盐酸埃克替尼对人舌鳞癌Tca-8113细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的研究表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂盐酸埃克替尼对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制。方法分别应用0、10、20、40μmol.L-1盐酸埃克替尼处理体外培养的人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,分别作用24、48、72 h后,采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,采用间接免疫荧光联合流式细胞技术及免疫细胞化学方法检测盐酸埃克替尼对人舌鳞癌Tca8113细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果盐酸埃克替尼作用于人舌鳞癌Tca8113细胞后Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加;随盐酸埃克替尼浓度、作用时间的增加,人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡率增加;人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡率与盐酸埃克替尼浓度、作用时间成正相关。结论盐酸埃克替尼可降低Bcl-2蛋白表达,增加Bax蛋白表达,诱导人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡。     

野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞Fas和FasL表达的影响

目的:观察野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞Fas和FasL表达的影响.方法:体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞分为对照组、不同浓度野黄芩苷药物组,野黄芩苷组分别用80μg/ml、120μg/ml、160μg/ml的野黄芩苷作用人舌鳞癌Tca8113细胞48h.采用免疫细胞化学法观察野黄芩苷对人舌鳞癌Tca8113细胞Fas和FasL表达的影响.结果:用药组Tca8113细胞Fas和FasL的表达水平明显高于对照组(P＜0.05);并且随着野黄芩苷药物浓度的增加,Fas和FasL的表达水平逐渐升高(P＜0.05).结论:野黄芩苷可能通过促进人舌鳞癌Tca8113细胞Fas蛋白和FasL蛋白的表达促进肿瘤细胞凋亡.     

吉西他滨对人舌鳞癌Tca8113 细胞的 放射增敏作用及其机制研究

目的 研究吉西他滨（GEM）对人舌鳞癌Tca8113 细胞的放射增敏作用及其相关机制。 方法 用不同浓度GEM 处理人舌鳞癌Tca8113 细胞24 h，测定细胞存活率并确定后续实验浓度。对Tca8113 细胞进行单独放疗或联合GEM 处理，MTT 法测定细胞存活率；平板克隆形成实验研究各组细胞集落形成 的能力；流式细胞术验证Tca8113 细胞对放射的敏感性变化。Western blotting 检测Bcl-2、Bax、 Cleaved Caspase-3 及Cleaved Caspase-9 蛋白的表达。结果 不同浓度GEM 作用时的细胞存活率比较，经方差分析， 差异有统计学意义（P <0.05）。与0.00μmol/L 组比较，GEM 浓度为0.01、0.02、0.03、0.10 及1.00μmol/L 时细胞存活率降低（P <0.05）。照射剂量为4 Gy 时，与单纯放疗组比较，GEM 联合放疗组细胞存活率降低 （P <0.05）。克隆形成实验显示，GEM 联合放疗组集落形成能力最弱（P <0.05）；流式细胞术进一步证实， GEM 联合放疗组较单纯放疗组凋亡率升高（P <0.05）。GEM 联合放疗组Tca8113 细胞凋亡高于其他各组，且 Tca8113 细胞中Bax、Cleaved Caspase-3 及Cleaved Caspase-9 蛋白表达水平高于其他组（P <0.05）；而Bcl-2 蛋白表达则低于其他各组（P <0.05）。结论 GEM 对舌鳞癌Tca8113 细胞的增殖有抑制作用，联合放射治疗 能有效提高放射敏感性；两者可能具有协同抗肿瘤作用。     

蟾毒灵体外抑制人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和促凋亡作用及对Na+/K+-ATP酶的影响

目的 探索蟾毒灵对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖、凋亡的影响及可能作用机制.方法 以人舌鳞癌Tca8113细胞为研究对象,MTT法检测10、20、40、80、160 nmol/L浓度蟾毒灵体外抑制Tca8113细胞增殖的活性;检测蟾毒灵干预下肿瘤细胞Na+-K+-ATP酶活性的变化;Western blot发检测Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表达.结果 蟾毒灵有抑制Tca8113细胞的活性,且呈剂量-时间依赖性;在蟾毒灵干预下Tca8113细胞Na+-K+-ATP酶收到抑制;Western blot结果显示凋亡相关Bax、caspase-3蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调.结论 蟾毒灵通过抑制细胞膜Na+-K+-ATP酶活性,通过调节Bcl-2凋亡通路的相关蛋白,最终激活caspase-3,诱导人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡.     

