溶血磷脂酸调控RhoA/ROCK2信号通路对乳腺癌细胞增殖的影响

目的 探讨溶血磷脂酸(LPA)与RhoA/ROCK2信号通路对乳腺癌细胞增殖的影响及其作用机制.方法 以不同浓度LPA干预乳腺癌MDA-MB-231细胞,每隔24 h以细胞计数法观察和记录细胞的增殖.以最佳LPA促增殖浓度作用于MDA-MB-231细胞,观察Rho激酶抑制剂(Y-27632)对癌细胞的影响;以Pull-down及Western blot法检测各组细胞内RhoA活性及RhoA、ROCK2蛋白表达.结果 LPA以时间及剂量依赖性关系显著促进MDA-MB-231细胞的增殖(P＜0.05);Y-27632可以显著抑制LPA的促增殖作用;LPA干预后RhoA活性及RhoA、ROCK2蛋白表达显著升高(P＜0.05),Y-27632干预后RhoA活性及RhoA、ROCK2蛋白表达显著下降(P＜0.05).结论 LPA可能通过调控RhoA/ROCK2信号通路促进乳腺癌细胞的增殖,为乳腺癌的临床治疗提供了新思路.     

溶血磷脂酸对肝癌细胞迁移行为的影响及其相关机制

目的研究溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)对肝癌细胞MHCC97H迁移行为的影响,并探究其相关的分子机制。方法采用Transwell法检测LPA处理后MHCC97H细胞迁移的变化情况,并通过Rho相关蛋白激酶(ROCK)抑制剂Y-27632检测ROCK信号通路在其中的作用,利用免疫荧光染色和免疫印迹法检测LPA对MHCC97细胞骨架F-actin表达的影响,通过原子力显微镜检测LPA作用后MHCC97H细胞弹性模量的变化。结果LPA显著促进MHCC97H的迁移,ROCK抑制剂Y-27632可阻断LPA诱导的MHCC97H细胞迁移。LPA上调MHCC97H中F-actin的表达,减小MHCC97细胞的弹性模量。结论 LPA可能主要通过ROCK/F-actin通路降低肝癌细胞MHCC97H的硬度,从而促进其迁移行为。     

实时观察Rho激酶对离体培养施万细胞形态和迁移的作用

目的 探讨Rho激酶(ROCK)对离体培养大鼠施万细胞形态和迁移的作用。 方法 运用原代培养施万细胞技术,并采用细胞免疫荧光化学技术鉴定施万细胞的纯度,同时建立实时观察施万细胞形态和迁移的单细胞迁移平台。基于该平台,在迁移施万细胞前方给予ROCK抑制剂Y-27632浓度梯度,显微实时观察该抑制剂对施万细胞形态和迁移的作用。 结果 1.细胞免疫荧光化学显示原代培养的细胞为高纯度的施万细胞;2.单细胞迁移平台非常适合实时研究施万细胞形态和迁移;3.在迁移施万细胞前方给予ROCK抑制剂Y-27632浓度梯度能明显地促进施万细胞突起分支增多,突起变细长,并抑制施万细胞迁移。 结论 ROCK能维持施万细胞形态,并调节施万细胞运动、迁移能力。     

ROCK对系统性红斑狼疮患者外周血T细胞黏附和迁移的调控

 目的：研究系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血T细胞中Rho激酶（ROCK）活化情况,并探讨其对T细胞黏附和迁移的影响。方法：收集SLE患者33例,正常健康人12例和类风湿关节炎患者9例作为对照组。外周血T细胞分离采用RosettSep T细胞提取试剂盒提取,ROCK活性用磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶亚基1（MYPT1）蛋白表达来表示,磷酸化MYPT1蛋白检测采用免疫印迹法,T细胞迁移采用Transwell小室测定。结果：新鲜分离的SLE患者外周血T细胞ROCK活性均显著高于正常对照组和类风湿关节炎组（均P<0.05）。SLE患者T细胞体外黏附和迁移能力显著高于正常对照组;ROCK特异性抑制剂Y27632显著抑制SLE患者T细胞黏附和迁移。结论：SLE患者存在T细胞ROCK活化异常;ROCK可能参与调控SLE T细胞的黏附和迁移;抑制T细胞异常的ROCK活性可能有助于SLE的治疗。     

