HBV X蛋白引起肝细胞癌异常表观遗传学修饰

肝细胞癌(HCC)是最常见的恶性肿瘤之一,与HBV的慢性感染密切相关。HBV X蛋白(HBx)由HBV x基因编码,研究表明它在HBV相关肝细胞癌的形成中起着重要作用。HBx可以引起宿主基因表观遗传修饰的显著改变,有证据已经表明由HBx引起的表观遗传学事件在HBV相关肝细胞癌的发展中起着重要作用。本综述主要关注HBx在肝细胞癌中引起的表观遗传学变化,包括异常的DNA甲基化、组蛋白修饰和microRNAs表达;对HBx引起HBV共价闭合环状(ccc)DNA的表观遗传学调控也进行了讨论。     

DNA错配修复基因甲基化在肝细胞癌发生发展中的作用

目的探讨DNA错配修复基因(MMR)hMLH1,hMSH2和hMSH3甲基化在肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法对38例新鲜HCC组织,相应非肿瘤肝组织,2例正常的捐肝组织及6种肝癌细胞系的hMLH1,hMSH2和hMSH3基因启动子CpG岛甲基化进行检测;培养6种肝癌细胞系,MSP法检测加入5-aza-2‘-deoxycytidine前后hMSH2基因在HCC中的甲基化状态改变;逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测加入5-aza-2’-deoxycytidine前后hMSH2在肝癌细胞株中的mRNA表达改变。结果HCC标本中13．2％(5／38)发生了hMLH1启动子甲基化,68．4％(26／38)发生了hMSH2启动子甲基化;相应的非肿瘤肝组织中hMLH1,hMSH2启动子甲基化阳性率分别为2．6％(1／38),55．3％(21／38);2例正常肝组织中未发现甲基化;6株肝癌细胞系中有5株发生了hMSH2启动子甲基化,而未发现有MLH1启动子甲基化。所有标本中均未发现有hMSH3启动子甲基化。5-aza-2‘-deoxycytidine处理细胞株后,可部分或完全逆转hMSH2启动子甲基化,各细胞株的mRNA均有不同程度的表达增加。结论hMSH3基因启动子CpG岛甲基化与HCC的发生发展关系不大。hMSH2基因甲基化与mRNA表达密切相关,是基因表达调节的一种重要方式。hMLH1和hMSH2基因启动子CpG岛的高甲基化在HCC中是一个常见的基因改变,DNA错配修复基因尤其是hMSH2基因启动子甲基化在HCC的发生中起了重要作用,是早期事件,其可能为临床诊断HCC提供新的检测指标。     

肝细胞癌中ZHX2基因启动子甲基化增强AFP的表达

目的探讨肝细胞癌中锌指和同源框2(ZHX2)基因启动子甲基化表达与血清AFP水平的关系,分析AFP基因的表达调控机制。方法以0.5、1.0及5.0μmol/L甲基化抑制剂5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-Dc)培养人肝癌细胞株HepG2,采用RT-PCR及Western blot法检测用药前后ZHX2及AFP基因的mRNA和蛋白表达差异。运用甲基化特异性PCR检测肝细胞癌组织38例中ZHX2基因启动子表达情况,分析其与血清AFP水平的关系。结果 HepG2可见少量ZHX2 mRNA扩增,未检测到ZHX2蛋白表达,而AFP却高表达;应用终浓度为1.0μmol/L和5.0μmol/L的5-Aza-Dc处理肝癌细胞6 d,ZHX2表达明显增加,而AFP却表达下调。血清AFP高于25 ng/mL肝细胞癌组织中ZHX2启动子甲基化51.6%,明显高于血清AFP小于25 ng/mL组(P<0.05)。结论 ZHX2基因启动子甲基化与AFP基因的表达有关。     