三氧化二砷体外诱导口腔鳞癌细胞凋亡的研究

目的 探讨三氧化二砷（As2O3)对口腔鳞癌细胞的体外生物学作用及机制。方法 采用形态学、MTT、克隆形成试验、DNA梯度降解试验、原位末端标记及流式细胞仪等方法，对As2O3在Tca8113细胞系中的作用进行体外研究。结果 As2O3对Tca8113细胞产生明显的生长抑制作用，MTT显示生长抑制率为76.3%。DNA梯度降解试验、原位末端标记、流式细胞仪显示As2O3诱导了Tca8113细胞凋亡。流式细胞仪显示As2O3的Tca8113细胞凋亡与细胞周期阻滞有关。结论 As2O3对口腔鳞癌细胞具有显著的体外生长抑制及凋亡诱导作用。     

蛇床子素对人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡和自噬的影响

目的 研究蛇床子素对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖、凋亡和自噬的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 体外培养Tca8113细胞,并将细胞分为不加药的对照组和分别加入40、80、120、160 μmol/L蛇床子素的实验组。用四甲基偶氮唑盐实验和集落形成实验检测蛇床子素对Tca8113细胞的增殖作用,通过Hoechst33342染色法和流式细胞仪检测蛇床子素对人舌鳞癌Tca8113细胞24 h凋亡情况,Western blot检测Bcl-2、Bax、活化的半胱氨酸蛋白酶3及LC3、P62的表达情况。结果 蛇床子素可以明显抑制Tca8113细胞增殖,且药物对细胞的抑制率呈浓度依赖性;细胞集落形成能力降低;Hoechst33342染色和流式细胞术结果显示,蛇床子素呈浓度依赖性诱导细胞死亡;Western blot结果显示,蛇床子素能上调Bax和活化的半胱氨酸蛋白酶-3蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达。同时增加LC3Ⅱ、P62的表达,降低LC3Ⅰ的表达。结论 蛇床子素能抑制人舌鳞癌Tca8113细胞增殖,其机制可能与促进细胞凋亡并抑制细胞自噬流、自噬途径损伤而抑制细胞自噬有关。     

EGCG抑制口腔鳞癌Tca8113细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的：研究绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对人口腔鳞癌Tca8113细胞生长抑制及促凋亡的作用。方法：应用MTT法检测不同浓度的EGCG对Tca8113细胞体外增值抑制作用;采用HE染色、Hochest33258染色法检测EGCG对Tca8113细胞凋亡的影响。结果：MTT法检测显示EGCG对Tca8113细胞有明显增殖抑制作用并呈现时间及浓度依赖性（P〈0.05）;HE、Hochest33258染色显示,EGCG处理Tca8113细胞中出现了典型的凋亡形态学改变如核碎裂、核浓缩。结论：EGCG对Tca8113细胞的生长具有显著的抑制及促凋亡作用,且呈现时间及浓度的依赖性。     

舌鳞癌细胞对Iressa的敏感性及其表皮生长因子受体突变

目的研究中国人舌鳞癌细胞系对表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂Iressa的敏感性及其EGFR突变,初步探讨Iressa在头颈鳞癌治疗中的价值。方法以中国人舌鳞癌细胞系Tscca和Tca8113为研究对象,采用MTT法检测Iressa对其增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;对Tscca和Tca8113进行EGFR外显子18～21测序。结果 Iressa对Tscca、Tca8113均有显著的增殖抑制作用,呈剂量依赖性。细胞周期分析显示,较低浓度Iressa(18.2μmol/L和36.4μmol/L)可使Tscca和Tca8113细胞G0/G1期比例增高;流式细胞仪分析显示高浓度Iressa可诱导Tscca和Tca8113细胞凋亡。测序发现Tscca和Tca8113的EGFR外显子20存在同一静止突变,即2361G-A,Q787Q。结论 Iressa可抑制Tscca和Tca8113的增殖,呈剂量依赖性;较低浓度时诱导细胞周期G0/G1期比例增高,高浓度时诱导凋亡,其抑制作用与EGFR突变未见相关性。     