损伤角膜修复重建中的ROCK抑制剂：促进角膜细胞增殖、迁移和黏附

背景：随着人们对Rho/ROCK通路的生物学功能的了解的不断加深,新的ROCK抑制剂不断被发现,且ROCK抑制剂在角膜细胞存活、增殖和迁移中表现出良好的促进效果,ROCK抑制剂的研究能为再生医学和临床细胞移植提供更多的良好供体材料或种子细胞。目的：总结并探讨ROCK抑制剂Y-39983和Y-27632在角膜病的治疗和应用的研究进展。方法：应用计算机检索PubMed 数据库和中国知网数据库内相关文章,检索时间为2008至2015年,检索词为“corneal endothelial cell,corneal epithelial cell,ROCK inhibitor,Y-39983,Y-27632,ROCK抑制剂,角膜”,从中筛选出与主题相关的部分文献。结果与结论：初检得到264篇文章,按主题相关性对文献进一步筛选,最终纳入45 篇文章进行讨论。应用到眼科的ROCK抑制剂主要有两种：Y-27632和 Y-39983,两者的应用主要还是基础研究与临床试验阶段。Y-27632可促进角膜缘上皮干细胞增殖及提高冻存复苏后的活性;Y-39983作为一种新型的ROCK抑制剂,其比Y-27632更有效地抑制ROCK激酶的活性,从而能更有效地促进角膜内皮的愈合。目前ROCK抑制剂在角膜治疗的研究较多,但是没有建立一种稳定的获得种子细胞的方法,每一种治疗方法都各有优缺点,而克服这些缺点以及找到快速稳定获得种子细胞的方法是今后的发展方向。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

ROCK参与乙醇诱导肠上皮细胞屏障通透性增加

目的探讨Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK)参与乙醇诱导的肠上皮细胞屏障通透性增加的作用。方法应用ROCK特异性抑制剂Y-27632预处理Caco-2细胞后,测定跨上皮细胞阻抗值(TEER)及荧光黄透过率,分析肠上皮细胞屏障的通透性的变化。应用Western blot的方法检测肌球蛋白轻链(MLC)、p-MLC及紧密连接相关蛋白(occludin)的表达。结果 Y-27632显著抑制乙醇诱导的TEER值降低、荧光黄透过率升高、pMLC/MLC及occludin(S/IS)比值的增加。结论 ROCK参与乙醇诱导肠上皮细胞屏障通透性增加。     

IL-38拮抗RhoA/ROCK信号抑制PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的探究白细胞介素(IL)-38对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的作用和机制。方法将人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)随机分成4组:对照组(不进行任何处理)、PDGF-BB组(加入20 ng/ml重组人PDGF-BB蛋白处理24 h)、PDGF-BB+空质粒组(转染pcDNA3.1空质粒48 h后加入20 ng/ml重组人PDGF-BB蛋白处理24 h)和PDGF-BB+IL-38组(转染pcDNA3.1-IL-38质粒48 h后加入20 ng/ml重组人PDGF-BB蛋白刺激24 h)。MTT法检测细胞活力、Transwell检测细胞迁移、Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、RhoA、Rho相关蛋白激酶(ROCK)1、ROCK2、肌球蛋白磷酸酶靶标亚基1(MYPT1)和磷酸化MYPT(p-MYPT)蛋白水平的表达。结果与对照组相比,PDGF-BB组中细胞活力,迁移细胞数目,PCNA、RhoA、ROCK1、ROCK2的表达和p-MYPT/MYPT1的值均增加,差异均具有统计学意义(均P0.05);与PDGFBB组相比,PDGF-BB+空质粒组中这些指标变化无统计学意义(均P0.05);与PDGF-BB+空质粒组相比,PDGF-BB+IL-38组中细胞活力,迁移细胞数目,PCNA、RhoA、ROCK1、ROCK2的表达和p-MYPT/MYPT1的值均降低,差异均具有统计学意义(均P0.05)。结论 IL-38能够减弱PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移,这种作用可能是通过抑制RhoA/ROCK通路活化发挥作用的。     

