95 % ,放射性浓度 6 6 4× 10 9Bq/L ,- 2 0℃保存 2 4h后放化纯仍为 95 %。②1 2 5I WH16与HepG2细胞结合具有细胞依赖性 ,较佳保温时间为 3h;相同条件下 ,1 2 5I WH16与HepG2细胞、L0 2细胞之间平均特异性结合计数有明显差异 ;1 2 5I WH16与HepG2细胞结合具有可饱和性 ,Scatchard作图提示HepG2细胞仅含一种WH16受体 ,Kd 为 (1 4 2± 0 2 8)nmol L ,Bmax为 (12 15± 0 6 3)pmol L ;Hill系数为1 0 3,接近于 1。结论　WH16的放射性标记物在肝癌显像及生物靶向治疗中可能有潜在的应用前景。     

^99Tc^m标记RGD环肽在荷肺腺癌裸鼠中的显像研究

目的制备^99Tc^m标记的含RGD序列的^99Tc^m-联肼尼克酰胺（HYNIC）-c（RGDfK）环肽单体,评价其在整合素表达阳性的肺腺癌严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠肿瘤模型中的生物学分布,并进行显像研究。方法（1）以HYNIC为双功能螯合剂,以三羟甲基甘氨酸（tricine）和乙二胺二乙酸为协同配体,采用二步法制备^99Tc^m标记HYNIC—c（RGDfK）,进行细胞结合实验,测定标记物生物学活性;（2）将荷A549肺腺癌模型小鼠分为7组[第7组作为竞争性抑制组,注射显像剂前0．5h先注射HYNIC-c（CRDGfk）100μg],每组5只,经尾静脉注射7．4MBq的^99Tc^m-HYNIC-c（RGDfK）,于注射后0．5,1,2,4,8,12h处死,计算荷A549肺腺癌小鼠模型各脏器％ID／g,同时采用ROI技术研究^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）在小鼠体内的生物学分布,计算不同时间点的T／NT比值（NT选取肌肉）;（3）取6只荷瘤裸鼠,其中3只为竞争性抑制组,经尾静脉注射7．4MBq的^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）,于注射后0．5,1,2,4,8,12h进行静态1显像。结果^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）的标记率〉90％,放化纯〉95％。^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）与A549肺腺癌细胞特异性结合率最高为36．14％,体内分布实验显示^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）在肾的摄取率始终高于20％ID／g,注射后0．5h肿瘤％ID／g为10．52±1．48,8h为17．26±2．81,12h为8．93±0．90,竞争性抑制组注射后0．5h为2．29±0．85。通过ROI技术测得T／NT在8h达6．87。注射后1h肿瘤可显影,4～8h显影更清晰。结论^99Tc^m标记HYNIC—c（RGDfK）易于制备,具有良好的靶向性。