99Tcm-RGD环肽二聚体的制备及其体内外评价

目的评价^99Tc^m标记的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）环肽二聚体E[c（RGDfK）]：的体内外特性及其用于整合素α，B，阳性肿瘤显像的可行性。方法以三羟甲基甘氨酸（tricine）和三苯基膦三磺酸钠（TPPTS）作为协同配体，以联肼尼克酰胺（HYNIC）作为双功能连接剂，采用无亚锡一步法制备^99Tc^m-HYNIC—E[c（RGDfK）]：，通过U87人神经胶质瘤细胞测定其半数抑制浓度（IC50），观察其体外与整合素α，B，受体的结合解离动力学、细胞内化及外化，评价其在荷人神经胶质瘤裸鼠的生物分布。结果^99Tc^m-HYNIC-E[c（RGDfK）]，的标记率〉95％，经Sep-PekC18柱纯化后其放化纯〉99％。与RGD环肽单体C（RGDyK）相比，HYNIC偶联的E[C（RGDfK）]：二聚体具有更高的整合素α，β3亲和力，IC50分别为80．0和9．07nmol／L。细胞实验显示，^99Tc^m-HYNIC—E[C（RGDfK）]：与整合素α，β，结合较快，并迅速被受体介导内化。生物分布实验显示，^99Tc^m -HYNIC—E[C（RGDfK）]：主要经肾脏排泄，在注射后0．5和4h，标记物在肿瘤的每克组织百分注射剂量率（％ID／g）分别为（2．46±0．66）和（3．10±0．35）％ID／g，标记物在肿瘤中的滞留时间足够长。1显像示注射后1h肿瘤清晰可见，注射后4h显像效果更佳。结论^99 Tc^mHYNIC-E[C（RGDfK）]：是一种有前景的用于整合素α，β3，阳性肿瘤显像的显像剂。     

99Tcm-HMIBP的生物学特性及与99Tcm-MDP的骨显像比较

目的 通过99Tcm-1-羟基-2-(1-甲基咪唑-2-基)乙烷-1,1-二膦酸(HMIBP)和鲫99Tcm-亚甲基二膦酸盐(MDP)的骨显像质量比较,评价99Tcm-HMIBP作为骨显像剂的可能性.方法 制备HMIBP冻干药盒,对HMIBP及SnCl2-2H2O含量、放化纯、药盒pH值及在4℃下的稳定性等进行了研究.测定99Tcm-HMIBP在正辛醇/水相中的分配系数(P)及血浆蛋白结合率,计算血药清除动力学方程参数.同时研究了HMIBP的半数致死剂量(LD50).新西兰兔静脉注射99Tcm-HMIBP和99Tcm-MDP后同步显像比较.结果 99Tcm-HMIBP药盒含HMIBP 5 mg,SnCl2·2H2O 0.05 mg,药盒pH值为5,标记率和放化纯均为98%;在4℃下放置180 d后标记率为96%.在pH值为7.0和7.4时,P值分别为0.0125和0.0054,血浆蛋白结合率为44.77%.小鼠血药清除动力学方程为C=3.0979 e-0.0721t+0.1250 e-0.0076.HMIBP的LD50为8.2 mg/kg.兔骨显像表明,99Tcm-HMIBP和99Tcm-MDP在3 h时均可获得清晰的图像.结论 99Tcm-HMIBP生物学性能优良,显像效果与99Tcm-MDP相当,可能成为集显像与治疗于一体的骨显像剂.     

99Tcm-环丙沙星炎症显像的动物实验研究

目的 用99Tcm标记环丙沙星并评估其生物学性能.方法 制备99Tcm-环丙沙星,测定其稳定性,并研究其在健康昆明小鼠体内和在炎症模型昆明小鼠及新西兰兔体内的分布.结果 99Tcm-环丙沙星标记率＞90%,6 h内放化纯均＞98%.99Tcm-环丙沙星静脉注射后主要分布在血供丰富的器官,如肾、肝、脾中.血液清除快,主要经泌尿系统排泄.新西兰兔炎症模型显像表明:注射99Tcm-环丙沙星1 h后即可显影;给药后3 h为炎症小鼠模型最佳显像时间,此时炎症组织/肌肉放射性比值为5.76.99Tcm-环丙沙星能高度特异地浓聚于细菌性炎症病灶.结论 99Tcm-环丙沙星是早期诊断细菌性炎症的一种特异性显像剂,其临床应用前景较好.     