TNF-α激活RhoA/ROCK信号通路增加单核细胞增生性李斯特菌感染内皮细胞的通透性

目的探讨大鼠肉瘤同源基因A/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(RhoA/ROCK)信号通路在肿瘤坏死因子α(TNF-α)促进单核细胞增生性李斯特(Lm)感染致内皮细胞通透性升高的调控作用。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为未感染细胞对照组、 TNF-α处理组(100 ng/mL TNF-α处理2 h)、 Lm感染组(以MOI=10的Lm感染2 h,加入庆大霉素杀菌0.5 h)、 TNF-α处理的Lm感染组(Lm感染组细胞加入100 ng/mL TNF-α处理2 h)、 Y-27632联合TNF-α处理的Lm感染组(细胞用50μmol/L ROCK抑制剂Y-27632处理30 min,再如上进行Lm感染和TNF-α刺激)。Western blot法检测HUVEC的RhoA、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)、 ROCK蛋白水平,检测辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量分析HUVEC通透性变化,用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的鬼笔环肽染色检测纤维型肌动蛋白(F-actin)细胞骨架的改变。结果 TNF-α可降低Lm感染的内皮细胞紧密连接蛋白ZO-1、 occludin的表达,促进其通透性升高、细胞骨架重排,并上调RhoA和ROCK的表达。ROCK抑制剂Y-27632可明显抑制TNF-α所致的HUVEC细胞骨架重排及通透性增高的作用。结论 TNF-α促进感染Lm的血管内皮细胞通透性增高可能通过RhoA/Rock信号通路调控。     

黄芪多糖通过激活AMPK减轻同型半胱氨酸对人血管内皮细胞的损伤

目的:探讨黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)能否减轻同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对人血管内皮细胞的损伤及其可能的机制。方法:培养人脐静脉内皮细胞,分为正常对照组、APS组[APS(200mg/L)处理24 h]、Hcy组[Hcy(1 mmol/L)处理24 h]和Hcy+APS组[Hcy(1 mmol/L)和APS(200 mg/L)共同处理24 h]。采用MTT法检测细胞活力,采用试剂盒法检测内皮细胞中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和超氧化物歧化酶(superoxidase dismutase,SOD)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,采用RT-q PCR检测SOD1、过氧化氢酶(catalase,CAT)和NADPH氧化酶2(NADPH oxidase 2,NOX2)的mRNA表达,并采用Western blot检测腺苷酸活化蛋白激酶α(AMP-activated protein kinaseα,AMPKα)和磷酸化AMPKα(phosphorylated AMPKα,pAMPKα)的蛋白水平。结果:与对照组相比,Hcy组内皮细胞活力明显下降,LDH活性升高,细胞内MDA含量,SOD活性下降,SOD1和CAT的mRNA表达水平显著下降,而NOX2的mRNA表达水平明显升高(P0.05)。APS能够抑制Hcy引起的细胞活力下降、LDH活性升高及MDA含量增加;增加SOD活性,提高SOD1和CAT的mRNA表达水平,减少NOX2的mRNA表达水平(P0.05)。AMPK抑制剂Compound C则可以显著降低APS对Hcy引起的内皮细胞损伤的修复作用。结论:APS可通过活化AMPK调控细胞内氧化应激从而抑制Hcy对血管内皮细胞的损伤。     

法舒地尔通过抑制兔尿道成纤维细胞Rho/ROCK通路激活减少尿道损伤后狭窄的发生

目的:研究法舒地尔对创伤后兔尿道狭窄发生的影响及机制,观察兔尿道成纤维细胞活力、迁移以及细胞外基质合成情况。方法:利用显微外科技术建立兔尿道创伤动物模型,分为5组:假手术组,手术组,不同剂量(3 mg/kg、10 mg/kg、30 mg/kg)法舒地尔组,术后3个月逆行尿道造影测量狭窄直径。从兔尿道瘢痕组织提取成纤维细胞进行传代培养,培养液中分别加入TGF-β1(10μg/L)和/或法舒地尔(12.5μmol/L,25μmol/L,50μmol/L)。MTT比色法检测细胞活力;用Transwell小室实验检测细胞迁移能力;Western blot法检测各组Rho相关激酶(ROCK)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的表达情况。结果:法舒地尔显著减少尿道损伤后狭窄发生(P0.05)。随着法舒地尔浓度的增加,成纤维细胞的活力受到抑制,细胞迁移能力逐渐减弱,ROCK、α-SMA以及胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的表达受到抑制;法舒地尔对兔尿道成纤维细胞外基质及ROCK表达起抑制作用,并呈剂量依赖性(P0.05)。结论:法舒地尔可以通过下调TGF-β1诱导的兔尿道成纤维细胞Rho/ROCK通路,抑制细胞外基质形成,减少尿道损伤后狭窄的发生。     

