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目的:探讨食管癌细胞抗原致敏、白细胞介素27(interleukin27,IL-27)基因修饰的树突状细胞(dendritic cells,DCs)疫苗的特异性抗食管癌免疫反应。方法:采用重组逆转录病毒介导IL-27基因修饰食管癌患者外周血DCs;反复冻融法提取食管癌细胞裂解产物,致敏经IL-27基因转染的DCs;ELISA法检测各组DCs和细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)上清液中IL-27、IL-12和干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的分泌水平;FCM法分析各组DCs表面分子CD1a、CD83、CD80和CD86的表达水平;MTT法检测DCs刺激T细胞增殖的活性和DCs诱导CTLs杀伤食管癌细胞的效能。结果:经IL-27基因修饰和抗原致敏后的DCs高表达CD83、CD80和CD86分子,其表达量分别为(82.67±7.92)%、(78.33±7.31)%和(85.33±4.32)%;DCs上清液中IL-12、IL-27及IFN-γ分泌量明显提高,分别为(107.85±7.20)ng/L、(430.39±10.12)ng/L及(411.97±17.80)ng/L;并且,DCs明显刺激同源T细胞增殖,增强了CTLs上清液中IFN-γ水平[(751.50±31.30)ng/L]。诱导产生的CTLs对食管癌细胞有强大的杀伤作用,显著高于其他组(P<0.01)。结论:IL-27基因修饰增强了DCs在体外诱导自体T淋巴细胞产生特异性抗食管癌免疫的能力。其机制可能与IL-27基因修饰和抗原致敏活化了DCs抗原提呈第二信号,促进了DCs高分泌IL-27和IL-12因子,活化了T淋巴细胞,并致使CTLs分泌IFN-γ的能力增强等密切相关。 相似文献
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冻融人树突状细胞基因疫苗体外抗肿瘤免疫效应 总被引:10,自引:0,他引:10
目的:观察人外周血和人脐血来源的冻融树突状细胞(dendritic cell,DC)基因疫苗的形态、表型及体外诱导的CTL抗肿瘤活性。方法:细胞因子扩增人外周血和脐血DC,分别将EBV-LMP2、HPV16E6基因转染2种来源的冻融DC制备疫苗。动态形态学观察和流式细胞术检测疫苗表面分子表达,体外诱导并测定CTL活性。结果:人外周血和脐血冻融DC疫苗均高表达CD80、CD86和CD83,低表达CD14,高表达CD1a,体外均能诱导高效的CTL活性(P=0.001),并与新鲜DC疫苗差异无统计学意义,P=0.138。结论:负载肿瘤相关病毒抗原基因的冻融DC疫苗保持了功能成熟DC的形态特征,且能诱导高效的特异性抗肿瘤免疫应答。 相似文献
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树突状细胞(DC)作为机体免疫应答的始动者,在肿瘤免疫中具有重要的作用。近几年来,以DC为基础的抗肿瘤免疫方面的研究已成为DC研究领域的热点之一。现综述DC在肿瘤、肿瘤转移以及肿瘤免疫治疗等方面的研究状况。 相似文献
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树突状细胞与抗肿瘤免疫 总被引:1,自引:0,他引:1
刘欣 《国外医学(肿瘤学分册)》2000,27(6):365-367
树突状细胞(DC)是一种重要的专职抗原提呈细胞(APC),在抗肿瘤免疫中发挥重要作用。目前有关DC在白血病和其它肿瘤治疗中作用的研究已成为该领域的研究热点,有望在肿瘤免疫治疗中取得新的突破。 相似文献
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目的:观察低温冻存对人脐血DC与EC109食管癌细胞融合疫苗生物学特性及CTL活性的影响。方法:应用免疫磁珠标记法分选人脐血CD34 干细胞,细胞因子扩增培养为成熟DC,聚二乙醇(PEG)融合法制备EC109-DC融合疫苗,-80℃低温冰箱冻存,3周后复苏,计算疫苗回收率及存活率。倒置相差显微镜观察冻存后疫苗的细胞形态,流式细胞术分析疫苗及疫苗活化后T淋巴细胞的表型,MTT法检测疫苗特异的CTL活性。结果:冻存后疫苗存活率及回收率分别为(77·2±1·8)%、(61·8±1·4)%。冻存对疫苗细胞形态及表型无明显影响。冻存疫苗和未冻存疫苗活化后T淋巴细胞,CD3 T/CD4 T及CD3 T/CD8 T均较活化前明显增加,P=0·002;CD4 T/CD8 T由活化前的0·85分别增加至1·25和1·29,疫苗冻存与否对T细胞活化能力无明显差别,P=0·052。疫苗特异的CTL活性未受冻存明显影响,其杀伤率与未冻存疫苗组相比差异无统计学意义,P=0·667。结论:-80℃低温冰箱短期冻存对EC109-DC融合疫苗生物学特性及特异的CTL活性无明显影响,可望为EC109-DC疫苗的开发应用提供简单可行的保存方法。 相似文献