肝细胞癌抗原587基因甲基化调节HCA587-TAF9互作介导肝细胞癌的侵袭和迁移

目的：研究肝细胞癌抗原587（HCA587）在肝细胞癌（HCC）组织中的表达和启动子区甲基化状态,探 讨HCA587对肝细胞癌细胞迁移和侵袭的调节机制。方法：纳入肝细胞癌肿瘤组织114 例,分为HCC组和癌旁 非癌组织（NT）组。荧光定量PCR 检测HCA587的mRNA表达量;免疫组织化学和免疫印迹检测HCC组和NT 组组织中HCA587的蛋白表达。基于甲基化敏感酶和甲基化依赖酶酶切,并结合荧光定量PCR 方法分析肝细胞 癌组织中HCA587基因启动子区甲基化状态。构建重组HCA587过表达质粒（pcDNA3.1-HCA587）,培养人肝 细胞癌细胞系BEL-7404,转染pcDNA3.1-HCA587 或者使用甲基化抑制剂5-Azacytidin 处理细胞。细胞分为对照 组、5-Azacytidin 组、pcDNA3.1-HCA587 组和pcDNA3.1-HCA587 空载体（EV） 组。免疫沉淀法分析HCA587 与TATA 盒结合蛋白相关因子9（TAF9）的结合,Transwell 小室检测细胞的迁移和侵袭能力。结果： 与癌旁非 癌组织组比,HCC组的HCA587在mRNA和蛋白水平均上调。免疫组织化学证实HCC组组织中HCA587阳性表 达。HCC组中HCA587的启动子区CpG 岛甲基化水平降低。体外实验结果显示,5-Azacytidin 促进BEL-7404 中 HCA587的表达、HCA587与TAF9的结合、BEL-7404 细胞的迁移和侵袭能力,但抑制HCA587甲基化水平;另外, HCA587过表达增强BEL-7404 细胞的迁移和侵袭能力。结论：HCA587高表达或抑制其启动子区甲基化可以促进 HCA587与TAF9的结合及导致肝细胞癌细胞的迁移和侵袭。     

肝细胞癌相关长链非编码RNA差异表达的研究

目的分析肝细胞癌与正常肝组织中差异表达的长链非编码RNA(lncRNA),发现可能与肝细胞癌发生发展相关的特异lncRNA。方法采用lncRNA表达谱芯片技术检测5例肝细胞癌和其配对癌旁正常组织中的lncRNA,筛选出差异表达的lncRNA。运用分层聚类分析,对所有的lncRNA进行分类。最后从中选择10个lncRNA用RT-PCR进行定量验证。结果有1359个lncRNA表达水平出现显著性差异,差异倍数〉2倍。其中629个显著上调,占46.2%,其中125个表达5倍以上;730个显著下调,占53.7%,其中110个表达5倍以上。聚类分析(1)基因间lncRNA有11706条,其中与已知编码基因相距300 kb的lncRNA共有352条。(2)增强子型lncRNA共有1802条,其中与已知编码基因相距300 kb的lncRNA共有42条。(3)HOX基因簇共有101条。RT-PCR结果有8条lncRNA表达趋势与基因芯片结果一致。对癌组和癌旁组进行检验,有6条差异有统计学意义(P0.05)。结论与癌旁组织比较,lncRNA肝细胞癌组织中的表达水平明显改变,可能与肝细胞癌的发生发展有关。     

RNA介导DNA甲基化的研究进展

RNA介导的DNA甲基化(RdDM)是RNA沉默机制之一,主要引起转录水平的基因沉默。RdDM主要通过dsRNA介导相同DNA序列发生重新甲基化(dc novo methylation)而实现转录水平的基因沉默。RdDM需要多种相关因子、代谢酶等参与。RdDM在抗病毒,抗肿瘤方面有广阔应用的前景,并可为后基因组时代规模性基因功能研究提供有力的工具。     

DNA甲基化修饰异常与肺癌

DNA甲基化是表观遗传学研究的重要内容之一,与多种肿瘤的发生、发展密切相关。近年研究发现,肺癌相关基因高甲基化及甲基化转移酶的表达异常与肺癌发生有重要关系。了解DNA甲基化修饰异常在肺癌发生机制中的作用,将有助于患者的早期预防、早期诊断和改善预后。     