大鼠肺动脉平滑肌细胞Rho激酶对 p-Smad1核迁移的作用及机制

目的: 研究Rho激酶对p-Smad1核迁移的作用及信号转导途径,探讨它们在肺血管重构中的作用机制。方法: 分离培养大鼠远端肺动脉平滑肌细胞,应用血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)启动肺动脉平滑肌细胞Rho激酶信号通路,应用骨形态发生蛋白2(BMP-2)启动BMP信号通路,并用Rho激酶抑制剂Y-27632、MEK抑制剂U0126进行干预。培养细胞分成5组:(1)对照组;(2)BMP-2组;(3)BMP-2+PDGF-BB组;(4)BMP-2+PDGF-BB+Y-27632组;(5)BMP-2+PDGF-BB+U0126组。免疫荧光染色标记p-Smad1在细胞核内外的分布并计算p-Smad1核迁移阳性细胞百分数(即核迁移率)。分离平滑肌细胞核蛋白和胞浆蛋白,Western blotting分析p-Smad1在细胞内的总量和细胞核内外相对含量的变化。Kit-WST-8试剂盒检测细胞增殖。结果: BMP-2组p-Smad1在细胞内的总量、在细胞核中的相对含量和核迁移率明显高于对照组(P<0.05);BMP-2+PDGF-BB 组p-Smad1的核迁移率和在细胞核中的相对含量明显低于BMP-2组(P<0.05),但是细胞内p-Smad1总量无明显改变(P>0.05);BMP-2+PDGF-BB+ Y-27632组和BMP-2+PDGF-BB+U0126组细胞内p-Smad1的总量、在细胞核中的相对含量和核迁移率与BMP-2组基本相似(P>0.05)。BMP-2组的A值明显小于对照组(P<0.05);PDGF-BB+BMP-2组的A值明显大于BMP-2组(P<0.05)且大于对照组(P<0.05);BMP-2+PDGF-BB+Y-27632组和BMP-2+PDGF-BB+U0126组的A值均小于PDGF-BB+BMP-2组(P<0.05)。结论: 在大鼠肺动脉平滑肌细胞,PDGF-BB激活的Rho激酶通过MEK/ERK1/2抑制BMP-2引起的p-Smad1核迁移,促进平滑肌细胞增殖。     

醛固酮通过激活RhoA/ROCK信号通路诱导大鼠肝星状细胞迁移

目的探讨醛固酮(ALD)诱导大鼠肝星状细胞系HSC-T6细胞迁移的作用及其机制。方法 HSC-T6细胞分为阴性对照组、 ALD单独处理组、安体舒通预处理组、 Y27632预处理组。对照组仅用无血清DMEM培养,其余各组给予1 nmol/L ALD刺激24 h,但安体舒通和Y27632预处理分别在ALD刺激前,分别给予10 nmol/L安体舒通或Y27632预处理1 h。Transwell~(TM)实验观察细胞迁移情况、罗丹明标记的鬼笔环肽染色观察细胞纤维型肌动蛋白(F-actin)的分布、激光共聚焦显微镜观察细胞骨架的变化; Western blot法检测细胞Rho激酶通路上肌球蛋白轻链(MLC)、膜突蛋白(moesin)磷酸化水平。结果 ALD处理的HSC-T6细胞迁移增加、 F-actin数量增加、 MLC和moesin蛋白的磷酸化增强。安体舒通和Y27632均可显著抑制以上作用并抑制MLC和moesin蛋白的磷酸化,两组的抑制效应无明显差别。结论 ALD诱导的肝星状细胞的迁移可能与Ras同源蛋白A/Rho相关卷曲蛋白激酶(RhoA/ROCK)信号通路的激活有关。     