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目的分离K562细胞释放的exosomes,致敏脐血树突细胞(dendritic cell,DCs),观察其对细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocytes,CTLs)的激活效应。方法离心超滤和蔗糖密度梯度离心法分离K562细胞释放的exosomes,固相免疫电镜法(SPIEM)制备exosomes的HSP70、ICAM-1及ABL免疫电镜标本。常规方法从脐血单个核细胞诱导DCs并分离T细胞,将K562细胞来源的exosomes冲击或未冲击的DCs与T细胞共培养。MTT比色法检测体外细胞毒活性。结果K562细胞分泌的exosomes为直径50~100nm的膜性微囊。Exosomes致敏的脐血DCs激活CTLs的能力显著高于肿瘤冻融抗原致敏的DCs组,在效靶比为501时,两组CTLs对K562细胞的杀伤率为(68.4%vs35.3%,P<0.05)。结论K562细胞分泌的exosomes负载脐血DCs后活化CTLs,有抗肿瘤活性。 相似文献
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目的 研究脐血CD34^+细胞在体外经造血细胞生长因子扩增后,诱导树突状细胞(DC)并观察该类DC在抗肿瘤免疫中的作用。方法 Ficoll分离脐血单个核细胞,免疫微磁珠法分离纯化CD34^ 细胞,以干细胞因子、flt3配体、白细胞介素-3和红细胞生成素体外扩增2周,诱导DC生成,观察肿瘤抗原负载后诱导特异性细胞毒T淋巴细胞生成和对肿瘤细胞杀伤作用。结果(1)脐血经免疫微磁珠法分离可获得高纯高的CD34^ 细胞;(2)2周体外扩增后,细胞数显著增加达150倍;体外集落试验证实该类细胞可形成粒单细胞集落形成单位/(CFU-GM);(3)扩增的细胞可成功诱导成DC,并具有活化异体淋巴细胞的功能,负载肿瘤抗原后能诱导发生肿瘤特异性淋巴细胞,并可特异性杀伤Daudi肿瘤细胞。结论 脐血来源CD34^ 细胞在体外能成功地扩增,并诱导产生功能性DC。 相似文献
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两种来源的树突状细胞体外培养及免疫学特征比较 总被引:1,自引:0,他引:1
目的对脐血(UCB)和外周血(PB)体外诱导培养成树突状细胞(DC),并进行免疫学特征的比较,探索更好的DC来源。方法UCB和正常成人PB各10例为UCB组和PB组,分离出单个核细胞后,分别加入粒细胞巨细胞集落刺激因子(GM-CSF),白介素4(IL-4)和肿瘤坏死因子(TNF-α)培养基中,培养12d,每天用光镜观察细胞形态,于第3、6d和10d,用流式细胞仪进行CD11c、CD80、CD86及HLA-DR表型分析,于第10d透射电镜和扫描电镜观察细胞形态,并在第12d与淋巴细胞混合培养,对比两种源性DC激发淋巴细胞增殖能力。结果两者均诱导出具有典型形态的DC,UCB组诱导的DC细胞数量明显多于外周血诱导的细胞数(P<0.01)。激发淋巴细胞增殖能力,两者无区别(P>0.05)。结论UCB和PB中的MNs均可在体外诱导为成熟DC,UCB诱导的DC细胞数高于PB,两者激发淋巴细胞增殖能力相同,故UCB有可能成为免疫治疗DC的丰富来源。 相似文献
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背景与目的:树突细胞(dendritic cells,DCs)是体内功能最强的抗原递呈细胞.在抗肿瘤免疫治疗中起着重要的作用。既往对DCs生物学特性的研究数据大多来自健康个体,而来自肿瘤患者的DCs的特性尚不清楚。本研究旨在探讨卵巢癌患者外周血单核细胞来源的树突细胞(monocyte—derived dendritic cells,MoDCs)的生物学特性。方法:收集8名上皮性卵巢癌患者及13名健康女性志愿者的外周静脉血标本,从中分离出单核细胞,将其置于含人白细胞介素4(interleukin4,IL4)及粒细胞.巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophag ecolony stimulating factor,GM-CSF)的RPMI-1640完全培养基中培养,用肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)刺激其成熟。对诱导7d后的MoDCs进行细胞形态、表型及刺激异体淋巴细胞增殖能力分析。结果:卵巢癌患者及健康妇女外周血单核细胞培养7d后,均诱导出形态学上典型的成熟MoDCs。两组MoDCs均表达丰富的HLA-ABC(MHC-Ⅰ)、HLA-DR(MHC-Ⅱ)和大量共刺激分子CD86和CD80。卵巢癌组HLA-ABC、HLA-DR、CD86及CD80的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)与健康妇女组差异无统计学意义(P〉0.05)。混合淋巴细胞反应(mixed leukocytes reaction,MLR)结果显示,卵巢癌各组(按MoDCs与淋巴细胞的比例分组)的吸光度值均明显低于健康妇女相应各比例组(P〈0.05)。结论:卵巢癌患者的MoDCs刺激异体淋巴细胞增殖能力较健康妇女降低,提示其存在一定程度的免疫学功能异常。 相似文献
