乙肝病毒外膜大蛋白检测对于判定HBV DNA复制的意义

目的:通过检测患者血清乙肝病毒外膜大蛋白(HBV-LP)、HBV DNA以及乙肝病毒标志物(HBV M),探讨HBV-LP对于反映体内乙肝病毒复制的意义．方法:采用荧光定量PCR方法对254份HBV 感染血清的HBV DNA进行检测,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法对HBV-LP、 Pre-S1蛋白及HBV M进行检测．结果:大蛋白的检出结果与HBV DNA的检出结果无明显差异．不同HBV M模式的HBV DNA与HBV-LP的检出结果均无显著性差异． HBV DNA拷贝数的对数值与HBV-LP表达具有相关关系(r=0．945,P<0．001),HBV DNA拷贝数的对数值变化的89%可以用HBV-LP A值为解释变量的线性回归模型来解释．结论:HBV-LP能够反应HBV的复制情况,血清中HBV-LP的含量与HBV DNA的拷贝数具有较好的相关性．     

基因芯片技术检测HBV DNA及拉米夫定耐药株的应用研究

目的 :研究基因芯片技术检测 HBV DNA及拉米夫定耐药株在临床应用中的特异性、实用性。方法 :利用基因芯片法、双脱氧测序法分别对 4 3例服用拉米夫定且 HBV DNA仍为阳性的乙型肝炎 (乙肝 )患者及 10例非乙肝患者的血清进行 HBV DNA和 P区 5 2 8、5 5 2、5 5 5突变位点检测、对比。结果 :两种方法检测 HBV DNA10 0 %相符 ;检测拉米夫定耐药突变株 12 4个位点结果相符 ,5个位点结果不相符 (P >0 .0 5 ) ,提示两种方法检测HBV DNA及 P区 5 2 8、5 5 2、5 5 5突变位点阳性率相等。结论 :利用基因芯片技术检测 HBV DNA及拉米夫定耐药株 ,其特异性可与 DNA测序媲美 ,在混合株检测方面比 DNA测序有更大的优势。其方法简便 ,能大量地对临床标本进行检测 ,可作为临床常规检测手段。     

乙型肝炎患者血清HBV标志物与HBV DNA相关性分析

目的探讨乙型肝炎患者血清学标志(HBVM)与HBV DNA的关系。方法对257例乙型肝炎患者同时检测HBVM与HBV DNA。HBVM检测用EHSA法，HBV DNA检测用PCR法。根据不同检测结果进行对比分析。结果在HBsAg HBeAg HBcAb阳性的血清中HBV DNA阳性率和含量最高，血清HBeAg与HBV DNA含量密切相关，但部分HBeAg阴性或抗-HBe阳性患者也有较高的HBV DNA阳性率及含量。结论PCR定量检测HBV DNA含量更有助于判断体内HBV复制的情况及传染性强弱，在临床上有重要意义。     

碱性磷酸酶直接标记核酸探针检测乙型肝炎病毒DNA

目的 建立快速、特异、灵敏的碱性磷酸酶直接(AlkPhos Direc)标记核酸探针检测血清中乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)方法。方法 应用 AlkPhos DirecTM将碱性磷酸酶直接标记在HBV DNA全基因序列上制备探针,与目标核酸杂交后加入CDP-Star化学发光试剂,用胶片放射自显影检测HBV DNA。同时检测探针的灵敏度和特异性。比较AlkPhos Direc标记HBV DNA探针与地高辛标记的HBV DNA探针检测临床血清标本80份结果,并对70份临床血清标本的荧光定量PCR方法检测的结果与AlkPhos Direc标记HBV DNA探针斑点杂交检测的结果作相关性分析。结果 探针灵敏度至少为10pg,与地高辛探针比较,用AlkPhos Direct标记探针检测方法的灵敏度为100％,特异性为100％,符台率为100％,用HBV DNA荧光定量PCR方法和AlkPhos Direct标记探针核酸斑点定量方法检测的结果进行相关性比较,r=0.98,P<0.01。结论 AlkPhos Direc标记 HBVDNA探针检测血清中HBV DNA方法灵敏、特异,与地高辛标记的HBV DNA探针检测结果完全符合,与HBVDNA荧光定量PCR方法硷侧的结果有良好的相关性。     

应用滚环扩增技术检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的研究

目的 应用滚环扩增(RCA)技术检测HBV共价闭合环状DNA(cccDNA),观察该方法的特异性和敏感性.方法 以HBV全基因质粒为模板,经酶切、连接、浓缩、胶回收纯化等步骤,构建和制备HBV cccDNA标准品.抽提7例慢性乙型肝炎患者肝组织总DNA,进行滚环扩增.用HBV cccDNA标准品、3.2 kb线性HBV DNA、健康肝组织总DNA及15例慢性乙型肝炎患者血清总DNA作为对照,验证此方法的特异性.将HBV cccDNA标准品进行系列稀释,了解该方法的敏感性.结果 成功构建了HBV cccDNA,并可用RCA方法进行扩增.RCA方法可从2 mg的慢性乙型肝炎患者肝组织中检测到HBV cccDNA,并可检测低至1×102拷贝/μL的HBV cccDNA.RCA方法不能检测3.2 kb线性HBV DNA,在健康肝组织及15例慢性乙型肝炎患者血清中亦检测不到HBV cccDNA.结论 RCA方法操作较方便,具有很高的特异性和敏感性.     