ATRA联合IFNγ对Tca8113细胞凋亡的诱导作用

目的"观察全反式维甲酸(ATRA)联合干扰素-γ(IFNγ)对人舌鳞癌细胞系(Tca8113)细胞的凋亡作用,并明确其作用机制. 方法"应用透射电镜、DNA凝胶电泳、流式细胞术等凋亡测定手段,对细胞凋亡进行了定性、定量观察. 结果"透射电镜细胞形态观察、DNA凝胶电泳、流式细胞术凋亡检测等结果都证实ATRA联合IFNγ可诱导Tca8113细胞凋亡.ATRA(1μmol/L)、IFNγ(1000U/ml)单独应用产生凋亡作用较弱,凋亡率低于30%;而两者联合后作用明显增强,凋亡率可达68%. 结论"诱导细胞凋亡是ATRA联合IFNγ对Tca8113细胞产生抗增殖作用的主要原因.该方法有可能成为口腔鳞癌凋亡治疗的有效方案.     

巴西苏木素对舌癌Tca8113 细胞凋亡和自噬的影响及分子机制

目的探讨巴西苏木素对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其分子机制,为临床用药提供理论依 据。方法用MTT法检测巴西苏木素对Tca8113细胞的增殖作用;Hoechst33342染色法观察细胞形态变化;Annexin V/PI双染 色检测巴西苏木素对Tca8113细胞凋亡程度的影响;Western blot法检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2、cleaved caspase3及自噬相关 蛋白p-AMPK、p-mTOR、LC3B、p62 的表达;使用AMPK通路抑制剂与巴西苏木素共同作用于Tca8113 细胞,并检测通路相 关蛋白p-AMPK、p-mTOR、LC3B的表达。结果MTT结果表明,巴西苏木素能明显抑制Tca8113 细胞的增殖,24 h 时IC50为 31.17 μmol/L;Hoechst33342染色结果显示,巴西苏木素能使Tca8113细胞发生凋亡形态学改变,且与浓度正相关;Annexin V/PI 染色结果显示,不同浓度巴西苏木素作用24 h后,细胞凋亡数和凋亡率均高于空白对照组;Western blot检测相关蛋白表达结果 表明,巴西苏木素可抑制抗凋亡蛋白bcl-2,促进凋亡关键蛋白bax和cleaved-caspase3的表达,同时增加LC3B和p-AMPK的表 达,降低p62和p-mTOR表达。在与抑制剂合用后,p-AMPK与LC3B表达量虽仍略高于空白对照组,但与单纯使用巴西苏木素 相比均明显降低,而p-mTOR的表达较巴西苏木素组则明显升高（P<0.05）。结论巴西苏木素能抑制Tca8113细胞增殖并促进 其凋亡,同时可通过AMPK/mTOR通路诱导细胞发生自噬。     

青蒿琥酯联合阿霉素对人舌鳞癌Tca8113细胞抑制作用的实验研究

目的研究青蒿琥酯(Art)与阿霉素(ADM)联合应用对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的影响。方法通过MTT法测定Art和ADM对Tca8113细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞术分析细胞周期变化;利用吖啶橙-溴化乙锭(AO-EB)染色观察经Art作用前后Tca8113细胞形态的改变;应用透射电镜观察药物对细胞超微结构的影响。结果 Art和ADM对Tca8113有显著地抑制增殖和诱导凋亡作用,并呈明显的时间-剂量效应(P0.05);Art(25μg.mL-1)和ADM(0.39～1.56μg.mL-1)联合给药可对Tca8113产生增强的联合杀伤效果(P0.01);流式细胞术检测Art可使细胞周期阻滞于G2/M期和S期;透射电镜和荧光染色观察可见凋亡细胞染色质凝聚、边集呈新月形。结论 Art对Tca8113细胞有显著地抑制作用,其机制可能为阻滞细胞周期于G2/M期和S期以及诱导细胞凋亡。Art与ADM合用具有较好联合效应,可增强Tca8113对ADM的敏感性。     