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目的:研究α干扰素(interferon alpha,IFN-α)对不同亚型的急性髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞来源的树突状细胞(dendritic cell,DC)免疫表型及功能的影响。方法:5例初发AML患者(其中M2 1例、M4 2例、M5 2例)的外周血单个核细胞,在含GM-CSF、IL-4、TNF-α的无血清培养液中培养11 d,其后加入IFN-α-2a(1 000 U/ml)继续培养3 d,获得DC(IFN-AML-DC),光镜下观察细胞形态,流式细胞仪测定细胞免疫表型,同种异体混和淋巴细胞反应检测DC的免疫功能。结果:所有患者白血病细胞培养14 d后均转化为IFN-AML-DC,与正常人外周血单核细胞由GM-CSF IL-4 TNF-α培养获得的DC(monocyte-derived DC,MoDC)及AML细胞由GM-CSF IL-4 TNF-α培养获得的DC(AML-DC)相比,IFN-AML-DC具有典型成熟形态的细胞明显增多,表达CD83 细胞的比例显著增加,HLA-DR、CD86分子的表达水平增高,对同种异体T淋巴细胞的激活能力明显高于MoDC及AML-DC。结论:IFN-α能够促进AML-DC的体外成熟,形成更强的免疫激活能力,为AML的免疫治疗提供更有力的手段。 相似文献
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目的 探讨体外诱导培养较高纯度和成熟度的树突状细胞(DC)的方法.方法 密度梯度离心分离人类外周血单核细胞,直接贴壁法收集前体细胞,含人类血清及细胞因子rhGM-CSF和rhIL-4完全RPMI1640培养基,37 ℃、5%CO2孵育培养;第3天全量换液并添加细胞因子,第5天加入rhTNF-α促进成熟,第8天收获悬浮细胞.同时进行形态学和细胞表型分析.结果 镜下表现为典型的DC形态特征;流式分析细胞表型CD1a阳性表达从第5天的(18.69±8.73)%增加到第8天的(78.07±9.43)%,CD83表达从(14.74±4.06)%增加到(46.82±14.15)%,第5天CD80表达(9.82±4.61)%,第8天CD80表达(60.11±20.50)%;40 ml外周血约得(3.12±1.30)×106个DC.结论 该方法可以体外诱导培养出较大数量和较高纯度的成熟DC,并且培养体系成熟,操作性和可重复性强. 相似文献
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目的:探讨转染肿瘤血管内皮细胞RNA的树突细胞(DC)能否诱导特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。方法:采用肿瘤细胞的培养上清诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖,从而制备肿瘤源性血管内皮细胞(Td-EC)。用RT-PCR检测肿瘤内皮标志1(TEM1)在Td-EC上的表达。制备Td-EC的总RNA,转染从人外周血中扩增的未成熟DC,用流式细胞仪检测DC表型的变化,用LDH法检测DC诱导的CTL对Td-EC、HUVEC和人脐静脉内皮细胞株CRL-1730的杀伤率。结果:Td-EC特异性表达TEM1。转染RNA的DC组CD83、CD86表达率分别为(85.22±7.73)%和(88.38±8.02)%,而未成熟DC组CD83、CD86表达率分别为(51.58±9.49)%和(61.77±2.91)%,两组差异有统计学意义,P<0.05。在效靶比为20∶1、10∶1和5∶1时,CTL对Td-EC的杀伤率分别为(34.15±1.14)%、(27.02±1.31)%和(13.12±1.63)%;CTL对HUVEC杀伤率分别为(11.35±0.97)%、(8.24±0.37)%和(5.30±0.73)%;CTL对CRL-1730杀伤率分别为(13.24±1.76)%、(8.41±0.91)%和(5.31±0.94)%;CTL对Td-EC杀伤率均显著高于对HUVEC和CRL-1730的杀伤率,P<0.05。结论:转染Td-EC RNA的DC可在体外诱导CTL特异性地杀伤Td-EC。 相似文献
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Numerical and functional defects of blood dendritic cells in early- and late-stage breast cancer 总被引:2,自引:0,他引:2
Pinzon-Charry A Ho CS Maxwell T McGuckin MA Schmidt C Furnival C Pyke CM López JA 《British journal of cancer》2007,97(9):1251-1259
The generation of antitumour immunity depends on the nature of dendritic cell (DC)-tumour interactions. These have been studied mostly by using in vitro-derived DC which may not reflect the natural biology of DC in vivo. In breast cancer, only one report has compared blood DC at different stages and no longitudinal evaluation has been performed. Here we conducted three cross-sectional and