抗HBc-IgM、前S1抗原与HBV-DNA检测在乙肝诊断中的相关性研究

目的通过对乙肝最常见的大三阳和小三阳患者进行抗HBc—IgM、前S_1抗原及HBV—DNA检测,找出三项指标的相关性。方法取大三阳和小三阳患者各100例进行抗HBc—IgM、前S_1抗原及HBV—DNA荧光定量检测,并进行统计学分析。结果前S_1抗原与HBV—DNA荧光定量检测对乙肝复制检测有相关性。抗HBc-IgM与乙肝大三阳和小三阳存在密切关系。结论大三阳和小三阳的抗HBc—IgM、前S_1抗原及HBV—DNA,三项指标阳性率不同,反映的临床意义也不同,对乙肝患者不能只是诊断了大三阳或小三阳,还应进行抗HBc—IgM与前S_1抗原检测尤其进行HBV—DNA荧光定量检测,并进行长期随访研究。     

乙型肝炎患者血清及肝组织中HBV DNA含量与肝脏炎症指标的相关性研究

目的 探讨慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA与肝组织HBV DNA及其肝脏炎症指标的相关性.方法 随机选择慢性乙肝患者51例做血液HBV DNA检测,并行肝穿刺取肝组织,分别进行肝组织HBV DNA检测及组织学检测.结果 慢性乙型肝炎患者肝组织HBV DNA检出率明显高于血清内,肝组织内HBV DNA含量明显高于血液内.结论 乙型肝炎患者血清HBV DNA与肝脏炎症程度无显著性差异,无相关性,不能真实反映肝组织内HBV DNA感染及复制情况.肝组织内HBV DNA与肝脏炎症程度有显著性差异,呈反向相关.     

乙型肝炎孕妇母婴传播影响因素分析

目的 对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性孕妇母婴传播影响因素进行分析,探讨母婴传播的原因及对策.方法 检测207例HBsAg阳性孕妇HBV血清标志物、血清HBV DNA,产妇乳汁HBV DNA,新生儿脐带血HBV DNA,并且对孕期一般情况、家族肝病史、是否进行孕晚期高效价乙型肝炎免疫球蛋白母婴阻断治疗、分娩方式、阿...     

HBsAg阴性HBV DNA阳性无偿献血者的血清学模式及其相关特征研究

目的:了解苏州地区HBsAg阴性HBV DNA阳性(HBsAg-HBV DNA+)献血者乙型肝炎病毒(HBV)感染的血清学模式、相关特征及经血传播HBV的残余风险。方法:用2种ELISA试剂对献血者血液进行HBsAg筛查,用罗氏Cobas TaqScreen MPX Test试剂检测ELISA检测合格标本中的HBV DNA,对HBV DNA阳性献血者进行乙肝两对半检测。结果:2遍ELISA检测均为HBsAg阴性的标本有104 862份,其中有61份为HBV DNA阳性,经核酸检测后HBV残余风险可降低5.82/万。男性献血者HBsAg-HBV DNA+阳性率显著高于女性献血者(P0.01);35岁献血者HBsAg-HBV DNA+阳性率显著高于18~35岁献血者(P0.01)。在HBsAg-HBV DNA+献血者中,35岁人群的HBsAg-HBsAb+阳性率显著高于18~35岁人群(P0.05)。结论:苏州地区HBsAg-HBV DNA+献血者分布具有一定的流行病学特征,核酸检测能降低HBV经输血传播HBV的残余风险;35岁具有HBsAg-HBcAb+血清学模式的献血者血液存在输血传播HBV的风险较高。     