法舒地尔抑制氧化应激反应减轻2型糖尿病大鼠心肌纤维化

目的探讨RhoA/ROCK通路在糖尿病大鼠心肌纤维化形成中的作用。方法高脂饮食联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病大鼠模型。实验分为对照(NC)组,糖尿病(DM)组和法舒地尔干预(DF)组(每天腹腔注射10 mg/kg,分两次注射)。24周末,应用HE染色观察大鼠心脏组织形态;电子显微镜观察心肌的超微结构;Masson染色观察心肌胶原沉积情况;羟脯氨酸(HYP)检测心肌胶原含量;测定超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量;免疫组化法检测一氧化氮合酶(eNOS)表达;Western blot法检测心肌中磷酸化肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1(MYPT1)表达,代表ROCK活性。结果糖尿病组大鼠较对照组大鼠心肌组织ROCK活性明显增强(P0.01),MDA含量增高(P0.01),SOD活力降低(P0.01),eNOS表达明显下调(P0.01),心肌胶原明显增多(P0.01)。法舒地尔干预组大鼠较糖尿病组心肌组织ROCK活性显著降低(P0.01),MDA含量降低(P0.05),SOD活力增加(P0.01),eNOS表达上调(P0.05),心肌胶原明显减少(P0.01)。结论 ROCK抑制剂法舒地尔抑制心肌组织氧化应激反应并上调eNOS表达,有效地减轻2型糖尿病大鼠心肌纤维化。     

人参皂苷CK对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖及迁移能力的影响

目的探讨人参皂苷CK对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖及迁移能力的影响。方法将人骨肉瘤细胞U2-OS分为阴性对照组(Control组)和实验组(CK药物组),MTT方法与CCK-8方法检测细胞活性及增殖能力,细胞划痕实验及Transwell实验检测细胞迁移能力,Western blotting检测侵袭相关蛋白MMP-9及MMP-2的表达。结果CK能够显著降低U2-OS细胞体外活性及生存率(P0.05);细胞划痕实验及Transwell法证明CK可抑制U2-OS体外迁移能力(P0.05);CK处理后U2-OS细胞的MMP-9及MMP-2表达水平下调(P0.05)。结论人参皂苷CK对骨肿瘤细胞U2-OS的抑制作用与下调MMP-9及MMP-2表达水平相关。     

黄芩素通过上调miR-7-5p影响脂多糖诱导的肾小球上皮细胞氧化应激及凋亡

目的:探讨黄芩素(SCU)对脂多糖(LPS)诱导的人肾小球上皮细胞氧化应激和凋亡的影响及其机制。方法:体外培养人肾小球上皮细胞,LPS(1.0 mg/L)处理建立细胞损伤模型,分为正常对照(NC)组、LPS组、NC+SCU组、LPS+SCU组、LPS+miR-NC组、LPS+微小RNA-7-5p(miR-7-5p)组、LPS+SCU+anti-miR-NC组和LPS+SCU+anti-miR-7-5p组。CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒测定细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,以及细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;RT-qPCR检测miR-7-5p的表达水平。结果:与NC组比较,LPS组细胞活力、miR-7-5p表达和SOD活性显著降低,细胞凋亡率、MDA含量和LDH活性显著升高(P0.05);与LPS组比较,LPS+SCU组细胞活力、miR-7-5p表达和SOD活性显著升高,细胞凋亡率、MDA含量和LDH活性显著降低(P0.05);与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-7-5p组细胞活力和SOD活性显著升高,细胞凋亡率、MDA含量和LDH活性显著降低(P0.05);与LPS+SCU+anti-miR-NC组比较,LPS+SCU+anti-miR-7-5p组细胞活力和SOD活性显著降低,细胞凋亡率、MDA含量和LDH活性显著升高(P0.05)。结论:黄芩素通过上调miR-7-5p表达抑制LPS诱导的肾小球上皮细胞氧化应激损伤和凋亡。     