one one-year longitudinal assessments of blood DC in patients with early (stage I/II, n=137) and advanced (stage IV, n=36) disease compared to healthy controls (n=66). Patients with advanced disease exhibit markedly reduced blood DC counts at diagnosis. Patients with early disease show minimally reduced counts at diagnosis but a prolonged period (1 year) of marked DC suppression after tumour resection. While differing in frequency, DC from both patients with early and advanced disease exhibit reduced expression of CD86 and HLA-DR and decreased immunostimulatory capacities. Finally, by comparing a range of clinically available maturation stimuli, we demonstrate that conditioning with soluble CD40L induces the highest level of maturation and improved T-cell priming. We conclude that although circulating DC are compromised by loco-regional and systemic breast cancer, they respond vigorously to ex vivo conditioning, thus enhancing their immunostimulatory capacity and potential for immunotherapy. 相似文献
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Saito R Mizuno M Nakahara N Tsuno T Kumabe T Yoshimoto T Yoshida J 《International journal of cancer. Journal international du cancer》2004,111(5):777-782
Interferon-beta (IFN-beta) has been used as an antitumor drug against human glioma, melanoma and medulloblastoma since the 1980s. Recently, we developed a new gene therapy using the IFN-beta gene against malignant gliomas and then began clinical trials in 2000. Since stimulation of immune system was one mechanism of antitumor effect induced by IFN-beta gene therapy, we hypothesized that combination of IFN-beta gene therapy with immunotherapy might increase its effectiveness. In the present study, we tested whether combination therapy with IFN-beta gene therapy and immunotherapy using tumor cell lysate-pulsed dendritic cells (DCs) would increase the efficacy of IFN-beta gene therapy. In an experimental mouse intracranial glioma (GL261), which cannot be cured by either IFN-beta gene therapy or DC immunotherapy alone, IFN-beta gene therapy following DC immunotherapy resulted in a significant prolongation in survival of the mice. Moreover, when this combination was performed twice, 50% of treated mice survived longer than 100 days. Considering these results, this combination therapy may be one promising candidate for glioma therapy in the near future. 相似文献