母亲血清乙型肝炎病毒载量及新生儿外周血游离母亲DNA与新生儿乙型肝炎病毒感染的关系

目的 探讨慢性HBV感染母亲血清HBV DNA载量及新生儿外周血中游离母亲DNA与新生儿HBV感染的关系.方法 等位基因特异性PCR及半套式PCR技术检测慢性HBV感染母亲及其新生儿外周血中游离母亲DNA.荧光定量PCR对母亲外周血血清中HBV DNA定量检测.数据采用阳性率、X2检验、Fisher精确概率等进行统计学分析.结果 筛选出36对母儿信息病例对,有26个新生儿外周血中检测到游离母亲DNA,占72.2%.母-胎DNA转移与新生儿HBsAg、HBV DNA阳性均无关(Fisher精确概率分别为0.278、1.000,均P>0.05),而与新生儿外周血单个核细胞(PBMC)HBV感染有关(Fisher精确概率＝0.026,P<0.05).母-胎DNA转移与母亲血清HBV DNA载量无关(X2=2.097,P>0.05),随着母亲血清HBV DNA载量的增加,其发生新生儿血清HBV DNA阳性的危险性呈增高趋势(总X2=62.21,P<0.05;趋势X2=58.46,P<0.05),而母亲血清HBV DNA载量与新生儿PBMC HBV DNA阳性无关(总X2=4.82,P>0.05).结论 母胎DNA转移与新生儿PBMC HBV感染有关,可能是新生儿HBV感染的一个因素.随着母亲HBV DNA载量增高,新生儿血清HBV DNA阳性的危险性越高.     

肝组织HBV DNA定量检查的临床意义

目的 由于对HBV感染的研究不断深入,抗病毒治疗亟待寻找判定效果的可靠方法,HBV DNA检测,特别是血液和肝组织定量检测显得极其重要。方法 不加选择在HBV感染者作肝活检时留取小粒肝组织,同时采血作HBVDNA定量检查。结果 急慢性HBV感染病例均示肝组织内HBV DNA检查明显高于血内检出率,同时肝组织HBV含量明显高于血液内含量。结论 肝组织检测HBV DNA可以明显提高HBV感染诊断率,血内HBV DNA阴转时不能说明肝组织内亦已阴转,血内HBV DNA阴转不宜随即停止治疗。     

三种乙型肝炎病毒DNA定量聚合酶链反应试剂比较及其假阴性原因分析

乙型肝炎e抗原（HBeAg）是乙型肝炎病毒（HBV）复制的一个标志，乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性、HBeAg阳性、抗-HBc阳性的患者体内HBV DNA亦较高。有报道所有该类标本均可检测到HBV DNA，且绝大部分（83．33％）的HBV DNA滴度高于10^6拷贝／ml。然而，我们在对临床标本进行HBV DNA定量检测中发现，相当一部分该类血清标本不能检测到HBV DNA或检测结果低于试剂盒检测下限。为了排除所用试剂盒缺陷造成的可能，我们对目前国内医疗机构常用的三种HBV DNA荧光定量聚合酶链反应（PCR）试剂进行了比较与分析。     

改良PCR法检测外周血单个核细胞中的HBV DNA与HBVcccDNA

目的检测慢性HBV感染者外周血单个核细胞(PBMCs)中HBV DNA的存在状况。方法采用改良PCR法检测慢性HBV感染者PBMCs中HBV DNA、共价闭合环状DNA(cccDNA)。结果120例慢性HBV感染者PBMCs中HBV DNA、cccDNA阳性检出率分别为62.50%、45.83%,HBV DNA阳性检出率高于cccDNA(P<0.01);其中HBeAg阳性组PBMCs中HBV DNA(80.00%)和cccDNA阳性检出率(45.00%)分别明显高于HBeAg阴性组(61.67%)(30.00%)(P均<0.01);PBMCs中HBVDNA检测阳性者血清HBVDNA水平明显高于HBVDNA检测阴性者(P<0.01)。结论改良PCR法检测表明HBV DNA不仅可感染PBMCs,且部分参与复制;PBMCs中HBVDNA存在和复制能力与HBeAg阳性相关;PBMCs中HBV DNA阳性检出率与血清HBV DNA水平有一致性。     

乙肝患者肝组织及外周血单个核细胞HBV DNA检测

用PCR方法对148例乙肝患者的肝组织及外周血单个核细胞HBV DNA进行检测，同时对肝组织进行病理组织学诊断。结果显示：148例乙肝患者的肝组织与PBMC内HBV DNA的检出率有一致性倾向，PBMC内HBV DNA的检出率与肝组织的损害程度呈正相关。     

荧光定量检测乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV DNA的含量及其意义

探讨乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）HBV DNA和血清HBV DNA的感染情况及其临床意义。采用荧光定量PCR技术对216例HBV感染者和20例健康人进行了PBMC中及血清中的HBV DNA检测。患者PBMC内HBV DNA的总检出率为51．3％（111／216）,有随着病情加重而逐渐增高的趋势,而血清中HBV DNA阳性率无此趋势;从定量结果上看各组血清和PBMC定量HBV DNA含量对数值间均呈正相关。所以PBMCHBV DNA较血清HBV DNA检测能更好反映肝细胞内HBV DNA的存在情况,从而对慢性乙型肝炎患者HBV的复制状态有更准确的评价。     