肝细胞癌17p13.3位点CpG岛甲基化状态的分析及其意义

为探讨ＤＮＡ甲基化异常在肝细胞癌中的作用，采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术对１２例肝细胞癌１７ｐ１３．３位点ＣｐＧ岛甲基化状态进行了检测，发现６例正常肝组织ＣｐＧ岛均未被甲基修饰，而４１．７％（５／１２）的肝细胞癌ＣｐＧ岛被不同程度的重新甲基化；甲基化程度显著升高者多伴１７ｐ１３．３位点的杂合缺失。结果表明：ＣｐＧ岛重新甲基化可能是１７ｐ１３．３位点基因失活的重要机理之一，过度的高甲基化状态与杂合缺失有关。为肝癌的病因学研究提供了资料。     

胎儿性RNA结合蛋白p62在肝细胞癌中表达的意义

目的　探讨表达p6 2的肝癌组织的病理形态学特点 ,以及 p6 2与癌细胞增殖和转移等生物学特性的关系。方法　用免疫组织化学方法检测 4 0例原发性肝细胞肝癌 p6 2和Ki 6 7的表达。结果　p6 2阳性率是 6 7.5 % (2 7/ 4 0 ) ,其中 p6 2强阳性表达的 12例中 9例为肝癌病理学分级为Ⅲ级的病例。p6 2表达强阳性的癌组织往往间质有大量的纤维组织或有大片坏死癌细胞 ,其增殖活性也高 ,Ki 6 7标记指数为 2 8 3%± 15 1% ,与 p6 2表达阴性组 (7 5 %± 9 8% )比较 ,差异具有显著性意义 (t=3 0 87,P =0 0 0 5 ) ;5例有肺转移或腹腔淋巴结转移的病例 ,其中 3例p6 2表达强阳性。结论　p6 2的表达与癌细胞的增殖和转移有一定的关系 ,和间质纤维组织较多的微环境有关     

RNA结合蛋白HuR的研究进展及其在肝细胞癌发生发展中的作用

<正>转录后事件,特别是 RNA翻转和翻译的改变,是哺乳动物细胞在应激反应中控制基因表达的主要机制。mRNA稳定性和翻译的变化主要是通过特定mRNA序列(顺式元件)与两种主要的反式作用因子——RNA结合蛋白(RNA-binding protein,RBP)和微小RNA(microRNA,miRNA)相互作用而启动的过程来控制的^[1]。RBP参与RNA代谢的各个环节,包括RNA剪接、多聚腺苷酸序列编辑、RNA转移、维持RNA的稳定和降解、细胞内定位和翻译调控等。     

miRNAs与肝细胞癌

最近发现一类小分子物质--microRNAs在肝细胞癌中异常表达,其中部分已被证实与肝细胞癌的发生发展密切有关.有些microRNAs与肝细胞癌的分型有关,提示microRNAs在肝细胞癌的诊断和预后判断中有着潜在的作用;有些microRNAs被证实为肝细胞癌发生的独立危险因素,为临床早期筛查和风险评估提供了分子标记,也为个体化治疗提供了分子依据.     

丙型肝炎相关的肝细胞癌

丙型肝炎病毒（HCV）感染现已被认为是肝细胞癌（HCC）的主要危险因素。丙型肝炎发展为肝细胞癌，经过肝硬变阶段。HCV是以何种方式致肝细胞癌仍在研究中。某些感染附加因素如HCV基因fo型，耗酒量，以及和乙肝病毒的同时感染等也是导致发生肝细胞癌的原因之一。本文就其HCV相关的肝细胞癌中HCV所起作用及其有关因素进行阐述。丙型肝炎病毒在肝细胞癌的作用是肯定的。多方面资料报道认为HCC患者抗一HCV阳性率达60～70％。HCV在HCC发展中通过何种途径起作用尚在探索之中。HCV是一种RNA病毒，其基因不和宿主的RNA整合，HCV的…     