CXCL1促进乳腺癌细胞增殖和迁移及其作用机制的研究

目的体外研究CXCL1对乳腺癌细胞增殖和迁移侵袭能力的影响及其作用机制。方法选取人乳腺癌细胞进行分组处理:空白对照组、CXCL1组、anti-CXCR2中和抗体组,用CCK8、克隆形成实验、流式凋亡、细胞划痕及Transwell迁移实验分别对各组细胞增殖活性、凋亡率、迁移侵袭能力进行检测,并用ELISA法对各组细胞内MMP-9蛋白、磷酸化AKT及活化NF-κB水平进行检测。结果 CCK8与克隆形成实验结果显示,与空白对照组相比CXCL1处理组细胞增殖活性提高,细胞克隆形成率增加(P0.05),与空白对照组相比anti-CXCR2处理组细胞增殖活性降低,细胞克隆形成率降低(P0.05);流式凋亡检测结果显示,与空白对照组相比CXCL1处理组细胞凋亡率降低(P0.05),与空白对照组相比anti-CXCR2处理组细胞凋亡率增高(P0.05);细胞划痕、Transwell迁移实验及细胞内MMP-9蛋白表达水平表明,与空白对照组相比CXCL1处理组细胞迁移侵袭能力增强(P0.05),与空白对照组相比anti-CXCR2处理组细胞迁移侵袭能力减弱(P0.05);细胞内p AKT/NF-κB蛋白检测表明,与空白对照组相比CXCL1处理组细胞内AKT磷酸化水平及NF-κB活化水平升高(P0.05),与空白对照组相比anti-CXCR2处理组细胞内AKT磷酸化水平及NF-κB活化水平降低(P0.05)。结论 CXCL1通过与CXCR2结合促进乳腺癌细胞增殖和迁移侵袭,其机制可能是激活了AKT/NF-κB信号转导通路。     

NRF2减轻阿霉素诱导的心肌H9C2细胞氧化应激和溶酶体功能障碍

目的:研究核因子E2相关因子2(NRF2)对阿霉素(又称多柔比星,DOX)诱导的心肌H9C2细胞氧化应激和溶酶体功能的影响。方法:用DOX处理大鼠心肌H9C2细胞,real-time PCR和Western blot测定细胞中NRF2表达的变化;慢病毒感染构建NRF2稳定过表达的H9C2细胞,real-time PCR和Western blot确认过表达效率;给予DOX处理,CCK-8法检测细胞活力,检测细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性及丙二醛(MDA)的含量;通过FITC-葡聚糖检测溶酶体pH的变化;Western blot检测溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)和组织蛋白酶B(cathepsin B)的表达。结果:DOX处理后H9C2细胞中NRF2的mRNA和蛋白表达明显减少(P0.05)。NRF2过表达能够明显上调DOX处理的H9C2细胞中NRF2的mRNA和蛋白表达(P0.05)。DOX处理后H9C2细胞的活力降低,上清中LDH的活性增强,SOD、GSH-Px和CAT的活性降低,MDA的含量增加(P0.05);细胞溶酶体的pH值升高,LAMP1和cathepsin B表达降低(P0.05)。NRF2过表达增强H9C2细胞的活力,降低LDH的活性(P0.05),提高细胞上清中SOD、GSH-Px和CAT的活性,减少MDA的含量(P0.05);减轻DOX所致的H9C2细胞溶酶体pH值的升高,升高LAMP1和cathepsin B的表达(P0.05)。结论:DOX处理后H9C2细胞的NRF2呈低表达;过表达NRF2可以减轻DOX诱导的心肌H9C2细胞氧化应激和溶酶体功能障碍。     