细胞因子诱导杀伤细胞在动物体内的分布

目的 观察细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞在动物体内分布的特点.方法 99Tcm标记CIK细胞采用亚锡还原法.昆明种小白鼠40只,按随机数字表法分为8组,每组5只,进行小鼠体内分布实验,计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g).新西兰家兔3只行动态显像,连续观察99Tcm-CIK细胞体内分布图像特点.结果 分离纯化后99Tcm-CIK细胞的放化纯＞95%,室温下6 h内保持稳定.小白鼠体内99Tcm-CIK细胞血液清除较快,观察到血液中1和24 h的再分布现象.99Tcm-CIK细胞主要分布于肺、肝、脾和肾,心脏、脑、骨骼和肌肉等其他脏器组织均分布较少.家兔动态显像示99Tcm-CIK细胞早期分布以肺为主,随时间延长肺内放射性逐渐减少,肝放射性逐渐增多,并超过肺部放射性,2 d后仍可见肝放射性浓聚.心脏、脑、骨骼和肌肉等其他脏器组织均未见明显放射性分布.结论 99Tcm-CIK细胞在血循环中滞留时间较短,注射后1 h内主要聚集于肺,随后肺的摄取逐渐减少,其主要浓聚于肝和脾,尤以肝为甚.     

99Tcm-MIDP的制备及其生物学分布

目的探讨^99Tc^m标记2-（2-甲基咪唑-1-基）-1-羟基乙烷-1，1-二膦酸（MIDP）用于骨显像的可能性。方法以2-甲基咪唑为原料，经3步反应制得MIDP。以SnCl2为还原剂，加入5mg MIDP，在pH值7．0下加入^99Tc^mO4^-溶液，室温放置8min即得^99Tc^m-MIDP。于正常小鼠尾静脉注射1．0MBq（0．2m1）^99Tc^m-MIDP，在不同时间断头处死小鼠。取心、肝、脾、肺、肾，肌肉、骨和血等，称重后测量放射性，计算每克组织百分注射剂量率（％ID／g）及骨中放射性与各组织中放射性的比值，并计算血药清除动力学方程和各参数。新西兰兔静脉注射^99Tc^m-MIDP后于不同时间显像。结果MIDP的制备总收率为34．3％。^99Tc^m-MIDP的标记率和放化纯均〉90％。在3h时小鼠骨摄取^99Tc^m-MIDP的量（Am.骨）为14．19％ID／g，Am.骨／Am.血为94．60，血药动力学方程为C=18．849e^-0.254＋3．568e^-0.0194。兔显像结果表明，3h时即可获得清晰的骨显像图。结论^99Tc^m-MIDP制备方便，骨显像清晰，是一种较有希望的新型骨显像剂：     

99Tcm-HYNIC-Annexin V的制备及其在健康小鼠体内的分布

目的制备人膜联蛋白V（Annexin V），应用联肼尼克酰胺（HYNIC）偶联后进行^99Tc^m标记，评价^99Tc^m-HYNIC-Annexin V在健康小鼠体内的分布。方法采用基因工程方法构建Annexin V的原核载体并诱导其表达，与自行合成的双功能螯合剂HYNIC偶联，并进行^99Tc^m标记。测定^99Tc^m-HYNIC-Annexin V的标记率、放化纯，并研究其在健康小鼠体内的生物分布特性。结果Annexin V在大肠杆菌中获得稳定表达，经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及Western Blotting检测，得到纯度较高的蛋白质。Annexin V经HYNIC偶联后，其^99Tc^m标记率可达90％左右，放化纯〉90％。小鼠体内分布结果表明，^99Tc^m-HYNIC-Annexin V血液清除迅速，主要从肾脏和肝脏排泄。结论Annexin V可在原核生物中稳定表达。其与HYNIC偶联后，^99Tc^m-标记率和放化纯较高，方法简单，条件温和。     