那可丁联合奥沙利铂对人舌鳞状细胞癌 Tca8113 细胞增殖及凋亡的影响

目的 探究那可丁联合奥沙利铂对人舌鳞状细胞癌Tca8113 细胞增殖及凋亡的影响。方法 将 体外培养的人舌鳞状细胞癌Tca8113 细胞随机分为空白对照组、奥沙利铂组、那可丁组和联合用药组。 CCK-8 法检测各组药物对Tca8113 细胞的存活率;Hoechst33342 染色荧光显微镜下观察凋亡形态变化;流 式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting 法检测各组细胞中Bax、Bcl-2、PARP、Cleaved Caspase-9 及 Cleaved Caspase-3 蛋白的表达水平。结果 奥沙利铂组、那可丁组和联合用药组Tca8113 细胞存活率较空白 对照组低（P <0.05）,联合用药组较奥沙利铂组、那可丁组低（P <0.05）。Hoechst33342 染色法结果显示：奥 沙利铂组、那可丁组和联合用药组处理后均使人舌鳞状细胞癌Tca8113 细胞发生凋亡特征性改变。奥沙利铂组、 那可丁组和联合用药组Tca8113 细胞凋亡率较空白对照组高（P <0.05）,联合用药组较奥沙利铂组、那可丁 组高（P <0.05）。奥沙利铂组、那可丁组和联合用药组Bax、PARP、Cleaved Caspase-9 及Cleaved Caspase-3 的蛋白表达较空白对照组高（P <0.05）,而Bcl-2 的蛋白表达较空白对照组低（P <0.05）,联合用药组Bax、 PARP、Cleaved Caspase-9 及Cleaved Caspase-3 的蛋白表达较奥沙利铂组、那可丁组高（P <0.05）,Bcl-2 的 蛋白表达较奥沙利铂组、那可丁组低（P <0.05）。结论 那可丁联合奥沙利铂对人舌鳞状细胞癌Tca8113 细 胞的生长具有协同抑制作用,并促其凋亡,其作用机制可能与调节细胞凋亡相关蛋白表达有关。     

miR-200c对舌癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨 miR-200c 对人舌鳞状细胞癌 Tca8113细胞增殖和凋亡的影响。方法将 miR-200c 的模拟物通过脂质体转染到人舌鳞状细胞癌 Tca8113细胞内,通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖能力、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率、Western blot 检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）和 Bcl-2蛋白的表达。结果与对照组相比,miR-200c 模拟物20、40、80 nmol／L 组的 Tca8113细胞生长受到明显抑制,差异有统计学意义（P ＜0．05）,miR-200c 模拟物的浓度越大,作用时间越长,抑制效果越明显（P ＜0．05）;转染 miR-200c 模拟物48 h 后,Tca8113细胞停滞于 G0／G1期,细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义（P ＜0．05）;Western blot 证明20、40、80 nmol／L 组 Bcl-2蛋白表达量明显低于对照组,而 Caspase-3蛋白表达量明显高于对照组（P ＜0．05）。结论miR-200c 过表达可抑制舌癌 Tca8113细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

Effects of ATRA, Acitretin and Tazarotene on Growth and Apoptosis of Tca8113 Cells