ROCK通过抑制PI3K/Akt通路促进高糖诱导的心肌细胞凋亡

目的:探讨Rho相关卷曲螺旋激酶(ROCK)是否通过调控PI3K/Akt信号通路参与高糖诱导的原代心肌细胞凋亡。方法:培养原代Wistar乳鼠心肌细胞,用α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)免疫组化法进行鉴定;建立心肌细胞高糖模型,采用5.5、33和40 mmol/L葡萄糖作用于细胞48 h。采用MTT法检测细胞活力;RT-qPCR检测各组心肌细胞中ROCK1和ROCK2的表达水平;流式细胞术检测各组心肌细胞的凋亡水平;Western blot检测ROCK1、ROCK2、cleaved caspase-3、Bcl-2、PI3K、Akt和p-Akt的蛋白水平;为了证实ROCKs对PI3K/Akt信号通路的调控作用,将细胞分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖处理细胞)、高糖组(33 mmol/L葡萄糖处理细胞)和高糖加Y27632(ROCK抑制剂)组,Western blot检测ROCK1、ROCK2、PI3K、Akt和p-Akt的蛋白水平。结果:高糖培养48 h后,33和40 mmol/L葡萄糖组细胞相对活力分别为(79.71±2.43)%和(68.41±7.49)%,与对照组相比显著降低(P<0.05)。各组细胞培养48 h后,33和40 mmol/L葡萄糖组ROCK1和ROCK2的mRNA相对表达量较对照组显著增加(P<0.05)。与对照组相比,33和40 mmol/L葡萄糖组细胞凋亡率均显著增加(P<0.05)。与对照组相比,33和40 mmol/L葡萄糖组的ROCK1和ROCK2蛋白表达增高(P<0.05),caspase-3活化片段的蛋白水平增加(P<0.05),Bcl-2的蛋白表达降低(P<0.05)。3组间心肌细胞PI3K与Akt蛋白水平的差异无统计学显著性,33和40 mmol/L葡萄糖组细胞p-Akt蛋白的水平较对照组降低(P<0.05)。与高糖组相比,高糖加Y27632组的ROCK1和ROCK2表达被抑制;3组间心肌细胞PI3K和Akt的蛋白水平差异无统计学显著性;与对照组相比,高糖组的p-Akt蛋白水平降低(P<0.05),高糖加Y27632组的p-Akt蛋白水平显著增加(P<0.05)。结论:高糖环境下,ROCK可能通过抑制PI3K/Akt信号通路,降低了p-Akt水平,从而促使心肌细胞凋亡的发生。     

Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠的保护作用北大核心CSCD

目的探讨Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠的保护作用机制。方法 MRL/lpr狼疮小鼠20只随机分为MRL/lpr对照组、5 mg/kg Y-27632处理组,每组10只;野生型对照组C57BL/6小鼠10只。采用ELISA检测各组小鼠血清、脾脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,ELISA检测血清核因子κB(NF-κB)相关炎症因子白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;采用Western blot法检测各组小鼠脾脏组织中硫氧还蛋白结合蛋白(Txnip)/硫氧还蛋白(Trx)、丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)相关蛋白胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38MAPK以及NF-κB的水平;Western blot法检测各组小鼠脾脏T淋巴细胞Txnip、p38MAPK、NF-κB蛋白水平;ELISA检测T淋巴细胞上清液IL-6、IL-1β、TNF-α水平。结果 Y-27632提高MRL/lpr狼疮小鼠血清及脾脏组织SOD水平;降低血清及脾脏组织MDA水平;降低血清、脾脏组织和脾脏T淋巴细胞上清液IL-6、IL-1β、TNF-α水平;抑制脾脏和脾脏T淋巴细胞Txnip、MAPK相关蛋白ERK、JNK和p38MAPK以及NF-κB表达,增加Trx含量。结论 Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠有保护作用。     

Rho激酶抑制剂Y-27632干预大鼠骨髓间充质干细胞增殖及细胞周期的变化

背景：Rho激酶抑制剂可以调节细胞骨架重构,激活转录因子,促进细胞增殖和分化。 目的：观察Rho激酶抑制剂Y-27632对大鼠骨髓间充质干细胞分裂增殖和细胞周期的影响。 方法：采用贴壁细胞培养法体外分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,并传代。取生长状态良好的第2代骨髓间充质干细胞分组：实验组加入10 µmol/L Rho激酶抑制剂Y-27632,对照组正常培养。 结果与结论：①骨髓间充质干细胞增殖：细胞生长曲线呈“S”型,Rho激酶抑制剂Y-27632作用后,3 d左右进入平台期,细胞生长加速,生长曲线上移。②骨髓间充质干细胞的细胞周期：对照组G0/G1期细胞比例为(80.640±5.516)%,S期细胞比例为(13.397±2.511)%;实验组G0/G1期细胞比例为(61.723±8.829)%,S期细胞比例为(29.380±7.630)%,实验组S期细胞比例高于对照组(P < 0.05)。表明Rho激酶抑制剂Y-27632可以促进骨髓间充质干细胞DNA的合成,促进细胞分裂和增殖。关键词：细胞周期;增殖;骨髓间充质干细胞;Rho激酶抑制剂;分离培养; 大鼠 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.19.007