三联放大技术与荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒的应用比较

目的通过比较聚合酶链反应偶联印迹杂交和酶联放大技术(即三联放大技术)与荧光定量PCR(FQ-PCR)两种方法检测HBV DNA结果,探讨三联放大技术用于血液HBV筛查的优越性。方法医院肝病门诊患者血清195份,同时进行三联放大技术检测和FQ-PCR检测,比较检测结果。结果195份血清,经三联放大技术检出HBVDNA 125份,检出率64.10%;FQ-PCR检出HBV DNA 103份,检出率52.82%。两种方法的HBV DNA检出率差异有统计学意义(P0.01)。结论与FQ-PCR比较,三联放大技术能显著提高HBV DNA的检出率,可用于血液HBV筛查。     

乙型肝炎病毒表面抗原阳性患者前-S1抗原和前-S2抗原与HBV DNA和HBV-M相关性分析

目的检测乙型肝炎病毒患者乙型肝炎病毒前-S1抗原（HBV pre-S1-Ag）、前-S2抗原（HBV pre-S2-Ag）、乙型肝炎病毒DNA（HBV DNA）和乙型肝炎病毒E抗原（HBeAg）,探讨其相关性和临床应用价值。方法应用酶联免疫测定法（ELISA）分别检测HBV pre-S1-Ag、HBV pre-S2-Ag和乙型肝炎病毒标志物（HBV-M）,荧光定量聚合酶链反应法（FQ-PCR）检测HBV DNA,并对检测结果进行统计学分析。结果 HBsAg阳性者中,pre-S1-Ag、pre-S2-Ag、HBV DNA阳性者分别为594例、541例、629例,其阳性率分别为66.29%、60.38%、70.20%。HBeAg阳性组pre-S1-Ag、pre-S2-Ag、HBV DNA的阳性率分别为90.21%、74.46%、93.32%,显著高于HBeAg阴性组的45.28%、48.01%、49.89%,差异有统计学意义（P〈0.01）。随着HBV DNA载量的增高,pre-S1-Ag、pre-S2-Ag、HBeAg阳性率随之增高。结论 pre-S1-Ag、pre-S2-Ag与HBV DNA和HBeAg阳性检出率具有显著相关性。联合检测pre-S1-Ag、pre-S2-Ag、HBV DNA及HBV-M,有助于HBV早期诊断、疗效观察和预后判断。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞及肝组织中HBV cccDNA定量检测

目的优化HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)特异性定量检测方法,并观察HBV cccDNA在慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)及肝组织中的分布情况。方法标本抽提核酸后,以不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD)进行酶切,再以跨双缺口的特异性引物进行荧光PCR定量检测HBV cccDNA;用10份HBV高滴度(10~7拷贝/mL)血清和梯度稀释的HBV克隆质粒标准品,验证此检测方法的特异度和灵敏度;取慢性乙型肝炎患者PBMC和肝组织穿刺标本各50份,检测其总HBV DNA和cccDNA。结果10份血清标本均无假阳性cccDNA检测结果,灵敏度可达到10~3拷贝/mL。所有PBMC中cccDNA检测均阴性;所有肝组织中总HBV DNA和cccDNA检测均阳性,总HBV DNA含量为3．19×10~2～6．69×10~7拷贝/μg人基因组DNA,cccDNA含量为7．32×10~0～6．51×10~6拷贝/μg人基因组DNA,同一患者肝组织中总HBV DNA含量是cccDNA含量的10．7倍至9．2×10~5倍。结论本方法特异度和灵敏度高。PBMC不能支持HBV的复制。在慢性乙型肝炎患者的肝组织中均可检测到cccDNA,但其水平并非与细胞内总HBV DNA水平正相关。     

荧光定量PCR在乙型肝炎病毒检测中的应用及临床意义

对1025份临床血清标本用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)的方法进行HBV DNA定量检测,并同时用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行乙肝免疫学指标的对比检测。结果:HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)模式HBV DNA阳性率为99.2％(390/393),其平均拷贝数为4.65×10 E8拷贝/ml:在HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式中HBV DNA阳性率为62.5％     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎患者血清HBV DNA及临床价值

目的探讨荧光定量聚合酶链反应法定量检测乙型肝炎病毒(HBV)核酸的临床应用价值。方法应用荧光定量聚合酶链反应定量检测1962例乙型肝炎患者血清HBV DNA水平并与血清HBV标志物进行比较,并对35例乙型肝炎患者在拉米夫定治疗前后血清HBV DNA含量及相关指标作动态观察。结果乙型肝炎患者HBVDNA定量范围在6.79×102～1.95×109拷贝/毫升之间,在HBeAg阳性患者,其检出率和定量拷贝数较高。拉米夫定治疗后患者外周血HBV DNA载量下降明显。结论荧光定量PCR法是一种相对准确、灵敏度高、特异性强的定量检测HBV DNA的技术,对乙型肝炎诊断、指导、临床用药和疗效监测方面具有实用价值。