肿瘤DNA异常甲基化与组蛋白修饰

基因启动子区域异常甲基化是肿瘤抑制基因失活的一个关键机制 ,与肿瘤每一步形成有关的基因也能靠这种机制失活。DNA甲基化抑制剂如 5氮杂脱氧胞苷 (5AZA)能逆转这种表观遗传学事件 ,说明可以用它治疗肿瘤。染色质的结构对基因表达调控也起重要作用 ,组蛋白中包含低乙酰化赖氨酸的染色质有一个紧密的结构 ,对转录起抑制作用。组蛋白去乙酰化酶 (HDAC)抑制剂能够使染色质结构开放 ,激活抑制肿瘤生长的某些基因 ,这些组蛋白去乙酰化抑制剂也可用于肿瘤治疗。DNA甲基化与组蛋白去乙酰化的联合作用可以用于沉寂基因转录 ,具体分子机理牵涉到甲基化CpG岛结合蛋白吸附到甲基化启动子上 ,以及吸附组蛋白去乙酰化酶形成抑制转录的复合物 ,这两种表观遗传学修饰代表了用 5AZA和HDAC抑制剂治疗干预的靶位点 ,这两种试剂联合使用显示有重新激活肿瘤抑制基因和增强抗肿瘤细胞增殖的协同效果 ,应当作为表观遗传学治疗肿瘤的新方法加以研究。     

DNA的甲基化修饰与DNA甲基转移酶

组织特异的 DNA甲基化谱是哺乳动物基因组的显著特征。DNA的甲基化修饰参与基因表达调控、发育调节、基因组印迹和 X染色体灭活等诸多重要生物学过程。大多数印迹基因可以调节胚胎的生长和发育。印迹功能的紊乱将导致发育异常及死胎。基因组范围内的广泛的去甲基化及随后发生的重新甲基化 ,可能使胚胎消除其亲本特异的甲基化谱 ,从而进入正常发育程序。DNA甲基化异常与肿瘤等疾病有关。肿瘤细胞的总体甲基化水平比正常细胞低 ,但是伴有某些 Cp G岛甲基化程度增高。抑癌基因启动子的异常甲基化和癌基因的去甲基化均影响肿瘤发生发展过程。哺乳动物 DNA甲基化谱的建立和维持需要维持 DNA甲基化的甲基转移酶和 DNA重新甲基转移酶。     

DNA的甲基化修饰与DNA甲基转移酶

组织特异的DNA甲基化谱是哺乳动物基因组的显特征。DNA的甲基化修饰参与基因表达调控、发育调节、基因组印迹和X染色体灭活等诸多重要生物学过程。大多数印迹基因可以调节胚胎的生长和发育。印迹功能的紊乱将导致发育异常及死胎。基因组范围内的广泛的去甲基化及随后发生的重新甲基化,可能使胚胎消除其亲本特异的甲基化谱,从而进入政党发育程序。DNA甲基化异常与肿瘤等疾病有关。肿瘤细胞的总体甲基化水平比正常细胞低,但是伴有某些CpG岛甲基化程度增高。抑菌基因启动子的异常甲基化和癌基因的去甲基化均影响肿瘤发生发展过程。哺乳动物DNA甲基化谱的建立和维持需要维持DNA甲基化的甲基转移酶和DNA重新甲基转移酶。     

哺乳动物卵母细胞的DNA甲基化和组蛋白修饰

哺乳动物卵母细胞发育过程中呈现出独特的表观遗传修饰模式。包括DNA甲基化和组蛋白修饰等在内的表观遗传修饰的建立,是一个复杂但高度有序的过程,对哺乳动物卵母细胞成熟和早期胚胎发育至关重要。因此,探究并揭示卵母细胞表观遗传特征建立的机制,对深入理解哺乳动物生殖发育机理和相关疾病的发生发展具有重要意义。本文以小鼠和人类为典型代表,阐述了哺乳动物卵母细胞发育过程中DNA甲基化以及组蛋白甲基化、乙酰化、泛素化、磷酸化和乳酸化的分布模式和动态变化特征,总结并探讨了这些表观遗传修饰之间潜在的关联及影响其发挥生物学功能的多种调控因素。     

肝细胞癌17p13.3位占CpG岛甲基化状态的分析及其意义

为探讨了ＤＮＡ甲基化异常在肝细胞癌中的作用，采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术对１２例肝细胞癌１７ｐ１３．３位点ＣｐＧ岛甲基化状态进行了检测，发现６列正常肝组织ＣｐＧ岛均未被甲基修饰，而４１．７％（５／１２）的肝细胞癌ＣｐＧ岛被不同程度的重新甲基化；甲基化程度显著升调得多伴１７ｐ１３．３位点的杂合缺失。结果表明：ＣｐＧ岛重新甲基化可能是１７ｐ１３．３位点基因失活的重要机理之一，过度的高甲基化状态杂合缺失