Summary：To investigate the effects of ATRA, acitretin and tazarotene on the growth and apoptosis of human tongue squamous cell carcinoma cell line Tca8113. The effect of retinoids on growth of Tca8113 cells in vitro was examined by MTT assay and Trypan blue exclusion assay. Cell cycle analysis, early apoptosis analysis with double staining with Annexin V-FITC and PI, and active caspase-3 analysis with the staining of FITC-conjugated monoclonal rabbit anli-active caspase-3 antibody were made by flow cytometer. Streptavidin-biotin complex （SABC） immunocytochemical assays were employed for the detections of Bax/Bcl-2 proteins expressions. Our results showed that the retinoids inhibited growth of Tca8113 cells in a dose-and time-dependent manner with maximal inhibition 24 h after treatment of 10 5 mol/L. 10^-5 mol/L retinoids altered cell cycle distribution of Tca8113 cells, revealing an increase in G0/G1-phase population, a decrease in S-phase population and the inhibition of G1/S switching. 10^-5 mol/L retinoids significantly induced apoptosis of Tca8113 cells （all P〈0.05）, elevated the cells population with detectable active caspase-3 （P〈 0.05 for all）, increased the number of cells forming Bax and decreased the number of cells forming Bcl-2 significantly （all P〈0.05）. Acitretin played a most prominent role among the retinoids. It is concluded that the inhibition of cell cycle progress of Tca8113 cells by ATRA, acitretin and tazarotene is one of the possible mechanisms for proliferation arrest of TcaS113 cells elicited by the retinoids. The retinoids mediate apoptosis in TcaS113 cells that may be caspase-dependent through mitochondria pathway. High concentration retinoids inhibit growth of Tca8113 cells in vitro by interfering with proliferation and inducing apoptosis of cells. Acitretin may be an alternative medicine for the prevention and treatment of tongue squamous cell carcinoma.     

补骨脂乙素对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的抑制作用和凋亡诱导作用及其机制

目的：观察补骨脂乙素（IBC）对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制。方法：将体外培养的Tca8113细胞分为对照组（0 μmol·L^-1）和不同浓度IBC组（10、20、40及80 μmol·L^-1）。通过MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中Akt、p-Akt、Erk、p-Erk、Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达水平。结果：MTT法检测,随着IBC浓度的增加和作用时间的延长,Tca8113细胞的增殖抑制率逐渐增加,12、24和48h半数抑制浓度（IC₅₀）分别为（285.13±8.97）、（132.40±7.76）和（58.56±5.93） μmol·L^-1,不同时间点IC₅₀比较差异有统计学意义（P < 0.05）。流式细胞术检测,与对照组（1.69%±0.65%）比较,作用48h后20和40 μmol·L^-1 IBC组细胞凋亡率（分别为8.21%±2.32%和22.45%±1.18%）明显升高（P < 0.05）。Western blotting法检测,与对照组比较,作用48h后20和40 μmol·L^-1 IBC组细胞中Bcl-2、p-Akt和p-Erk表达水平明显降低（P < 0.05）,Bax表达水平明显升高（P < 0.05）;Akt和Erk蛋白表达水平无明显变化（P > 0.05）;与对照组比较,作用48h后40 μmol·L^-1 IBC组Tca8113细胞中Caspase-3蛋白表达水平明显升高（P < 0.05）。结论：IBC可抑制Tca8113细胞的增殖并诱导细胞凋亡,Akt和Erk通路可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的途径。     

放射线对Tca8113细胞端粒重复序列结合因子2蛋白的影响

目的:研究X线对Tca8113细胞端粒重复序列结合因子2蛋白的影响。方法:采用Western Blot检测X线照射前后端粒重复序列结合因子2蛋白的含量变化,采用AnnexinⅤ-FITC/PI联合染色检测细胞早期凋亡。结果:与照射前相比,细胞早期凋亡率显著升高(P<0.05);经不同剂量X线照射后0.5 h,各组端粒重复序列结合因子2蛋白含量均上升(P<0.05),1 h后,2 Gy组的TRF2蛋白含量降至与未照射时水平相当,3 h和5 h时降至比未照射时更低(P<0.05),其它照射剂量组的TRF2蛋白在照射后1 h时均已降至不可测得的水平。结论:端粒重复序列结合因子2被激活,端粒重复序列结合因子2蛋白含量应激性地短暂升高是经X线照射后的早期事件。