建立99Tcm标记联肼尼克酰胺多肽"显像剂"纤维膜组合文库

目的证明^99 Tc^m标记联肼尼克酰胺（HYNIC）多肽“显像剂”文库是^99 Tc^m显像剂研制中的有效方法。方法八肽组合文库采用人工点阵方式合成。HYNIC多肽通过C末端以及双B丙氨酸（连接体）共价连接在纤维膜上。用阻断剂阻断非特异结合位点后，将膜文库和人重组热休克蛋白70（HSP70）温育，冲洗。用生物素-亲和素法和抗体法筛选文库。对筛选阳性多肽化合物进行再合成、^99 Tc^m标记（以三羟甲基甘氨酸为辅助配体）以及体内分析。将人肺癌细胞株A549和H460接种于雌性裸鼠胸壁皮下，用于体内研究。结果^99 Tc^m标记文库显示，“显像剂”文库的质量较好。由于天冬酰胺-亮氨酸-亮氨酸-精-氨酸-亮氨酸-苏氨酸-甘氨酸多肽（NLLRLTG）对HSP70家族蛋白具有高度特异性，因此，采用^99 Tc^m-HYNIC—NLLRLTG为对照组。经筛选获得的15种阳性多肽化合物中，有8种^99 Tc^m化合物在体内肿瘤中的分布优于对照组，其中^99 Tc^m HYNIC-谷氨酰胺-甘氨酸-缬氨酸-亮氨酸-苏氨酸．甘氨酸-苏氨酸-精氨酸多肽（QGVLTGTR）在体内肿瘤中的分布最佳。活性肽NLLRLTG替代实验和肿瘤热疗研究表明，^99 Tc^m HYNIC—QGVLTGTR具有HSP70结合肽活性。结论^99 Tc^m标记HYNIC八肽化合物“显像剂”文库的设计可能为多肽显像剂的研制提供一种模式。     

脂质体介导的99Tcm-反义寡聚核苷酸在荷瘤裸鼠体内分布及显像研究

目的研究脂质体介导的99Tcm-反义寡聚核苷酸在荷瘤裸鼠体内的分布及反义显像诊断结肠癌的可能性,为反义显像和反义治疗的临床应用提供实验依据.方法制作荷瘤裸鼠模型,每只小鼠尾静脉注射约0.30MBq脂质体包裹的99Tcm-反义寡聚核苷酸,于不同时间眼眶静脉采血后处死小鼠,测定不同组织中及标准源的放射性计数.荷瘤裸鼠尾静脉注入脂质体介导的99Tcm-反义寡聚核苷酸(30～90mg),于注射后不同时间显像,观察其在肿瘤组织的浓聚情况,并以脂质体介导的99Tcm标记的正义和无义寡聚核苷酸为对照.结果胃、网状内皮系统和肿瘤组织放射性浓聚较高,其次为心和血,余组织中放射性分布较少.肿瘤组织中放射性在2h时达到高峰,以后迅速降低.在2h时,脂质体介导的99Tcm-反义寡聚核苷酸能清晰显示肿瘤部位,而对照组则不能.结论脂质体介导的99Tcm-反义寡聚核苷酸可用于结肠癌的诊断,但临床应用前还需进行大量的研究.     

^99mTc—P357血栓显像诊断急性肺栓塞的初步临床研究

为评价９９ｍＴｃＰ３５７血栓显像对急性肺栓塞的诊断价值及其安全性，对７例疑有急性肺动脉血栓栓塞的患者，经静脉注射９９ｍＴｃＰ３５７，１和２小时后行肺平面及断层显像，并与９９ｍＴｃ大颗粒聚合白蛋白肺灌注显像、肺动脉造影、超高速ＣＴ、ＤＳＡ和螺旋ＣＴ对比。结果：４例急性肺栓塞中３例９９ｍＴｃＰ３５７血栓显像阳性，１例溶栓后１个月血栓显像为阴性；另外３例显像结果为阴性，临床诊断分别为慢性肺栓塞、肺血管炎和高血压。初步临床研究表明，９９ｍＴｃＰ３５７对急性肺栓塞的诊断有较大价值。     

^99Tc^m—BPHA的肾排泄机制研究及肾功能显像

目的 探讨^99Tc^m-二胺乙基丙二胺六乙酸（BPHA）的肾排泄机制及临床应用的可能性。方法 用丙磺舒抑制实验确定^99Tc^m-BPHA的肾排泄机制;用γ射线测量装置测量一定时间内^99Tc^m-BPHA在动物体内的残存率;用γ相机对家兔和正常人进行肾动态显像;同时进行^99Tc^m-BPHA和^99Tc^m-DTPA的对比研究。 结果^99Tc^m-BPHA和^99Tc^m-DTPA生物学性能相似,为肾小球滤过型显像剂。24h后^99Tc^m-BPHA体内残留极少。对家兔和人的显像表明,肾显影清晰,排泄迅速。结论 自行研制的^99Tc^m-BPHA为一种可满足临床要求的肾小球滤过型显像剂,可望替代^99Tc^m-DTPA。     

99Tcm-谷胱甘肽一步法药盒的制备和实验研究

目的 对新型亲炎症或感染显像剂＾９９Ｔｃ＾ｍ－谷胱甘肽（ＧＳＨ）的制备,质控及药代动力学进行研究。方法 用氯化亚锡作还原剂,制备冷冻干燥＾９９Ｔｃ＾ｍ－ＧＳＨ一步法药盒,用纸层析法鉴定＾９９Ｔｃ＾ｍ－ＧＳＨ标记率及标记稳定性,测定标记物＾９９Ｔｃ＾ｍ－ＧＳＨ的理化性质,生物学特性。结果 室温下该药盒与＾９９Ｔｃ＾ｍＯ＾－４混合３０ｍｉｎ后,＾９９Ｔｃ＾ｍ－ＧＳＨ标记率大于９９％,标记方法简便,标记     

炎症显像剂99Tcm-citrate的制备及动物实验

目的 研制炎下显像剂＾９９Ｔｃ＾ｍ－柠檬酸盐（ｃｉｔｒａｔｅ）方法 柠檬酸三钠在还原剂氟化亚锡存在,ｐＨ６．０时与＾９９Ｔｃ＾ｍ络合,生成＾９９Ｔｃ＾ｍ－ｃｉｔｒａｔｅ研究了标记物的稳定性,炎症模型小白鼠体内分布并进行了炎症模型大白兔显像,结果 制备的＾９９Ｔｃ＾ｍ－ｃｉｔｒａｔｅ标记率大于９０％,６ｈ内稳定,小白鼠炎症组织与正常组织的放射性比值高,注射后５,３０,６０,１２０ｍｉｎ分别０．９７,     

中性心肌显像剂^99mTcN（NOEt）2的制备及生物分布

为探索中性心肌显像剂９９ｍＴｃＮ（ＮＯＥｔ）２（ＮＯＥｔ：Ｎ乙氧基，Ｎ乙基氨荒酸钠盐）的制备方法及生物学特性，合成了制备中间体〔９９ｍＴｃ≡Ｎ〕２＋所需试剂及ＮＯＥｔ。在Ｎ的供体及还原剂存在的条件下，先加热制备中间体〔９９ｍＴｃ≡Ｎ〕２＋，再在常温下制备９９ｍＴｃＮ（ＮＯＥｔ）２。试剂及配体经ＩＲ、ＮＭＲ、ＭＳ及元素分析等鉴定与结构相符。标记物经ＨＰＬＣ和ＴＬＣ检测，放化纯及标记率均大于９０％，在体外６小时内稳定。ｐＨ值７４时的分配系数为４２７。大鼠体内分布结果表明，药物能很快被心肌摄取，５分钟心肌摄取量为２７９％ＩＤ，９０分钟为１８８％ＩＤ。结果表明，９９ｍＴｃＮ（ＮＯＥｔ）２的体外性质稳定，心肌摄取快且高，滞留时间长，具有临床研究价值。     

前哨淋巴结显像剂99Tcm-IT-Rituximab的制备及其定位性能

目的研究前哨淋巴结（SLN）显像剂^99Tc^m-亚氨基噻吩（IT）．美罗华（Rituximab）的标记方法及其定位效应。方法采用2-IT作为双功能连接剂，制备^99Tc^m-IT-Rituximab，确定最佳反应条件，评价标记抗体分子完整性及生物活性。观察比较^99Tc^m-IT-Rituximab及^99Tc^m-硫胶体（SC）2种示踪剂在小鼠淋巴结中的定位性能。将^99Tc^m—IT—Rituximab作为显像剂，对10例乳腺癌患者行乳腺癌SLN动态显像。结果2-IT与Rituximab连接的最佳物质的量比为10：1，4℃反应45min后，每分子抗体螯合上的游离巯基数平均为2．1个。IT—Rituximab分子保持完整、免疫活性保留完全。^99Tc^m-IT-Rituximab的标记率〉90％，其与B淋巴瘤细胞株Raji细胞的结合率为69．4％。动物显像结果显示^99Tc^m—IT—Rituximab可清晰定位小鼠SLN，注射后30min～24h SLN均可显影，2h后SLN显影清晰，至24h未见次级淋巴结显影。动物体内分布数据显示^99Tc^m-IT-Rituximab定位性能明显优于^99Tc^m-SC，24h时SLN百分注射剂量率（％ID）为4．49％，次级及第3级淋巴结基本无摄取，24h注射点滞留率为22．14％。结论该标记方法简单，标记率高；^99Tc^m—IT—Rituximab在SLN中定位性能良好，是一种潜在的新型SLN显像剂。     

^99Tc^m标记RGD环肽在荷肺腺癌裸鼠中的显像研究

目的制备^99Tc^m标记的含RGD序列的^99Tc^m-联肼尼克酰胺（HYNIC）-c（RGDfK）环肽单体,评价其在整合素表达阳性的肺腺癌严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠肿瘤模型中的生物学分布,并进行显像研究。方法（1）以HYNIC为双功能螯合剂,以三羟甲基甘氨酸（tricine）和乙二胺二乙酸为协同配体,采用二步法制备^99Tc^m标记HYNIC—c（RGDfK）,进行细胞结合实验,测定标记物生物学活性;（2）将荷A549肺腺癌模型小鼠分为7组[第7组作为竞争性抑制组,注射显像剂前0．5h先注射HYNIC-c（CRDGfk）100μg],每组5只,经尾静脉注射7．4MBq的^99Tc^m-HYNIC-c（RGDfK）,于注射后0．5,1,2,4,8,12h处死,计算荷A549肺腺癌小鼠模型各脏器％ID／g,同时采用ROI技术研究^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）在小鼠体内的生物学分布,计算不同时间点的T／NT比值（NT选取肌肉）;（3）取6只荷瘤裸鼠,其中3只为竞争性抑制组,经尾静脉注射7．4MBq的^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）,于注射后0．5,1,2,4,8,12h进行静态1显像。结果^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）的标记率〉90％,放化纯〉95％。^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）与A549肺腺癌细胞特异性结合率最高为36．14％,体内分布实验显示^99Tc^m-HYNIC—c（RGDfK）在肾的摄取率始终高于20％ID／g,注射后0．5h肿瘤％ID／g为10．52±1．48,8h为17．26±2．81,12h为8．93±0．90,竞争性抑制组注射后0．5h为2．29±0．85。通过ROI技术测得T／NT在8h达6．87。注射后1h肿瘤可显影,4～8h显影更清晰。结论^99Tc^m标记HYNIC—c（RGDfK）易于制备,具有良好的靶向性。     

99Tcm直接标记αvβ3受体拮抗剂环形RGD多肽

目的探讨^99Tc^m直接标记αvβ3受体配体——含2个二硫键的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）-九肽（RGD-4CK）的可行性和不同标记条件对标记率的影响。方法采用预锡化法^99Tc^m直接标记RGD-4CK，3MM色谱纸层析测定^99Tc^m-RGD-4CK的雕值，计算标记率与比活度。研究各种标记条件对^99Tc^m-RGD-4CK标记率的影响。通过高效液相色谱仪（HPLC）分析，Sep-Pak C18柱层析，进行体外稳定性实验、半胱氨酸置换实验以及血清蛋白结合实验，评价^99Tc^m-RGD-4CK的放射化学性质。结果^99Tc^m-RGD-4CK在以丙酮和V（氨水）：V（乙醇）：V（水）=1：2：5为流动相中的雕值分别为0与0．8～0．9，标记率为（97．8±0．4）％，基础标记条件下的比活度为（11．90±0．05）TBq／mmol。在以下条件下放化纯均〉95％：（1）酒石酸亚锡为150～300μg；（2）预锡化反应pH值为2．0～3．5，温度60℃，保温时间6h以上；（3）^99Tc^mO4^-活度为37～185MBq，体积在200μl内；（4）标记温度为95℃，标记时间30min.^99Tc^m-RGD-4CKHPLC的保留时间与其洗脱液的放射峰基本一致；^99Tc^m-RGD-4CK室温放置6h，放化纯仍〉95％；Sep—Pak C18柱层析测定的^99Tc^m O4^-峰仅比3MM纸层析高0．5％；标记物与300mmol／L半胱氨酸37℃保温1h，^99Tc^m O4^-峰仅增加1．88％；^99Tc^m-RGD-4CK与血清蛋白无明显结合。结论预锡化法^99Tc^m直接标记RGD-4CK方法简便、标记率高，无需分离纯化即可直接应用，还可用于制备冻干品药盒。标记产物^99Tc^m-RGD-4CK具有良好的放射化学性质。